全 文 ：黄岑素诱导体抑制酪氨酸酶作用的动力学研究
汕头大学 医学 院化学教研室 (5 5 103 1)方 冶
摘 要 黄琴素诱导体对酪氨酸酶 的抑制作用是竞争性抑制 , 其 k 、 为 0 . 0 58 m m ol / L 。 对 O子的清
除 作用和作 为竞争性底物 是黄荃素诱导 体竞争性 抑制酪氨酸酶 的两个重 要机制 。 提示通 过清除
O 子而抑制酪氨酸酶是多经基黄 酮的共性 , O 矛的 清除剂 也将都是酪氨酸酶的抑制剂 。
关健词 黄芬素诱导体 ( S D ) 酪氨酸酶抑制作用 动 力学
2
.
2 抑制类型及动力学参数的确定 : 分别作
L i n e w e a v e r
一
B u r k 曲线 及 D i x o n 曲线 , 判别
抑制类 型 、 确 定米 氏常 数 ( k , ) 及 抑 制常 数
( k
`
)的值 。
3 结果和讨论
3
.
1 S D 抑制酪氨酸酶 的动力学考察 : 在不
同浓度的左旋多 巴底液中 ,分别测定不 同浓
度 的 S D 抑 制 酪 氨酸 酶 的反 应 初 速度 , 作
L i n e w e a v e r
一
B u r k 曲线及 D i x o n 曲线 。 结果
见表 1 及图 1 、 2 。
表 1 S D 和多巴的浓度对反应
初速度的影响 (n 一 3)
C ( m m o l / L ) S ( m m o l / L ) (△ A / t ) 一 1
O曰咋`0OJ亡」.…OJ右斗0匕O,曰,自O上1
多经基黄酮化合物是植物界分布最广泛
的黄酮类化合物 , 近年来对其抗 自由基 、 抗氧
化 、 抗癌 、 防癌 、 抗菌 、 抗病毒 、 抗炎 、 抗 过敏 、
抗糖尿病并发病等多种生物活性及药理作用
已有较多研究川 , 对酪氨酸酶 的抑制作用也
有 了一些 报道图 , 但未见有其抑制作用机制
的报道 。 黄琴素诱导体 ( S D )也是多经基黄酮
化合物 , 已研究证实具显著的紫外吸收 、 抑制
酪氨酸酶和清除 O牙作用阁 。 笔者就其抑制
酪氨酸酶的作用进行 了动力学考察和机制探
讨 。
1 材料
U V
一
1 2 0 紫外可见分 光光度计 ( 日本 岛
津 ) ,酪氨酸酶 ( E C I · 1 、 4 . 1 、 8 . 1 , S i g m a ) , 左
旋多巴 (S i g m a ) , 黄芬素诱导体 (从市售黄琴
提取 , 重结晶法纯化后为淡黄褐色粉末 ) ; 其
它试剂均为 A R 级 。
S D
、 酪氨酸酶和左旋多 巴分别 以 p H 6 . 8
的 0 . 0 2 5 m ol / L 磷酸盐缓冲液配成所需浓度
溶液 。
2 方法
2
.
1 反应速度测定 : 在试管中先加人一定量
的 S D 溶 液和左旋多 巴溶液 , 再用缓 冲溶液
补充至混合液总体积为 4 . 5 0 m L , 25 ℃温育
s m in 后 ,加人 O . S O m L 酪氨酸酶溶液 ( 0 . 10
g / L )
, 立 即用分光光度计在 4 75 n m 处 测吸
光度 ( A ) 。 连续记录 1 0 m i n ,取 0一 3 . 0 m i n
间的吸光度平均变化率作为初始反应速度 。
0
.
1 0
0
.
2 0
0
。
2 0
0
.
25
0
.
33
0
。
50
1
.
00
2
.
0 0
0
.
2 0
0
.
2 5
0
。
3 3
0
.
5 0
l
。
0 0
2
.
0 0
0
。
2 0
0
.
2 5
0
.
3 3
0
。
5 0
1
.
0 0
2
.
0 0
△ A t/
0
.
0 3 34
0
。
0 4 04
0
.
0 4 9 9
0
.
0 6 2 8
0
.
0 9 5 2
0
。
1 2 5
0
.
0 1 8 3
0
.
0 2 1 2
0
.
0 2 7 8
0
.
0 3 8 3
0
.
0 6 2 1
0
.
0 9 8 6
0
.
0 1 1 6
0
.
0 1 3 4
0
.
0 1 8 6
0
。
0 2 7 3
0
.
0 4 3 6
0
.
0 6 9 0
8
.
0
5 4
.
6
4 7
。
2
3 6
.
0
2 5
。
8
1 6
。
1
1 0
.
1
8 6
。
2
7 4
。
6
5 3
.
7
3 7
。
0
22
.
9
1 4
.
5
其 中△ A t/ 表示 反应初速 度 , S 和 C 分别 为底物 左旋
多巴 和抑制剂 S D 在反应介质 中的浓度 。
A d d r e s s
:
F a n g Y e
,
M e d i e a l C o lle g e o f S h a n t o u U n i v e r s i t y
,
S h a n t o u
.
5 2 6
.
3
.
2 S D 抑制酪氨酸酶 的机制探讨 :酪氨酸
酶催化酪氨酸氧化为多 巴并继而氧化为多 巴
酿 ,最终形成黑色素 (皮肤色素 ) 。其反应过程
可简示如下 :
。拿残黔” · q散萝残黔璐氮胶 多 巴
月今c白2黔’ 纵 ’ ` ’
的匆如加认.资心à侧谈异以
多 巴砚
一 2 一 1 0 0 3 1 2
(旅度 ) 、 C ( . 川d了 L )
l
一无抑制剂 2 一 0 . 10 m m ol / L S D
3一 0
.
2 0 m m o l / L S D
图 1 S D 抑制酷氮酸醉的 L i n e w e a v e r
一
B u r k 曲线 ( n = 3 )
写丫气下前一丁一而污一石j 0 . ” 。 2
(旅度 )通 e ( . 口 d / L )
1
一 0
.
2 5 m m o l / L 多 巴 2一 0 . 3 3 m m o l / L
多 巴 3一 0 . 5 0 m m o l / L 多 巴 4一 1 . 0 0
m m ol / L 多巴
图 2 S D 抑制酪氨酸酶的 D i xo n
曲线 ( n = 3 )
从图 1 可看出 , S D 对酪氨酸酶 的抑制是
竞争性的 ; 从图 1 、 2 上 的横轴截距可分 别得
出 k。 值和 k、 值 〔` 1 ,结果见表 2 。
衰 2 不同浓度 S D 抑制酷氮酸醉的
动力学参数
C ( m m o l / L )
0 0
.
10 0
.
2 0
k二 ( m m o l / L ) 0
.
7 8 7 1
.
4 5 2
.
6 3
k
、
( m m o l / L ) 0
.
0 5 8
《中草药 》 1 9 99 年第 3 0 卷第 7 期
在此过程 中 , 酪氨酸酶可提供 O护5 〕 , 并
通过 O子的引发困和酪氨酸酶的催化作用使
酪氨酸逐步氧化 ,最终形成黑色素 。 因此 , S D
对酪氨酸酶的抑制作用机制可推断如下 : ( 1)
由于在酪氨酸酶 的催化 氧化过程 中 , 0 于既
是引发剂又是反应物 , 因此 S D 对 O 子的清除
作 用既阻断 了反应 的引发 , 也削弱了酪氨酸
酶 的供氧作用 , 从而使酪氨酸氧化反 应的强
度减弱 , 即削弱了酪氨酸酶的作用 。 所以 , S D
对 O 了的清除作用是其对酪氨酸酶的竞争性
抑制的一个重要方面 ; ( 2 ) 由于 S D 的母体为
5
,
6
,
7
,
4气四 轻基黄酮 ,其 B 环上的结构与酪
氨酸相 同 , 都是对位苯酚的结构 ,每一步氧化
的产物在结构上也 与酪氨酸的 极为相似 , 所
以 , S D 也可被酪氨酸酶催化 , 是酪氨酸酶 的
竞争性底物 。 它们可与酪氨酸酶竞争性地结
合 , 从而削弱了酪氨酸酶对酪氨酸及其系列
氧化产物的催化氧化作用 。 因此 , 作为竞争性
底物是 S D 抑 制酪氨酸 酶的 另一个 重要 方
面 。
清除 0 牙和作为竞争性底物是 S D 抑制
酪氨酸酶的两个重要机制 。 其它多经基黄酮
化合物对酪氨酸酶也具有不同程度的抑制作
用21[ 。 虽不同的多经基黄酮化合物在结构上
有一定差异 ,但对 O牙清除作用则是它们 的
共性 , 故推断清 除 0 子是多经基 黄酮 化合 物
抑制酪氨酸 酶普遍存 在的过 程 。 提示所 有
O子的清除剂将都是酪氨酸酶的抑制剂 。
酪氨酸酶普遍存在于人和动植物体内 ,
`
5 2 7
.
60阴刹幼认“资心)友侧暇尽创时à
是黑色素合成的关键酶 , 色素 障碍性疾病及
恶性黑色素瘤的发生和治疗也与酪 氨酸酶有
直接关系川 。 S D 抑制酪氨酸酶机制的探讨 ,
对色素障碍性疾病及恶性黑色素瘤的防治将
有一定的指导意义 。
参 考 文 献
l 刘诗平 ,等 . 中草药 , 1 9 9 1 , 2 2 ( 4 ) : 1 8 2
2 丁 维功 , 等 . 中国医学化 学进 展 . 上海 : 百家 出版社 ,
1 9 9 6
: 7 2
方 冶 . 中草药 , 1 9 9 8 , 2 9 ( 9 ) : 59 6
陈惠黎 , 等 . 分 子酶学 . 北京 : 人 民卫生出版社 , 1 983 :
2 3 3
王 夔 , 等 、 生命 科学中 的微量元素 , 北京 : 中国计量
出版社 , j 9 8 9 : 5 3 5
S a n e h e z
一
F e r r e r A
, e t a l
.
B i o e h e m B i o p h y A e t a
, 1 9 95
,
1 2 4 7
: 1
季文才 . 生命的化学 , 1 99 1 , 1 1 ( l ) : 3
( 1 9 9 9
一
0 2
一
1 2 收稿 )
墓头回总昔片治疗大肠癌的临床研究
河南省人 民医院 (郑州 4 5 0 0 0 3)
河南省肿瘤 医院
陈金秀 ’
王怀璋
马培志
摘 要 以墓头 回 (异叶败酱 )总昔 片结合手术 、 化疗治疗 幼 例大肠癌患者 , 1 年 、 2 年 、 3 年的生存
率为 79 % 、 61 % 、 4 0% 。 该制剂能增强患者体力状 况 , 改善临 床症状 , 显著 降低癌胚抗原 ( C E A )水
平 ;能够提高 T 细胞 免疫功能 , 增强体内 N K 杀 伤细胞活性 。
关键词 肠肿瘤 中医药疗 法 墓头 回总昔 片
墓头回为败酱科植物异叶败酱 尸 “ t ir nl’ a
h e z e r op 勿l al B g e 及糙 叶败酱 P . : c a b ar B g e
的根 ,具有清热解毒 、 消痈排脓 、 祛窟 止痛等
功能 。 近年来发现墓头回体外有较强的抗癌
作用川 。 我们将墓头回 ( 异叶败酱 ) 的主要化
学成分进行提取分离 . 研制成墓头回总昔片 ,
对大肠癌患者进行了临床观察和研究 。
1 一般资料
所有病例均经病理检查证实为大肠恶性
肿瘤 , 其 中男 3 8 例 , 女 12 例 。 年龄 2 5一 7 5
岁 ,平均 5 0 岁 。 病变部位于直肠 2 4 例 , 乙状
结肠 10 例 , 降结肠 5 例 , 横结肠 3 例 , 升结肠
7 例 , 回盲部 1 例 。 病变类型 : 腺癌 32 例 ,粘
液腺癌 8 例 , 高分化腺癌 2 例 , 中分化腺癌 3
例 , 低分化腺癌 4 例 , 乳头状腺 癌 1 例 。 按
D u ke s
, 分型 , B 期 24 例 , C 期 1 2 例 , D 期 1 4
例 。 另随机选同期化疗患者 32 例为对照组 。
2 治疗方法
所有病例一旦确诊 , 均先行手术治疗 , B 、 C
期患者施行根治术 ( 占 72 % ) , D 期患者行姑息
性手术 ( 占 2 8 % ) ,术后 4 周开始化疗 。
2
.
1 术后化疗组 (对照组 ) : 5一氟脉哦吮 O , 5
g 静脉点滴 , 隔 日 1 次 , 总量 1 0 9 ; 丝裂霉素 6
m g 加入 0 . 9%生理盐水 20 m L 中静脉推注 ,
每 周 1 次 。 化疗前 后均常规肌注 胃复安 10
m g
。 上述两药合用 8 周为 1 疗程 。 全部患者
均常规 口 服 V it B 6 , 以辅助治疗 。
2
.
2 术后中药加化疗组 (治疗组 ) : 除上述化
疗外 , 加服墓头 回总昔片 , 每 次 3 片 , 每 日 3
次 , 2 月为 1 疗程 。
2
.
3 统计方法 : 计量资料均采用 t 检验 。
3 治疗结果
.3 1 体力状况 : 用 K ar on fs k y 评分法作治疗
前后评分 ,接受中药治疗前大于或等于 60 分的
:感燕撇橇羚鹭P e o p le , , H o s p i t a l , Z h e n g z h o u中医学院 中药专业 ,获 中药学硕士学位 . 近年来在 国家级 和省级刊物上发表1 9 9 7 年 1 0 月出席首届世界 中西 医结合大会 。 参与编写著作 2 部 , 先后承担供职于河南省人 民医 院药剂科 , 主要从 事中 、 西 药新制剂 的研制与开发应用 。
5 28