全 文 ：影响 , 结果以 s m ol / I一 为佳 。
参 考 文 献
l 中华人 民共和 国药典一部 . 19 9 。 : 1吐5
2 江苏新 医学 院编 . 中药大 词典 ( L册 ) . 1 9 8 6 : 1 1 2 7
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张爱岑 , 等 . 中成药 , 1 9 9 4 ; 1 9 (12 ) : 1 2
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版社 , 1 9 8 2 : 1 1 2
(1 9 9 7
一
1 2
一
3 1 收稿 、
Stu d ie s o n th e Q u a lity
一 c o n t r o l Sta n d a r d o f P a e o n o l in Z h ilin C a Ps u le
I
一
1 H u ife 丁1 a n d W
a n g 1 1一ie (C o lle g e o f P h a r m a e y , T ia n jin U n iv e r s ity o f M e d ie a l S e ie n e e s , T ia n zin 3 0 ()()7 0 )
A b s tr a c t Pa e o n o l 15 o n e o f t he a e tiv e e o n ip () n e n t s o f tlle a n ti
一
g ()n o r r h e ie l)r e p a r a tio n Z h ilin e a p s 、lle
.
A s it 一5 v o la tile w ith s t e a m , P a e o n o l e a n be s e p a r o te d fr o m th e Pr e P a r a tio n b y s t e a m d is tilla tio n a n d d e : e r -
m in e d q u a lit a t iv e ly a n d (l u a n tit a tiv e ly b y v ls ib le 乏飞n d u lt r a v io le t s p e e t r o p lio t o m e t r y
.
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,
b la n k in t e rfe r e n e e C a n b e e lim in a t e d a n d a r e e o v e r y r a t e o f a d d e d s a m ple o f 9 8
.
7 5 % 弋n 一 6 ) ,
R S D = 0
.
6 8 % w
a s o b t a in e d
.
K e y w o r d s Z h ilin e a Ps u le P a e o n o l u lt r a v io le t v is ib le sp e e t r o l)h o r() m e t r y
黄等素诱导体紫外吸收清除 O 牙和抑制
酪氨酸酶性能的研究
汕 头大学 医学院化学 教研室 (5 1 5 0 3 1 ) 方 冶
摘 要 从 中药 黄琴 中提 取 了黄芬素诱导 体 (S D ) , 并 经纯化后 对其紫外 吸收 、清除 超氧 阴离子 自
由基 (0 了)和抑 制酪氨 酸酶的作用进行试验 。 结果 为 : 在 1 9 0 n m ~ 4 0 0 n m 范 围内各波长 都有强 吸
收 , 清 除 (O 子)的 C 。。为 0 . 13 m g / I刁 . 抑制 酪氨酸酶的 C 二 为 0 . 06 9 /l 才 。 提示 S D 可作 为一种高效多功
能的防晒添加剂 。
关键词 黄菩 黄芬素诱 导体 (S D ) 超氧阴离子 自由基 (0 子) 酪氨 酸酶 防晒添加 剂
从具抗菌消炎作 用的中药黄答中提取了
黄琴素诱 导体 (S D ) , 经纯化后对其进行紫外
吸收 、清除 O 子 和抑制酪氨酸酶的试 验 , 证实
它在 1 9 0 n m 一 4 0 0 n m 范围内各波长的紫外
线都 有强吸收 , 并发现它对 0 『有显著 的清
除作用和对酪氨酸酶有明显的抑制作用 。 提
示 不但有优异 的紫外 吸收性能 , 还有保 护皮
肤 、 增 白皮肤的作用 , 而且具有 防治皮炎 、皮
肤癌 、黑斑及黑色素瘤的作用 。 现报道如下 。
1 材料和方法
1
.
1 仪器和试 剂 : U V 一12 0 紫外可见分光光
度计 汪王F 一 1 化学发光仪 。
黄 嗓吟 氧化酶 (X O D , 东 风公 司 , 1_ . 9 3 8
胖/ m l一 , 0 . 3 1 3 2, / m IJ ) , 超 氧 化 物 歧 化 酶
(s o D
, 华东 理工 大学 , 6 0 0 0 拼/ m g . p r o t一
次黄嗓吟 (H X , Fl u ka) , 酪 氨酸酶 (E C , 1 . 1 、
4
.
1
、
8
.
1
,
S ig m a )
, 左旋 多 巴 (Sin g m a ) , 鲁‘米
诺 (1 , u m in o l, M e r c k 一S e hu e h a r d t ) , 黄 芬素 诱
导体 (从 市售黄芬提取 , 重结晶法纯化后为淡
黄褐色粉末 ) ;其它试剂均为 A R 级 。
X O D
、
H X 和 IJ u m in o l分 别 以 p H IO . 2
含 0 . 1 m rn o l/ I一 E D T A 的 0 . 0 5 m o l/ I, 碳酸
盐缓 冲液稀释 ; S O D 以 p H 7 . 8 含 0 . 1 m n lt)l /
I
_
E D T A 的 0 . 0 5 m ol / IJ 磷酸盐缓冲液稀释 ;
A d d r e s s
:
F a n g Y e
,
D e p a r t n ie n t o f C h e n l is t r y
,
M e d ie
a
l C o ll
e g e o f S ll a n to u 毛Jn iv e r s ily s lla n r o tl
冶 36 岁 , 讲 师 。 1 9 3 6 年毕 业于华中 师大 化学系 , 并 获学士学位 ; 1 9 9 3 年 中国科技大学修 读 “仪器分析 ”专业研究主要从事 医 用化学的教学工作和药物 检验的研究工作 , 食品防腐 、 日用化学 品制作等工作 。
5 9 6
S O D 溶液 (0 . 01 9 / L ) , 再按 1 . 2 . 2 所述的步
骤及用量加人各试剂 , 测量发光峰值 (H , 3 次
取 平 均 ) ; 以 不 加 S O D 时 的 发 光 峰 值 为
1 0。% 发光值 , 计算 S O D 的抑制率 : I% 一「H
(1 0 0 % )
一
H (样 品 ) ] X 1 0 0 / H (1 0 0 % ) 。结果见
图 2 。 从图 2 得 出 50 %抑制时的浓度 C S。为
2 1
.
5 拼9 . p r o t . / IJ 。
碱侧娜哪
S D
、酪氨 酸酶 和左 旋多 巴分别 以 p H 6 . 8 的
0
.
0 2 5 m ol / L 磷酸盐缓冲液稀释 。
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 紫外吸收试验 : 用紫外可见分光光度
计 , 以溶剂为空 白 , 测定 S D 溶液在各波长下
的吸收度值 A 。
1
.
2
.
2 0 『 的检测 〔2〕 : 采用 X O D 一H X 一L u m i-
n ol 化学发光体 系 , 用化学发光法进行检测 。
步骤为 : 于 H F一 1 化学发光仪 的发光腔内 , 先
加入 0 . 1 m L X O D (0 . 1 9 / L ) , 再加人 H X 与
鲁米 诺 的混 合 液 ( 1 0鸽 m ol / L , 9 : 1 混 合 )
1
.
9 0 m L 启 动 反应 , 最 终反 应 体积 为 2 . 0 0
m I
J 。 测量发光峰值进行计算 。
1
.
2
.
3 酪氨酸酶活力测定 〔2〕 : 在试管中加人
1
.
0 m I
J 左旋 多 巴溶 液 ( 1 0 m m o l/ L )及 3 . 5
m l
, 缓 冲溶液 , 2 5 ‘C温育 s m in 后 , 加人 0 . 4
m L 酪氨酸酶 (0 . 1 9 八才 ) , 立即用分光光度计
在 4 7 5 n m 处测 定 吸收 度 A , 连 续 记 录 n
m in
, 取 7 m in 一 1 1 m in 之 间 , 以 每分钟 A 、7 5
增加 0 . 0 01 为 1 个酶活力单位 (U ) 。
2 结果与讨论
2
.
1 S D 对紫外线的吸收作用 : 于 1 c m 比色
杯 中 , S D 溶液 (1 g / L )在各波长处 的吸收度
值 A (3 次取平均 ) , 测定结果见图 1 。从图 1 中
看出 , 样品在 1 9 0 n m 一 4 0 0 n m 范图内各波长
都有强烈的吸收 , 推算在该范围内的最强吸收
(2 4 0 n m )及最弱吸收 (3 6 0 n m )处达到 5 0 %
吸收时 , 样品浓度分别为 。. n g /1 J 和 。. 2 0 9 /
I
J 。 说明样品具有极佳的紫外吸收性能 。
2
.
2 S O D 活力 测定及 S D 清 除 O 于的试验
结果
2
.
2
.
1 S O D 活力测定 : 先加人一定量的
波长 又(n m )
图 1 黄等素诱导体的紫外吸收曲线
2
.
2
.
2 S D 抑制 O 夕 的活 力测 定 : 以一定量
的 S D 溶 液 (0 . 1 9 / L )代替 上 述 的 S O D 溶
液 , 按 同法测其发光峰值 (3 次取平均 )并计
算相应的抑制率 , 结果见图 3 。 从 图 3 看出 ,
SD 有强烈抑制 0 子发光的作用 , 其抑制 曲线
与 S O D 的 极为 相似 , 抑制 率 I 都 随浓 度 C
的增加而增加 , 但 I 与 C 不呈线性关 系 。 说
明它与 S O D 一 样 , 对 O 子 有 明显 的清 除作
用 。 从 图 3 中得出 C S。为 0 . 31 m g / L , 它相对
于 S O D 的比活力为 4 1 6 U / m g 。
2
.
3 S D 抑制酪氨酸酶的活力测 定 : 先加入
一 定 量 的 S D 溶液 (0 . 1 9 / L ) , 再加 人 L O
m I
J 左旋多 巴溶 液 , 以 缓 冲溶 液补充 至总体
积为 5 . 0 m L , 同前述方法测定酪氨酸酶活
力 。 结果见 图 4 。 从图 4 中看 出 , S D 对酪氨酸
酶有显 著的抑 制作用 , 抑制 曲线 与对 O 厂的
抑制 曲线也很相似 , 都是 工%随 C 的增加而
增 加 , 但 不 呈线 性关 系 ; 从 图 4 得 出 , C : 。为
O
·
0 6 9 / L
。
6040加
水胃铸书段
的叻40酬
户盆份书橄价二铸.橄
浓度 矛 (护旧2 ‘》
0
.
2 5 0 5 0
浓度 刃
7 5 1 以 1 25
0 0 2 器 : 几怨 “阳 “ ‘。
图 2 SO D 对超氧离子 自 由基 图 3 黄琴素诱导体对超氧 阴 图 4
的抑 制曲线 离子 自由基抑制 曲线
黄等素诱导体对酪氨酸
酶的抑 制曲线
《中草药 》1 9 9 8 年第 29 卷第 9 期 . 5 9 7 .
3 讨论
阳 光 中的紫 外 线按 其 波 长分 为三 段 :
U V
一
A (4 0 0 n m 一 3 2 0 n m ) , U V 一B (3 2 0 n m ~
2 8 0 n m )和 U V 一C (2 8 0 n m 一 1 0 n m ) 。 皮肤长
时间受阳光照射时 可产生 自由基 , 引发脂质
过氧化反应 , 进而引起皮炎 , 导致皮肤癌 。 一
般 防晒化妆品中添加的化学紫外吸收剂只能
吸收 2 9 0 n m 一 3 2 0 n m 波长范围的紫 外线 ;
虽然其中也常常加人二氧化钦 、氧化锌之类
的紫外掩蔽剂以 防护 U V 一A , 但这些掩蔽剂
对紫外线并没有吸收作用 。 只具遮挡作用 , 而
且它们易从皮肤上脱落而失去作用 〔3〕 ; U V 一C
虽经臭氧层吸收后 , 到达地面已极为微弱 , 但
随着大气层 臭氧洞的 日益增大 , U V 一C 对 人
体皮肤的损害将 日趋严重 。 由此可见 , 一般的
化学防晒剂根本无法充分地防止阳光中的紫
外线对人体皮肤的伤害 。 本文实验证 明 , SD
在 1 90 n m 一 4 0 0 n m 范围各波长都有强烈吸
收 , 其紫外吸收性 能远远优于现有一般的化
学 吸收剂 。 因此 , S D 将是首选 的防晒护肤添
加剂之一 。
0 牙 是 机体 内最初 产生 的 自由基 , 并 由
此 引发一 系列 的 自由基反应 , 造成机体组织
的损伤或坏死 , 导致皮炎 或癌变 ; S O D 是体
内清除 O 子的酶 , 近年来 已有 厂家将其添加
于护肤品中 , 但实验证明 , 新配的 S O D 溶液 ,
于 4 C冷藏过夜 , 其活力已有明显的下降 ;而
化妆 品 中的 S O D , 在 室温中贮藏 , 并且涂 抹
在皮肤之上露置于空气之 中 , 其 活性究竟 能
维持多久 ? 同时 , 这些大分子物质能否有效地
渗进皮肤发挥作用 ?至今未见详细证 明资料 。
可 以 推测 , S O D 作为护肤 品添加剂 , 其清除
O 子的效果将非常有限 。 实验证明 , S D 对 〔)牙
也有显著的清除作用 , 由于其分子 比 S O D 小
得多 , 且性能稳定 (自提取至完成本文全部实
验 , 历时 3 个多月 , 其活性未见明显衰退 ) , 由
此推测 , 将 S D 用于清 除 O 子 的护肤 品添加
剂 , 其效果将大大优于 SO D 。
酪氨酸酶普遍存在于人 和动植物体 内 ,
是黑色素合 成的关键酶 , 色素障碍性疾病及
恶性黑色素瘤的发生和治疗也与酪氨酸酶有
直接关系 〔们 。 由于 S D 对酪氨酸酶也有明显
的抑制作 用 , 所 以推测 , 将它 添加于护肤 品
中 , 将会 抑制皮 肤黑 色素 的合成 , 使皮肤 增
白 , 并对皮肤黑斑及黑色素瘤有一定的疗效 。
综上所述 , S D 不仅是一种极其有效的紫
外吸收剂 , 而且有显著 的清除 ()夕 和 抑制酪
氨酸酶的 ·作用 , 是一种集防晒 、护肤 、 增白 、消
炎 、 防癌和 清除黑斑等作用于一体的天然高
效多功能 的化妆 品添加剂 。可 以预见 , 对添加
S D 的化妆品的进一步研究和开发 , 将会有很
大的经济效益和社会效益 。
致谢 : 本文得到沈文英教授的大 力 支持 ,
特致谢意 !
参 考 文 献
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2 丁 维 功 , 等 . 中 国 医学 化 学 进 展 . 上 海 : 百 家 出 版社 ,
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3 谭勇军 , 等 . 精细 化工 小产品新 配方 . 武汉 : 中南工业大
学出版社 , 19 9 1 : 4 8
4 季文才 . 生命 的化 学 , 工9 9 1 ; 1 1 (1 ) : 3
(1 9 9 7
一
0 8
一
0 4 收稿 )
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