全 文 ：1-6)。根系发达 ,根的生长很快 , 15 d后长达 8～ 10
cm。三裂叶野葛再生植株经锻炼后 ,在移栽基质中
的移栽成活率达 90% 以上。
有关三裂叶野葛叶柄和茎段的组织培养和植株
再生的研究目前尚未见正式报道。我们的结果表明 ,
三裂叶野葛叶柄的组织培养和植株再生效果比其茎
段更好。比较野葛不同外植体再生植株的效果 ,我们
认为野葛组培快繁材料以选取叶柄最合适。本文结
果为我们利用细胞工程技术来生产葛根的药用有效
成分提供了基础材料。
参 考 文 献
1　郭建平 ,周　全 ,孙其荣 . 中草药 , 1995, 27(3) : 163
2　石昌顺 .中草药 , 1994, 25( 4): 496
3　范礼理 ,赵德化 ,赵敏崎 ,等 . 药学学报 , 1985, 20( 9): 647
4　 Tak aya K, Itok aw a H. Ch em Ph arm Bul l, 1982, 30( 4): 1496
5　施和平 ,潘瑞炽 . 植物生理学通讯 , 1998, 34( 6): 444
( 1999-05-13收稿 )
用同工酶技术鉴定滇产菟丝子
云南农业大学农学院 (昆明 650201)　　郭凤根
南京农业大学农学系　　　　　　　 　李扬汉
摘　要　采用过氧化物酶同工酶和谷草转氨酶同工酶分析技术鉴定了产于云南的 3种 7份菟丝子材料 ,结果表明
用同工酶技术鉴定菟丝子是一种新的行之有效的方法。
关键词　过氧化物酶同工酶　谷草转氨酶同工酶　菟丝子鉴定
Identification of Cuscuta L. by Isozyme Analysis
　　Colleg e o f Ag ronomy , Yunnan Ag ricultural Univ e rsity ( Kunming 650201)　 Guo Fenggen
　　Depar tment of Ag ronomy , Nanjing Ag ricultura l Univ er sity　 Li Yanghan
Abstract　　 7 samples of 3 species of Yunnan dodders w ere identi fied by peroxidase iso zyme and
g lutamic oxalacetate t ransaminase iso zyme analysis. The resul ts show ed that isozyme analysis was a new
and ef fectiv e method to identify these dodders.
Key words　 　 peroxidase iso zyme　 isozyme of g lutamic oxalaceta te transaminase　 dodder
identi fica tion
　　菟丝子 Cuscuta spp.是一类重要的中草药资
源 ,具有补肝肾、益精、明目、安胎等功效 [1 ]。 关于菟
丝子种类的鉴定 ,已报道过花粉形态 [2 ]、种子表面超
微结构 [3 ]、种皮显微特征 [4 ]、薄层层析 [5 ]、紫外光谱
法 [6 ]和蛋白质纸上电泳 [7 ]等方法或技术 ,但用同工
酶技术鉴定菟丝子尚未见报道。 作者进行了用同工
酶技术鉴定菟丝子的尝试 ,效果很好。现将结果作一
报道。
1　材料与方法
1. 1　材料及其处理:从云南各地收集到 3种 7份菟
丝子种子 (表 1) ,用浓硫酸处理 20～ 30 min以打破
休眠 ,用清水漂洗干净后把种子置于垫有潮湿滤纸
的培养皿中 ,于 25℃生化培养箱中培养 ,每天光照
12 h。 约 3 d后待菟丝子茎尖从种皮中伸出时取幼
苗制样。
表 1　供试菟丝子材料
编号 中名 拉丁学名 产地
1 菟　丝　子 Cuscuta chinensi s Lam. 云南省宾川县
2 金　灯　藤 C . japonica Choisy 云南省景洪市
3 大花菟丝子 C. ref lexa Rox b. 云南省玉溪市
4 大花菟丝子 C. ref lexa Rox b. 云南省大理市
5 大花菟丝子 C. ref lexa Rox b. 云南省昆明市
6 大花菟丝子 C. ref lexa Rox b. 云南省呈贡县
7 大花菟丝子 C. ref lexa Rox b. 云南省路南县
1. 2　聚丙烯酰胺凝胶的制备:按胡能书等介绍的方
法 [8 ]制备聚丙烯酰胺凝胶 ,规格为 13. 5 cm× 23. 5
cm× 0. 1 cm , 每板 12个点样槽 ,浓缩胶浓度 4% ,
分离胶浓度因酶而异: 过氧化物酶同工酶 ( POD) 7
·552· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 7期
Address: Guo Fenggen, Ag ricul tu ral Col leg e of Yunnan Ag ricu tu ral Universi ty, Kunming郭凤根　男 , 1964年 6月生于浙江平湖。 1998年 7月从南京农业大学农学系植物学专业毕业 ,并获理学博士学位。 1996年 11月起任云南农业大学农学院副教授。主要从事资源植物学的教学和科研工作 ,曾主持或参与了 8项国家自然科学基金课题或省部级科研课题的研究工作 ,在各级学术刊物上发表学术论文 30篇 ,许多论文被《 Ag ris》、《Weed Abs tract s》、《 Biocont rol New s and In formation》、《 Chemical Abs t racts》、《中国生物学文摘》和《中国农业文摘》等中外检索刊物收录。
% ;谷草转氨酶同工酶 ( GO T) 6%。
1. 3　酶液的制备: 取菟丝子幼苗 0. 5 g ,放入蒸馏
水中冲洗 ,滤纸吸干后放入预冷的小研钵中 ,加 10
滴 1% β-巯基乙醇和 10滴浓电极缓冲液 ,冰浴研磨
匀浆 , 10 000 r /min离心 10 min后取上清液作酶液
备用。
1. 4　点样、电泳和染色: 用 50μL微量进样器吸取
酶液点在样品槽内 ,每槽 1个样品 ;点完样吸取电
极缓冲液缓缓加在样品上至点样槽满 ,然后再加电
极缓冲液使电路接通 ,以溴酚蓝作指示剂 ,用稳压稳
流电泳仪稳流电泳 ,浓缩胶时每槽 1 mA,到分离胶
时加大电流至每槽 2 mA,约需 5 h后当溴酚蓝移至
离玻板下端 1 cm处时停止电泳。 POD染色液配方
是 5 mL联苯胺贮存液 + 2 m L 3% H2O2+ 93 mL
蒸馏水 ,室温下染色 5 min; GO T染色液配方是吡
哆醛 -5′-磷酸盐 2 mg+ α-酮戊二酸 200 mg+ L-天
冬氨酸 400 mg+ 坚牢蓝 BB 600 mg+ 0. 2 mol /L
Tris-HCL缓冲液 ( p H 8. 0) 100 mL,凝胶在染色液
中于 37℃下恒温染色 10 min[9, 10 ]。
1. 5　电泳结果的记录和保存:将染完色的同工酶凝
胶用 7% 醋酸进行漂洗和固定 ;测定酶带迁移距离
和指示剂迁移距离 ,两者相除即得相对迁移率 ( Rf
值 ) ;拍摄凝胶照片 ,绘制酶谱示意图 ;制干胶片供永
久保存。
2　结果与分析
2. 1　过氧化物酶同工酶 ( POD): 7份菟丝子试材的
过氧化物酶同工酶的电泳酶谱见图 1-Ⅰ ,共有 15
条 POD酶带 ,其中 Rf值为 0. 059的第一条酶带为
所有试材所共有 ,是菟丝子的特征带。 菟丝子 POD
酶带根据迁移率的大小可分为慢带区 ( Rf值 <
0. 15)、中间带区 ( 0. 15～ 0. 4)和快带区 ( 0. 4～ 0. 7)
3个区域。菟丝子 ( No. 1)仅有 2条酶带 ,均位于慢
带区: 金灯藤 ( No. 2) 有 14条酶带 ,分布在 3个区
中 ;大花菟丝子 ( No. 3～ 7)有 2～ 5条酶带 ,分布在
3个区中 ,其中 Rf值为 0. 196的酶带为大花菟丝子
的共有带。
Ⅰ -过氧化物酶同工酶酶谱　Ⅱ -谷草转氨酶同工酶酶谱
图 1　电泳酶谱
2. 2　谷草转氨酶同工酶 ( GO T): 7份菟丝子试材的
谷草转氨酶同工酶电泳酶谱见图 1-Ⅱ ,它们共有 5
条酶带 , Rf值为 0. 61的酶带是菟丝子 GO T的特征
带。菟丝子 ( No. 1)具有 Rf值为 0. 54和 0. 61的 2
条酶带 ;金灯藤 ( No. 2)有 4条酶带 , Rf值分别为
0. 34, 0. 54, 0. 61和 0. 71; 5份大花菟丝子中有 4份
的酶谱完全相同 ,都有 2条强带和 1条弱带 ,仅云
南产大花菟丝子除具有这 3条酶带外还具有 Rf值
为 0. 54的强带。
3　讨论
3. 1　菟丝子等小粒菟丝子的种子一般都很小 ,用种
子来鉴定难度很大 ;金灯藤和大花菟丝子等大粒菟
丝子的种子虽然较大 ,但两者极为相似 ,用显微方法
较难区分。黄建中等 [3 ]提出了应用扫描电镜观察菟
丝子种子表面超微结构 ,并依据超微结构进行检疫、
鉴定的新方法 ,该法效果很好 ,但由于电镜设备非一
般单位所具有 ,测试价格也比较高 ,所以其应用受到
了一定的限制。作者以产于云南省的 3种菟丝子的
7份种子为试材 ,先让其萌发长成幼苗 ,制样分析了
过氧化物酶同工酶和谷草转氨酶同工酶 2种酶系
统 ,酶带分离效果好 ,重复性也好 ,而且设备简单 ,操
作方便 ,分析技术也都比较成熟 ,可作为菟丝子鉴定
的新方法加以应用。
3. 2　菟丝子分种检索表
3. 2. 1　过氧化物酶同工酶分种检索表
1. 有 1条 Rf值为 0. 108的酶带。
　 2. 仅有 2条酶带 菟丝子……………………………
　 2. 酶带数多 , 9～ 14条 金灯藤………………………
1. 不具 Rf值为 0. 108的酶带 大花菟丝子…………
3. 2. 2　谷草转氨酶同工酶分种检索表
1. 有 1条 Rf值为 0. 34的酶带 金灯藤………………
1. 不具有 Rf值为 0. 34的酶带。
　 2. 仅有 2条酶带 菟丝子……………………………
　 2. 有 3条或 4条酶带 大花菟丝子………………
参 考 文 献
1　金　晓 ,李家实 ,阎文玫 . 中国中药杂志 , 1992, 17( 5): 292
2　张芝玉 ,郭　澄 ,苏中武 ,等 . 广西植物 , 1991, 11( 4): 308
3　黄建中 ,李扬汉 ,章毓英 . 植物分类学报 , 1993, 31( 3): 261
4　金　晓 ,李家实 ,阎文玫 . 中国中药杂志 , 1990, 15( 4): 9
5　郭　澄 ,苏中武 ,李承祜 ,等 . 基层中药杂志 , 1992, 6( 3): 12
6　郭　澄 ,苏中武 ,李承祜 . 中草药 , 1991, 22( 12): 553
7　张淑华 ,李连怀 ,常广敬 ,等 . 河北医学院学报 , 1988, 9( 4): 169
8　胡能书 ,万贤国编 . 同工酶技术及其应用 .长沙:湖南科技出版
社 , 1985: 1
9　沈全光 .植物生理学通讯 , 1980( 4): 59
10　黄庆榴 . 植物生理学实验手册 . 上海:上海科技出版社 , 1985:
344
( 1999-06-28收稿 )
·553·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 7期