全 文 ：1-实生苗　 2-嫁接苗　 3-公园种植　 4-国内制
剂 [4 ]　 5-国外制剂 [7 ]　 6-国外提取物 [5]
注:实生苗及嫁接苗均采用 06-14采集的数据 ,
公园种植采用 08-15采集的数据。
图 3　不同类型银杏叶及不同来源制剂
黄酮苷元 Q∶K∶ I比值的比较
酚、异鼠李素含量之比 1∶ ( 0. 98± 0. 16)∶ ( 0. 38±
0. 07 ) [4 ]和 1∶ ( 1. 06± 0. 23)∶ ( 0. 29± 0. 02) [ 5] ,国
内学者认为二者比值与质量有一定关系。 瑞士学者
Hasler和 Sticher早已注意到此 ,银杏叶黄酮苷元
比值为 1∶ 2∶ 0. 75,银杏提取物为 1∶ ( 0. 94±
0. 32)∶ ( 0. 24± 0. 03) [6 ] , 3个不同生产厂家银杏叶
制剂 1∶ ( 1. 21± 0. 10): ( 0. 43± 0. 02) [7 ] ,与我国学
者及我们 [2 ]以前分析结果较一致。本次实验结果实
生苗 I值低于文献 3倍 ,嫁接苗 K值低 1倍 ,是否与
栽培期过短 ,还是与类型有关 ,尚待探讨。
3. 3　综上所述 ,良种银杏幼苗叶总黄酮含量与生长
季节、树龄、培育方式、生态环境和产地条件等诸因
素有关。 8月份银杏生长量似乎与含量有一定关联。
参考文献:
[ 1 ]　 Stich er O. Quali ty of Gink go p reparations [ J ]. Planta Med.
1993, 59: 2-11.
[ 2 ]　杨义芳 ,王　晖 ,夏野鹰 ,等 . 银杏叶质量标准研究 [ J] . 安徽
中医学院学报 , 1997, 16( S): 46-47.
[3 ]　仲　英 ,唐文照 ,丁杏苞 ,等 . 不同树龄的银杏叶在不同生长季
节中银杏总黄酮和总内酯的含量变化 [ J] . 中草药 , 1993, 30
( 12): 909-910.
[4 ]　陶巧凤 . 不同厂家的银杏叶片黄酮含量的比较与分析 [ J ]. 中
国现代应用药学杂志 , 1999, 16( 1): 47-48. .
[ 5 ]　王新宏 ,王智华 ,范广平 ,等 . HPLC法测定银杏制剂成分 [ J ].
中成药 , 1996: 18( 9): 36-37.
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matographic d etermination of fiv e w idesp read f lavonoid ag ly-
cones [ J ]. J Cl romatog r, 1990, 508( 1): 236-240.
[ 7 ]　 Hasler A, Tich er O. M eier B. Id ent ifi cation and determina-
tion of the f lav onoid s f rom Ginkgo biloba by high-performance
liquid ch rom atography [ J] . J Chromatog r, 1992, 605( 1): 41-
48.
天师栗茎芽组织培养研究
郑小江 ,刘金龙
⒇
(湖北民族学院资源与环境科学系 ,湖北 恩施　 445000)
摘　要: 目的　研究其组培技术 ,为工厂化育苗提供依据。 方法　采用不同浓度的 MS无机盐 ,不同浓度的 MS有
机成分 ,对其进行生根和生茎芽、叶的效果研究。 结果　 1 /2改良 M S无机盐+ 肌醇 100 mg / L+ 烟酸 0. 5 mg / L+
盐酸吡哆醇 0. 5 mg /L+ 盐酸硫胺素 0. 1 mg / L+ 6-BA 1 mg / L+ 甘氨酸 2 mg / L+ IBA0. 5 mg /L+ 蔗糖 2% + 琼脂
0. 8% + V C 0. 1 mg /L对愈伤组织形成及茎芽分化生长效果显著 ; 1 /8改良 M S无机盐+ 肌醇 100 mg / L+ 烟酸
0. 5 mg /L+ 盐酸吡哆醇 0. 5 mg / L+ 盐酸硫胺素 0. 1 mg /L+ 甘氨酸 2 mg /L+ 蔗糖 1% + 琼脂 0. 7% + 活性碳 600
mg / L+ IBA0. 5 mg /L+ V C 0. 1 mg /L+ 6-BA 0. 2 mg /L对生根效果显著。结论　以上结果分别为天师栗茎芽组培
中愈伤组织形成与茎芽生长和生根的适宜培养基配方 ;愈伤组织形成与茎芽生长和生根的生长素浓度与细胞分裂
素浓度比为 0. 5∶ 1 mg /L和 0. 5∶ 0. 2 mg /L较合适 ;高无机盐浓度抑制生根 , 1 /8 M S改良无机盐浓度生根最佳 ;
V c可消除组培中因茎芽分泌的酚类氧化物在培养基中过量积累 ,而对茎芽和根生长的不良影响 ;茎芽和根的分化
在微酸至中性培养基中效果较好。
关键词: 开师栗 ;茎芽 ;组织培养
中图分类号: R282. 13　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2001) 11 1035 04
Studies on tissue culture for bud of stem in Aesculus wilsonii
ZHENG Xiao-jiang , L IU Jin-long
　　 ( Depa rtment o f Resource and Envir onment Science, Hubei Institute fo r Nationalities, Enshi Hubei 445000, China)
Key words: Aesculus wilsonii Rehd. ; bud o f stem; tissue cultur e
　　天师栗 Aesculus wilsonii Rehd落叶乔木 ,湖北 省保护树种 [1 ]。湖北恩施州木林子、星斗山保护区有
·1036· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
⒇收稿日期: 2001-04-25作者简介:郑小江 ( 1958-) ,男 ,山东淄博人 ,湖北民族学院资源与环境科学系 (原林学系 )副教授 ,中国林学会高级会员 ,硕士生导师。 研究方向:野生植物资源开发利用。 地址:湖北省恩施市三孔桥路 29号。 Tel: 0718-8430564
极少量的原始母树 ,其木材黄褐色带红色 ,轻软细
质 ,果实药用可理气、解郁、安神、杀虫疟、止痛、治气
郁、胃闷、疝气、腹痛、痢疾、烧伤水肿、肝炎、肝硬化、
腹水。种子含油量 20% ,供制优质肥皂 ,是多用途经
济林和绿化树种。有性繁殖差 ,用其茎芽进行组织培
养是快繁的有效方法 ,但无报道 ,为此进行了研究。
1　材料与方法
1. 1　天师栗茎芽为恩施州星斗山自然保护区生长
的原始母树茎芽。
1. 2　培养条件: 天师栗茎芽处理: 从母树上取带幼
芽的茎节 ,用 70%医用酒精浸泡 5 min,取出置
0. 1%升汞水中浸泡 5 min后在无菌超净工作台上
用无菌蒸馏水浸泡 5次 ,每次 5 min,消毒后的茎芽
在无菌条件下接入灭菌的三角瓶内的培养基上→盖
上半透膜→组织室培养。温度 25℃ ,光照 1 500 lx,
每日光照 14 h。将其在茎叶分化的培养基上长出新
的茎芽叶剥离母体转接在生根培养基上培养。
1. 3　培养基配方研究设计
1. 3. 1　愈伤组织 ,茎芽分化配方研究设计 ,促愈伤
组织和促使茎芽分化生长的培养基配方 ,见表 1。
表 1　形成梭罗果愈伤组织、茎芽分化生长培养基配方
改良培养基
类　　　型
IBA
( mg /L)
IAA
( mg /L)
NAA
( mg /L)
V C
( mg /L)
肌醇
( mg /L)
盐酸硫胺素
( mg /L)
硫酸腺嘌呤
(mg /L)
琼脂
( mg /L)
蔗糖
(% )
6-BA
( mg /L)
烟酸
( mg /L)
盐酸吡哆醇
( mg /L)
甘氨酸
( mg /L)
MS 0. 5 - - - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
- 0. 5 - - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
- - 0. 5 - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
0. 2 - - - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
- 0. 2 - - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
- - 0. 2 - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
0. 8 - - - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
- 0. 8 - - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
- - 0. 8 - 33. 3 0. 133 26. 66 0. 7 3 1 - - -
1 /2 M S 0. 5 - - 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
- 0. 5 - 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
- - 0. 5 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
0. 2 - - 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
- 0. 2 - 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
- - 0. 2 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
0. 8 - - 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
- 0. 8 - 0. 1 100 0. 1 - 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
- - 0. 8 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 1 0. 5 0. 5 2
1 /3 M S 0. 5 - - 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
- 0. 5 - 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
- - 0. 5 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
0. 2 - - 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
- 0. 2 - 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
- - 0. 2 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
0. 8 - - 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
- 0. 8 - 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
- - 0. 8 0. 1 100 0. 1 80 0. 8 2 0. 5 0. 5 0. 5 2
1. 3. 2　生根培养基配方研究设计 (见表 2)。
2　结果
2. 1　其带幼芽的茎节经过 16 d组培 ,插入培养基
的茎节截面韧皮部处形成愈伤组织 ,以后逐渐向木
质部形成愈伤组织 , 35 d后 ,叶片展开并在叶腋处
生长出茎芽 , 50 d后 ,小茎芽展叶 ,茎长 0. 3 cm。
2. 2　 1 /2改良 MS无机盐+ 肌醇 100 mg /L+ 烟酸
0. 5 mg /L+ 盐酸吡哆醇 0. 5 mg /L+ 盐酸硫胺素
0. 1 mg /L+ 甘氨酸 2 mg /L+ V C 0. 1 mg /L+ IBA
0. 5 mg /L+ 6-BA 1 mg /L+ 琼脂 0. 8%+ 蔗糖 2%
培养基对梭罗果快速形成愈伤组织和茎芽分化生长
效果显著 (见表 3)。 它在组培中对 N、 P、 K需求较
高 ;对烟酸、肌醇、盐酸吡哆醇、甘氨酸的量有一定要
求 ;浓度过高抑制愈伤组织形成和茎芽分化生长 ;生
长素与细胞分裂浓度之比为 0. 5∶ 1; V C对分泌的
酚类氧化物有拮抗作用加速其愈伤组织形成和茎芽
分化生长 ;硫酸腺嘌呤对地上部的分化无影响。
2. 3　转接在生根培养基上的幼嫩茎节 ,组培 15 d
后插入培养基的茎节截面韧皮部处 ,出现愈伤组织 ,
以后扩大整个茎节截面 ,组培 35 d从茎节韧皮部与
木质部交接面处分化出肉眼明显看见的突出的白细
幼根生长点。
·1037·中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2001年第 32卷第 11期
表 2　梭罗果生根培养基配方
改良培养基种类 IBA
( mg /L)
N AA
( mg /L)
蔗糖
(% )
V C
( mg /L)
活性炭
( mg /L)
甘氨酸
( mg /L)
改良培养基种类 IBA
( mg /L)
N AA
( mg /L)
蔗糖
(% )
VC
( mg /L)
活性炭
( mg /L)
甘氨酸
( mg /L)
1 /2 M S 0. 2 - 1 0. 1 600 2 1 /4 MS - 0. 2 1 0. 1 600 2
0. 5 - 1 0. 1 600 2 - 0. 5 1 0. 1 600 2
0. 8 - 1 0. 1 600 2 - 0. 8 1 0. 1 600 2
- 0. 2 1 0. 1 600 2 1 /8 MS 0. 2 - 1 0. 1 600 2
- 0. 5 1 0. 1 600 2 0. 5 - 1 0. 1 600 2
- 0. 8 1 0. 1 600 2 0. 8 - 1 0. 1 600 2
1 /3 M S 0. 2 - 1 0. 1 600 2 - 0. 2 1 0. 1 600 2
0. 5 - 1 0. 1 600 2 - 0. 5 1 0. 1 600 2
0. 8 - 1 0. 1 600 2 - 0. 8 1 0. 1 600 2
- 0. 2 1 0. 1 600 2 1 /12 MS 0. 2 - 1 0. 1 600 2
- 0. 5 1 0. 1 600 2 0. 5 - 1 0. 1 600 2
- 0. 8 1 0. 1 600 2 0. 8 - 1 0. 1 600 2
1 /4 M S 0. 2 - 1 0. 1 600 2 - 0. 2 1 0. 1 600 2
0. 5 - 1 0. 1 600 2 - 0. 5 1 0. 1 600 2
0. 8 - 1 0. 1 600 2 - 0. 8 1 0. 1 600 2
表 3　梭罗果茎芽愈伤组织形成及茎芽分化生长
培养基配方效果 %
改良培养基
类型
愈伤组织
发生率
茎芽分化
发生率
改良培养
基类型
愈伤组织
发生率
茎芽分化
发生率
M S 31 - 1 /2 M S 15 -
26 - 11 -
22 - 9 -
28 - 31 -
25 - 1 /3 M S 56 40
23 - 50 32
100 85 48 29
80 78 70 51
76 51 65 45
1 /2 MS 38 - 62 39
32 - 59 32
35 - 31 -
65 46 62 37
56 41
2. 4　 1 /8 M S改良无机盐+ 肌醇 100 mg /L+ 烟酸
0. 5 mg /L+ 盐酸吡哆醇 0. 5 mg /L+ 盐酸硫胺素 0. 1
mg /L+ 甘氨酸 2 mg /L+ 蔗糖 1% + 琼脂 0. 7%+ 活
性炭 600 mg /L+ IBA 0. 5 mg /L+ VC 0. 1 mg /L+
6-BA 0. 2 mg /L生根培养基生根效果显著 ,见表 4,
影响梭罗果茎芽生根的主要因素:培养基无机盐的浓
度 , 1 /8 M S改良无机盐浓度最佳 ;生长素 IBA 0. 5
mg /L;细胞分裂素 0. 2 mg /L诱导生根效果显著 ;蔗
糖含量以 1%为宜 ;硫酸腺嘌呤对其生根不显著。
3　结论与讨论
3. 1　不同浓度的 IAA、 NAA对梭罗果茎芽的分化
生长和生根效果较差 ,而 IBA生根显著 ,其原因与
IAA、 NAA的分子结构耐温稳定性较差有关。
3. 2　培养基无机盐减少到 1 /4时开始生根 ,减少到
1 /8时其生根率最高 ,说明无机盐浓度是明显抑制其
生根原因之一。
表 4　梭罗果生根培养基配方效果 %
改良培养基
类型
愈伤组织
发生率
茎芽分化
发生率
改良培养
基类型
愈伤组织
发生率
茎芽分化
发生率
1 /2 M S 52 - 1 /4 M S 50 21
69 - 69 30
65 - 70 32
50 - 1 /8 M S 61 41
61 - 100 100
60 - 100 52
1 /3 M S 59 - 62 35
76 - 100 61
70 - 100 58
54 - 1 /12 M S 25 -
71 - 31 -
65 - 26 -
1 /4 M S 55 20 21 -
82 39 28 -
78 30 29 -
3. 3　促其茎芽分化生长较适宜的生长素浓度比为
0. 5∶ 0. 2 mg /L;生根需要的生长素与细胞分裂素浓
度比为 0. 5∶ 0. 2 mg /L。
3. 4　生根时应加强光照强度 ,但强光抑制根的生长 ,
向培养基中加入活性炭可有效协调矛盾。
3. 5　在本实验中 ,硫酸腺嘌呤对其的茎芽分化生长
和根的生长作用不显著 ,其原因有待研究。
3. 6　梭罗果在组培中分泌酚类氧化物较多影响茎
芽、根的生长 ,向培养基中适量加入 V C则可防止氧
化物在培养基中的过量积累。用升汞消毒对梭罗果组
织杀伤严重 ,影响组培效果 ,有待改进。防止培养基灭
菌后变酸 ,在组培中梭罗果的茎芽、根的分化在弱酸
至中性培养基中效果较好。
参考文献:
[1 ]　颜昌敬 . 植物组织培养手册 [M ]. 上海:上海科技出版社 , 1999.
[2 ]　李浚明 . 植物组织培养教程 [M ]. 北京:北京农业出版社 , 1992.
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