全 文 ：草血竭醇提物体外抗脂质过氧化作用
和对中性白细胞功能的影响
兰州医学院药理学教研室(7 3 0 0 0 0)
兰州大学应用有机化学国家重点实验室
李文广 ’
田 暄 钟惠民
摘 要 草血竭醇提物体外能明显抑制大鼠肝自发性及 Fe , + 一 Vi t C 体系诱导的心 、肝 、肾丙二醛
生成 , 并抑制 H 2 0 : 诱导的红细胞溶血 , E R S 法直接抑制 H ZO Z 一Fe Z + 产生 O H . , 能诱导并增强酵母
多糖诱导中性 白细胞释放 O 『 , 表明草血竭醇提物体外能清除 O H ’ 而提高白细胞功能 。
关键词 草血竭 活性氧自由基 丙二醛 中性 白细胞 E S R
草血竭 p o ly g o n u m Pa le a c e u m W a ll 为
寥科植物草血竭的根茎 , 有散血止血 , 下气止
痛之功效 , 民间用于 治菌痢 , 止血等川 ,对其
药理作用的研究尚未见报道 , 本实验研究其
对活性氧自由基的影响 。
1 实验材料
1
.
1 药物 : 草血竭 采自云南省丽江县 , 由兰
州大学生物系张国梁教授鉴定 。 经醇提干燥
后得红色结晶 , 初步实验证实为多酚类物质 。
1
.
2 试剂 : 硫代巴比妥酸 (T BA )为上海试剂
二 厂产品 , 氯化硝基四氮哇蓝 (N B T )为上海
前进试剂厂产品 , 酵母多糖为 Si g m a 产品 ,
D M PO (5
,
5
, 一D im e th yl
一
1
一
p yr r o lin e N
一 o x id e )
为 Fl u ka 公司产 品 , 其余试剂均为国产分析
纯 。
1
.
3 动物 : W is t a r 大鼠 , 雌雄兼用 , 由兰州医
学院动物房提供 。
2 方法与结果
2
.
1 对大鼠肝 自发性丙二醛 (M D A )生成的
影响 : 大鼠断头放血处死 , 剖取肝脏 , 用 T r is -
K C I缓冲液 (K C I 1 m m o l/ L , T r is 0 . 1 m o l/
L
,
pH 7. 4) 制成 5 %的肝组织匀浆 , 实验分空
白组 (加相应溶媒 )和药物组 (加相应浓度的
药液 ) , 每组平行 5 管 , 每管 1 m L 组织匀浆 ,
37 ℃温育 Z h , 按硫代巴比妥酸法〔2〕测 M D A 。
结果 (表 l) 草血竭醇提物对肝 自发性 M D A
生成有明显的抑制作用 , IC S。为 8 . 63 拜g / m L 。
表 1 草血竭醉提物对大鼠肝
自发性 MD A 生成的影响
药物剂量 M D A 抑制率
滩 / m L n m ol / g 肝 写
1。J八US夕O乙n九nJ住占匀急⋯内了jIn乙J任勺,口月了内人匕占乙心1
对照
5 0
2 5
1 2
.
5
6
.
2 5
3
。
1 2 5
1
.
5 6 2
0
.
7 8 1
9 4
.
5 4士 4 . 6 4
2 1
.
5 5 士 1 . 16 .
2 5
.
5 0 士 1 . 2 9 .
3 0
.
9 1士 1 . 76 爷
5 4
.
3 8 士 5 . 0 5 ,
7 1
.
36 士 4 . 7 5 .
7 9
.
8 8 士 4 . 7 5 香
8 7
.
7 7 士 5 . 8 7
和对照组比 番 P < 0 . 01
2
.
2 对 Fe , + 一V it C 诱导 的大 鼠心 、肝 、 肾
MD A 生成的影响 : 同前法制备 5 %各组织匀
浆 , 实验分空白组 (加相应溶媒 ) , 对照组 (加
Fe S O
4 和 抗 坏 血 酸 即 Fe Z+ 一 V it C 各 5 0
拜m o l/ L )和给药组 (加 F e , + 一V it C 和各浓度
药液 ) 。 先在相应管中加入各浓度药液或溶
媒 , 37 ℃水浴温育 10 m in , 再给相应管中加
Fe
, + 一V it C
, 继续温育 3 0 m in , 测 M D A 。 结果
(表 2) 草血竭醇提物体外对 Fe Z+ 一Vi t C 诱
导的大鼠心 、肝 、肾组织匀浆 M D A 生成均有
明显抑制作用 , IC S。分别为 1 0 9 . 0 2 、 7 4 . 7 8 、
8 8
.
4 7 拌g / m L 。
2
.
3 对 H ZO : 诱导红细胞溶血的影响 〔3〕 : 取
A d d r e s s
:
L i m e n t o f Ph a L a n z h o u M e d i e a lC o lle g e
,
L a n z ho u
李文广 男 , 1” 药理教研室获 并留校任教 , 现任讲师 。 主要从事年来发表相关论文 20 余篇 ,性的研究以及氮氧自由基对 氧
自由基抗氧用 。 作为主 研究
:天然产物鬼 臼毒类翩合作完成了新药 NG F , r h
于理研究 。 近和抗肿瘤活·
bFG F 等的临床前研究 。
肝素抗凝大鼠全血 , 用生理盐水 Z o o o r / m in , (O D ) , 判断溶血程度 , 空 白管不加 H 刀 2 , 结
s m in 离心洗涤 3 次 , 制成 0 . 5 %的红细胞悬 果 (表 3) 草血竭 醇提物体外对 H ZO Z 诱导的
浮液 , 分组同 2 . 2 , 将红细胞悬浮液加药液后 红 细胞溶血有明显的抑制作用 , 量效关系明
与 1 0 0 m m o l/ IJ H ZO : 3 7 ‘C温育 l h , 稀释 5 倍 显 , IC S。为 4 8 . 7 1 拌g / m IJ 。
后 离心 , 取 上清液在 4 15 n m 处测 吸收 度
一
~ 表 2 草血竭醇提物对 Fe Z十 一Vi t 耳透导.的大鼠肝 , 心 、肾M D入生成.的影响(牙士 , , 。 ~ 5) ⋯
药物剂量 M D A (n m o l/ g ) / 抑制率(% )
拜g / m L 肝 (% ) 心 (% ) 肾 (写 )
空白管
对照管
7 4
.
3 5 士 3 . 7 9 苦
2 6 8
.
6 3士 7 . 7 6
1 2 8
.
7 3 士 1 7 . 9 1 普
2 3 0
.
7 2士 1 0 . 7 6 书
2 6 2
.
7 6士 1 1 . 2 7
::
10 8
.
4 5士 1 . 2 5 ‘ 一
3 4 1
.
2 8 士 1 5 . 4 5 一
2 1 8
.
7 3士 2 3 . 2 4 书 52
30 3
.
6 3士 1 2 . 3 0 各 16
3 1 5
.
6 2士 7 . 4 5 朴 1 1
1 1 5
.
9 2士 2 . 3 7 书
34 7
.
3 5 士 8 . 0 9
2 0 9
.
5 6士 2 . 5 0 书
2 9 9
.
40 士 1 0 . 7 9 潇
3 0 9
.
9 7士 7 . 2 3 ,
5 9
.
5
2 0 7
1 6
.
2
10502
和对照组 比 , 尸< 。. 01
表 3 草血竭醉提物对 诱导的大鼠寸H ZO : 沐
; 响 (王士 , , n = 5 )
溶血度
0 D
4 15
空白管
对照管
1 0 0
5 0
2 5
0
.
0 4 5士 0 . 0 0 5 祷
0
.
6 4 8士 0 . 0 3 8
0
.
2 2 1士 0 . 0 1 9 “
0
.
3 1 5士 0 . 0 1 5 “
0
.
4 8 9士 0 . 0 5 8 “
7 0 8 8
5 5
.
2 5
2 6
.
4 0
和对照组比 , 尸< 。. 01
2
.
4 自旋捕集 E S R 技术测定 OH ‘ : 参照文
献 〔‘〕用 E R Z o o D 型顺磁波谱仪 (B r u k e r 产 品 )
测定 , 微波功率 2 8 m w , 调制频率 1 0 0 k H z , 调
制幅度 4 G , 扫 描速度 25 G / m in , 时间常数
2 0 0 5
, 测 定体系为 1 . 2 5 %H Z O Z , 0 . 1 m o l/ L
D M PO
,
2
.
0 x 1 0 一 ‘ m o l/ L 硫酸亚铁钱 , 0 . 1 2 5
m o l/ L PB S (pH 7
.
4 )
, 各浓度药液各 5 0 拌L 混
匀后 s m in 测 E S R 谱 , 以 D M PO 一O H 谱的第
2 个峰的高度计算 O H ‘ 的生成量和 药物的抑
制率 。 结果 (图 1) 草血竭醇提物体外对 O H ’
的生成有明显抑制作用 , 10 0 拜g / m l, 的抑制
率为 30 % 。
0 子的影响 : 酵母多糖 50 m g 加新鲜大鼠血清
0
.
5 m L
,
3 7 oC 水浴振荡温育 3 0 m in , 4 o o o r /
m in
,
4 ℃离心 2 0 m in , 弃上清 , 沉淀加 lm L 磷
酸缓冲液 (PB S p H 7 . o )洗 1 次后用 2 m L P B S
悬浮备用 〔5〕 ; 大 鼠中性 白细胞的制备 〔6〕 , 用
W i
s t a r 大鼠 ip 液体石腊 1 0 m L , 1 8 h 时断头
处死 , 用 1 0 m L 冰浴中预冷的 H a n k s 液分两
次洗出腹腔渗 出液 , 50 o r / m in , 4 ℃离心 10
m in
, 取沉淀细胞再用 H an k s 洗一次后制成细
胞悬液 , 冰浴中保存备用 。 实验分组同 2 . 2 , 测
定系统含 0 . 0 1 m o l/ L K CN 0 . lm L , 0 . 1 %
N BT 0
.
4 m L
, 细 胞 悬液 (1 只 1 0丫m L ) 0 . 4
m L
, 药液 50 拜L (空 白和对照管含 D MS O 2 . 5
拌L / m L ) , 2 . 5 m g / m L 酵母多糖 。. 1 m L (空白
管不加 ) , 3 7 ℃温育 3 5 m in 后按 N B T 法〔6〕测
定 , 结果 (表 4) 草血竭醇提物体外对酵母多糖
诱导的中性白细胞释放 0 子有明显增强作用 。
表 4 草血竭醉提物对酵母多糖诱导的大鼠中性
白细胞释放 0 矛的增强作用 (牙士 : , , 一 5)
药物剂量
仁g / m L
空白管
对照管
还原型 N BT
OD 5 z s
0
.
0 8 8 士 0 . 0 1 3 赞
0
.
2 2 8士 0 0 1 7
0
.
3 3 3 士 0 . 0 1 4 ‘
0
.
3 2 0 士 0 . 0 0 8 “
0
.
2 7 8 士 0 . 0 1 2 “
1 6 0
.
0
2 8 0
.
0
2 6 5
。
7
2 1 7
.
1
10502
图 1 草血竭醉提物对 OH ’ 生成的影响
A
一对照 B 一1 0 限/ m L C 一50 滩/ m L
2
.
5 对酵母多糖诱导大鼠中性 白细胞 释放
《中草药 》19 98 年第 29 卷第 l 期
和对照组比 , 尸< 0 . 01
2
.
6 对大 鼠中性 白细胞释放 O 子的影响 : 测
定系统同 2 . 5 , 实验分对照组 (加溶媒 )和给药
组 。 结果 (表 5) 草血竭醇提物体外对中性白细
。
3 5
·
胞释放 O 子
母多糖 2 50
表 5
有 明显增强作用 , 5 0 拼g / m L 与酵
拼g / m L 的作用相当 。
草血竭醇提物对大鼠中性白细胞
O 牙 的影响 (王士 、 , n ~ 5 )
药物剂量拜g / m L
空白管
还原型 N B T
O D 51 5
0
.
2 1 2 士 0 . 0 20
0
.
6 2 0 士 0 . 0 18 ,
0
.
5 3 2 士 0 . 0 3 6 餐
0
.
4 4 7 士 0 . 0 0 9 ,
1 9 2
.
4 5
15 0
.
9 4
1 1 0
,
8 5
10502
和空 白组 比 * P < 0 . 01
3 讨论
Fe , +
一
V it C
,
H
Z
O
Z 可通过 F e n t o n s 反应产
生 O H ‘ 川 , 继而引发脂质过氧化产 生 M D A ,
正常组织代谢过程中也可产生脂质过氧化损
伤 , 引起衰老等很多病理变化 。 草血竭醇提物
能 明 显 抑 制 自发性 或 F e Z气V it C 诱 发 的
M D A 生成 , 并抑制 H 2 0 : 诱发的红细胞溶血 ,
E S R 检测能直接清除 O H ’ , 说明草血竭醇提
今 .今 .今 .今. 幸.今 .今 .幸 .今妇李卜招》 .令 .夺 .令 .幸 .幸.今 .令 .今 .幸 . 嘴 , .
物能清除 OH ’ , 有抗脂质过氧化作用 〔8 〕 , 白细
胞受酵母多糖等刺激可引发呼 吸暴发 , 释放
O 子 , 参与杀菌及抗肿瘤等作用 〔幻 , 草血竭醇提
物能诱导并增强酵母多糖诱发 的中性 白细胞
释放 0 于, 这可能是其药理作用的基础 。 说明
草血竭对活性氧自由基的影响是复杂的 , 有关
草血竭的其它药理作用 , 正在进行深入研究 。
参 考 文 献
1 江苏新医学院编 . 中药大辞典 . 下册 . 上海 : 上海科技出版
社 , 1 9 8 4 . 1 5 8 1
2 陈顺志 , 等 . 1洽床检验杂志 , 1 9 5 4 , 2 : s
3 冯立明 , 等 . 中国药理学通报 , 1 9 。, 6 : 26
4 陈雨亭 , 等 . 生物物理学报 , 19 8 9 , 5 : 2 35
5 杨庆利 , 等 . 兰州医学院学报 , 1 9 2 , 8 : 1 52
6 B a n e h n e r R
, e t a l
.
N e w E n g lJ M ed
, 一9 6 8 , 2 7 8 : 9 7 1
7 路雪雅 . 生物化学和生物物理进展 , 19 8 9 , 1 6 : 3 72
8 田昌孝 . 蛋白胃核酸化季 (日) , 1 9 8 8 , 3 3 : 3 0 2 4
(1 9 9 6
一 0 6 一0 3 收稿 )
芝牌乙肝宁颗粒剂 (冲剂)有奖征文揭晓
长沙九芝堂 (集团 )有限公司与湖南省中医药研究院共同研究开发的芝牌乙肝宁颗粒剂 (冲剂 )具有调气
健脾 , 利胆清热 , 活血化痰的效果 , 被卫生部确定为治疗慢性乙型肝炎的首选药 , 并被引入《全国医院用基本中
成药 目录》。 颗粒剂服用方便 , 深受医生及患者的赞许 。 为了进一步更科学地检验乙肝宁的临床效果 , 长沙九
芝堂 (集团 )有限公司和《中草药》杂志联合举办了芝牌乙肝宁颗粒剂 (冲剂 )的有奖征文活动 , 半年来共收到论
文 40 余篇 , 经过以天津市传染病医院张迈省主任医师为首的专家评审组的严格评选 , 以下 9 篇论文被评为优
秀论文 :
张 小平 . 乙肝宁颗粒剂治疗慢性乙型肝炎疗效观察 ;
李 嘉 , 卢诚襄 . 不同剂量乙肝宁颗粒剂治疗慢性 乙型肝炎 80 例疗效观察 ;
陈丽艳 , 曹铁公 , 等 . 乙肝宁颗粒剂治疗慢性肝炎 54 例疗效观察 ;
王津生 , 刘宏元 , 等 . 乙肝宁颗粒剂治疗慢性 乙型肝炎的疗效观察 ;
徐立 新. 乙肝宁冲剂治疗慢性乙型肝炎及 T 细胞亚群变化 ;
丁 晶莉 , 曹铁公 , 等 . 乙肝宁冲剂对慢性肝炎的治疗作用 ;
陈 评 . 乙肝宁冲剂治疗慢性乙型肝炎的分析 ;
吴志敏 , 吴 巧 , 等 . 乙肝宁颗粒 (冲剂 )治疗慢性乙型肝炎的疗效观察 ;
杨恭友 . 乙肝宁颗粒剂治疗慢性肝炎 68 例疗效分析 。
以上 9 篇论文与乙肝宁药效学 、毒理学基础研究资料已汇编成册 , 并将陆续在 1 9 9 8 年内《中草药》杂志上
刊出 。
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