全 文 ：时间 以 ~)
流动相 : 甲醇 一乙猜 一水 ( 25: 5 3: 4 0), 图 A ~ C 分别 为样 品经液 /液
萃取 、 C l s及 A 12 O 3 柱 固相 萃取后 的 H P L C , 峰 1 为 : 。 e p h a lo m a n n in e ,
峰 2 为 : p a e li t a x e l ,其停 留时间 : 3 2 m in , 峰 3 为 : 7一 e p i t a x o l
图 1 云南红豆杉漫 . H P L C 分析
峰 1 为 : p a e li t a x e l ,其停 留时 间 : 15 m i n
图 2 红豆 杉培养细 胞漫资叙化
铝萃取后 H P L C 图
参 考 文 献
H a r v e y S D
, e t a l
.
J C h
r o m a t o g r
,
1 9 9 1
,
5 8 7
:
30 0
K o p y e k i W J
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.
J o f L iq C h r o m a t o g r
,
1 9 9 4
,
1 7
:
2 5 6 9
Y u n g i W
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.
J L iq C h r o m a t o g r
,
1 9 9 7
,
2 0
:
3 14
L i l l i a n K S
, e t a l
.
A n a l C h e m
,
1 9 9 7
, 6 9 : 2 0 0 8
王文芝 . 色谱 , 1 99 7 , 1 5 ( 3 ) : 25 4
D a u h
一
R u r n g W
u , e t a l
.
J C h
r o m a t o g r A
,
1 9 9 5
,
7 0 2
:
2 3 3
( 1 9 9 8
一
0 4
一
2 3 收稿 )
D e t e r m i n a t i o n o f P a e l i t a x e l i n Y e w ( T a x u s ) b y y
一
A 1 2O
3
S o l i d
一
P h a s e E x t r a e t i o n a n d R P
一
H P L C
Z h a n g Z h iq ia n g
,
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( I n s t it u t e o f B io e h e m i e a l E n g i n e e r in g
,
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U n i v e r s it y o f T e e h n o l o g y
,
D a li a n 1 1 6 0 1 2 )
A b s t r a e t A n e w R P
一
H P L C m e t h o d f o r t h e d e t e r m in a t io n o f p a e l i t a x e l in T a x u s 夕 u n n a n e n s i s C h e n g e t
L
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.
1
5 d e s e r i b e d
.
T h e e r u d e e x t r a e t m a y b e
f r a e t io n a l l y p a r t it i o n e d u s i n g 7
一
A 12 O : s o l id
一
p h a s e e x t r a e t io n
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r a e t io n e a n t h e n b e a s s a y e d d ir e e t ly b y
m e a n s o f H P L C o n a C I 。 e o l u m n w i t h m e t h a n o l : a e e t o n it r i le : w a t e r ( 2 5 : 4 5
:
3 0 ) a s m o b i l e p h a s e a n d U V
d e t e e t o r a t 2 2 7 n m
.
T h e e a l ib r a t io n e u r v e w a s l in e a r b e t w e e n t h e P e a k a r e a a n d t h e a m o u n t o f P a e l it a x e l o v e r
t h e r a n g e o f 0
.
4 ~ 1 9
.
2 拌9 w i t h a e o r r e la t i o n e o e f f ie ie n t o f 0 . 9 9 9 6 .
K e y w o
r d s s o li d
一
P h
a s e e x t r a e t i
o n
R P
一
H P L C P a c li t a x e l
胶束电动毛细管电泳法测定柑橘属
药材中袖皮普和橙皮昔的含量
湖南省 中医药研究院 中药研究所 (长 沙 4 1 0 0 1 3) 杨 瑛 辛 王实强 彭源 贵
摘 要 建立 了一种测定芸香科柑橘属药材 中抽皮昔及橙皮昔含量 的新 方法 , 即以苯 甲酸钠为内
标物 , 采用胶束电动毛 细管电泳 法 , 可将上述药材 中抽皮昔 、 橙皮昔 和 内标物较好分离 。 加样 回收
率抽皮昔为 98 . 5% , 橙皮昔为 9 6 . 7 % 。 该方法简便 、 准 确 、 重现性好 , 可 作为抽皮昔 和橙皮昔 的含
量控制方法 。
关键词 胶束电动毛细管 电泳法 芸香科柑橘属 中药材 抽皮 昔 橙皮昔
芸香科柑橘属药用植物来源广泛 , 1 9 9 5 年版药典收载 的中药材主要有 6 种 , 即化橘
A d d r e s s
:
Y a n g Y i n g
,
In s t i t u t e o f C h in e s e M a t e r i a M e d i e a
,
H u n a n A e a d e m y o f T r a d i t i o n a l C h in e s e M e d ie i n e a n d
M a t e r i a M e d i e a C h a
杨 瑛 , 1 9 8 6 年湖南中医学院中 业 , 学士学位 ,助理研究员 。 主要从事 中药新药 的制剂工艺和质量标准 的研究工
作 。 曾负责卫生部 四类新药 “ 八珍 胶囊 ” 的制剂学研究 , 三类新药 “ 烧伤净软膏 ” 的质量 标准研究等 。 参 与部 、 省级科研课题多
项 ,获得省厅级 中医药科技进步奖三项 。 在国家级及部省级 杂志上 发表论文多篇 。
《中草药 》 1 9 99 年第 30 卷第 3 期 · 1 8 1 ·
2
.
6 加样 回收试验 : 以袖皮昔和橙皮昔含量
较高的积壳为代表 , 测定加样回收率 。精确称
取上述两种对照品适量 , 加人 已知含量 的积
壳药材 0 . 25 9 中 , 依上法操作 , 结果平均 回
收率 : 抽皮昔为 98 . 5 % , R S D % 一 2 . 1 4 ; 橙皮
昔为 9 6 . 7% , R S D % = 3 . 6 8 ( n = 5 ) 。
2
.
7 样品测定 : 取上述 6 种药材每份约 0 . 5
g
,精密称定 , 按上述方法提取并测定 3 次 , 用
内标 峰面积法计算 , 各药材中袖皮昔和橙皮
昔的含量见表 1 。
表 1 各药材中抽皮昔和橙皮普的含 t (n 一 3)
袖皮昔(% ) 橙皮昔 (% )
朴荃
36910一.3.0305
*咒圣蛇0卜一.061tGI 月 5 g ar 月di s ( L
.
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. 柑 t i c u l a t a Bl a ne o
C
.
a u ar ” t艺u祝 L .
(〕. a u ar n t iu m L .
手皮壳实佛陈青权
红 、 佛手 、 陈皮 、 青皮 、 积实 、 积壳 。 该属植物主
要含挥发油及黄酮类 成分 , 尤以袖皮昔和橙
皮昔为其代表成分 。 上述两种成分有多种分
析方法 〔`一 6〕 。 我们采用胶束电动毛细管电泳
法同时测定芸香科柑橘属药材中袖皮昔和橙
皮昔的含量 , 取得 了较满意的结果 。
1 仪器与试药
H R 3 D 高效毛细管电脉仪 ( 惠普公司 ) ,
袖皮昔和橙皮昔购 自中国药品生物制品检定
所 , 6 种药材购 自本 院中药房 , 所用化学试剂
均为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 电泳条件 : 石英毛细管 ,直径 50 拜m , 长
度 6 4 . 5 c m , 有 效长度 5 6 c m ; 缓 冲液 p H =
9
.
0
,
0
.
0 2 m o l / L 的硼 砂 , 0 . 0 5 m o l / L 十二
烷 基 硫 酸 钠 ( S D S ) , 10 %的 乙 睛 , 电压 20
k V ;温度 25 ℃ ; 检测波长 入一 21 3 n m ; 进样量
为 1 0 k P a . S 。 在上述条件下 , 各药材 中袖皮
昔 、 橙皮 昔及 内标 物 迁移 时间 分别 为 6 . 5 、
6
.
8 和 1 0 . 4 m 血 。 各成分分离较好 , 见图 1 。
2
.
2 对照品溶液的配制 : 精称取袖皮昔和橙
皮昔适量 , 用 5 0% 甲醇溶解 ,滴加氨水调 p H
值 8一 9 ,分别制成 2 0 m g / L 和 92 m g / L 的
溶液 。
2
.
3 内标溶液 的配制 : 精密称取苯 甲酸钠 ,
加水溶解成 2 0 0 m g / L 的溶液 , 备用 。
2
.
4 样 品溶液 的配制 : 化橘红 、 佛手剪成极
细条 , 陈皮 、 青皮 、 积实 、 积壳等粉粹成细粉 ,
过 筛 , 分 别称 约 0 . 5 9 , 置 于 50 m L 容 量瓶
内 , 加 5 0% 甲醇超声提取 30 m in , 放冷 至室
温 , 补充 损失 的溶 剂 , 用 0 . 45 拌m 微孔滤 膜
过滤 , 即得 。
2
.
5 标 准 曲线 与线性 关系 : 分 别吸取袖 皮
昔 、 橙皮昔 、 苯 甲酸钠不同浓度的混合液 , 进
样 , 以袖皮昔 、 橙皮昔的浓度为横坐标 , 峰面
积为纵坐标 , 绘制标准曲线 。 袖皮昔在 20 0一
1 0 0 0 拌g 、 橙皮昔 1 0 0一 6 0 0 拜g / m L 范围内线
J性 关 系 良 好 , 回 归 方 程 : 袖 皮 昔 为 Y 一
0
.
1 8 5X 一 0 . 8 2 4 , r = 0 . 9 9 9 5 ; 橙皮 昔为 Y =
0
.
1 O6X 一 0 . 9 9 4 , r = 0 . 9 9 5 。
·
1 8 2
·
; 在上述对照品浓度范围内几乎测不出。
3 讨论
3
.
1 芸香科柑 橘属药 材来源广 泛 , 不 同产
地 , 药材名称不一 , 本文仅对 95 版药典内所
载 6 个品种作一 次含量测定方法的探讨 , 未
进一步分析各 品种与产地间的含量差异 。
3
.
2 9 5 版药典所载陈皮 中橙皮昔的含量测
定方法为分 光光度法 , 操作较为繁冗 , 化橘红
中袖皮昔含量测定采用 H P L C 法 , 理论塔板
数要求不低 于 1 0 0 , 相 比之下 , 本法前处理
简单 ,分析速度快 ,样品需要量很小 ,使用很简
单 的缓冲液作为载体 , 几乎不产生废液 ,分析
耗 费低 , 柱效高 , 理论塔板数均达到 1 0 0 0
以上 。 分离效率要高两个数量级 。 在上述药材
中 , 由于袖皮昔 和橙皮昔 含量差异较 大 , 在
H P L C 法中同时测定 , 国内文献中未见报道 。
3
.
3 在分离中性成分时于操作缓 冲液 中加
人表面活性剂 S D S , 单个 的表面活性剂分子
之间聚集而成胶束 , 样 品 中各组分 极性 的差
异而致胶束与中性分子间的相互作用有强有
弱 , 从而引起各组分迁移速率的快慢达到分
离的 目的 。
3
.
4 选择苯甲酸钠为内标物 ,在本法测定条
件下 , 可与袖皮昔和橙皮昔分离完全 ,迁移时
间相隔 4 m in , 有利于 内标物 与上述药材 中
其它杂质峰的分离 。
3
.
5 曾以 积壳为代 表 , 选 择不 同前处理 方
法 ,结果采用 甲醇回流法与用 5 0% 甲醇超声
提取法结果较接近 ,而 以水煮加热提取法为
最低 , 约为超声法含量的 85 % 。
d 尧
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一 : “ -
7
.
5
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时间 t (m in )
1
一袖皮昔 2一橙皮昔 3一苯 甲酸钠 a 一化橘 红 b 一陈皮 c 一青皮 d一积实 e 一积壳 f一对照品
图 1 胶束电动毛细管电泳图
6j连
5内匕
致谢 : 本所 生药室谢昭 明助理研究员代
作 生药鉴定 。
参 考 文 献
K a i t o T
, e t a l
. 某剂学 , 19 7 9 , 3 9 : 2 10
陈光表 . 药学通 报 , 1 9 8 1 , 16 ( 8 ) : 1 8
卢 日刚 . 中成药研究 , 1 9 87 , ( 8) : 8
李国权 . 中草药 , 1 9 94 , 2 5 ( 7 ) : 35 9
王静竹 ,等 . 中国 中药杂志 , 19 94 , 1 9 ( 7 ) : 4 2 4
何燕萍 , 等 . 中草药 , 1 9 97 , 28 ( 4 ) : 2 0 5
( 1 9 9 8
一
0 6
一
2 6 收稿 )
D e t e r m i n a t i o n o f N a r i n g i n a n d H e s P e r i d i n i n C i t ru s
b y M i e e l l a r E l e e t r o k i n e t i e C a P i l l a r y C h r o m a t o g r a P h y
Y
a n g Y in g
,
W
a n g S h iq i a n g a n d P e n g Y u a n g u i ( H u n a n A e a d e m y o f T r a d it i o n a l C h i n e s e M
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M
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C h a n g s h a 4 1 0 0 1 3 )
A b s t r a e t A m ie e l la r e l e e t r o k i n e t ie e a p i ll a r y e h r o m a t o g r a p h ie m e t h o d ( M E C C )
, u s in g s o d i
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b e n z o a t e a s in t e r n a l s t a n d a r d
,
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C i t
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.
w
a s e s t a b l i
s h e d
.
T h e r e e o v e r i s e o f n a r in g i n a n d h e s p e r id i n w e r e 9 5
.
5 %
a n
d 9 6
.
7%
r e s p e e t i
v e ly
,
w h ie h s h o w e d t h a t t h i s m e t h o d 15 s im P l e
, a e e u r a t e , a n d r e P r o d u e i b l e a n d e a n b e u s e d f o r t h e q u a li t y e o n t r o l
《中草药 》 19 9 9 年第 3 。 卷第 3 期 · 1 8 3 ·
o f th e C h e n es e m e d ie in e o f C i tr us L
K e y wo
r ds C i tr us L
.
M E C C
n a r in g in h es Pe r id in
应用离子对色谱技术同时测定天仙子中的三种生物碱
天津 医科大学 ( 30 0 0 70) 李惠芬 命 张庆伟 张晓梅 董伟林
摘 要 应 用离子对色谱技术 , 同时测 定天仙子 中山莫若碱 、 东莫若碱 、 阿托 品 3 种有效成分 。 色
谱条件为 Y WG 一 C , 。柱 , 4 . 6 m m X 2 5 0 m m , 灵敏度 : 0 . 0 4 A U F S , 柱温 :室温 , 进样量 : 2 0 拜L 。 山莫若
碱 、 东蓑若碱 、 阿 托 品的 回收率分别为 9 8 . 5 % , 尺 S D = 0 . 5 6% ; 1 0 0 . 4% , R S D = 1 . 2% ; 1 0 1 . 5 % ,
R S D = 0
.
4 0%
。
关键词 离子对色谱 山蓑若碱 东食 若碱 阿托 品
天 仙子 为 茄科 蓑 若 了乃夕。 s cy a m u : in g er
L
. 的干燥成熟种子 〔 1〕 , 所含的生物碱具有重
要的 医疗用途 , 但因其有大毒 , 5 ~ 10 m g 即
能产出显著中毒的症状 〔2〕 。 因此 ,新药审批要
求 ,处 方中无论是作为君药还是 臣药都必须
检测 。 我们 曾用薄层扫描法 ,对所含的生物碱
做 了分别测定 〔3一 5〕 。 笔者应用离子对 色谱技
术 ,反复优化分离条件 〔卜 ? 〕 ,不经分离 同时测
定 了天仙子 中山蓑若碱 ,东蓑若碱和阿托 品
3 种有效成分的含量 。 此法与 T L C 测定方法
比较 ,其操作简便 、 准确 。
1 仪器 、 试剂及试药
日本 岛津 L C 一 6A 高 效 液 相 色谱 仪 及
S P D
一
ZA S 紫外 检测 , C R 一 3 A 色谱 数据 处理
机 。 乙睛 (色谱纯 ) ,水 (二次重蒸水 ) ,氢澳酸
山蓑若碱 、 氢嗅酸东食若碱 、 硫酸 阿托 品 (中
国药品生物 制品检定 所 ) , 天仙 子分别 由山
西 、 宁波 、 辽宁 、 内蒙古 、 河北药材仓库购得 。
2 色谱条件
色谱 柱 : Y W G 一C 1 8 4 · 6 m m X 2 5 0 m m ,
流动相为 乙睛 一 0 . 0 5 m ol / L 庚烷磺酸钠水溶
液 ( 3 5 : 6 5 ) , 流 速 : 1 . 5 m L /m i n , 检 测 波长
2 1 0 n m
, 灵敏度 : 0 . 0 4 A U F S , 柱温 : 室温 , 进
样量 : 20 拜L 。 在上述条件下有关标准品及供
试品溶液的分离情况见图 1 。
3 标准曲线制备
精密称取氢澳酸 山夏若碱 、 氢澳酸东莫
若碱 、 阿托 品各 10 m g, 置 10 m L 容量瓶 中 ,
分别加人流动相溶解并稀释至刻度 , 摇匀 、 备
用 , 作为各 自的标准品贮备液 1 、 2 、 3 。
精 密 移 取 上 述 标 准 溶 液 0 . 25 、 0 . 50 、
1
·
O
、
2
·
0
、
3
.
5 m L 置 1 0 m L 容量瓶 中 , 用流
动相稀释至刻度 , 摇匀进样 ,得 回归方程为 :
Y 氢澳酸 山蕊 若孩 = 2 6 8 7
.
3 3 5 + 5 1 8
.
6 0 8 1 C
, r
= 0
.
9 9 9 8
Y氮 澳酸东 友若旅 = 3 2 7 9
.
6 6 3 + 5 4 8
.
6 0 1 0 C
, ;
= 0
.
9 9 9 3
Y硫 成阿托品 = 2 7 1
.
8 7 9 4 + 6 1 6
.
1 9 9 9C
, r =
0
.
9 9 9 5
A
一标准品 B 一样 品 1一山蓖若碱 2一东蓑若碱 3一阿托品
图 1 样品色谱图
4 样品测定
精密称取 山西 、 宁波 、 辽宁 、 河北 、 内蒙古
5 个地区 的样品粉末各 4 9 ,装袋于索氏提取
器 中 , 加石油醚去脂 6 h ,取 出 ,挥干石油醚 ,
滴加氨水 s m L 润湿 ,密闭 50 m in , 挥去多余
A d d r e s s
:
L i H u i f e n
,
T i a n jin U n i v e r s i t y o f M e d i e a l S e i e n e e s
,
T i a n jin
.
1 8 4
.