全 文 ：忍冬种子萌发期间 P AL活性及氯原酸含量变化
山东 中医药大学 (济南 2 50 0 1 ) 4
青 州市卫生局
张永清 ` 王丽 萍
曾宪勇
摘 要 忍冬 种子萌 发期 间 P AL活性 呈不断提高趋势 , 并 在胚根 与子叶 突破或脱离 种皮时 出现
两次高峰 ;抓原酸含量表现为持续提高 , 提高幅度不断加大 。 P A L 活性变化与氛原酸含量 变化并不
同步但有密切关系 。 笔者还测定 了幼苗不 同器官中的 P A L 活性与氛原酸含量 。
关键词 忍冬 种子 萌发 P A L 抓原酸
C h a n g e s o f P h e n y l a l a n i n e A m m o n i a L y a s e A e t i v i t y a n d C h l o r o g e n i e A e i d C o n t e n t
o f J a P a n e s e H o n e y s u c k l e S e e d s ( L o n ice ar j aP
o n i c a ) D u r i n g G e r m i n a t i o n
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a s e ( P A L ) e h lo r o g e n i e a e i d
忍冬 L o n i c e ar j a P o n i c a T h u n b . 属忍冬
科植物 ,为常用中药金银花与忍冬藤 的主要
( L o n i c e ar j a P o n i c a T h u n b
. 李 建 秀 教 授 鉴
定 ) 植株成熟果实 , 清水漂洗去除果皮 、 果 肉
原植物 , 在山东 、 河南等省有大面积种植 。 一 及瘪种 , 收集饱满种子 ,将水沥干 , 置室 内通
般认为 , 氯原酸是金银 花与忍冬藤的主要有 风处阴干备用 。
效成分 , 并被作为评价药材 与制剂质量的指 1 . 2 方法 : 1) 种子发芽 : 种子以 0 . 1 % H g 1C 2
标 。氯原酸作为植物体次生代谢物质 , 来源于 水溶液表面消毒 15 m in 后 , 用蒸馏水冲净 ,
苯丙烷类代谢途径 , 在其生物合成过程中 ,苯 置培养皿中发芽 ,每 10 0 粒种子为 1 组 , 多次
丙氨酸解氨酶 ( P A L )是第一个关键酶和限速 重 复 。 发 芽期 间 , 每 2 天取 3 组 种子 测定
酶川 。 研究忍冬种子萌发期间 P A L 活性及氯 P A L 活 性及 氯原酸 含量 , 取平 均值作 为结
原酸含量 的变化 , 对于 了解抓原酸的生物合 果 。 2) P A L 活性测定 :将种子置研钵 中 , 加人
成与积累规律 ,提高药材质量 , 有重要意义 。 在 0一 4℃温度下放置一段时 间后 的 10 m L
1 材料与方法 含 s m m ol 的琉基乙醇硼酸缓冲液 、 0 . 5 9 聚
1
.
1 材料 : 采摘本校药用植物 园种植的忍冬 乙烯毗咯烷酮及少量石英砂 ,冰浴研磨 ,将匀
镶黯es slb矜辈瞬肇戮者留器毅常森瑟la0dr 梦料岔黑批忠育耀爹盎戮挺攀罢1 9。 。 年被破格晋升为副教授 , 现为山东 中医药大学 中青年 学术骨干学科带头人培养对象 。 多年来 , 一直从事药用植物栽培学与中药市场学 的教学与研 究工作 , 专业研究方向为药材栽培生理 , 力 图通 过控 制人工栽培条件来达到控 制或提高药材的产量 与质量 。 相继完成的 “ 金银花高产优质栽 培技术及其推广应用 ” 、 “ 玉竹产地加工研究 ” 等有关课题 6 项 ,获得多 项奖励 , 在国家级及省级以上学术刊物上发表学术论文 50 余篇 , 主编 、 参编 《药材种植实用技术 》 、 《中药市场 营销学 》等著作 4 部 。
.
6 1 6
.
ǎ书忍. 0价、日à- 如. 场吸
浆抽滤 , 滤 液在 1 0 0 0 o r / m i n 离心 1 5 m i n ,
取上清液测定酶活性 , 方 法为 l m L 酶液加
1 0
.
0 2 m m ol / L L
一苯丙氨 酸 、 2 m L 蒸馏 水 ,
对照 以蒸馏水代替 L 一苯丙氨酸溶液 , 反应液
置恒温水浴保温 30 m in 后测定 2 9 0 n m 处 的
吸收度 , 以每小时吸收度变化 0 . 01 所需酶量
为一个单位 , 酶活性以单位毫克蛋 白质 中的
酶单位表示 。 蛋 白质含量测定采用考马斯亮
蓝法川 。 3) 氯原酸含量测定 : 取种子研细 ,加
入一定量 95 % 乙醇多次洗涤 , 完全转移于大
试管 中 , 用塑料布封 口 , 在 80 ℃水浴 上连续
提取 2 次 ,每次 1 . s h ,提取液过滤后定容 ,测
定 3 3 n m 处 的吸收度 , 以 氯原酸纯 品作对
照绘制标准曲线 、 计算氯原酸含量 。
2 结果与分析
2
.
1 P A L 活性的变化 : 忍冬种子浸水后 , 经
吸胀 、 裂 口 、 胚根伸出 、 子叶脱离种皮等 ,最终
完成萌发 。 其间种子 P A L 活性变化如图 1 。
时同 t ( d )
图 1 忍冬种子萌发过程中 P A L 活性的变化
图 1 表明 , 发芽初期种子的 P A L 活性较
低 , 而后不断提高 , 在第 6 天 出现第 一个高
峰 ,然后呈下降趋势 , 至第 10 天又开始上升 ,
第 1 4 天达到第二个高峰 。 对照种子外部形态
变化 , 发现 P A L 活性两次高峰 的出现 , 恰恰
发生在胚根与子叶突破或脱离种皮的时候 ,
说明光照 、 氧气等因素对 P A L 活性的提高有
刺激作用 。
2
.
2 氯原酸含量的变化 : 忍冬干种子含有少
量氯原酸 ,并且主要分布在种皮 中阁 。 发芽期
间其氯原酸含量变化如图 2 所示 。
发芽伊始 , 种子与水接触 , 因渗透和扩散
《中草药 》 1 9 9 9 年第 30 卷第 8 期
时间 亡( d)
图 2 忍 冬种子萌发过穆中级原
酸含 t 的变化
作用 ,种皮 中的氯原酸含量有所损失 ,结果种
子中的氯原酸含量略有下降 。 从第 2 天开始 ,
伴随着 P A L 活性的提高 , 氯原酸含量也不断
提高 ,且提高幅度不断加大 。
从忍冬种子发芽期间 P A L 活性与氯原
酸含量的变化可以看出二者之间存在明显正
相关 ,但 P A L 活性易受多种因素的影响发生
显著变化 ,而合成后的抓原酸除不断代谢外
尚有一定积累 ,含量呈逐步增加趋势 。这也说
明 , 氯原酸的生物合成除受 P A L 限制外 , 还
受其它因素调节 。
2
.
3 忍冬幼苗不同器官中的 P A L 活性及氯
原酸含量 : 取胚轴长 2一 4 c m 、 胚根长 2一 3
c m
、 两片子叶完全展开并呈绿色的幼苗 , 分别
测定不同器官 P A L 活性及抓原酸含量 (表 1 ) 。
表 1 忍冬幼苗不同器官中的 P A L 活性与级原酸含 ,
器 官 子叶 胚轴 胚 根
抓原酸 (% FW ) 0 . 1 70 6 0 . 0 54 4 0 . 0 4 9 6
P A L /m g
.
h 7 0
.
1 0 2 5 5
.
8 8 3 2 5
.
9 9
活性 /g · FW · h 1 2 0 0 . 5 9 6 2 4 . 5 9 6 2 5 . 9 4
表 1指 出 , 子叶的氯原酸含量最高 ,胚轴
和胚根较低 ,此结果与完整植株叶 、 茎与根中
的氯原酸含量变化趋势相一致 [’] 。 P A L 活性
因表示单位的不 同有很大差异 , 以每小 时单
位毫克蛋 白质 中的酶单位 (/ m g · h )表示时 ,
子叶 P A L 活性最低 ,胚轴居中 ,胚根最高 ; 以
每 小时每克鲜重 中的酶单位 ( / g · FW · h)
来表示时 , 子叶 P A L 活性最高 ,其次是胚根
和胚轴 。所以如此 , 与子叶含有较多储存蛋白
·
6 1 7
·
飞·匕ù ,目ó国à卿想`哎
质密切相关 。
参 考 文 献
l欧 阳光察 ,等 . 植物生理学通讯 , 1 9 8 , ( 3) : 9
2 肖伏蛾 . 湖南农学 院学报 , 1 9 8 7 , (增刊 ) : 1 45
3 张永清 ,等 . ilJ 东中医学 院学报 , 1 9 9 1 , 1 5 ( 2 ) : 3 9
4 张永清 , 等 . 中国中药杂志 , 1 9 9 6 , 2 1 ( 4 ) : 2 0 4
( 1 9 9 8
一
1 0一 1 9 收稿 )
太行铁线莲生药学初步研究
山 东省临沂市 中医医院 ( 27 6 0 0 2 ) 孙兆祥
摘 要 对太行铁线莲进行 了原植物 、药材性状 、 显微鉴定等生药学方 面的初步研究 , 并与威 灵仙
作对 比区别 , 以澄清混乱 , 挖掘中药资源 。
关键词 太行铁线莲 生药学 威灵仙
A P r e l i m i n a r y P h a r m a e o g n o s t i e S t u d y o n K i r i l o w C l e m a t i s ( lC e m a t i s k i ir l o iw i )
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a n d o n g P r o v in e e
,
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n 2 7 6 0 0 2 )
A b s t r a e t A p
r e lim i n a r y s t u d y o n t h e o r ig i n m e d i e in a l e f f e e t s a n d m i e r o s e o p ie e h a r a e t e r is t ie s o f lC
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a t is k i r i l o切 11 M a x im , C le m a t i s c h i n e n s is O s b e e k
太行铁线莲 Cl e m a t i : k i ir l o w i i M a x im .
为毛食科铁线莲属植物 ,在我省广为分布 。 目
前在教学 、 科研和某些地区用药上 ,均把太行
铁线莲误定为威灵仙 lC e m a t i : ` h i n e n s i : 0 5 -
be ck
。 为了澄清混乱 ,保证用药 的正确性 , 挖
掘中药资源 ,笔者对其进行了原植物 、 药材性
状 、 显微鉴定等生药学方面的初步研究 。
1 材料及方法
1
.
1 材料采 自山东 费县 、 济南等地 。 原植物
及药材均经鉴定为太行铁线莲 。
1
.
2 药材采用徒手切片法 、 石蜡切片法及组
织解离法制片 ,并进行 了显微描绘 。
1
.
3 将花粉按 E r d t m a n ( 1 9 6 9 ) 醋酸配分解
法处理制片 lj[ ,在光学显微镜下观察 、 测量并
摄影 。
1
.
4 将干燥 的花粉直接均匀地撒在双面胶
片上 l[] , 喷碳 、 喷金 后 置于 日本 JE O L . S U -
P ER P R O B E 7 3 3 型扫 描电子显微镜下观察 ,
并照像 。
2 结果
2
.
1 植物形态 :藤本 , 干后常为黑褐色 。 茎 、
小枝有短柔毛和细纵棱 。一至二回羽状复叶 ,
叶片革质 , 卵形 、 卵圆形或长 圆形 ; 基部 叶较
大 , 顶端叶较小 , 长 0 . 3 ~ 6 . 2 。 m , 宽 0 . 2一
3
.
2 c m ;两面网脉突出 ,沿叶脉疏生短柔 毛或
近无毛 。 花较大 , 曹片 4一 6 ,倒卵圆形 , 顶端
呈截形而微凹 , 宽 4一 7 m m , 白色 , 干后常变
灰黄色 , 外面有短柔毛 , 边缘 密生绒毛 , 内面
无毛 。 瘦果卵形至 椭圆形 , 长 5 ~ 7 m m , 扁
平 , 边缘稍厚 , 被平伏绒毛 。 宿存花柱长 2一 3
c m
,有黄色柔毛 。
花粉粒辐射对称 ,多为圆球形 , 少有长球
形 ,极轴 长 2 0 ~ 2 6 . 6 拜m ,赤道 轴长 1 5 . 5 ~
2 .3 3 拼m , 三沟 , 无萌无孔 , 扫描 电镜下观 察
外壁粗糙 , 现颗粒性 , 表面较大颗粒约 14 个 /
1 0 拜m Z (图 1一 1一 3 ) 。
.
A d d r e s s
:
S u n Z h a o x i a n g
,
L i n y i M u n i e i p a l H o s p i t a l o f T r a d i t i o n a l C h in e s e M e d ie in e
,
L i n y i
6 1 8