全 文 ：14 20
,
1 6 0 5
,
1 5 7 4
,
1 5 1 0
, 一4 5 6 , 9 0 6 , 8 4 0 。 氢谱
和碳谱数据与文献报道 的 7一轻基 香豆 素完
全相符〔 6 ’ 的 。 晶 n 与 7一轻基香豆素标准品测
混熔点不下降 , 共薄层 R ; 完全相符 , 确定晶
1 为 7一经基香豆素 , 即伞形花内酷 。
晶 V : 白色粉末 , M ol is h 反应紫红色 , L -
B 反应阳性 。 与胡萝 卜贰标准品测混熔点不
下降 ,共 T L C 其 R ; 值完全相符 ,推定晶 v 为
胡萝 卜贰 。
晶 l : 白色晶体 , m 1P 38 一 1 4 0 C , L 一B 反
应阳性 , M ol i s h 反应 阴性 。 与 各谷街醇标准
品测混熔 点不下降 ,共 T L C R ; 值完全相同 ,
确定晶 l 为 俘一谷街醇 。
致谢 : 红外 、 紫外尤谱 由 辽宁中医学院中
心实验室沙明 、 曹爱 民代刚 : 质谱 、 核磁共振
由 辽 宁省理化浏试 中心代浏 。
参 考 文 献
l 江 苏新医学院编 . 中药大辞典 . 下册 . 上海 : 上海人 民出
版社 , 19 7 7 . 1 8 98
2 中屠瑾 , 等 . 中西医结合杂志 , 1 9 8 4 , 4 ( 1 ) : 4 6
3 杨宝印 , 等 . 中药通报 , ] 9 8 6 , 1 1 ( 1 ) : 5 8
4 杨伟文 , 等 . 长州大学学报 , 19 8 3 , 1 9 ( 4 ) : 1 0 9
5 黄 文魁 , 等. 科学通报 , 1 9 7 , 3 (4 ) : 50
6 吴 1乏德 , 等. 西北药学杂志 , 1 98 8 , 3 ( 3 ) : 2 0
7 T o v r a n e e T
,
e t a l
.
J P h
a r
m s
e l . 19 7 9
,
6 8
:
6 6 4
8 国家 民药局中草药情报中心站 . 植物药有效成分手册 .
北 京 : 人民 I几生出版社 , 19 8 6 . 3 0 7
9 I e e k H
, e t a l
.
J N
a t P r o d
,
19 8 1
,
4 4 ( 5 )
: 5 30
10 陈德昌 . 碳潜及其 在中草药化学中的应用 . 北京 : 人民
jI 生 出版 , 1 9 8 1 . 3 4 8
( 1 9 9 4
一
0 9
一
0 6 收稿 )
S t u d i e s o n t h e C h e m i e a l C o n s t i t u e n t s o f C h i n e s e S t e l l e r a (S r
e l l e r a c h a m a ej 口 s m e ) ( I )
1 l u G u 一f a n g , Z h a o C h日 a n l in g , e t a l
T w e lv e
姗 ) o f t h e m
e o m p o u n d s ( I 一 郑 ) w e r e i s o l a t e d f r o m t h e r o o t o f S l e l l e ar o h a m a 勺 a s m r L 二 F i v e ( I 二 , V , VI ,
w e r e e l u e i d
a t e d b y
s p e e t r o s e o p i e a n d e h e m i
e a l m e t h o d s a s 7 一m e t h o x y d a P h n o r e t in ( 珊 ) , d a P h -
n o r e t in ( VI )
, u
m b
e l l if e r o n e ( I )
,
d
a u e o s t e r o l ( V ) a n d 昌一 s t t o s t e r o l ( l ) . 珊
n o r e t in
. 贾 a n d V , 呱 , 姗 w e r e i s o la t e d f o r t h e f i r s t t一m e f r o m t h一5 P la n t .
1 5 a n e w
e o m p o u n d n a rn e d i s o d a p h
-
红参须根中多肤成分的分离与鉴定
白求恩医科大学 ( 长春 1 30 02 1)
吉林省中医中药研究院剂型室
焦连庆 ` 魏俊杰 徐景达
于 敏
摘 要 用 反相高效液相色谱技 术从红参须根 中分 得 一个新的多肤化合物 。 根据氨基 酸组成分
析 , S D S 一聚丙烯酸胺凝胶电泳和高效排阻层析 分子量测 定结果 , 鉴定为 3 肤 。 文中还报道应用组
织培养技术和 免疫手段 . 研究 了红参须根 多吠的活性 , 并与人参皂贰的活性进行了对 比 。
关键词 红参须根多肤 S D S 一聚丙烯酞胺凝胶电泳 高效排阻层析
人参 尸 a n a 二 g : , , s 尸 n g C . A . M e y . 属五加
科植物 , 主要化学成分是人参皂贰 . 迄今己有
大量的研究和报道 〔`一 ” 〕 。 近年来 , 国内外学者
开 始 对 人 参 水 溶 性 成 分 多 肤 类 进 行 研
究 〔`一 8 〕 , 但有关 红参须根中多肤 的研 究 尚未
见报道 。
本 文 采 用 超 滤 、 大 孔 树 脂 吸 附 、
S e p h a d e x G
一
2 5 柱 层析 、 D E A E一 e e l l u l o s e 分
步抽提和 R P H P L C 等研究方法 ,从红参须根
中得 到一个多肤 , 命名 为 R G H P 一 1 B Z 。 将其
,
A dd
r e s s : Jia o I
J
ia n q i n g
,
N o r m
a n
eB
r t h u n e M e d l e o l U n i v e r s i t y
,
C h
a n g e h u n
.
7 0
·
完全水解 ,进行氨基酸组成分析 ,结果见表 。
以 S D S 一聚 丙 烯酞胺 ( S D S 一 P A G E ) 和
H P L C 两种方法测得 R G H P 一 1 B Z的分子量分
别为 3 3 2 5 和 3 3 8 0 , 与氨基酸组成分析结果
相吻合 。
表 R G H P一 I BZ的氨基酸组成
氨基酸
天冬氨酸
苏氨酸
谷氨酸
丝氨酸
甘氨酸
丙氨酸
撷氨酸
R G H P
一 I 比 数 目 R G H P一 日: 数 目
1
.
8 9
4
.
1 7
34
84
1
.
3 3
4
.
1 4
氨基酸
异亮 氢酸
亮 氨酸
苯丙氨酸
赖氨酸
精氢酸
脯氨酸
2
.
10
1 1 7
8 3
2 8
2
.
3 6 2
1 材料与仪器
红参须根购 自抚松第一参场 。 eS p h a d e x
G
一
2 5 瑞典 P h a r m a e i a 公司产品 。 D E A E 一 e e l -
l u l o
s e ( D E 3 2 )瑞典 W h a t m a n 公司产品 。 精细
分 离使 用 W a t e r s 高 效液 相色 谱仪 (M o d e l
H P L C 5 l O 型 高 压 泵 ) , Y W G 一 C 1 8 ( s x
Z O0 m m )
, 色谱柱 (大连色谱技术开发 中心制
造 ) 。 层析检测仪为 X Z 一 8 7一 1 型紫外检测仪 ,
浙江温州鹿城 生化仪器 厂 。 垂直板 电泳仪
2 0 0 1
,
L K B 公 司产 品 。 分子 量测 定 P r o t e i n
P a k 6 0 色谱柱 , W a t e r S 公司产品 。 氨基酸组
成分析用 日立 83 5 型氨基酸 自动分析仪 。
2 提取和分离
2
.
1 提取 : 红参须根粗粉 2 . sk g , 用蒸馏 水
浸提 4 8 h ,提取液经高速离心 1 2 0 0 o r / m i n ,取
上清液真空薄膜浓缩至原体积的 1 / 1 0 。 浓缩
液经超滤 ,得超滤液 。
2
.
2 大孔吸 附树 脂 吸 附 : 大 孔 吸 附 树脂
( D 4 0 2 0) 以文献〔幻 的方法 反复处理后 , 装柱
( 10 X 60
c m )
,然后将超滤液分次置于柱 中反
复进行吸附 , 以蒸馏水洗脱 ,流出液用紫外检
测仪 2 2 o n m 进行检测 ,收集紫外有吸收部分
进行真空冷冻干燥 ,得浅黄色粉末 。
.2 3 S e p h a de x G
一
25 柱层析 : 用蒸馏水平衡
柱子 , 上述浅黄色粉末 lg 溶 于少 量蒸馏 水
《中草药 》19 96 年第 27 卷第 2 期
中 , 离心后上清液上样 。 蒸馏水洗脱 , 第 3一
1 0 管峰 I 为小分子多肤类化合物 , 同条件层
析 1 0 0 次 .峰 l 合并后 , 真空冷冻干燥 。
2
·
4 D E A E
一 e e l l u l o s e 分 步 抽 提 : 以
O
·
O l m o l / I
J
N H
:
H C ( )
3 溶液平衡柱子 。 样品为
S e p h a d e x G
一
2 5 层析的峰 I 。用 0 . 0 1一 l m o l /
L N H
4
H C O
。 线性梯度洗脱 ,根据峰 亚 A (第 8
一 1 7 管 ) 、 亚 B (第 1 5一 2 5 管 ) 、 I C (第 2 6一 2 7
管 ) 、 l : ) (第 2 5一 3 4 管 )中第 1 7 , 2 5 , 2 7 , 3 4 管
的电导强度相应由 N H 4 H C O 3 电导强度与浓
度的线性关系 y 一 4 . o sx + 0 . 7 ,求出峰 I A 、
I B
、
I C 及 I D 的洗脱溶液浓度 ( m ol / L )分别
为峰 I A ( 0 . 0 7 ) , 峰 I B ( 0 . 3 3 ) , 峰 I C ( 0 . 4 3 ) ,
峰 l 。 (0 . 5 1 ) 。 根据各个峰的洗脱浓度进行分
步抽提 。 分步抽提后 ,将抽提液真空冷冻干
燥 。
2
.
5 R P
一
H P L C 分 离 : 将 R G H P 一 I 。 I O Orn g
溶 于 Zm l 流 动 相 中 , 离 心 ( 1 2 0 0 o r / m i n ,
Zo m i n )后进样 ,进样量 3 0拜l 。 组分 I B 经 R p -
H P L C 〔柱 : Y W G 一C 1 4 ( 5 X ZO Om m ) , 流动相 :
6 0 % C H
3C N
,
4 0 % H
Z
O ( 1
.
5% T F A )
, 压 力 :
2 2 5 6 P a
, 检测 : U V 2 1 5 n m 〕分离成 4 个部分 :
l 。 , , l 。 2 , I 。 3 , I B ; 。 重复进样 4 0 次 ,分别收
集后冻干 。
3 鉴定
3
.
1 以高效排阻层析 系统进行检验 , 1 B Z为
单峰 , 见图 1 。 S D S 一聚丙烯酞胺凝胶电泳为一
条谱带见图 2 。
图 1 R G H P 一 I 。 2的高效排阻层析
柱 : P r o t e i n P a k 6 0
流动相 : 。 . o s m ol I/ 磷 酸 钠 缓 冲液 , 20 % ( V / V ) 乙
醇 , 0 . 3 2 m o l / I N a C I
流速 : l m l / m i n
压力 : 11 2 2 P a
检测 : U V 2 15 n m
口. . f
. .
a
图 2 标准多肤及 RGH P 一 I B多 DS 一聚丙烯酸
胺凝胶电泳
a一细 胞色素 C b 一胰岛素 A 链 c 一胰岛素 B 链
d
一胰岛素 e 一 G RH P 一 皿 B : f 一促黄体 生成素
3. 2 分子量的测定和氨基酸组成分析
3. 2. 1 试剂 :) a分离胶缓 冲液 ,并用作下槽
缓冲液的贮存液 ; b) 上槽缓冲液 ; c )分离胶贮
存液 ; d )层积胶贮 存液 ; e ) 2 . 4 % ( N H 4 ) 2 5 0 4
溶液 ; f) 染色液 ; g ) 脱色液 的配制及制胶过
程 。
标准蛋 白 : 细胞色素 C 、 胰 岛素 、 胰岛素
B 链 、 胰岛素 A 链 、 促黄体 生成素 。
取适量 R G H P 一 亚 : ; 2及 标准 多肤分 别溶
于 样 品 缓 冲 液 中 , 60 C保 温 10 m in , 加 样
1。川 , 立即通 电 , 电流 20 m A 。 待 染料前沿进
入分离胶后加大电流至 4 o m A , 全部 电泳约
需 12 h 。 图 2 为电泳图谱 。 电泳完成后 ,立即
取出凝胶 ,并在染料前沿做标记 ,然后直接浸
入染色液中 ,染色 1 . h5 , 换成脱色液 , 在室温
下浸洗 ,至本底清亮色带清晰 。 标准多肤电泳
迁移率与分子量对数线性关系为 y 一 4 . 98 一
2
.
3 O x ( r = 0
.
9 9 2 0 )
,
R G H P
一 正 。 : T RD = 0 . 6 3
代入方程 ,计算其分子量为 3 3 2 5 。
.3 .2 2 高效排阻层析分子量测定 : 采用高效
排阻层析系统 , 使多肤和固定相离子和极性
作用降低到最小 。 样品保留时间只和分子量
大小有关 。 标准多肤为细胞色素 C 、 胰岛素 、
杆菌肤 、 促黄体生成素 标准多肤保留时间和
分子虽对数的线性关系为 y 一 6一 .0 82 x (r -
0
.
9 9 8 5 )
,
R G H P
一
1 B Z保 留时间 8 . 5 0 代入方
程 ,计算其分子量为 3 3 8 0 。
3
.
2
.
3 氨基酸组成分析 : 约 l m m ol / L 样品
以 5 . 7m ol / L H C l( 重蒸馏水配制 )溶解 , 置于
封管 中 , 于 1 1 o C 恒温水解 , 2 h4 后进行 自动
分析 。
本 文 还 采 用 组 织 培 养方 法 研 究 了
R G H P
一
I
B 对胚肺二倍体成纤维细胞 ( ZB )S
的生长 、 增殖的影响 ,发现 R G H P 一 I 。 ( 1即 g /
c m
3
)对 ZB S 细胞的生长增殖具有促进作用 。
对 比研究 了 R G H P 一 I B 和人参总 皂贰对小
鼠脾细胞及 由 C o n A 和 L P S 诱导小 鼠脾细
胞增殖 的影 响 。 结果表 明 R G H P 一 I B ( 7 5一
6 0即 g c/ m 3 )在体外有直接激活小 鼠脾细胞
增 殖作用 。 这与人参皂贰 ( 7 5一 6 0 0拌g / e m 3 )
的显著抑制 作用相反 。 R G H P 一 l 。 对 C o n A
诱导的小鼠脾细胞增殖有显著的抑制作用 ,
对于 L P S 诱 导 的脾细 胞增 殖 只在高 浓 度
( 6。如 g c/ m 3 ) 时有显 著的抑制作 用 , 而 人参
皂试对 C o n A 诱导的脾细胞增殖也只在高浓
度时有显著抑制作用 , 对于 L P S 诱导的脾细
胞增殖在 75 一 6 0 0 胖g c/ m 3 浓度范 围内均有
较强的抑制作用 。 R G H P 一 l 。 的活性研究报
告将 另文发表 。
参 考 文 献
l (二s t一n e r F . e r a l . A r e h 一v s d e r P a r m a z l e , 19 6 6 , 2 9 9 ( l ) :
9 3 6
八 n d (〕 T , e t a l . P l a n r a M e d z e a , 19 8 0 . 3 8 ( 1 ) : 1 8
张今 . 等 . 高等学 校化学学报 , 1 9 8 5 , 6 1 ( 4 ) : 37 6
张今 , 等 . 科学通 报 , 1 9 8 , 12 : 95 2
魏俊杰 , 等 . 白求恩医科大学学报 , 1 9 。 , 1 6 ( 5 ) : 43 6
I己本祥 , 等 . 药学学报 , 1 9 9 0 , 2 5 ( 6 ) : 4 0 1
卜本 祥 , 等 . 药学学报 , 19 。 , 2 5 ( 1 0) : 72 5
吴庆夫 , 等 . 药学学报 , 29 9 1 , 2 6 ( 7 ) : 4 9 9
中 国医学科学院药物研究所植化室 . 中草药 , 1 980 , 1
( 3 )
: 13 8
几乃月任ù内h一了卜q
( 1 9 9 4
一
1 2
一
0 6 收稿 )
I s o l a t i o n a n d D e t e r m i n a t i o n o f P o l y p e p t i d e f r o m R e d G i n s e n g R o o t H a i r
Ja o I l a n q i n g
,
Y u M l n
,
e t a l
A n e w p o ly p e p t id e ( R G H P ) w a s i s o l a t e d f
r o
m
r e d G l n s e n g r o o t h
a i r b y R p
一
H P L C
.
I t w a s id e n t if i
e
d
a s t r i
-
t r ia e o n t p e p t l d
e o n b a s l s o f
a n a l y s i s o f a m i
n o a e 一
d
e o
m p
o s 一t io n a n d d e t e r m i n a t i o n o f m o l e e u la r w e ig h t b y S D S
-
P A G E a n d h ig h p c r f o r m
a n e e s l z e 一 e x e l : 一s io n e h r o m a t o g r a p h y
.
T h e a e t iv it ie s o f R G H P w
e r e s t u d i e d b y m
e a n s
o f t i s s u e e u lt u r e a n d irn
n : ,一n o a s s a y , a n d e o m p a r e d w i t h g 、n s e n o s i d e s
.
·
7 2
·