全 文 ：H PL C法测定月腺大戟根中狼毒甲素及狼毒乙素的含量
中国药科大学 (南京21 0 0 09 )赵 奎君 . 徐国钧 金蓉莺 徐路珊 丛晓 东
摘要 用 反相H L P C浩测定了月腺大戟根中抗结核活性成分狼毒甲素 , 狼毒乙素的含量 。 实验采
用O D S柱 , 以甲醇一水一 10 %乙酸 ( 朽 : 5 : 2 ) ( 10 %氨水调 p H至 5 . 4) 为流动相 ,延胡索乙素为
内标 , 2 8 0 n m为检测波长 , 可在30 m in 内完成测定 。 本法快速 , 简便 , 灵敏性好 , 可用于原药材
的质量控制 。
关健词 狼毒 月腺大裁 高效液相色谱法 狼毒甲素 狼毒乙素
大戟科植物月腺大戟万 “ P h o r b f a e b r a e t e o l a t a H a y a t a 为中药狼毒的原植物之一 , 以
其根入药 , 具有散结杀虫的功效 。 据报道 〔张涵庆 , 等 . 植物学报 , 1 9 8 7 , 9 ( 4 ) : 4 2 9 〕
从月腺大戟根巾分得 7个结晶性成分 , 其中狼毒甲素 〔双 ( 5一甲酞基一糠基 ) 一醚 , ( I ) 〕 ,
狼毒乙素 〔 2 , 4一二经基一 6一甲氧基一 3一甲基一卜茉乙酮 ( I ) 〕及三枯酸对结核杆菌具有明显 的
抑制作用 , 临床上已将该药的制剂用于肺结核的治疗 。 为了对原药材进行质量评价 , 以确保
其制剂的疗效 , 我们对月腺大戟根中的 I 、 I 两种成分的含量做了测定 , 结果如下 :
1 仪器与试药
1
.
1 仪器 : 日本 岛 津 L C一 6A 高 效 液 相色谱仪 ; S P D 一 6 A U V 可调波长紫 外 检 测 器 ,
S C L 一 6A 系统控制器 , 岛津 C一 R 3 A色谱处理机 ; R H E O D Y N E 7 1 2 5进样阀 , 层析柱 : 4 . 6
x 2 5 o m m
,
O D S一 5填料 , 预柱填充剂 : O D S一 5 。
1
.
2 对照品 : 对照品 I 、 I 由江苏植物研究所惠赠 , 内标物延胡索乙素 由本校生药教研 室
制备 。 上述对照品及内标物均经光谱鉴定。
1
.
3 试剂均为分析纯 , 重蒸水。
1
.
4 实验材料 : 本实验所用材料均系作 者 采
集并经过分类学鉴定 。
2 方法与结果
2
.
1 仪器参数 : 紫外检测波长 2 8 0 n m , 灵敏
度 o . o 5 A U F S , 流速 o . s m l /m i n ; 纸速 m m /
m i n , 温度 2 0℃ 士 z℃ 。
2
.
2 流动相选择 : 选用 甲醇一水一 10 % 乙酸 (
4 5 , 5 5 : 2 ) ( 用 10%氨水调 P H至 5 . 4 ) 。
通过计算上述流动相在不同配比情况下所
测各组分的容量因子 的大小 , 最后确定了上述
配 比分离效果较好 。 标准品分离情况见图中A 。
2
.
3 提取方法 : 样品 0 . 29 , 加硅 胶 2 09 , 置
自制的小柱中 , 用乙醚 10 m l冲洗脱脂 , 再用
丙酮 10 m l冲洗 , 回收丙酮液至干 , 用甲醇溶
解 , 进样 。
时间 以幼川
图 H P L C分析图
A
一对照品 B ·样品 1一狼毒 甲素
2 一猜 毒乙素 3一延胡索乙素 ` 一溶剂
,
A d d
r e s s : Z h
a o
K
u i j
u n , C h i n a P h a r位 a e e u t i e a l L Jn iv e r s : t y , N a n j i n g
现在解放军北 京医学高等专科学校
经考察 , 此法能排除杂质对一组分 I 的干扰 , 较其它方法为好 。 样品分离情况见图中 B 。
2
.
4 系统适应性试验
2
.
4
.
1 分离度 : 在本实验条件下 , 组分 I 、 I 及 内标物 is 的保留时间分 别为 7 . 叭 , i 7 . 9 0’
2 6
.
0 5 , n i n
。 分离度为 : I 一 1 5 . 0 2 , I 一 15 2 . 7 0 。
2
.
4
.
2 进样精密度试验 : 取 I 、 I 及 is 混合溶液按同样量重复进样 8次 , 按上述方法恻定 ,
结果各组分的峰面积平均值 、 标准差及变异系数分别为 : 1为 17 4 9 3 7士 1 0 4 3 ( 0 . 6% ) , l
为 7 5 7 5 3士 9 4 5 ( 1 . 2 5% ) , 15为 r 6 13 5 0士 1 3 4 5 ( 0 . 5 3% ) 。
2
.
4
.
3 线性范围考察: 精密称取 I 、 I 各 l m g , 15 1 . s m g , 分别置 l m l容量瓶中 , 用 甲醇
定容 , 配成标准液 。 分别精密吸取标准液 1 3 、 10 、 · 3 0 、 5 0 、 7 0 、 9 0卜l , 标准液 1 10 、 2 0 、
4 0
、
6 0
、
5 0
、
10 0卜! , 置 l m l容量瓶中 , 再分别加入 3 0协l内标液用甲醇调至刻度 。 进样 10卜l ,
测定 , 计算 A s 、 A i , M s 、 M i( A s : 对照品峰面积 , A i : 内标准品峰面积 ; M s : 对照品重量 ,
M i : 内标物重量 ) , 以 A s/ A i对M s/ M i作图 , 得两条直 线 。 其回归方程 : I : Y = 0 . 97 X +
0
.
0 4 (
! = 0
.
9 9 9 3 ) , I
: Y = 2
.
9X + 0
.
13 (
r 二 0 . 9 9 9 3 )
。 式中 Y = M s /M i , X = A s / A i 。 线
性范围 : I : 0 . 0 2 5 ,一 0 . 8 4协g , I : 0 . 1 1一 1 . 1协 g 。
2
.
4
.
4 提取率考察 : 按前述方法提取 , 洗脱液依次接收 10 0 、 30 、 GZ m l , 将后 2 份洗 脱 液
浓缩 , 进样 , 未检出待测成分 , 说明已提取完全 。
2
.
4
.
5 回收率试验 : 精密称取月腺大戟粉末 ( 80 目 ) 0 . 29 , 6份 , 其中 5份 加入一定量的对
照品 , 按前述方法进行提取测定 , 计算含量及 回收率 。 结果 , I 王士 S D 为 10 0 . 1 士 3 . 6。% ,
C V 为 3 . 6% , I 万士 S D为 9 9 . 9 3士 2 . 69%, C V 为 2 . 2 % 。
2
.
5 样品测定 : 按前还提取方法得样品丙酮提
取液 , 浓缩至干 , 用甲醉溶解 , 转移 至 2 m l 容 量
瓶中 , 加入 内标袱 6 。时 , 用甲醇调至刻度 , 进
样 , 或根据情况适当调整待测成分 至 线性 范
围 , 测定 , 计算含量 。
对两个产地的标准药材及 12 件商品药材做
了含量测定 , 结果见表 1、 2 。
表2 商品药材含最测定结果 ( n = 5)
狼毒 甲素 ( % ) 狼毒乙素 ( % )
。
0 0 8 5
。
0 0 4 3
0
.
0 0 2 7
表 1
产 地
不 同产地标准药材测定结果 (。 = 5)
0
。
0 03 4
0
。
0 0 3 3
0
。
0 0 7 6
采集时问 狼 毒甲素 ( % ) 狼毒乙素 ( % )
南京燕子矶 1 9 8 7
南京燕子矶 1 9 8 8
安徽琅解山 1 9 3 7
0
.
0 0 6 6
0
。
0 0 7 2
0
。
0 0 3 0
0 。 0 6 1
0
。
4 9
1
。
1
商品来源
山东青岛
山西太原
山东济南
安徽合肥
浙江杭州
安徽毫州
浙江嘉兴
江苏南京
福建龙岩
安徽颖上
江苏如皋
四川乐 孜
产地
山东
山西
山东
安徽
浙江
安徽
浙江
江苏
不详
安徽
江苏
不详
0
。
0 0 3 9
0
。
0 0 3 2
0
。
0 6 2
0
。
0 6 2
0
。
1 6
1
。
9
0
。
0 4 0
0
。
0 2 2
0
。
1 5
0
。
7 1
0
。
0 6 9
0
。
0 6 2
0
。
1 0
0 。 1 0
注 : 一 : 未检 出 , . : 痕星
2
.
6 同属其它 8种 ( 变种 ) 狼毒的分析 : 对 同属其它 8种 ( 变种 ) 犷毒 ( 狼毒大 戟百 u P h。卜
b`。 f ` s 。 h e r 玄a 。 a S t e u d . , 大狼毒 E . o e 。 。 r o c y p h a H a n d 一M a z z . , 毛大狼毒 E . 。 e 阴 a t o -
一 e y p h a H a n d 一M a z z . : a r . f n d u t a H a n d 一M a z z . , 鸡肠 狼 毒百 . p r o l墓f e r a B u e h
H a m
.
, 土瓜狼毒 E . p `n u : L e 、 1 . , 柴胡状大戟 E . b u p l e u r o `d e s D i e l s , 硕苞大戟 E . 二 a l -
l玄e h “ H o o k . f . 刮金板 E . e h r y s o c o o a L e v l . e t V a n . ) 的根按上述方法 做 T H P L C 分
析 , 结果未检出 I 、 I 组分 。
3 讨论 ( 下 转第75 页 )
《 中草药 》 1 9 9 5年第 26 卷第 2期
2
.
1
.
2 将鸦胆子油乳颗粒剂放于恒温 4 0 、 6 0 、 8 0℃条件下 , 。一 1 d0 , 分别取样 测 含 量 , 并
观察外观变化 , 结果见表 4 。
2
.
1
.
3 将样品于 40 ℃ 、 相对湿度为 75 % , 恒温放置 3个月 , 每月按规定项 目检 测 一 次 , 结
果见表 5 。
通过恒温 、 恒湿加速试验考察结果 , 从表中看出颗粒剂中主要成分 ( 油酸 ) 含量应在本
品规定的标示量 85 士 15 %的范围内 , 初步认为本品比较稳定 , 估计在 2年保质期内含 量变化
不会超过标示量范围 。
另外 , 本品在留样 3个月后的样品加水冲溶后 , 分散均匀 ; 在显微 镜 下 观 察 ( 15 o x 理。
倍 ) 油滴仍在 5协m 以下 , l 。卜m 以上的粒子不超过 5粒 , 故服用仍具乳剂作用 。
2
.
1
.
4 取 80 ℃恒温样品层析鉴定 : 取标准品油酸 、 鸦胆子油 , 0 、 4 、 8 、 l o d s 。℃下 恒温样
品 , 用石油醚提取 , 硅胶 G C板层析 , 展开剂 : 石油醚一醋酸乙酚 ( 85 : 1 5 ) , 如 图 2。
表 5 鸦胆子油乳颗粒剂干 40 O C , 相对湿
度为75 %下恒温 3个月结果
0 0 0 0 乙
外观 洁化性 含量 ( % ) 结果 ( % ) (与原始含量比
0
3 0
6 0
9 0
奶白色 均匀 分散
奶白色 均匀分散
奶白色 均匀分散
奶白色 均匀 分散
0
。
12 7
0
。
12 0
0 。 1 1 2
0
。
10 8
1 0 0
9 4
。
4 9
8 8
。
1 8
8 5
。
0 3
。
{ { { { }
亨一 霭一 闭. 一丈~ 叫舀~ 一 各 - 一5 6
图 2 样品层析图
i
一油酸 2 一鸦胆子油
3
、
4
、
5
、
s分别为。 、 4 、 s 、 l o d样品
薄层结果显示 , 鸡胆子油乳颗粒剂在 80 ℃恒温下 1 o d 以内所含成分与鸦胆子油无差 别 ,
且依然含有油酸 , 所以可以 一肯定同样条件下在 40 ℃ 、 60 ℃恒温下 , 样品成分和含量变化不会
超过规定范围 。
参 考 文 献
1 许洪霞 , 等 . 辽宁肿瘤防治研 究 , l o a 3 , 1 7 : x g s o . 1` 3
2 5 5 宋永青 。 食品工业科技 , 1 9 9 0 , 6 : 5 3
2 中国科学院林业土壤研究所植物化学组 . 东北 油 ( 1 9 9 4一 01 一31 收稿 )
脂植物及油脂成分测定法 . 沈阳 : 辽宁人民出版 社 ,
( 上接第67 页 )
3
.
1 有关狼毒抗结核活性成分的含量测定至今未报道 , 本文用反相 H P L C法 , 用甲醇一水一
醋酸系统做流动相 , 对 I 、 1 2种成分做了测定 。 分析过程 在 30 m in 左右 , 方法简便快速灵
敏 , 重现性好 , 可供该类生药在质量控制及品质评价时参考。
3
.
2 从测定结果中可知 , 不 同产地 的商品药材 , 上述 2种成分的含量有一定的差异 , 同一产
地 ( 燕子矶 ) 的药材 , 春季 ( 3月 ) 比夏季 ( 6月 ) 含量为高 , 说明本草文献中关于狼毒春天
采收的记载是科学的 。
3
.
3 在所分析的大戟属 9种 ( 变种 ) 狼毒中 , 所测组分只存在于月腺大戟中 , 可视为本种的
特征性成分 。
致谢 : 承江 苏植物研完所张涵 庆研完员惠赠时照 品并给予指 导 。
( ]。 9 4一 0 2一 1。 `:戈稿 )
《 中草药 》丁亏百5牵第 26 卷第 2期 · 7 5 ·
A BST RA T S COF ORIG IN AL A RT I L CES
S t u d ie s n ot h e Ch e m ie a !Con s t it u e n t s of Y u n n a n h Po !id ot a
(尸、 。 z i jot 。 夕“ 。 。 。菇e n s is )
M a X
u e m
e
i
,
L i M a n f e i a n d Z h a n g Q i
n g r o n g
T r it e r P e n o i d s a n d a s t e r o l w e r e i s o l a t e d f r o m P h
o li d o t a y “ ” ” a ” e ” 5 15 R o l f o f o r t五 e f i r o t t i
m e
。
T h e y
0 1 ( 1 )
,
w e r e i d e n t i f i e d a s c y c l o Ph o l i d o n 。 ( I ) , e y c l o P h o l i d o n o l ( 1 ) , h e x a c o 一y l a l c o h -
2 5
一
m
e t h y l o n o c y c l o a r t a n y l P
一
h y d r o x y
一 t r a n s 一 c i n n a m a t e ; ( V ) a n d
t h o b a s i s o f P h y s ic a l a n d s P e c t r a l d a t a
.
A位 o n g r h e 皿 , V 1 5 a n e w c o m P o u n d ,
Ph o l i d o t a n i n
.
p
一 s i t o s t e r o l o n
a n d n a m o d a s
( O r i g i n a l a r t i c l e o n P a g . 5 9 )
S t u d i e s o n t h e C h e m l e a ! C o n s t i t u e n t s o f C o m m o n
M a e r o e a r P i u m ( C
o r o u s o f f 官。￡。 。 l了; )
X u L i z h o n , L i H
u i y i n g , T i a n L e i , e t a l
T o n c o m P o u n d s i s o l a t e d f r o m C o r o u s o f f i
e i o a l亡5 5 1。 b . e t Z u c c 。 w e r e i d e n t i f i e d 扭 S
a c i d ( I )
,
s
, 5 , 一 d i a
一
f u r a l d o h y d ic d i m e t h y l . t h e r ( 1 )
,
5
一
h y d r o x y m e t h y l f u r f u r a l ( 班 )
u r s o l i c
g a l l
-
i c a c i d ( W )
,
3
,
s
一
d i h y d r o x y b e
n z o ic a c i d ( V )
,
l o g a n i n ( yI )
,
7
一
0
一
m e t h y l m o r r o n i s i d e ( 姐 ) ,
of卜 d e h y d r o l o g a n i n ( 植 ) , p一 s i t o s t e r o l ( 双 ) , a n d d e h y d r o m o r r o n i a g l y c o n 。 ( x ) o n t h e b a s i s
Ph y s i c o c h e m i c a l c o n s t a n t s a n d s P e c t r a l a n a l y a i s
.
X w a s f
o u n d f r o m n a t u r e f o r t h e f i r s t t i m 。
a n d n a m
e d a s d e h y d r o m o r
r o n i a g l y c o n e
.
l
,
1 a n d 植 w e r o a l s o i s o l a t e d f o r t h o f i r s t t i m e
f r o m e ” r ” u e e o e 。
( o r玉9 i n a l a r t i c l e o n P a g o 6 2 )
D e t e r m i n a t i o n o f B i s一 ( 5一 f o r m y l一 f u r f u r y l ) 一 e t h e r
a n d Z
,
4一 D ih y d r o x y一 6一 m e t h o x y 一万一 m e t h y l一 a e e t o P h e n o n e i n
t h e R o o t o f Y u e x i a n d a j i ( E
u P h o r b` a e b r a e t e o l。 t a ) b y HP L C
Z h
a o
K u i j
u n , X u G u o j
u n , J i n R
o n g l u a n
, e t a l
A n H P L C m
e t h o d f o r t h e q u a n t i t a t iv o a n a l y s i s
o f b i s ( 5
一
f
o r m y l
一
f u r f u r y l )
一 e t h e r a n d Z
, 专·
d i h y d r o x y
一
6
·
m e t h
o x y
一
s
·
m e t h y l
· a e e t o P助 n o n e i n C h i n e s e d r u g ,毛 a n g d u c ( E u P h o r b i a e b r a e t e o la -
t a ) w
a s d e v e l o p e d
.
T h e , o l v e n t s y s t o ln
u s e d w a s nI e t h a
n o l
一下 a t e r 一 10% a e i d ( 4 5 , 5 5 : 2 ) ( a d j -
u s t e d t o P H 5
.
4 b y 10沁 a m m o n i a ) o n O D S c o l u 位皿 a t 2 8 o n 皿 . T e t r a h y d r o P a l m a t i n e w a s u s e d
a s a n i n t e r n a l s t a n d a r d
.
T h e o P e r a t i o n c a n b e c o m P l e t e d i n 3 0 m i n
.
T h i s m e t h o d 1 5 s e n s i t i v e
,
s i m P l e
a n d a c c u r a t e w i t h g o o d r e P r o d u c i b i l i t y
.
l t c a n b o
a P P l i e d t o t h e q u a l i t y c o n r r o l o f r h c
c r u d e d r u g o f E
. e
b
r a e t e o l a t a
.
( o r i g i n a l a r t ic l e o n P a g e 6 6 )
S t u d i e s o n t h e U s e o f a y a n g y i n s h e n g j i
” F i l m a s W o u n d D r e s s i n g
G u o Zh i
,
M e n g G e n
,
Z h . n g Y o n g y i
. Y a n g y i n s h e n g j i
” F i l m 1 5 a m o d e r n i z e d w o u n d d r e s s i n g p r e p a r e d b y i n c o r P e r a t i n g e a r b o -
x y m o t h y l c e l l u l o s e i n t o t h e t r a d i t i o n a l C h i n o s e P o w d e r y p r e s c r i P t i o n f o r n o u r i s h i n g t h e
“
Y i n
, a n d p r o m
o t i n g t i s s u e r e g e n e r a t i o n
.
W h o n u s
e d a s d r e s s i n g i n d e r m a b r a s i v e w o u n d o f
.
1 10
·