全 文 ：银杏叶中活性成分的提取工艺 、 测定及其进展
中国科学院生态环境研究中心 北京 ! 妇匕渭溪
摘要 概述银杏叶内活性成分 黄酮类和菇内醋 的提取工艺 水蒸汽蒸馏 、 溶剂索氏提 取和超
临界流体萃取 , 测定方法 分光比色法、 衍生化一气相色谱法、 萃取一高效液相色谱法和水解一
高效液相色谱法。 目前 , 敲合提取法测定方法为一体的超临界流体萃取 超临界流体色谱一 质 谱
一 的联用技术 , 它将是今后发展方向之一 。
近 多年来 , 国内外特别是德国、 日本 、美国和法国等国家对银杏叶中的化学成分及其分
离方法 、药理试验和临床应用进行了大量的研究工作 〕, 结果表 明 银 杏 叶 中存 在 两
类重要生理活性物质—黄酮类化合物 和菇内酷 ! 。它们具有捕获游离基、抑制血小板活化因子 促进血液循环及脑代谢等功能 。
用 于治疗冠心病 、 心绞痛 、 增强记忆功能 、 治疗老年痴呆症和防治皮肤病 、脱发等多种疾病 ,
同时还可用于研制营养口服液 、 保健食品和化妆品等 , 其应用范围日益广泛 。 在新药产品不
断出现的情况下 , 德国率先提出了银杏制剂含量的质量标准 黄 酮醇糖贰妻 纬、 菇内醋》
和白果酸 。, 现该标准已成为世界许多国家进出口银杏叶和制剂的检验标准 。 为
了使银杏叶产品能出口创汇 , 参加国际市场的大循环 、 不断探索新的提取工艺、 研究新的测
定方法已成为大家共同关注的问题 。
提旅工艺
银杏叶中黄酮类化合物和菇内醋的提取工艺 , 大致可分为 种类型 。
水蒸汽蒸馏法 将银杏叶千燥 、 粉碎后 , ℃水蒸汽蒸馏 , 燕馏液冷却后 , 用
非极性大孔树脂 或其他吸附剂 吸附、 浓缩, 然后用乙醇洗脱 , 蒸干 即得粉状结晶。 该方
法设备简单 , 但提取率较低 , 现已很少采用 。
有机溶剂萃取法 这是目前国内外使用
最广泛的方法 一幻 , 其提取工艺的专 利也
较多 , 可归纳为两种形式 一种是制备银 杏
叶粗提物 这类方法是把银杏叶干 燥、 粉碎
后用有机溶剂 例如乙醇 或 丙 酮 、 石 油醚
等 浸泡 、 萃取、 过滤 , 滤液中的溶 剂 用减
压蒸馏除去后 , 得银杏浸膏 。 这种方 法的制
备设备简单 , 产品得率高 约 ,
但产品中杂质含量较高 , 通常呈棕黑色。 其
活性成分黄酮 化合物含 量 约 纬 , 菇
内脂约 一 。 另一种是制备银杏叶精
提物 这类方法通常在粗提物制备基础上 ,
进一步精制 , 常用精制方法有 液一液萃取
生
办
一娜
一 ,二
国 的 装置简田
一原料 一极性剂 一 萃取 罐 一减 压阀
一热交换器 一分离罐 卜 温水 一过滤器 一冷凝器
一冷冻掖 卜贮槽 一高压泵 工 流量计
苏失汽 字提物产物 一 七卜充
从一 , , !
。 ,
《中草药 》 , 今举 耘弟 期
一 功 ,
例如用二氯甲烷 、 氯仿或苯脱脂 , 沉 淀 法 用 ‘ 或 。等 沉淀剂 , 和吸附一
洗脱法 用大孔树脂 、 硅藻土或硅胶等吸附剂。再通过无水 千燥 、过滤 、 减压蒸馏除
去溶剂后 , 即可得精提取物 。一般为黄褐色粉末 , 得率约 , 其中黄酮类含量约达
, 菇内酷达 左右。
超临界流体提取法
近 年来 , 随着超临界流体提取 技术的迅速发展〔 〕, 用该技术提取 天 然植物中的
药用有效成分也越来越广泛 , 它和上述提取工艺相比较 , 具有提取效率高 , 无溶剂残留毒性 、
天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏而保持其天然的特征等优点 , 同时还可以
通过控制临界温度和压力的变化 , 来达到选择性提取和分离纯化的目的 , 其基本装置如图 。
因此 , 在当今人们渴望回归大自然 的潮流中 , 该提取方法倍 受 青
睐。 用超 临界二氧化碳提取银杏叶中药用成分的方法 , 已受到人们的关注 , 现欧 州 已 有 专
利 〕, 近年来我们和有关单位合作 , 用超临界二氧化碳提取银杏叶中黄酮类化合物 , 得 到
黄绿色精提物 , 得率为 写 , 其 中黄酮占 以上 。 该方法 回收率为 , 相对标准偏 差
为 二 。 我们在进行扩大实验 , 为我国超临界提取银杏叶中药用成分的工业 生 产
提供条件 。
测定方法
银杏叶及其制剂中黄酮类化合物和嘴内醋含量的侧定 , 由于两者物化性质上的差别 , 往
往分别进行。
黄酮类化合物的测定
前几年 , 国内使用较广的是 “络合一分光光度法” 〔 , 〕, 其测定过程是把被测样品用
乙醇溶解 , 经 , 络合后 , 以芦丁为标准溶液 , 在 处作紫
外分光的比色测定。 此法的测试设备价廉 , 操作简便易学 , 但因样品未经过分离纯化 , 受杂质
千扰 , 定量测定误差较大。
利用 “衍生化一气相色谱法” 〔〕。 因为多数黄酮类化合物的沸点比较高 , 难 于 气
化 , 要先把样品用衍生化试剂 例如双三甲基硅院基兰氟乙酸氨 , 制成黄酮衍生物 , 然后
经气相 色谱分离测定 , 该法由于装置较贵、 操作繁琐 , 应用也不普遍 。
目前使用较多方法是 “高效液相色谱法〔, ‘ , 〕 , 由于黄酮类化合物能溶解在有机
溶剂中 , 样品不需经过衍生化反应 , 而直接经液相色谱进行分离测定 , 若以棚皮素为标准 , 用归
一化方法即可以简便测 出样品中总黄酮含量 , 虽这方法比 “络合一分光光度法” 简便 , 但仍含
一定的误差 , 若将每一种黄酮化合物分离后 , 各自定量进行加和 , 得到总黄酮含量 , 这样误
差较小 , 但这必须有各个黄酮化合物的标准样品才能做到 。图左是用该方法分离的色谱图 。
较好的方法是使用水解法先将黄酮贰水解为黄酮贰元后 ,用高效液相色谱测定其贰元含量 ,再
通过计算得出黄酮贰的含量〔 , , , , , “〕。 高效液相色谱法还可 以用来制备高纯的黄酮化合物 ,
但高效液相色谱装置的价格较贵 , 操作也较分光光度法复杂些 。
超临界流体色谱法 是一种新的分离技术 , 它综合了气相色 谱 法 和
高效液相色谱法 的优点 , 所以近年来国际上发展很快 , 年 用 测 定
了银杏叶中聚异戊烯醇 ! 〔 〕。
枯内醋的测定方法 目前 已发现在银杏叶中的褚 内酪包括有银杏 内 酷 魄 飞 墓引
、 、 、 和 以及 白果内酚 、, 它们在银杏叶中含量很低 , 比黄酮含量
·
口认心州竹
约低一个数量级 约。, 另 , 而且
它们常温下在有机溶剑中溶解度比较小 , 因
此测定之前往往要经过多步的分离 、 浓缩、
纯化等前处理 。 然后再用高效液相色谱分离
和紫外或差示折光检测器测定。 由于菇内醋
含量低 , 紫外检测时杂质千扰较大 , 最好使
用差示折光检测器检测 。 该方法准确度较高
, 平均回收率为 , 其相对 标 准 偏 差
为 ‘〕。图右是用该法分离广
西银杏叶中菇内醋的 色 谱图 。
展望
随着银杏制品应用范围的不断扩大 , 对
提取工艺和测定方法的要求也不断提高, 不
仅要有高的提取率 、好的产品质量 ,而且测定
方法还要求准确简便 、省时省力 。由于超临界
流体提取 比常规方法的提取率高 , 能
保持产品的天然特征 , 而且产品中没有有机
溶剂的残留毒性 , 特别适合制作药品和食品 ,
时间 认 尸 句
圈 银杏叶中活性成分的 色讼圈
左一黄酮化合物 右 一裕 内酮
因此超临界流体提取技术将是生产银杏制品的主要发展方向之一 。 同时超临界色谱 。
也比常规气相色谱 和高效液相色谱
近年来 , 超临界流体提取及其色谱和质
谱或紫外 、 红外和核磁共振波谱的联用技术
发展很快〔, 〕。 它把提取和分离测定合 为 一 商体 , 准确 、 快速 、 简便 , 特别适合产品质量 —现场监控 , 其基本装置如图 。
这种联用技术目前在我 国尚属空白 , 我
们正在开展超临界流体提取 色谱一紫外
更适合天然产物成分分析 。
,摺一。:
圈3
自
超临界流体联用装里方框图
E / SF C 一U V ) 联用技术 , 研究银杏叶中生理活性成分的工作 。
今 考
i 高根 芳春 。 J P 平3一 , . 5 , 2
2 陈惠芳. 国 外医药一植物药分册 , 1 9 9 3 , 8
( 4 )
:
1 5 9
名 庄林根 . 国外医药一植物药分册 , 1 9 9 3 , 8
( 6 )
:
2 5 1
连 B e e k T A V . J C h r o ln a t o g r 一 1 9 0 1 一 5 4 3 1
3 7 5
5 J o n g K W
. E P O ‘0 2 9 2 5 ( 1 9 9 0 )
6 李兆龙 。 中成药 , 1 9 9 2 , 1 一( 6 ) : 57 刘桂霞 , 等 。 国外医药一植物药分册 。 1 9 9 通, 9
( 1 )
. 生公
8 H a s l. r A 一 e t a l . J C h r o m a t o g r , 1 9 9 2 ,
6 0 5 ( 1 )
:
4 1
9 虞杏英 , 等. 药物分析杂志 , 1 9 9 3 , 1 3 ( 2 ) :
会5
1 0 刘盆芳 , 等. 中成药 , 1 9 0 2 , “ ( 7 ) : 711 A k iy o 一h i M , 一t a l 。 E P . 3 o t o 7 5 ( i , 台. )1 2 H u 五 H 一tal。 1 C h r o m a t o ‘r , 1 9 0 2 一00-
文 峨
36413 Jinn o K 。 H y p h e n a t o d T e e h n i q u e s i n S u ·
P e r c r i t i c a l F l u i d C h r o m a t o g r a P h y a n d
E x t r a c t i o n
.
N e t h e r l a n d s * E l s e v i e r S e i
·
. n c e P u b l i s h e r s 1 9 9 2
。 2 5
、 2 7 5
1 4 庄向平 。 中草药 , 1 。。2 ( s ) : 12 21 5 姚渭溪 , 等 . 超临界萃取和高效液相色谱测定银杏叶中黄酮. 第四届全国中药和天然药物学术会议 。 北京 : 1 994一 0 4
1 . L 二 M L , e t a l 。 A n a l y t i c a l S u P e r c r i t i c a {
F l u i d C h r o m a t
o g r a P h y a n d E
x t r a c t i o n ,
C h
r o 坦 ato g raP h ic C o n f.re nco s 。I n c P r o v o
U T
一 1 9 9 0 。 4 3 7
1 7 张晓琦 , 等 .色谱 , z , , ‘, 1 2 “):3 021. 谢大年 , 等.色谱 , 1 , , 魂, 1 2 ( 5 ) . 3 3 4
(
1 9 9 4 一0 9 一2 0 收稿 )
《中草药 》x , 9 5年第2‘卷第 a 期 1 5 9