全 文 ：　 Ｇｕｉｈａｉａ　 Ｊａｎ. ２０１６ꎬ ３６(１):１１４－１２０
ｈｔｔｐ: / / ｊｏｕｒｎａｌ.ｇｘｚｗ.ｇｘｉｂ.ｃｎ
ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍ
ＤＯＩ: １０.１１９３１ / ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１４１１０３９
刘承源ꎬ王辉ꎬ邱文昌ꎬ等. 基于过氧化物同工酶分析月季种质资源的亲缘关系及杂种真实性[Ｊ]. 广西植物ꎬ ２０１６ꎬ ３６(１):１１４－１２０
ＬＩＵ ＣＹꎬＷＡＮＧ ＨꎬＱＩＵ ＷＣꎬｅｔ ａｌ. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ａｎｄ ｈｙｂｒｉｄｓ ｒｅａｌｉｔｙ ｉｎ ｒｏｓｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＰＯＤ ｉｓｏｚｙｍｅ[Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ ２０１６ꎬ ３６(１):１１４－１２０
基于过氧化物同工酶分析月季种质
资源的亲缘关系及杂种真实性
刘承源１ꎬ ２ꎬ 王　 辉２ꎬ 邱文昌２ꎬ 何亨辉２ꎬ 方炎明１∗
( １. 南京林业大学 南方现代林业协同创新中心 生物学与环境学院ꎬ 南京 ２１００３７ꎻ
２. 深圳市公园管理中心 园艺推广部ꎬ 广东 深圳 ５１８０４０ )
摘　 要: 为了提高种质资源利用率ꎬ加速月季育种进程ꎬ对 ２７份月季种质及 ３个杂交组合的 ８个杂交后代ꎬ采
用过氧化物酶(ＰＯＤ)同工酶方法分析其亲缘关系并进行杂种真实性鉴定ꎮ 结果表明:月季种质采用 ＰＯＤ 同
工酶分析具有一定的可行性ꎮ 酶谱分析中ꎬ在相对迁移率为 ０.２６４~０.８５８的位点处共获得 ７条酶带ꎬ其中共有
酶带 ３条ꎬ特征酶带 ４条ꎬ表明不同月季种质间遗传多样性丰富ꎬ但又存在一定同源性ꎮ 基于酶带特征进行聚
类分析ꎬ在相似系数为 ０.５７处ꎬ可将 ２７份供试材料分为 ３个大组ꎮ 合柱组与月季组材料聚在一个大组中ꎬ两
个组在形态上的相似性再次得到确认ꎮ 金樱子与硕苞蔷薇分别聚在两个不同的组中ꎬ表明二者之间的亲缘关
系较远ꎮ 供试的古老月季品种被聚在两个不同的大组中ꎬ与野生种聚成的一组呈平行关系ꎬ表明古老月季在
起源上的差异较大ꎬ可利用其作为杂交亲本进行广泛杂交以选育具有丰富遗传多样性的杂交后代ꎮ 根据有无
父本特征酶带对杂种后代真实性进行鉴定ꎬ初步确定 ２个杂交组合的 ６个杂交后代中 ５个为真实杂种ꎬ１个为
自交种ꎮ 该研究结果为进一步开展月季遗传育种奠定了基础ꎮ
关键词: 月季ꎬ 过氧化物酶ꎬ 亲缘关系ꎬ 杂种鉴定ꎬ 聚类分析
中图分类号: Ｓ６８５. １２　 　 文献标识码: Ａ　 　 文章编号: １０００￣３１４２(２０１６)０１￣０１１４￣０７
Ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ａｎｄ ｈｙｂｒｉｄｓ ｒｅａｌｉｔｙ ｉｎ
ｒｏｓｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＰＯＤ ｉｓｏｚｙｍｅ
ＬＩＵ Ｃｈｅｎｇ￣Ｙｕａｎ１ꎬ２ꎬ ＷＡＮＧ Ｈｕｉ２ꎬ ＱＩＵ Ｗｅｎ￣Ｃｈａｎｇ２ꎬ
ＨＥ Ｈｅｎｇ￣Ｈｕｉ２ꎬ ＦＡＮＧ Ｙａｎ￣Ｍｉｎｇ１∗
( １. Ｃｏ￣Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎａꎬ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔꎬ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ｓｈｅｎｚｈｅｎ Ｐａｒｋ Ｓｅｒｖｉｃｅꎬ Ｓｈｅｎｚｈｅｎ ５１８０４０ꎬ Ｃｈｉｎａ )
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓꎬ ａｎｄ ｔｏ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｒｏｓｅ ｂｒｅｅｄｉｎｇꎬ ｐｅｒｏｘｉ￣
ｄａｓｅ (ＰＯＤ) ｉｓｏｚｙｍｅ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ２７ ｒｏｓｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ ８ ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ ｏｆ ３ ｈｙｂｒｉｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｗｉｔｈ
ｖｅｒｔｉｃａｌ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｐｌａｔｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｔ ｈａｄ ｃｅｒｔａｉｎ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｄｏ ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ｗｉｔｈ
ＰＯＤ ｉｓｏｚｙｍｅ ｉｎ Ｒｏｓａ. Ｔｈｒｅｅ ｇｅｎｅｒａｌ ｅｎｚｙｍｅ ｂａｎｄｓ ａｎｄ ｆｏｕｒ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｚｙｍｅ ｂａｎｄｓ ａｔ ｓｅｖｅｎ ｉｓｏｚｙｍｅ ｌｏｃｉ (Ｒｆ ｆｒｏｍ ０.２６４ ｔｏ
０.８５８) ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｚｙｍｏｇｒａｍ ａｎａｌｙｓｉｓꎬｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗｅｒｅ ａｂｕｎｄａｎｔꎬｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ
ｓｏｍｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ａｍｏｎｇ ｔｈｅｓｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ. Ｔｈｅ ２７ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ＵＰＧＭＡ ｃｌｕｓｔｅｒ ａ￣
收稿日期: ２０１４￣１１￣２７　 　 修回日期: ２０１５￣０３￣１８
基金项目: 国家自然科学基金(３１３７０６６６)ꎻ 江苏高校优势学科建设工程项目(ＰＡＰＤ)ꎻ 深圳市城管局项目(２０１００８) [Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ(３１３７０６６６)ꎻ Ｐｒｉｏｒｉｔｙ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｉｇｈ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ(ＰＡＰＤ)ꎻ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｓｈｅｎｚｈｅｎ
Ｕｒｂａｎ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ Ｂｕｒｅａｕ(２０１００８)]ꎮ
作者简介: 刘承源(１９８２￣)ꎬ男ꎬ山东青岛人ꎬ在读博士研究生ꎬ工程师ꎬ研究方向为月季种质资源创新及遗传育种ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｃｙｌｉｕ＿１９８２＠ １２６.ｃｏｍꎮ
∗通讯作者: 方炎明ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ研究方向为植物学ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｊｗｕ４＠ ｎｊｆｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎮ
ｎａｌｙｓｉｓ ａｔ ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ０.５７. Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓꎬ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｒｏｍ ｓｅｃｔｉｏｎｓ Ｓｙｎｓｔｙｌａｅ ａｎｄ Ｉｎｄｉｃａｅ ｗｅｒｅ
ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｗｉｔｈｉｎ ｏｎｅ ｓａｍｅ ｇｒｏｕｐꎬ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ｓｅｃｔｉｏｎｓ ｗａｓ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ａｇａｉｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｏｕｒ
ＰＯＤ ｉｓｏｚｙｍｅ ａｎａｌｙｓｅｓ. Ｗｈｅｒｅａｓ Ｒｏｓａ ｌａｅｖｉｇａｔａꎬａｎｄ Ｒ. ｂｒａｃｔｅａｔａ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｉｎ ｔｗｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓꎬｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ
ｔｈｅｓｅ ｔｗｏ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｓｔａｎｔｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｅａｃｈ ｏｔｈｅｒ. Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎ￣
ｔｏ ｔｗｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓꎬａｎｄ ｉｎ ｐａｒａｌｌｅｌ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ ｍａｄｅ ｏｆ ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓꎬｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｌａｒｇｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｅｘｉｓｔｅｄ ｏｎ ｔｈｅ
ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｓａｍｐｌｅｓꎬ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｗｉｄｅ ｃｒｏｓｓｅｓ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｇｅｔ ｈｙｂｒｉｄ ｏｆｆｓｐｒｉｎｇｓ ｗｉｔｈ ａｂｕｎｄａｎｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉ￣
ｔｉｅｓ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｗｈｅｔｈｅｒ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｚｙｍｅ ｂａｎｄｓ ｏｆ ｍａｌｅ ｐａｒｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｇｅｎｉｅｓꎬ ｆｉｖｅ ｏｆ ｓｉｘ ｈｙｂｒｉｄｓ
ａｍｏｎｇ ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ｔｒｕｅ ｏｎｅｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｔ ｏｎｅ ｗａｓ ｓｅｌｆ￣ｃｒｏｓｓ ｖａｒｉｅｔｙ. Ｔｈｅｓｅ ｆｉｎｄｉｎｇｓ
ｃｏｕｌｄ ｏｆｆｅｒ ｂａｓｉｃ ｄａｔａ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ ｒｏｓｅ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ｒｏｓｅꎬ ＰＯＤꎬ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐꎬ ｈｙｂｒｉｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ
　 　 月季隶属蔷薇科蔷薇属(Ｒｏｓａ Ｌ.)ꎬ该属约有近
２００ 种野生资源 ( Ｒｅｈｄｅｒꎬ １９４０ꎻ Ｋｕ ＆ Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎꎬ
２００３)和 ３０ ０００ 余个园艺品种(Ｃａｉｒｎｓꎬ２００７)ꎬ但参
与现代月季演化的野生资源仅为 ７ 个 (Ｗｙｌｉｅꎬ
１９５４)ꎬ分别为月季花 ( Ｒ. ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)ꎬ巨花蔷薇
(Ｒ. ｇｉｇａｎｔｅａ)ꎬ多花蔷薇(Ｒ. ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ)ꎬ异味蔷薇
(Ｒ. ｆｏｅｔｉｄａ )ꎬ法国蔷薇 ( Ｒ. ｇａｌｌｉｃａ )ꎬ麝香蔷薇
(Ｒ. ｍｏｓｃｈａｔａ)ꎬ光叶蔷薇(Ｒ. ｗｉｃｈｕｒａｉａｎａ)ꎮ 另外ꎬ
在现代月季的育成中起了重要作用的中国古老月季
(Ｃｈｉｎｅｓｅ ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅｓ)也未能得到充分应用
(Ｗａｎｇꎬ２００７ꎻ张佐双和朱秀珍ꎬ２００６)ꎮ 因此ꎬ与野
生资源和古老月季丰富的遗传多样性相比ꎬ现代月
季的遗传背景较窄(Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌꎬ１９９８)ꎮ 现在世
界各地的月季育种工作者普遍认识到ꎬ要使现代月
季育种有新的突破ꎬ必须进一步导入野生资源和古
老月季的优良性状(张佐双和朱秀珍ꎬ２００６ꎻＤｅｂｅｎｅｒ
＆ Ｍａｔｔｉｅｓｃｈꎬ１９９９)ꎮ
由于月季资源种类繁多ꎬ来源多样ꎬ加之广泛的
种内变异、多倍化及种间杂交ꎬ使其种质资源复杂多
样ꎬ分类和鉴定工作难度较大(Ｗｉｓｓｅｍａｎｎꎬ２００３)ꎮ
同工酶是基因表达的产物ꎬ是基因在蛋白质水平上
的表现型ꎬ既有相对的稳定性ꎬ又有种属的特异性ꎬ
因此ꎬ同工酶能够反映物种基因水平的差异(胡能
书和万贤国ꎬ１９８５)ꎮ 过氧化物同工酶(ＰＯＤ)是细
胞内抗脂质过氧化作用保护系统的主要成分之一ꎬ
在植物次生代谢系统中起着重要的作用ꎬ同时ꎬ又是
一种重要的遗传标记酶ꎮ ＰＯＤ 被广泛应用于研究
植物种类间的亲缘关系(李学强等ꎬ２０１０)ꎬ种质资
源的遗传多样性(李强栋等ꎬ２０１２ꎻ王玉荣等ꎬ２０１３ꎻ
陈立强等ꎬ２０１４)ꎬ逆境条件下植物的生长发育(陆
晓民等ꎬ２０１１ꎻ张清等ꎬ２００４)及杂种后代真实性鉴
定(郭海林等ꎬ２００６)ꎮ 而且与 ＲＡＰＤ、ＳＳＲ、ＳＲＡＰ、
ＡＦＬＰ、ＳＮＰ 等分子标记技术相比ꎬ同工酶标记技术
具有成本较低、易于操作等特点ꎮ 在品种分类研究
方面ꎬ贾元义等(２００５)曾利用过氧化物同工酶对 １８
个现代月季园艺品种进行测定ꎬ共检测出 ８条酶带ꎬ
并基于酶带聚类分析将供试材料分成了 ５大类ꎮ 然
而ꎬ利用该酶对月季种质资源亲缘关系及杂种真实
性鉴定的研究还未见报道ꎮ 本研究通过对 ４１ 份月
季种质资源的过氧化物酶(ＰＯＤ)分析ꎬ探讨了野生
种间及野生种和古老月季间的亲缘关系ꎬ并对 ２ 个
杂交组合的杂交后代进行早期鉴定ꎬ为蔷薇属的系
统关系、种质鉴定和资源的有效利用提供了理论
依据ꎮ
１　 材料与方法
１.１ 材料
实验选用的 ４１份材料包括 １２ 个野生种、１５ 个
古老月季及 １４个现代月季栽培品种均取自深圳市
公园管理中心月季种质资源保存圃(表 １)ꎮ 根据形
态特征和文献资料确定材料的准确性(Ｋｕ ＆ Ｒｏ￣
ｂｅｒｔｓｏｎꎬ２００３ꎻＣａｉｒｎｓꎬ２００７ꎻ张佐双和朱秀珍ꎬ２００６)ꎮ
１.２ 酶液制备、凝胶板制作、电泳及染色
取待试材料的新鲜幼嫩叶片ꎬ洗净ꎬ沥干ꎬ称取
０.５ ｇ于研钵中ꎬ加入少许石英砂ꎬ混合 ０.０５ ｍｏｌ􀅰
Ｌ￣１ꎬｐＨ７.８ 的磷酸缓冲液 １.５ ｍＬ 冰浴研磨成匀浆ꎮ
１０ ０００ ｒ􀅰ｍｉｎ￣１４ ℃离心 ２０ ｍｉｎꎬ取上清液ꎬ分装在 １
ｍＬ的 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ 管中ꎬ于－ ２０ ℃冰箱中冷冻保存
(胡能书和万贤国ꎬ１９８５)ꎮ
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法ꎬ电泳装置采用
ＤＹＹ￣６Ｃ型电泳仪ꎬＤＹＣＺ￣２４ＥＮ 型电泳槽(北京市
六一仪器厂)ꎮ 电极缓冲液为 ｐＨ８. ３ 的 Ｔｒｉｓ￣甘氨
酸ꎬ酶加样量为 ２０ μＬꎬ分离胶浓度为 ７.２％ꎬ浓缩胶
浓度为 ３.１％ꎮ 稳压电泳ꎬ浓缩胶 １００ Ｖꎬ分离胶 ２００
Ｖꎬ电泳 ４.５ ｈ左右(胡能书和万贤国ꎬ １９８５ꎻ 何忠孝
５１１１期　 　 　 　 　 　 刘承源等: 基于过氧化物同工酶分析月季种质资源的亲缘关系及杂种真实性
表 １　 实验材料
Ｔａｂｌｅ １　 Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
编号 Ｎｏ. 名称 Ｔａｘａ 类型 Ｔｙｐｅ 编号 Ｎｏ. 名称 Ｔａｘａ 类型 Ｔｙｐｅ
１ 硕苞蔷薇
Ｒｏｓａ ｂｒａｃｔｅａｔａ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
２２ 清廉学士
‘Ｑｉｎｇｌｉａｎ Ｘｕｅｓｈｉ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
２ 樟味蔷薇
Ｒ. ｍａｊａｌｉｓ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
２３ 映日荷花
‘Ｙｉｎｇｒｉ Ｈｅｈｕａ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
３ 香水月季
Ｒ. ｏｄｏｒａｔａ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
２４ 大富贵
‘Ｄａｆｕｇｕｉ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
４ 粉红香水月季
Ｒ. ｏｄｏｒａｔａ ｖａｒ. ｅｒｕｂｅｓｃｅｎｓ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
２５ 一品朱衣
‘Ｙｉｐｉｎ Ｚｈｕｙｉ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
５ 粉团蔷薇
Ｒ. ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ ｖａｒ. ｃａｔｈａｙｅｎ￣
ｓｉｓ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
２６ 月月红
‘Ｙｕｅｙｕｅｈｏｎｇ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
６ 无刺蔷薇
Ｒ. ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ ｉｎｅｒｍｉｓ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
２７ 月月粉
‘Ｙｕｅｙｕｅｆｅｎ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
７ 悬钩子蔷薇
Ｒ. ｒｕｂｕｓ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｃ１ 藤墨红
‘Ｃｒｉｍｓｏｎ Ｇｌｏｒｙ’ (Ｃｌ)
藤本月季
Ｃｌｉｍｂｅｒ ｒｏｓｅ
８ 巨花蔷薇
Ｒ. ｇｉｇａｎｔｅａ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｃ２ 五月天
‘Ｍａｙ Ｄａｙ’
藤本月季
Ｃｌｉｍｂｅｒ ｒｏｓｅ
９ 竹叶蔷薇
Ｒ. ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ ｆ. ｗａｔｓｏｎｉａｎａ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｃ１２￣１ 香粉蝶
‘Ｆｒａｇｒａｎｔ Ｂｕｔｅｒｆｌｙ’
杂交品种
Ｃｕｌｔｉｖａｒ ｂｙ ｃｒｏｓｓｂｒｅｅｄｉｎｇ
１０ 光叶蔷薇
Ｒ. ｗｉｃｈｕｒａｉａｎａ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｃ１２￣２ 粉风铃
‘Ｆｅｎｆｅｎｇｌｉｎｇ’
杂交品种
Ｃｕｌｔｉｖａｒ ｂｙ ｃｒｏｓｓｂｒｅｅｄｉｎｇ
１１ 玫瑰
Ｒ. ｒｕｇｏｓａ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｃ３ 白雪山
‘Ｍｏｕｎｔ Ｓｈａｓｔａ’
杂种茶香月季
ＨＴ
１２ 金樱子
Ｒ. ｌａｅｖｉｇａｔａ
野生种
Ｗｉｌｄ ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｃ４ 光彩
‘Ｋｏｓａｉ’
杂种茶香月季
ＨＴ
１３ 软香红
‘Ｒｕａｎｘｉａｎｇｈｏｎｇ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ３４￣１ Ｃ３×Ｃ４株系 １
Ｃ３×Ｃ４ Ｓｔｒａｉｎ １
杂种 Ｆ１代
Ｆ１ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
１４ 四面镜
‘Ｓｉｍｉａｎｊｉｎｇ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ３４￣２ Ｃ３×Ｃ４株系 ２
Ｃ３×Ｃ４ Ｓｔｒａｉｎ ２
杂种 Ｆ１代
Ｆ１ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
１５ 紫红香
‘Ｚｉｈｏｎｇｘｉａｎｇ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ３４￣３ Ｃ３×Ｃ４株系 ３
Ｃ３×Ｃ４ Ｓｔｒａｉｎ ３
杂种 Ｆ１代
Ｆ１ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
１６ 绿萼
‘Ｌü ｅ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ５ 戴高乐
‘Ｃｈａｒｌｅｓ Ｄｅ Ｇａｕｌｌ’
杂种茶香月季
ＨＴ
１７ 云蒸霞蔚
‘Ｙｕｎｚｈｅｎｇ Ｘｉａｗｅｉ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ６ 红霞
‘Ｈｏｎｇｘｉａ’
杂种茶香月季
ＨＴ
１８ 玉玲珑
‘Ｙｕｌｉｎｇｌｏｎｇ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ５６￣１ Ｃ５×Ｃ６株系 １
Ｃ５×Ｃ６ Ｓｔｒａｉｎ １
杂种 Ｆ１代
Ｆ１ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
１９ 湖中月
‘Ｈｕｚｈｏｎｇｙｕｅ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ５６￣２ Ｃ５×Ｃ６株系 ２
Ｃ５×Ｃ６ Ｓｔｒａｉｎ ２
杂种 Ｆ１代
Ｆ１ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
２０ 春水绿波
‘Ｃｈｕｎｓｈｕｉ Ｌüｂｏ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
Ｃ５６￣３ Ｃ５×Ｃ６株系 ３
Ｃ５×Ｃ６ Ｓｔｒａｉｎ ３
杂种 Ｆ１代
Ｆ１ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
２１ 思春
‘Ｓｉｃｈｕｎ’
古老月季
Ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅ
和张树政ꎬ１９９９)ꎮ
采用抗坏血酸￣联苯胺法染色(胡能书和万贤
国ꎬ１９８５)ꎬ室温染色至出现清晰的条带后ꎬ用 ７％冰
醋酸脱色ꎬ选取谱带最清晰、整齐的胶板拍照做进一
步分析ꎮ
１.３ 数据处理
染色后凝胶谱带颜色的深浅反映同工酶活性的
强弱ꎮ 根据颜色深浅程度将酶活性划分为强、中、弱
３个等级ꎮ 利用 ＢａｎｄＳｃａｎ ５.０ 软件按谱带分布计算
电泳迁移率(Ｒｆ＝酶带迁移距离 /前沿指示剂距离)ꎬ
参考酶活性等级绘制酶谱模式图ꎮ
将稳定出现条带的有或无量化为 １和 ０进行统
计ꎬ形成 ０ꎬ１ 矩阵ꎮ 采用 ＮＴＳＹＳｐｃ ２.１ 分析软件计
算样品之间的 Ｎｅｉ 氏相似性系数( ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔꎬＧＳ)ꎬ利用非加权平均法(ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ ｐａｉｒ￣
ｇｒｏｕｐ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ ｍｅａｎｓꎬＵＰＧＭＡ)进行聚
类分析并构建系统树(李强栋等ꎬ２０１２ꎻ王玉荣等ꎬ
２０１３)ꎮ
２　 结果与分析
２.１ 野生种与古老月季的过氧化物酶酶谱特征
１２个蔷薇原种及 １５个古老月季的 ＰＯＤ同工酶
酶谱及模式图见图 １~２ꎮ 不同材料之间在酶带数、迁
移率及酶活性方面差异明显ꎮ ２７份月季种质的 ＰＯＤ
同工酶共显示了 ７条酶带ꎬ这与贾元义等(２００５)对该
６１１ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
图 １　 ２７份月季种质的 ＰＯＤ酶谱　 试验材料编号见表 １ꎬ下同ꎮ
Ｆｉｇ. １　 ＰＯＤ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ ｏｆ ２７ ｒｏｓｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　 Ｍａｔｅｒｉａｌ ｎａｍｅｓ ａｒｅ ｌｉｓｔｅｄ ｉｎ ｔａｂｌｅ １ꎬｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
图 ２　 ２７份月季种质的酶谱模式图
Ｆｉｇ. ２　 Ｉｄｅｏｇｒａｍ ｏｆ ２７ ｒｏｓｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ
属材料进行 ＰＯＤ 同工酶研究所获得的酶带数基本
一致ꎮ 对获得的酶带分别标记为 ａ、ｂ􀆺􀆺ｇꎬ酶带最
少的是金樱子(Ｎｏ. １２)ꎮ 这个材料中未检测到 ＰＯＤ
酶带ꎻ最多的是无刺蔷薇 ( Ｎｏ. ６) 和 ‘湖中月’
(Ｎｏ. １９)ꎬ为 ５条ꎻ其余材料的酶带数在 １~４之间ꎮ
根据酶带的相对迁移率及其分布特点把酶谱分
为 ２ 个酶带区 (表 ２)ꎬ分别为 Ａ 区 (Ｒｆ ＝ ０. ２６４ ~
０.６５０)ꎬＢ 区(Ｒｆ ＝ ０.８５８)ꎬＡ 区包括 ａ ~ ｆ 六条带ꎬＢ
区只有 ｇ 一条带ꎮ 其中 ａ、ｂ为野生种所特有ꎬｅ、ｆ为
古老月季特有ꎬ ｃ、ｄ、ｇ为所有材料的共有酶带ꎬｄ 除
了无刺蔷薇具有外ꎬ其他野生种都无此带ꎮ 在 Ａ 区
的 ａ 带ꎬ除硕苞蔷薇、樟味蔷薇、玫瑰、金樱子
(Ｎｏ. １ꎬ２ꎬ１１ꎬ１２)ꎬｂ 带除樟味蔷薇、玫瑰、金樱子
(Ｎｏ. ２ꎬ１１ꎬ１２)ꎬ其余野生种均有检测出ꎮ 所有古老
月季都具有 ｇ 带ꎬ‘软香红’等(Ｎｏ. １３ ~ １５ꎬ１８ ~ ２０ꎬ
２４ꎬ２５)８个品种具 ｅ、ｆ带ꎮ
２.２ 现代月季杂交亲本与后代的酶谱特征
杂交亲本与后代的过氧化物同工酶酶谱特征见
表 ２　 月季种质的酶谱迁移率
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｒｆ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌｓ
分区
Ｚｙｍｏｇｒａｍ ｒｅｇｉｏｎ
酶带
Ｉｓｏｚｙｍｅ
ｂａｎｄ
迁移率
Ｒｆ
材料序号
Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｎｏ.
Ａ (Ｒｆ ＝ ０.２６４~０.６５０) ａ ０.２６４ ３~１０
ｂ ０.３５８ １ꎬ３~１０
ｃ ０.４２５ ３ꎬ ４ꎬ ６ ~ １０ꎬ １５ ~
１７ꎬ１９ꎬ２１
ｄ ０.５１４ ６ꎬ１８ꎬ １９ꎬ ２１ꎬ ２２ꎬ
２４ꎬ２５
ｅ ０.５７９ １３ ~ １５ꎬ １８ ~ ２０ꎬ
２４ꎬ２５
ｆ ０.６５０ １３ ~ １５ꎬ １８ ~ ２０ꎬ
２４ꎬ２５
Ｂ (Ｒｆ ＝ ０.８５８) ｇ ０.８５８ ２ꎬ ３ꎬ ６ ~ ８ꎬ １１ꎬ
１３~２７
图 ３ꎮ 在 ３个杂交组合中ꎬ‘五月天’ (Ｃ２)与藤‘墨
红’(Ｃ１)比较无特征酶带ꎬ二者杂交后代‘香粉蝶’
(Ｃ１２￣１)的酶谱与双亲差异明显ꎬ酶带在各处的酶
活性都很强ꎬ以至于连成一条粗线ꎻ‘粉风铃’(Ｃ１２￣
２)中未检测到与双亲不同的酶带ꎮ ‘光彩’(Ｃ４)与
７１１１期　 　 　 　 　 　 刘承源等: 基于过氧化物同工酶分析月季种质资源的亲缘关系及杂种真实性
‘白雪山’(Ｃ３)比较具有一条特征酶带ꎬ其杂交后代
Ｃ３４￣１、Ｃ３４￣２、Ｃ３４￣３ 也都具有父本的特征带ꎮ ‘红
霞’(Ｃ６)与‘戴高乐’(Ｃ５)相比具有两条特有酶带ꎬ
杂交后代中 Ｃ５６￣１ 具有一条父本的特有带ꎬＣ５６￣２
具有一条父本特有带的同时却未检测到父母本的两
条共有带ꎬＣ５６￣３不具有父本的特征带ꎬ且酶带与母
本完全一致ꎮ
图 ３　 杂交组合及后代的 ＰＯＤ酶谱　 箭头示与
母本相比ꎬ父本的特征酶带ꎮ
Ｆｉｇ. ３　 ＰＯＤ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ
ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ　 Ａｒｒｏｗｓ ｒｅｆｅｒ ｔｏ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｚｙｍｅ ｂａｎｄｓ ｏｆ ｍａｌｅ ｐａｒｅｎｔｓ.
２.３ 聚类分析
将 ２７份月季种质材料的 ＰＯＤ同工酶酶谱特征
转化成二元属性数据ꎬ通过 ＮＴＳＹＳｐｃ ２.１ 软件计算
得到遗传相似性系数(ＧＳ)ꎬ为 ０~１(表 ３)ꎮ 表 ３ 表
明其遗传多样性丰富ꎬ亲缘关系远近各异ꎮ 其中ꎬ香
水月季与巨花蔷薇、悬钩子蔷薇ꎬ粉红香水月季与光
叶蔷薇、竹叶蔷薇ꎬ樟味蔷薇与玫瑰、‘映日荷花’
‘月月红’ ‘月月粉’之间的 ＧＳ 最大ꎬ亲缘关系近ꎮ
光叶蔷薇、竹叶蔷薇分别与古老月季中的‘玉玲珑’
‘大富贵’及‘一品朱衣’间的 ＧＳ 最小ꎬ亲缘关系较
远ꎮ 其他材料的 ＧＳ在 ０.１４３~０.８５７之间ꎮ
采用 ＵＰＧＭＡ法对 ２７份材料进行聚类分析ꎬ得
到聚类树状图(图 ４)ꎮ 以相似系数 ０.５７ 为阈值ꎬ供
试的 ２７ 份种质被分为 ３ 个大组ꎮ 第一组包括除樟
味蔷薇、玫瑰及金樱子外的所有野生种ꎬ组内以相似
系数为 ０.８６为阈值ꎬ香水月季、粉红香水月季、巨花
蔷薇、悬钩子蔷薇ꎬ光叶蔷薇及竹叶蔷薇分别聚在一
起ꎬ上述材料与无刺蔷薇在 ０.８１ 处聚为一个分支ꎮ
第二组包括 ７个古老月季与樟味蔷薇、玫瑰与金樱
子ꎬ在相似系数为 ０.８３ 处ꎬ金樱子与其他材料分离
开来ꎮ 其余古老月季材料聚为第三组ꎬ其中ꎬ‘软香
红’‘四面镜’和‘春水绿波’ ‘玉玲珑’ ‘大富贵’和
‘一品朱衣’分别在相似系数为 １处聚在一起ꎮ
３　 讨论与结论
对酯酶(ＥＳＴ)和过氧化氢酶(ＣＡＴ)进行了研
究ꎬ但这两种酶活性较弱ꎬ不易被观察ꎮ 而过氧化物
酶相对来说更加稳定和清晰ꎬ且重复性好ꎮ 类似情
况在果树和蓖麻中也有报道(王玉荣等ꎬ２０１３ꎻ晁无
疾和牛淑珍ꎬ１９８１)ꎬ但在结缕草中却有相反观点
(郭海林等ꎬ２００６)ꎮ 所以要根据所用材料来选择合
适的酶进行分析ꎬ本研究表明蔷薇属植物采用过氧
化物同工酶进行分析研究具有一定的可行性ꎮ
野生种及古老月季的酶谱结果显示不同材料在
酶带数、迁移率及酶活性差异明显ꎬ表明供试材料具
有丰富的遗传多样性ꎬ这与前人从形态 (Ｒｅｈｄｅｒꎬ
１９４０ꎻＫｕ ＆ Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎꎬ ２００３ꎻ张佐双和朱秀珍ꎬ
２００６)、倍性(蹇洪英等ꎬ２０１０ꎻ张婷等ꎬ２０１０)及 ＳＳＲ
(唐开学等ꎬ２００８)等分子水平上研究得出的结论一
致ꎮ 聚类分析中巨花蔷薇、香水月季及悬钩子蔷薇
优先聚类后再与粉红香水月季、光叶蔷薇及竹叶蔷
薇聚为一支ꎬ再之后又与无刺蔷薇聚在一起ꎮ 这一
结果再次确认了蔷薇属内月季组与合柱组近缘
(Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌꎬ１９９８ꎻＪａｎ ｅｔ ａｌꎬ１９９９)ꎮ 形态上ꎬ两
个组内的材料都是托叶贴生ꎬ宿存ꎬ花柱外伸
(Ｒｅｈｄｅｒꎬ１９４０ꎻＫｕ ＆ Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎꎬ２００３)ꎬ区别仅在于
月季组材料为离生花柱ꎮ 这 ７个材料中有 ４个参与
了现代月季的演化(Ｗｙｌｉｅꎬ１９５４)ꎬ表明现代月季遗
传背景较窄(Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌꎬ１９９８)ꎮ 值得注意的
是ꎬ合柱组的另外一个材料粉团蔷薇和硕苞组的硕
苞蔷薇聚在了一起ꎬ此处的粉团蔷薇在之前研究得
知由于种内多倍化为三倍体材料 (刘承源等ꎬ
２００８)ꎬ硕苞蔷薇与其他月季种质杂交高度不亲和
(Ｌｅｗｉｓ ＆ Ｂａｓｙｅꎬ１９６１)ꎬ此时两个材料聚在一起ꎬ为
杂交可行性提供了依据ꎮ 虽然硕苞蔷薇与金樱子在
形态上因都具有离生且脱落的托叶而被划入一个大
支中(Ｒｅｈｄｅｒꎬ１９４０)ꎬ但本文中基于过氧化物同工酶
分析却被划入两个不同的大组中ꎮ 实际上ꎬ硕苞蔷
薇的 宽 锯 齿 状 托 叶ꎬ 花 托 及 小 枝 被 短 柔 毛
(ｐｕｂｅｓｃｅｎｔ ｏｒ ｗｏｏｌｌｙ)等性状都很容易区别于金樱
子ꎮ ＲＡＰＤ分析(Ｊａｎ ｅｔ ａｌꎬ１９９９)也认为二者之间亲
缘关系较远ꎮ 所以ꎬ托叶离生、脱落这一性状似乎是
意味着二者之间的趋同进化(ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅ)ꎬ 而不是
８１１ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
表 ３　 ２７份月季种质资源的 ＰＯＤ同工酶遗传相似性系数
Ｔａｂｌｅ ３　 ＰＯＤ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ２７ ｒｏｓｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４ ２５ ２６ ２７
１ １.０００
２ ０.７１４ １.０００
３ ０.５７１ ０.５７１ １.０００
４ ０.７１４ ０.４２９ ０.８５７ １.０００
５ ０.８５７ ０.５７１ ０.７１４ ０.８５７ １.０００
６ ０.４２９ ０.４２９ ０.８５７ ０.７１４ ０.５７１ １.０００
７ ０.５７１ ０.５７１ １.０００ ０.８５７ ０.７１４ ０.８５７ １.０００
８ ０.５７１ ０.５７１ １.０００ ０.８５７ ０.７１４ ０.８５７ １.０００ １.０００
９ ０.７１４ ０.４２９ ０.８５７ １.０００ ０.８５７ ０.７１４ ０.８５７ ０.８５７ １.０００
１０ ０.７１４ ０.４２９ ０.８５７ １.０００ ０.８５７ ０.７１４ ０.８５７ ０.８５７ １.０００ １.０００
１１ ０.７１４ １.０００ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.５７１ ０.４２９ ０.４２９ １.０００
１２ ０.８５７ ０.８５７ ０.４２９ ０.５７１ ０.７１４ ０.２８６ ０.４２９ ０.４２９ ０.５７１ ０.５７１ ０.８５７ １.０００
１３ ０.４２９ ０.７１４ ０.２８６ ０.１４３ ０.２８６ ０.１４３ ０.２８６ ０.２８６ ０.１４３ ０.１４３ ０.７１４ ０.５７１ １.０００
１４ ０.４２９ ０.７１４ ０.２８６ ０.１４３ ０.２８６ ０.１４３ ０.２８６ ０.２８６ ０.１４３ ０.１４３ ０.７１４ ０.５７１ １.０００ １.０００
１５ ０.２８６ ０.５７１ ０.４２９ ０.２８６ ０.１４３ ０.２８６ ０.４２９ ０.４２９ ０.２８６ ０.２８６ ０.５７１ ０.４２９ ０.８５７ ０.８５７ １.０００
１６ ０.５７１ ０.８５７ ０.７１４ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.７１４ ０.７１４ ０.５７１ ０.５７１ ０.８５７ ０.７１４ ０.５７１ ０.５７１ ０.７１４ １.０００
１７ ０.５７１ ０.８５７ ０.７１４ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.７１４ ０.７１４ ０.５７１ ０.５７１ ０.８５７ ０.７１４ ０.５７１ ０.５７１ ０.７１４ １.０００ １.０００
１８ ０.２８６ ０.５７１ ０.１４３ ０.０００ ０.１４３ ０.２８６ ０.１４３ ０.１４３ ０.０００ ０.０００ ０.５７１ ０.４２９ ０.８５７ ０.８５７ ０.７１４ ０.４２９ ０.４２９ １.０００
１９ ０.１４３ ０.４２９ ０.２８６ ０.１４３ ０.０００ ０.４２９ ０.２８６ ０.２８６ ０.１４３ ０.１４３ ０.４２９ ０.２８６ ０.７１４ ０.７１４ ０.８５７ ０.５７１ ０.５７１ ０.８５７ １.０００
２０ ０.４２９ ０.７１４ ０.２８６ ０.１４３ ０.２８６ ０.１４３ ０.２８６ ０.２８６ ０.１４３ ０.１４３ ０.７１４ ０.５７１ １.０００ １.０００ ０.８５７ ０.５７１ ０.５７１ ０.８５７ ０.７１４ １.０００
２１ ０.４２９ ０.７１４ ０.５７１ ０.４２９ ０.２８６ ０.７１４ ０.５７１ ０.５７１ ０.４２９ ０.４２９ ０.７１４ ０.５７１ ０.４２９ ０.４２９ ０.５７１ ０.８５７ ０.８５７ ０.５７１ ０.７１４ ０.４２９ １.０００
２２ ０.５７１ ０.８５７ ０.４２９ ０.２８６ ０.４２９ ０.５７１ ０.４２９ ０.４２９ ０.２８６ ０.２８６ ０.８５７ ０.７１４ ０.５７１ ０.５７１ ０.４２９ ０.７１４ ０.７１４ ０.７１４ ０.５７１ ０.５７１ ０.８５７ １.０００
２３ ０.７１４ １.０００ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.５７１ ０.４２９ ０.４２９ １.０００ ０.８５７ ０.７１４ ０.７１４ ０.５７１ ０.８５７ ０.８５７ ０.５７１ ０.４２９ ０.７１４ ０.７１４ ０.８５７ １.０００
２４ ０.２８６ ０.５７１ ０.１４３ ０.０００ ０.１４３ ０.２８６ ０.１４３ ０.１４３ ０.０００ ０.０００ ０.５７１ ０.４２９ ０.８５７ ０.８５７ ０.７１４ ０.４２９ ０.４２９ １.０００ ０.８５７ ０.８５７ ０.５７１ ０.７１４ ０.５７１ １.０００
２５ ０.２８６ ０.５７１ ０.１４３ ０.０００ ０.１４３ ０.２８６ ０.１４３ ０.１４３ ０.０００ ０.０００ ０.５７１ ０.４２９ ０.８５７ ０.８５７ ０.７１４ ０.４２９ ０.４２９ １.０００ ０.８５７ ０.８５７ ０.５７１ ０.７１４ ０.５７１ １.０００ １.０００
２６ ０.７１４ １.０００ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.５７１ ０.４２９ ０.４２９ １.０００ ０.８５７ ０.７１４ ０.７１４ ０.５７１ ０.８５７ ０.８５７ ０.５７１ ０.４２９ ０.７１４ ０.７１４ ０.８５７ １.０００ ０.５７１ ０.５７１ １.０００
２７ ０.７１４ １.０００ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.４２９ ０.５７１ ０.５７１ ０.４２９ ０.４２９ １.０００ ０.８５７ ０.７１４ ０.７１４ ０.５７１ ０.８５７ ０.８５７ ０.５７１ ０.４２９ ０.７１４ ０.７１４ ０.８５７ １.０００ ０.５７１ ０.５７１ １.０００ １.０００
图 ４　 ２７份月季种质的聚类分析图
Ｆｉｇ. ４　 Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ
ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＵＰＧＭＡ ｍｅｔｈｏｄ
共有 衍 征 ( ｓｙｎａｐｏｍｏｒｐｈｙ ) ( Ｗｉｓｓｅｍａｎｎ ＆ Ｒｉｔｚꎬ
２００５)ꎮ 桂味组的玫瑰、樟味蔷薇与古老月季聚为
一组ꎬ表明他们在野生种向古老月季ꎬ以至现代月季
品种的演化过程中起到了一定作用ꎬ这个结果也与
唐开学等(２００８)的观点基本一致ꎮ 金樱子和古老
月季聚在一组同样表明其作为杂交亲本的可行性ꎬ
这一观点也在较早就被证实:大花白木香(Ｒ. × ｆｏｒ￣
ｔｕｎｉａｎａ)就是由金樱子和木香杂交而来 ( Ｃｒéｐｉｎꎬ
１８８９ꎻＭａｔｓｕｍｏｔｏ ｅｔ ａｌꎬ２００１)ꎮ 我们在田间试验中应
用其作为父本与‘映日荷花’‘秋霞’‘歌林娇红’等
古老月季和现代月季杂交都有结实ꎬ遗憾的是种子
不能萌发ꎬ这可在以后的工作中结合幼胚拯救做进
一步研究ꎮ 此外ꎬ供试古老月季聚为两组ꎬ与野生种
聚成的一组成并列关系ꎬ说明古老月季品种间的起
源差异较大ꎬ和供试野生种ꎬ尤其是参与现代月季演
化的月季组与合柱组材料之间的亲缘关系也较远ꎬ
可以作为远缘杂交育种的亲本材料ꎮ 古老月季倍性
丰富(蹇洪英等ꎬ２０１０ꎻ张婷等ꎬ２０１０)ꎬ可利用不同
倍性材料与栽培品种杂交ꎬ从中获得具有丰富染色
体倍性和遗传多样性的杂交后代ꎮ
９１１１期　 　 　 　 　 　 刘承源等: 基于过氧化物同工酶分析月季种质资源的亲缘关系及杂种真实性
对杂种 Ｆ１代的真伪鉴定参照前人(郭海林等ꎬ
２００６ꎻ谷丽佳等ꎬ２０１２)的研究方法对酶谱进行分
析:(１)父本与母本比较有特征带ꎬ且后代也具有该
特征带ꎻ(２)父本与母本比较具有特征带ꎬ但后代不
具有该特征带ꎻ(３)父本与母本比较没有特征带ꎮ
第一种情况可鉴定后代为真是杂种ꎬ第二三种情况
不能做出明确判断ꎬ要具体分析ꎮ 本试验的第 １ 个
杂交组合中两个亲本(‘墨红’ꎬ‘五月天’)的酶带
特点属于上述的第三种情况ꎬ其杂交后代‘香粉蝶’
和‘粉风铃’是两个获得品种权的材料ꎬ如果是对这
两个材料按上述标准进行初次鉴定ꎬ其杂种真实性
都不能确定ꎮ 其余两个杂交组合的杂交后代根据上
述鉴定标准可推断 Ｃ３４￣１、Ｃ３４￣２、Ｃ３４￣３ꎬＣ５６￣１、Ｃ５６￣
２为真实杂种ꎬＣ５６￣３应为自交种ꎮ
由于受同工酶分子标记的特点所决定ꎬ同工酶
多有低估种间实际差异的倾向(张俊卫和包满珠ꎬ
１９９８)ꎮ 本试验表明过氧化物同工酶在分析种质亲
缘关系时由于多态性位点的局限而略显不足ꎬ但在
杂种早期鉴定方面效果较好ꎮ 因此ꎬ为使实验结果
更加精确ꎬ在研究植物材料物种之间的关系时ꎬ通过
同工酶、核型分析及分子标记等实验技术互为补充ꎬ
结合外部形态来进行综合分析ꎬ不失为一种交叉印
证的可行方法ꎮ
参考文献:
ＣＡＩＲＮＳ Ｔꎬ ２００７. Ｍｏｄｅｒｎ ｒｏｓｅｓ ＸＩＩ [Ｍ]. Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ: Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ.
ＣＨＡＯ ＷＪꎬＮＩＵ ＳＺꎬ １９８１. Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｉｓｏｚｙｍｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ
ｗｉｌｄ Ｖｉｔｉｓ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ[Ｊ]. Ｃｈｉｎ Ｆｒｕｉｔｓꎬ４: ４１－４４.[(晁无疾ꎬ牛
淑珍ꎬ １９８１. 我国葡萄野生种质资源的同工酶研究初报
[Ｊ]. 中国果树ꎬ４: ４１－４４.]
ＣＨＥＮ ＬＱꎬＳＨＩ ＳＬꎬＭＡ ＣＨꎬ ２０１４. Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｗｉｌｄ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ａｌｆａｌｆａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｂｙ ｉｓｏｚｙｍｅ ｍａｒｋ￣
ｅｒｓ[Ｊ]. Ｐｒａｔａｃ Ｓｃｉꎬ３１(６): １ ０７０－１ ０７９.[陈立强ꎬ师尚礼ꎬ马
春晖ꎬ ２０１４. 野生及栽培苜蓿种质资源遗传多样性的同工酶
分析[Ｊ]. 草业科学ꎬ３１(６): １ ０７０－１ ０７９.]
ＣＲÉＰＩＮ Ｆꎬ １８８９. Ｓｋｅｔｃｈ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｏｓｅｓ [ Ｊ]. Ｊ
Ｒｏｙａｌ Ｈｏｒｔ Ｓｏｃꎬ１１:３３７－３５２.
ＤＥＢＥＮＥＲ ＴꎬＭＡＴＴＩＥＳＣＨ Ｌꎬ １９９９. Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｅｎｅｔｉｃ ｌｉｎｋ￣
ａｇｅ ｍａｐ ｆｏｒ ｒｏｓｅｓ ｕｓｉｎｇ ＲＡＰＤ ａｎｄ ＡＦＬＰ ｍａｒｋｅｒｓ[ Ｊ]. Ｔｈｅｏｒ
Ａｐｐｌ Ｇｅｎｅｔꎬ９９(５): ８９１－８９９.
ＧＵ ＬＪꎬＷＡＮＧ ＷＨꎬＷＡＮＧ ＳＤꎬｅｔ ａｌꎬ ２０１２. Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｆ１ ｈｙｂｒｉｄ
ｏｆ ｌｉｌｙ ｂｙ ｉｓｏｚｙｍｅ ａｎａｌｙｓｉｓ[Ｊ]. Ｃｈｉｎ Ａｇｒｉｃ Ｓｃｉ Ｂｕｌｌꎬ２８(０１): １４８－
１５２.[谷丽佳ꎬ王文和ꎬ王树栋ꎬ等ꎬ ２０１２. 同工酶分析法鉴定百
合杂种 Ｆ１代[Ｊ]. 中国农学通报ꎬ２８(１): １４８－１５２.]
ＧＵＯ ＨＬꎬＬＩＵ ＪＸꎬＺＨＵ ＸＨꎬｅｔ ａｌꎬ ２００６. Ｃｒｏｓｓ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｈｙｂｒｉｄ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｏｙｓｉａ￣Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｓｏｚｙｍｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ[ Ｊ]. Ａｃｔａ
Ｐｒａｔａｃ Ｓｉｎꎬ１５(６): １０１－１０８.[郭海林ꎬ刘建秀ꎬ朱雪花ꎬ等ꎬ
２００６. 结缕草属植物杂交育种及其杂种鉴定￣同工酶的变异
分析[Ｊ]. 草业学报ꎬ１５(６): １０１－１０８.]
ＨＥ ＺＸꎬ ＺＨＡＮＧ ＳＺꎬ １９９９. Ｃａｔａｐｈｏｒｅｓｉｓ [ Ｍ]. Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｐｒｅｓｓ: ２８０－２８７.[何忠效ꎬ张树政ꎬ １９９９. 电泳[Ｍ]. 北京: 科
学出版社: ２８０－２８７.]
ＨＵ ＮＳꎬＷＡＮ ＸＧꎬ １９８５. Ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
[Ｍ]. Ｃｈａｎｇｓｈａ: Ｈｕｎａｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐｒｅｓｓ.[胡能书ꎬ
万贤国ꎬ １９８５. 同工酶技术及其应用[Ｍ]. 长沙: 湖南科学技
术出版社.]
ＪＡＮ ＣＨꎬＢＹＲＮＥ ＤＨꎬＭＡＮＨＡＲＴ Ｊꎬｅｔ ａｌꎬ １９９９. Ｒｏｓｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ａ￣
ｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ＲＡＰＤ ｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ]. Ｈｏｒｔｉｃ Ｓｃｉꎬ３４(２): ３４１－３４５.
ＪＩＡ ＹＹꎬＺＨＡＯ ＬＹꎬＷＡＮＧ ＷＬꎬｅｔ ａｌꎬ ２００５. Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｂｙ ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｒｏｓａ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
Ｊａｃｑ. ｃｕｌｔｉｖａｒｓ[Ｊ]. Ｊ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ａｇｒｉｃ Ｕｎｉｖ: Ｎａｔ Ｓｃｉ Ｅｄꎬ３６(２):
１７２－１７４.[贾元义ꎬ赵兰勇ꎬ王文丽ꎬ等ꎬ ２００５. 月季品种过氧
化物同工酶分类研究[Ｊ]. 山东农业大学学报􀅰自然科学版ꎬ
３６(２): １７２－１７４.]
ＪＩＡＮ ＨＹꎬＺＨＡＮＧ ＨꎬＷＡＮＧ ＱＧꎬｅｔ ａｌꎬ ２０１０. Ｋａｒｙｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｏｌｄ ｇａｒｄｅｎ ｒｏｓｅｓ[Ｊ]. Ａｃｔａ Ｈｏｒｔ Ｓｉｎꎬ３７(１):８３－８８.[蹇
洪英ꎬ张灏ꎬ王其刚ꎬ等ꎬ ２０１０. 中国古老月季品种的核型研究
[Ｊ]. 园艺学报ꎬ３７(１):８３－８８.]
ＫＵ ＴＣꎬＲＯＢＥＲＴＳＯＮ ＫＲꎬ ２００３. Ｒｏｓａ (Ｒｏｓａｃｅａｅ)[Ｍ] / / Ｗｕ ＺＹꎬ
Ｒａｖｅｎ ＰＨ ( ｅｄｓ). Ｆｌｏｒａ ｏｆ Ｃｈｉｎａ. Ｖｏｌ ９. Ｂｅｉｊｉｎｇ: Ｓｃｉｅｎｃｅ
ＰｒｅｓｓꎻＳｔ Ｌｏｕｉｓ: Ｍｉｓｓｏｕｒｉ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎ Ｐｒｅｓｓ: ３３９－３８１.
ＬＥＷＩＳ ＷＨꎬＢＡＳＹＥ ＲＥꎬ １９６１. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｎｉｎｅ ｃｒｏｓｓｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ
ｄｉｐｌｏｉｄ Ｒｏｓａ ｓｐｅｃｉｅｓ[Ｊ]. Ｐｒｏｃ Ａｍｅｒ Ｓｏｃ Ｈｏｒｔ Ｓｃｉꎬ７８:５７２－５７９.
ＬＩ ＱＤꎬ ＭＥＮＧ Ｌꎬ ＭＡＯ ＰＣꎬ ｅｔ ａｌꎬ ２０１２. Ｉｓｏｚｙｍｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｉｒｉｓ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ[Ｊ]. Ａｃｔａ Ａｇｅｒ Ｓｉｎꎬ２０(１): １１６
－１２４.[李强栋ꎬ孟林ꎬ毛培春ꎬ等ꎬ ２０１２. 不同居群马蔺种质材
料同工酶酶谱特征分析[Ｊ]. 草地学报ꎬ２０(１): １１６－１２４.]
ＬＩ ＸＱꎬＬＩ ＸＺꎬＷＡＮＧ Ｘꎬ ２０１０. Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｆｉｖｅ Ｐｒｕｎｕｓ ｐｌａｎｔｓ ｂａｓｅｄ
ｏｎ ＰＯＤꎬＣＡＴ ａｎｄ ＥＳＴ[Ｊ]. Ｂｕｌｌ Ｂｉｏｌꎬ４５(２): ４６－４９.[李学强ꎬ
李秀珍ꎬ王祥ꎬ ２０１０. ５种樱桃属植物的 ＰＯＤ、ＣＡＴ和 ＳＯＤ同
工酶分析[Ｊ]. 生物学通报ꎬ４５(２): ４６－４９.]
ＬＩＵ ＣＹꎬＷＡＮＧ ＧＬꎬＸＩＥ ＱＬꎬｅｔ ａｌꎬ ２００８. Ａ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
ｋａｒｙｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ６ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ Ｒｏｓａ [Ｊ]. Ｊ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｆｏｒ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈ￣
ｎｏｌꎬ３５(６): ５－８.[刘承源ꎬ王国良ꎬ谢秋兰ꎬ等ꎬ ２００８. ６种蔷薇
的核形态学研究[Ｊ]. 江苏林业科技ꎬ３５(６): ５－８.]
ＬＵ ＸＭꎬＳＵＮ ＪꎬＧＵＯ ＳＲꎬｅｔ ａｌꎬ ２０１１. Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ２４￣ｅｐｉｂｒａｓｓｉｎｏｌｉｄｅ
ｏｎ ｒｏｏｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ ｉｓｏｚｙｍｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ ｓｔｒｅｓｓ [ Ｊ]. Ｃｈｉｎ Ｊ Ｅｃｏｌꎬ３０
(１１): ２ ４９７－２ ５０２.[陆晓民ꎬ孙锦ꎬ郭世荣ꎬ等ꎬ ２０１１. 低氧胁
迫下 ２４鄄表油菜素内酯对黄瓜幼苗根系生长及其无氧呼吸
同工酶表达的影响[Ｊ]. 生态学杂志ꎬ３０(１１): ２ ４９７－２ ５０２.]
ＭＡＴＳＵＭＯＴＯ ＳꎬＫＯＵＣＨＩ ＭꎬＹＡＢＵＫＩ Ｊꎬｅｔ ａｌꎬ １９９８. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ
ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ Ｒｏｓａ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍａｔＫ ｓｅｑｕｅｎｃｅ: ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎａｒｒｏｗ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｏｆ ｍｏｄｅｒｎ ｒｏｓｅｓ
[Ｊ]. Ｓｃｉ Ｈｏｒｔｉｃꎬ７７(１－２): ７３－８２.
ＭＡＴＳＵＭＯＴＯ ＳꎬＮＩＳＨＩＯ ＨꎬＵＥＤＡ Ｙꎬｅｔ ａｌꎬ ２００１. Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ
ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｇｅｎｕｓ Ｒｏｓａ: Ｐｏｌｙｐｈｙｌｙ ｏｆ ｓｅｃｔｉｏｎ Ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉａｅ
ａｎｄ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ Ｒｏｓａ×ｆｏｒｔｕｎｉａｎａ Ｌｉｎｄｌ[Ｊ] . Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃ (ＩＳＨＳ)ꎬ
５４７: ３５７－３６３.
ＲＥＨＤＥＲ Ａꎬ １９４０. Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｔｒｅｅｓ ａｎｄ ｓｈｒｕｂｓꎬ２ｎｄ ｅｄ
[Ｍ]. Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ: ＭａｃＭｉｌｌａｎ: ９９６－９９８.
ＴＡＮＧ ＫＸꎬＱＩＵ ＸＱꎬＺＨＡＮＧ Ｈꎬｅｔ ａｌꎬ ２００８. Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉ￣
ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍｅ Ｒｏｓａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＳＳＲ
ｍａｒｋｅｒｓ[Ｊ]. Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃ Ｓｉｎꎬ３５(８): １ ２２７－１ ２３２. [唐开学ꎬ
(下转第 １００页 Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｏｎ ｐａｇｅ １００ )
０２１ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷