全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　May２０１４,３４(３):３１５－３１９　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．３９６９/j．issn．１０００Ｇ３１４２．２０１４．０３．００７
李壮,辛本华,杨华,等．重楼属植物遗传多样性的SCOT标记[J]．广西植物,２０１４,３４(３):３１５－３１９
LiZ,XinBH,YangH,etal．SCOTgeneticdiversityofplantsinParis[J]．Guihaia,２０１４,３４(３):３１５－３１９
重楼属植物遗传多样性的SCOT标记
李　壮１,辛本华１,杨　华２,刘　晨３,田孟良３∗
(１．四川农业大学农学院,四川 成都６１１１３０;２．四川农业大学科技管理处,四川 雅安６２５０１４;
３．四川农业大学新农村发展研究院,四川 雅安６２５０１４)
摘　要:为评估重楼属植物的基因资源开发前景,初步探讨了SCOT标记技术在重楼属植物遗传多样性研究
上的应用.采用目标起始密码子多态性(Startcodontargetedpolymorphism,SCOT)技术,对重楼属９个种４０
份材料进行基因组DNA多态性分析.结果表明:四川地区重楼属植物具有丰富的遗传多样性,４０份供试材
料可聚为４类:狭叶重楼单独聚为第一类;球药隔重楼、卵叶重楼、金线重楼及滇重楼聚为第二类;黑籽重楼与
七叶一枝花聚为第三类;五指莲与毛重楼聚为第四类.说明SCOT标记能够对重楼属植物进行准确的分子鉴
定,为重楼属植物的种类鉴定和种间的分类地位提供分子生物学依据,同时也为深入探究重楼皂苷合成关键
酶基因定位研究提供重要参考.
关键词:重楼;SCOT标记;多态性;聚类分析
中图分类号:Q９４９　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１４)０３Ｇ０３１５Ｇ０５
SCOTgeneticdiversityofplantsinParis
LIZhuang１,XINBenＧHua１,YANGHua２,LIUChen３,TIANMengＧLiang３∗
(１．AgriculturalcollegeofSichuanAgriculturalUniversity,Chengdu６１１１３０,China;２．Scienceandtechnology
managementofficeinSichuanAgriculturalUniversity,Ya’an６２５０１４,China;３．Researchinstitute
ofnewruraldevelopmentinSichuanAgriculturalUniversity,Ya’an６２５０１４,China)
Abstract:GeneresourcesanddevelopmentprospectsofplantsinPariswereevaluated．Appliedresearchesingenetic
diversityofplantinPariswerecarriedoutbasedonSCOTmarkers．GenomicDNApolymorphicanalysisintotalforＧ
tyindividulsofninespeciesinPariswereperformedbytheapproachofstartcodontargetedpolymorphism(SCOT)．
ThegeneticdiversityoftheninespeciesinPariswashighinSichuanProvince．Clusteringanalysiscouldbeusedto
studytheclassificationofParis,whichindicatedthatfortyindividulswereclustered４classes．P．polyphyllavar．
stenophylla wasclusteredalonely．P．fargesii,P．delavayivar．petiolata,P．delavayivar．delavayi,P．
polyphyllavar．yunnaensiswereclustered．P．thibeticaandP．polyphyllavar．chinesiswereclustered．P．axiparis
var．axialisandP．maireiwereclustered．Inconclusion,plantinPariswasidentifiedaccuracilyinmolecularby
SCOTmarkersandmolecularevidenceswereprovidedonthetaxonomicstatusofspeciesandinterspecific．ItishelpＧ
fultofurtherstudyongenemappingofP．polyphyllasaponinbiosynthesiskeyenzyme．
Keywords:Paris;SCOTmarkers;polymorphism;clusteringanalysis
　　重楼属(Paris)是瑞典植物学家CarlvonLinne
于１７５３年以分布于欧洲的Parisguadrifolia为模
式建立的,由于本属植物的外貌一致:一个茎,一轮
叶,顶生一朵花,不容易确定划分种以上各级单位的
指标,所以属的分类系统学范围一直存在争论,曾被
归于５个不同的科中,置于７个不同的目下(杨永红
收稿日期:２０１４Ｇ０１Ｇ２７　　修回日期:２０１４Ｇ０３Ｇ０７
基金项目:国家“十二五”科技支撑计划项目(２０１１BAI１３B０２Ｇ６)
作者简介:李壮(１９８０Ｇ),男,重庆江津人,博士,讲师,从事药用植物栽培及分子生物学研究,(EＧmail)lizhuang２００６＠sina．com.
∗通讯作者:田孟良,博士,教授,长期从事药用植物栽培及分子生物学研究,(EＧmail)secondat＠sicau．edu．cn.
表１　供试材料
Table１　Listofmaterialsused
编号
No．
种名 Materials 采集点Source
份数
Copies
编号
No．
种名 Materials 采集点Source
份数
Copies
１ 球药隔重楼
Parisfargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２１ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
２ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２２ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
３ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２３ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
４ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２４ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
５ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２５ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
６ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２６ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
７ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２７ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
８ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２８ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
９ 球药隔重楼
P．fargesii
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ２９ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１０ 黑籽重楼
P．thibetica
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３０ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１１ 黑籽重楼
P．thibetica
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３１ 狭叶重楼
P．polyphyllavar．stenophylla
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１２ 黑籽重楼
P．thibetica
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３２ 七叶一枝花
P．polyphyllavar．chinensis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１３ 黑籽重楼
P．thibetica
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３３ 七叶一枝花
P．polyphyllavar．chinensis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１４ 毛重楼
P．mairei
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３４ 七叶一枝花
P．polyphyllavar．chinensis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１５ 金线重楼
P．delavayivar．
delavayi
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３５ 七叶一枝花
P．polyphyllavar．chinensis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１６ 金线重楼
P．delavayivar．
delavayi
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３６ 七叶一枝花
P．polyphyllavar．chinensis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１７ 卵叶重楼
P．delavayivar．
petiolata
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３７ 七叶一枝花
P．polyphyllavar．chinensis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１８ 卵叶重楼
P．delavayivar．
petiolata
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３８ 五指莲
P．axiparisvar．axialis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
１９ 卵叶重楼
P．delavayivar．
petiolata
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ３９ 五指莲
P．axiparisvar．axialis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２
２０ 卵叶重楼
P．delavayivar．
petiolata
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
１２ ４０∗ 滇重楼
P．polyphyllavar．yunnaensis
天全、宝兴
Tianquan,Baoxingcounty
６
　注:４０∗采自云南丽江,２００８年４月移栽至四川宝兴;天全县和宝兴县属雅安市.
　Note:４０∗colectedfromLijiangofYunnantransplantingtoBaoxinofSichuaninApril,２００８;TianquanCountyandBaoxingCountybelongtoYa’anCity．
等,２００８;纪运恒,２００６).
李恒(１９９８)曾基于形态特征及演化趋势、根据
数量性状和质量性状数据进行聚类分析(翁周等,
２００８),利用DNA分子标记(陈照等,２００９)等方法
建立了分类系统,但由于各种方法都有一定的缺陷
性(赵亚周等,２００９),所以结果都还需进一步考证.
随着重楼需求量的增加以及重楼研究的进展,需要
更多的从种质资源方面入手,解决目前重楼基因资
源利用率水平低、药材品质不稳定以及基源选择太
过单一等问题.
在本研究中,通过SCOT标记揭示了四川重楼
属植物的遗传多样性,这不仅对收集与保存优良重
楼种质资源具有重要而深远意义,而且对保障用药
安全与扩大法定重楼基源具有重要参考价值.
１　材料与方法
１．１材料
２０１０年５月分别于四川天全至泸定二郎山隧
道段、宝兴至甘孜泸定段龙门山脉原始森林中荫湿
６１３ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
处采集完整开花植株,每个材料采集６~１２株,采集
地海拔２０００~２８００m.连同土壤用湿毛巾包裹,
带回四川农业大学农学院人工气候室按野生条件进
行栽培.供试材料编号、种名、采集点、份数见表１,
所有材料均由四川农业大学杨瑞武教授鉴定.
１．２基因组DNA提取及检测
将每个供试材料的样本混合,采用CTAB法分
别提取每个供试材料混合样的基因组DNA,通过
０．８％的琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测
DNA的浓度和纯度,并稀释至１０ng􀅰μLＧ１.DNA
样品保存于４℃冰箱内.
１．３SCOT标记
１．３．１SCOT 标记引物设计　试验参考 Bertrand
(２００９)的研究,设计合成３６条SCOT标记引物(表
２),引物由上海Invitrogen公司合成.
表２　SCOT引物
Table２　SCOTprimers
SCOT引物
SCOTprimer
引物序列
Sequence(５′Ｇ３′)
G＋C含量
Contentof
G＋C(％)
SCOT１ ５′ＧCAACAATGGCTACCACCAＧ３′ ５０
SCOT２ ５′ＧCAACAATGGCTACCACCCＧ３′ ５６
SCOT３ ５′ＧCAACAATGGCTACCACCGＧ３′ ５６
SCOT４ ５′ＧCAACAATGGCTACCACCTＧ３′ ５０
SCOT５ ５′ＧCAACAATGGCTACCACGAＧ３′ ５６
SCOT６ ５′ＧCAACAATGGCTACCACGCＧ３′ ５６
SCOT７ ５′ＧCAACAATGGCTACCACGGＧ３′ ５６
SCOT８ ５′ＧCAACAATGGCTACCACGTＧ３′ ５０
SCOT９ ５′ＧCAACAATGGCTACCAGCAＧ３′ ５０
SCOT１０ ５′ＧCAACAATGGCTACCAGCCＧ３′ ５６
SCOT１１ ５′ＧAAGCAATGGCTACCACCAＧ３′ ５０
SCOT１２ ５′ＧACGACATGGCGACCAACGＧ３′ ６１
SCOT１３ ５′ＧACGACATGGCGACCATCGＧ３′ ６１
SCOT１４ ５′ＧACGACATGGCGACCACGCＧ３′ ６７
SCOT１５ ５′ＧACGACATGGCGACCGCGAＧ３′ ６７
SCOT１６ ５′ＧACCATGGCTACCACCGACＧ３′ ５６
SCOT１７ ５′ＧACCATGGCTACCACCGAGＧ３′ ６１
SCOT１８ ５′ＧACCATGGCTACCACCGCCＧ３′ ６７
SCOT１９ ５′ＧACCATGGCTACCACCGGCＧ３′ ６７
SCOT２０ ５′ＧACCATGGCTACCACCGCGＧ３′ ６７
SCOT２１ ５′ＧACGACATGGCGACCCACAＧ３′ ６１
SCOT２２ ５′ＧAACCATGGCTACCACCACＧ３′ ５６
SCOT２３ ５′ＧCACCATGGCTACCACCAGＧ３′ ６１
SCOT２４ ５′ＧCACCATGGCTACCACCATＧ３′ ５６
SCOT２５ ５′ＧACCATGGCTACCACCGGGＧ３′ ６７
SCOT２６ ５′ＧACCATGGCTACCACCGTCＧ３′ ６１
SCOT２７ ５′ＧACCATGGCTACCACCGTGＧ３′ ６１
SCOT２８ ５′ＧCCATGGCTACCACCGCCAＧ３′ ６７
SCOT２９ ５′ＧCCATGGCTACCACCGGCCＧ３′ ７２
SCOT３０ ５′ＧCCATGGCTACCACCGGCGＧ３′ ７２
SCOT３１ ５′ＧCCATGGCTACCACCGCCTＧ３′ ６７
SCOT３２ ５′ＧCCATGGCTACCACCGCACＧ３′ ６７
SCOT３３ ５′ＧCCATGGCTACCACCGCAGＧ３′ ６７
SCOT３４ ５′ＧACCATGGCTACCACCGCAＧ３′ ６１
SCOT３５ ５′ＧCATGGCTACCACCGGCCCＧ３′ ７２
SCOT３６ ５′ＧGCAACAATGGCTACCACCＧ３′ ５５
１．３．２SCOTＧPCR的优化　SCOTＧPCR反应的因素
及用量采用 L１６(４５)正交试验设计,对 Mg２＋、
dNTps、Taq酶、引物和模板DNA的用量进行５因
素４水平的筛选(表３),取引物SCOT１９作为体系
优化的引物,以编号为１的DNA作模板,建立适合
重楼属植物多样性研究的最优体系.其 SCOTＧ
PCR产物经２．５％的琼脂糖凝胶电泳检测,筛选出最
优PCR体系.
表３　L１６(４５)正交试验设计
Table３　FactorsanddosageL１６(４５)orthogonaldesign
编号
No．
因素Factors
Mg２＋
模板量
Template dNTPs
引物
Primer
Taq酶
TaqEnzyme
１ １(１．０) １(１．０) １(１．２) １(０．４) １(０．５)
２ １(１．０) ２(１．５) ２(１．６) ２(０．８) ２(１．０)
３ １(１．０) ３(２．０) ３(２．０) ３(１．２) ３(１．５)
４ １(１．０) ４(２．５) ４(２．４) ４(１．６) ４(２．０)
５ ２(１．５) １(１．０) ２(１．６) ３(１．２) ４(２．０)
６ ２(１．５) ２(１．５) １(１．２) ４(１．６) ３(１．５)
７ ２(１．５) ３(２．０) ４(２．４) １(０．４) ２(１．０)
８ ２(１．５) ４(２．５) ３(２．０) ２(０．８) １(０．５)
９ ３(２．０) １(１．０) ３(２．０) ４(１．６) ２(１．０)
１０ ３(２．０) ２(１．５) ４(２．４) ３(１．２) １(０．５)
１１ ３(２．０) ３(２．０) １(１．２) ２(０．８) ４(２．０)
１２ ３(２．０) ４(２．５) ２(１．６) １(０．４) ３(１．５)
１３ ４(２．５) １(１．０) ４(２．４) ２(０．８) ３(１．５)
１４ ４(２．５) ２(１．５) ３(２．０) １(０．４) ４(２．０)
１５ ４(２．５) ３(２．０) ２(１．６) ４(１．６) １(０．５)
１６ ４(２．５) ４(２．５) １(１．２) ３(１．２) ２(１．０)
　　以最优SCOTＧPCR体系设计进行退火温度梯
度试验,取编号为１的DNA作模板,SCOT７为引
物进行试验,试验中对PCR扩增程序中的扩增阶段
设置４８℃、５０℃、５２℃、５４℃、５６℃共５个温度梯
度,其PCR产物经２．５％的琼脂糖凝胶电泳检测.
１．４SCOTＧPCR电泳检测
扩增产物用６％的变性聚丙烯酰胺(PAGE)凝
胶(丙烯酰胺Ｇ甲叉１９∶１,７mol􀅰LＧ１尿素,１×TBE
缓冲液)电泳分离.７５W恒功率预电泳２０min,每
点样孔中点样３．５μL,７５W 恒功率电泳１１０~１２０
min后,经固定、银染、显影观察及记录.
１．５聚类分析
对获得清晰可重复的DNA条带进行统计,按
二元数据进行统计,有带记为１,无带记为０;构成遗
传多样性的原始数据矩阵.用 NTSYSpc２．１０e软
件分析采集的数据计算遗传距离,进行UPGMA聚
类分析构建聚类图.
７１３３期　　　　　　　　　　李壮等:重楼属植物遗传多样性的SCOT标记
２　结果与分析
２．１SCOT标记的引物筛选电泳图
在本研究中,以供试材料 QYG１为模板,从３６
条SCOT标记引物中筛选出１１条可扩增出清晰、
具有多样性谱带的引物(图１).
２．２SCOTＧPCR的优化
琼脂糖电泳检测发现,可扩增出较多清晰条带
的最优 SCOTＧPCR 体系为 Mg２＋ 为２．０μL(２０
mmol􀅰LＧ１)、模板DNA为１．５μL(１０ng􀅰μLＧ１)、
dNTPs为２．４μL(２．５mmol􀅰LＧ１)、引物为１．２μL
(１０μmol􀅰LＧ１)、Taq酶 为０．５U,退火温度为
５２℃.
图１　SCOTＧPCR引物筛选的电泳图
Fig．１ElectrophoresisofprimersselectioninSCOTＧPCR
２．３扩增产物多态性分析
４０份供试重楼材料总扩增带为１２７条,其中多
态性带在１７~７０条之间,平均多态性条带为４８．１５
条;多态性条带百分比为７０．８３３％~９０．９０９％,平均
多态性百分比为８６．４９４％.结果表明,经SCOT标
记研究供试的４０份重楼均表现出丰富的多态性(表
４).
表４　SCOTＧPCR扩增产物多态性
Table４　AmplificationpolymorphismofSCOTＧPCR
编号
No．
多态性条带数
Polymorphicbands
总扩增条带数
Amplificbands
多态性百分比
Polymorphism(％)
XY(２１Ｇ３１) ５９．７３ ６６．７３ ８９．５１０
QYG(１Ｇ９) ３１．３３ ３８．３３ ８０．８６５
HZ(１０Ｇ１３) ５５．００ ６２．００ ８８．７０５
WZ(３８Ｇ３９) ３８．５０ ４５．５０ ８４．６１４
DIA(４０) ３９．００ ４６．００ ８４．７８３
LY(１７Ｇ２０) ４４．００ ５１．００ ８６．２０５
QY(３２Ｇ３７) ５３．００ ６０．００ ８８．３１１
JX(１５Ｇ１６) ５１．００ ５８．００ ８７．８９９
MAO(１４) ５５．００ ６２．００ ８８．７１０
２．４基于SCOT标记揭示的遗传多样性
基于遗传相似系数,利用UPGMA法对重楼属
９个种４０份供试材料进行UPGMA聚类分析,从聚
类图可以将４０份供试材料聚为４类,与李恒(１９９８)
的分类结果较为一致.狭叶重楼单独聚为第一类;
球药隔重楼、卵叶重楼、金线重楼及滇重楼聚为第二
类;黑籽重楼与七叶一枝花聚为第三类;五指莲与毛
重楼聚为第四类.其中遗传相似系数在０．３３３~
０．８１７,遗传距离在０．１８３~０．６６７之间;以七叶一枝
花与狭叶重楼间的遗传距离最小,狭叶重楼与金线
重楼间的遗传距离最大,表明重楼属植物遗传多样
性比较丰富(图２).
图２　４０份重楼种质SCOT标记聚类图
Fig．２　Dendrogramfor４０accessionsof
ParisbasedonSCOTmarkers
８１３ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３４卷
３　讨论与结论
３．１重楼属种间系统发育关系
狭叶重楼、滇重楼、七叶一枝花为同一种下的不
同变种,但这三种重楼的遗传距离较远,分别聚在了
不同的类中.其中狭叶重楼单独聚在了第一类,滇
重楼却与来自不同种的卵叶重楼、球药隔重楼、金线
重楼一起聚在了第二类,七叶一枝花却与来自不同
种的黑籽重楼聚在了第三类.滇重楼和球药隔重
楼、卵叶重楼、金线重楼聚为第二类,可能是由于属
于蚤休组的滇重楼、卵叶重楼和金线重楼与属于球
药隔组的球药隔重楼都会出现雄蕊２轮的情况(李
恒,１９９８).金线重楼、卵叶重楼为同一种下的不同
变种,二者遗传距离较近,且同时聚在了第二类.七
叶一枝花属于多叶重楼,它与黑籽重楼同归于侧膜
亚属种,它们都同为热带型核型(李恒,１９９８),这两
种重楼聚为第三类.
本研究将球药隔重楼、卵叶重楼、金线重楼、滇
重楼聚为一类(第二类),虽尚无同时将这四种重楼
归为一类的相关研究,但却有不少间接的支持观点.
李恒(１９９８)根据核型结构公式均为 K２n＝２x＝１０
＝６m＋４t而将金线重楼与球药隔重楼都归在热带
核型组中,根据萼片、花瓣特点及药隔外凸等将金线
重楼与卵叶重楼归为金线重楼的两个变种;丁春邦
等(２００９)研究发现金线重楼与卵叶重楼柱头可授性
与花粉活力呈正相关;李娟等(２００８)通过POD同
工酶分析指出球药隔重楼与卵叶重楼和金线重楼按
形态学差异分属于两个不同的组,但体内代谢相似
程度较高;赵万顺等(２０１０)采用数量分类学得到了
类似的聚类结果.根据本课题组资源收集后质量指
标测试试验数据,聚为第二类的重楼所含皂苷类物
质组成基本相同,含量相近,有类似的药用价值,由
于上述四种重楼中除滇重楼外的其它三种还未被药
典所收载,建议可将球药隔重楼、卵叶重楼、金线重
楼归为药典允许使用的种,扩大基源范围,缓解重楼
药用资源紧张的现状.
本研究将黑籽重楼与七叶一枝花聚在一起(第
三类),在一定程度支持了洪淑华(２００９)根据薄层色
谱谱聚类分析的观点.２０１２－２０１３年我们在目前
国内最大的野生重楼密集分布区、四川省绵阳市安
县高川乡天池村的实地调查中发现,该地近１０km２
的野生重楼中约６０％为黑籽重楼、４０％为七叶一枝
花.这一结果有力地提示了这两个种在系统发育关
系上的特殊性.在四川省邛崃山脉其它地区如宝
兴、彭州等地的调查也有相似的结果.
此外,关于五指莲与毛重楼聚在同一支的报道,
目前按李恒(１９９８)分类标准,毛重楼虽属侧膜亚属
种,但与属于中轴亚属的五指莲的雄蕊均有２轮,且
都为热带型核型;黄芸等(２００５)以包含五指莲与毛
重楼在内的１１种重楼测定皂苷总含量百分比低于
２．３００％,缺乏分子方面的依据.
３．２重楼属植物遗传多样性
RSAP分子标记基于限制性酶切位点设计引
物,产物经分辨率较高的变性的PAGE(６％)检测;
而本研究所采用的SCOT分子标记是以起始密码
子设计引物,其PCR同时具有单、双引物特征,加之
产物由２．５％的琼脂糖凝胶电泳检测.PAGE电泳
结果显示,RSAPＧPCR在供试材料间能有效、重复
地扩增出差异条带(杜晓华等,２００６;辛本华等,
２０１１);SCOTＧPCR同样能扩增出稳定的多样性条
带,说明这两种分子标记方法都适合于研究重楼属
植物遗传差异的多样性.
近年来利用分子标记进行分子系统学研究已广
泛应用于生物分类学,辛本华等(２０１１)用RSAP分
子标记方法研究重楼属植物,认为重楼属植物种内
差异较大.本研究以SCOT分子标记方法,通过对
电泳图谱数据矩阵进行遗传相似系数计算与聚类分
析,同样表明四川地区重楼属植物具有丰富的遗传
多样性.SCOT分子标记能够对重楼属植物进行准
确的分子鉴定,这为收集、保存、评价和利用重楼种
质资源,对重楼属植物的种类鉴定和种间分类地位
提供了分子生物学的依据,同时对深入探究重楼皂
苷合成关键酶基因定位研究提供了重要参考.
参考文献:
BertrandCY,ColardDavidJ,Mackil．２００９．StartCodonTargeted
(SCOT)Polymorphism:Asimple,novelDNAmarkertechnique
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９１３３期　　　　　　　　　　李壮等:重楼属植物遗传多样性的SCOT标记