全 文 ：广 西 植 物 Guihaia　Aug．２０１５,３５(４):５８６－５８９　　　　　　　　　　 http://journal．gxzw．gxib．cn　
DOI:１０．１１９３１/guihaia．gxzw２０１４１０００２
李树立,刘玉衡．毛药忍冬花蕾抗氧化活性部位化学成分研究[J]．广西植物,２０１５,３５(４):５８６－５８９
LiSL,LiuYH．ChemicalconstituentswithantioxidativeactivityfromtheflowerbudsofLoniceraserreana[J]．Guihaia,２０１５,３５(４):５８６－５８９
毛药忍冬花蕾抗氧化活性部位化学成分研究
李树立１∗,刘玉衡２
(１．河北经贸大学 生物科学与工程学院,石家庄０５００６１;２．河北医科大学 基础医学院,石家庄０５００１７)
摘　要:毛药忍冬 (Loniceraserreana)为忍冬属 (Lonicera)植物,其花和果实入药,具有清热解毒、凉散风热
之功效,但至今缺乏系统化学成分及药理活性研究.为了寻找毛药忍冬中天然抗氧化活性成分,进一步开发
利用忍冬属药用植物资源,该研究以DPPH自由基清除法为活性指导,首次对毛药忍冬干燥花蕾７５％乙醇提
取物的不同极性萃取部位进行抗氧化活性测试,结果发现乙酸乙酯萃取物表现出最强的抗氧化活性 (平均清
除率为８９．４５％).进一步应用现代色谱手段 (硅胶柱色谱、SephadexLHＧ２０凝胶柱色谱等),从毛药忍冬花
蕾的乙酸乙酯萃取物中分离单体化合物,运用现代光谱分析技术 (MS、１HＧNMR、１３CＧNMR、COSY、HSQC、
HMBC、ROESY),并结合文献数据鉴定化合物的化学结构.结果表明:从毛药忍冬干燥花蕾７５％乙醇提取物
中共分离得到９个化合物,分别鉴定为４个酚酸类化合物:绿原酸 (１)、绿原酸甲酯 (２)、绿原酸乙酯 (３)、咖啡
酸 (４);４个黄酮类化合物:木犀草素 (５)、木犀草素Ｇ７ＧOＧβＧDＧ葡萄糖苷 (６)、槲皮素 (７)、槲皮素Ｇ３ＧOＧβＧDＧ葡
萄糖苷 (８);１个甾醇类化合物:βＧ谷甾醇 (９).所有化合物均为从毛药忍冬花蕾中首次分离得到.研究结果
可为抗氧化类相关产品的开发提供科学依据.
关键词:毛药忍冬花蕾;DPPH自由基清除法;抗氧化活性;绿原酸;黄酮
中图分类号:Q９４６　　文献标识码:A　　文章编号:１０００Ｇ３１４２(２０１５)０４Ｇ０５８６Ｇ０４
Chemicalconstituentswithantioxidativeactivityfrom
theflowerbudsofLoniceraserreana
LIShuＧLi１∗,LIUYuＧHeng２
(１．CollegeofBiologyScienceandEngineering,HebeiEconomyandTradeUniversity,Shijiazhuang０５００６１,
China;２．BasicMedicalCollege,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang０５００１７,China)
Abstract:LoniceraserreanaistheendemicspeciesinChinafromthegenusLonicera．Theflowersandfruitsof
L．serreanawerecommonlyusedinthetraditionalChinesemedicineforthetreatmentofvariousdiseases,butthere
wasnostudyonthechemicalconstituentsofL．serreana．TostudythechemicalconstituentswithantioxidativeactivＧ
ityfromtheflowerbudsofL．serreana,DPPHradicalscavengingassaywasusedforscreeningtheactivefractionsof
７５％ethanolextract．Thehighestantioxidantactivity(８９．４５％)wasobservedintheethylacetatelayerofthe
extract．Furtherchemicalinvestigationledtotheisolationofninecompoundsbymodernchromatographicmethod
(chromatographyonsilicagelandSephadexLHＧ２０columns)．Theirstructureswereelucidatedbymodernspectrum
analysis(MS,１HＧNMR,１３CＧNMR,COSY,HSQC,HMBC,ROESY)．Asaresult,fourchlorogenicacids,four
flavonoidsandonesterolcompoundwereidentifiedfromtheethylacetatelayeroftheextract．Alofthesecompounds
wereisolatedfromtheflowerbudsofL．serreanaforthefirsttime．Thechemicalconstituentoftheflowerbudsof
L．serreanawasdeeplystudiedundertheactiveguidanceofDPPHradicalscavengingassay,thereforethisstudy
收稿日期:２０１４Ｇ１０Ｇ０２　　修回日期:２０１５Ｇ０３Ｇ２５
基金项目:河北省科技支撑计划项目(１０２３７１０１DＧ９)
作者简介:李树立(１９６３Ｇ),河北石家庄人,硕士,副教授,主要从事植物化学成分与抗氧化活性研究,(EＧmail)lishuli６３１８＠sina．com.
∗通讯作者
wouldaccumulatethefundamentaldataforantioxidantrelatedproductsdevelopment．
Keywords:flowerbudsofLoniceraserreana;DPPHradicalscavengingassay;antioxidantactivity;chlorogenic
acids;flavonoids
　　 活性氧自由基 (ReactiveOxygenSpecies,
ROS)是生命体在各种生命活动过程中,在一系列
生物化学反应中所产生的中间产物,它们是一些处
于激发态的含氧基团.当机体处于正常的生理情况
下时,体内自由基的产生和消除处于一个动态平衡
之中.但是活性氧自由基如果在体内过量存在,就
可以伤害生物大分子,如造成蛋白质损伤、DNA损
伤、脂质过氧化反应等,而这些是引起生物体衰老和
某些机体病变发生的重要因素(田云等,２００５).
天然植物活性成分中的酚酸类化合物和黄酮类
化合物具有良好的抗氧化活性 (Kandaswamiet
al．,２００８).忍冬属植物中含有多种酚酸和黄酮成
分 (翁 裕 馨 等,２０１１).毛 药 忍 冬 (Lonicera
serreana)为我国特有植物,属于忍冬科 (CaprifoliＧ
aceae)忍冬属 (Lonicera).主要分布于中国河北、
山西、陕西、甘肃、宁夏、四川等省区(中国植物志编
辑编委会,１９８８).毛药忍冬的花和果实均可入药,
具有清热解毒的功效,可以治疗炎症、感冒、发热等
症(谷志云等,２００８).关于毛药忍冬的化学成分及
药理作用研究未见相关报道,为寻找毛药忍冬干燥
花蕾中天然抗氧化活性成分,进一步开发利用忍冬
属药用植物资源,本实验首次以毛药忍冬的干燥花
蕾为材料,采用DPPH (１,１Ｇ二苯基Ｇ２Ｇ三硝基苯肼)
的测试方法,对其７５％乙醇提取物的各极性萃取层
进行抗氧化活性测试.发现毛药忍冬花蕾提取物乙
酸乙酯萃取层抗氧化活性最好.进一步运用硅胶、
凝胶等色谱分离技术,从中分离得到９个化合物,通
过波谱数据并结合文献分别鉴定为酚酸类化合物
(１Ｇ４)、黄酮类化合物(５Ｇ８)及甾醇 (９).这些化合物
均属于首次从毛药忍冬中分离得到.
１　材料与仪器
BrukerAVIII６００MHz超导核磁共振波谱
仪;BT２２４S电子天平;KQ５２００E超声波清洗器;XＧ
６显微熔点仪;AgilentＧ１１００ＧLC/MSDＧTrap;SHBＧ
B９５型循环水式多用真空泵;薄层色谱用硅胶板
GF２５４和柱层析色谱用硅胶(中国青岛海洋化工公司
生产);SephadexLHＧ２０;其余试剂均为国产分析纯
试剂.DPPH为美国Sigma公司产;维生素C标准
对照品为中国医药上海化学试剂公司产.毛药忍冬
花蕾于２０１２年７月采自河北省平山县,经鉴定为毛
药忍冬 (Loniceraserreana)的花蕾.
２　提取与分离
毛药忍冬干燥花蕾１．７kg,７５％乙醇室温提取
３次,每次浸泡１周.减压回收溶剂并得到浸膏
１３６．０g.浸膏分散于水中,用石油醚、氯仿、乙酸乙
酯、正丁醇依次进行萃取,并分别减压回收溶剂,得
到４种萃取浸膏,质量分别为２２．０、２３．０、２７．０、２４．８
g.因石油醚萃取物中含有大量植物色素,影响DPＧ
PH抗氧化实验５１７nm波长检测,所以实验样品选
用其余３种极性萃取物,阳性对照为维生素C.以
上３种萃取物配置不同质量浓度的乙醇溶液,分别
加入一定浓度的DPPH 溶液,５１７nm 波长处检测
最大吸收(Brandetal．,１９９５),每份样品平行操作３
次.DPPH活性实验结果显示,同其他萃取部位相
比,乙酸乙酯萃取物 DPPH 自由基平均清除率
(８９．４５％)最接近阳性对照物维生素C(９１．４７％),
显示最强抗氧化活性,因此实验开展乙酸乙酯萃取
层浸膏的化学成分分离.
将乙酸乙酯萃取物２７．０g进行硅胶柱层析,以
氯仿Ｇ甲醇溶剂系统为洗脱液,梯度由２０∶１至１∶
１,洗脱共得到６个馏分 (F１~F６).F１部分首先经
SephadexLHＧ２０凝胶柱层析,以氯仿Ｇ甲醇 (１∶１)
为洗脱液,接着利用硅胶柱层析,洗脱液为石油醚Ｇ
乙酸乙酯 (３∶１),得到化合物９(１０．６mg).F２部
分首先以SephadexLHＧ２０凝胶柱层析,洗脱剂为
氯仿Ｇ甲醇 (１∶１)溶剂,得到化合物５(５．３mg)和
化合物７(６．７mg).F３部分经过硅胶柱层析,以氯
仿Ｇ甲醇 (５∶１)为洗脱剂,得到化合物２(５．８mg)
和化合物３(４．４mg).F４部分经凝胶柱层析,得到
化合物４(２．７mg).F５经硅胶柱层析,以氯仿Ｇ甲
醇 (３∶１)为洗脱剂,得到化合物１(１３．１mg).F６
硅胶柱层析,氯仿Ｇ甲醇 (１∶１)作为洗脱剂,并进一
步用凝胶柱层析,以甲醇为洗脱剂,得到化合物６
(７．６mg)和化合物８(４．７mg).
７８５４期　　　　　　　　　李树立等:毛药忍冬花蕾抗氧化活性部位化学成分研究
３　结构鉴定
化合物１　淡黄色粉末,３６５nm紫外灯下显蓝
色荧光,与绿原酸标准品比较,Rf值及斑点颜色一
致.与绿原酸标准品相互混合,熔点不变,将化合物
１鉴定为绿原酸.
化合物２　淡黄色粉末,ESIＧMSm/z:３６９[M
＋ H]＋;１HＧNMR(DMSOＧd６,６００MHz)δ:７．４２
(１H,d,J＝１６．０Hz,HＧ７′),７．０３(１H,d,J＝
２．０Hz,HＧ２′),６．９８(１H,d,J＝８．０Hz,HＧ６′),
６．７６(１H,d,J＝８．０Hz,HＧ５′),６．１９(１H,d,J
＝１６．０ Hz,HＧ８′),５．２７ (１H,m,HＧ３),４．８５
(１H,m,HＧ５),３．７６(１H,m,HＧ４),３．６５(３H,
s,ＧOMe);１３CＧNMR (DMSOＧd６,１５０MHz)δ:
１７４．９(CＧ７),１６９．２(CＧ９′),１４９．８(CＧ４′),１４８．５
(CＧ７′),１４４．９(CＧ３′),１２７．９(CＧ１′),１２３．３(CＧ６′),
１１６．１(CＧ８′),１１５．２(CＧ５′),１１４．９(CＧ２′),７５．４
(CＧ１),７１．７(CＧ４),７１．４(CＧ３),６９．３(CＧ５),５２．１
(ＧOMe),３７．６(CＧ２),３６．６(CＧ６).以上数据与翁
裕馨等(２０１１)报道一致,故鉴定为绿原酸甲酯.
化合物３　淡黄色粉末,ESIＧMSm/z:３８３[M
＋ H]＋;１HＧNMR(DMSOＧd６,６００MHz)δ:７．４２
(１H,d,J＝１６．０Hz,HＧ７′),７．０５(１H,d,J＝
２．０Hz,HＧ２′),７．０２(１H,d,J＝８．０Hz,HＧ６′),
６．７６(１H,d,J＝８．０Hz,HＧ５′),６．２０(１H,d,J
＝１６．０ Hz,HＧ８′),５．２９ (１H,m,HＧ３),４．１９
(１H,m,HＧ５),３．７６(１H,m,HＧ４),１．２４(３H,
t,J＝７．０Hz,HＧ９);１３CＧNMR (DMSOＧd６,１５０
MHz)δ:１７４．７(CＧ７),１６８．４(CＧ９′),１４８．５(CＧ
４′),１４５．９(CＧ７′),１４５．３(CＧ３′),１２７．５(CＧ１′),
１２３．９(CＧ６′),１１５．２(CＧ５′),１１５．１(CＧ８′),１１５．１
(CＧ２′),７５．６(CＧ１),７１．６(CＧ４),７０．７(CＧ３),６９．３
(CＧ５),６１．３(CＧ８),３７．９(CＧ６),３７．０(CＧ２),１３．９
(CＧ９).以上数据与翁裕馨等(２０１１)报道一致,故鉴
定为绿原酸乙酯.
化合物４　黄色无定形粉末,ESIＧMSm/z:
１８１[M ＋ H]＋;１HＧNMR(DMSOＧd６,６００MHz)
δ:７．４８(１H,d,J＝１５．６Hz,HＧ７),７．０４(１H,d,
J＝１．２Hz,HＧ２),６．９４(１H,dd,J＝８．４,１．８Hz,
HＧ６),６．７８(１H,d,J＝８．４Hz,HＧ５),６．２２(１H,
d,J＝１５．６Hz,HＧ８).数据与黄永林等(２０１４)报
道一致,故鉴定为咖啡酸.
化合物５　黄色无定型粉末,ESIＧMSm/z:
２８７[M ＋ H]＋;１HＧNMR (DMSOＧd６,６００MHz)
δ:１２．９７(１H,s,５ＧOH),７．４０(１H,dd,J＝８．４,
２．０Hz,HＧ６′),７．３７(１H,J＝２．０Hz,HＧ２′),
６．８７(１H,d,J＝８．４Hz,HＧ５′),６．６５(１H,s,HＧ
３),６．４３(１H,d,J＝２．１Hz,HＧ８),６．１７(１H,d,
J＝２．１ Hz,HＧ６);１３CＧNMR (DMSOＧd６,１５０
MHz)δ:１８１．４(CＧ４),１６４．２(CＧ２),１６３．９(CＧ７),
１６１．４(CＧ５),１５７．３(CＧ９),１４９．４(CＧ４′),１４５．６(CＧ
３′),１２１．５(CＧ１′),１１８．９(CＧ６′),１１５．９(CＧ５′),
１１３．０(CＧ２′),１０３．６(CＧ１０),１０２．８(CＧ３),９８．８(CＧ
６),９３．８(CＧ８).以上数据与李洪娟(２００７)报道一
致,故该化合物被鉴定为木犀草素.
化合物６　黄色无定形粉末,ESIＧMSm/z:
４４９[M ＋ H]＋;１HＧNMR (DMSOＧd６,６００MHz)
δ:１２．９７(１H,s,５ＧOH),７．４３(１H,dd,J＝８．２,
２．１Hz,HＧ６′),７．４０(１H,d,J＝２．１Hz,HＧ２′),
６．８９(１H,d,J＝８．２Hz,HＧ５′),６．７８(１H,d,J
＝２．１Hz,HＧ８),６．７１(１H,s,HＧ３),６．４１(１H,
d,J ＝２．１Hz,HＧ６);１３CＧNMR(DMSOＧd６,１５０
MHz)δ:１８１．６(CＧ４),１６４．１(CＧ２),１６３．８(CＧ７),
１６１．５(CＧ５),１５７．５(CＧ９),１４９．９(CＧ４′),１４５．９(CＧ
３′),１２１．７(CＧ１′),１１９．３(CＧ６′),１１６．２(CＧ５′),
１１３．６(CＧ２′),１０４．２(CＧ１０),１０３．１(CＧ３),１００．１
(CＧ１″),９９．６(CＧ６),９４．２(CＧ８),７６．９(CＧ３″),７７．６
(CＧ５″),７４．１(CＧ２″),７０．９(CＧ４″),６１．１(CＧ６″).数
据与李洪娟等(２００７)报道一致,确定该化合物为木
犀草素Ｇ７ＧOＧβＧDＧ葡萄糖苷.
化合物７　黄色无定形粉末,ESIＧMSm/z:
３０３[M ＋ H]＋;１HＧNMR (DMSOＧd６,６００MHz)
δ:１２．４６(１H,s,５ＧOH),７．６７(１H,d,J＝２．０
Hz,HＧ２′),７．５４(１H,dd,J＝８．５,２．０Hz,HＧ
６′),６．９０(１H,d,J＝８．５Hz,HＧ５′),６．４０(１H,
d,J＝２．０Hz,HＧ８),６．１７(１H,d,J＝２．０Hz,
HＧ６);１３CＧNMR (DMSOＧd６,１５０MHz)δ:１７５．８
(CＧ４),１６３．９(CＧ７),１６０．９(CＧ５),１５６．４(CＧ９),
１４７．５(CＧ４′),１４６．６(CＧ２),１４４．９(CＧ３′),１３５．７
(CＧ３),１２１．９(CＧ１′),１２０．０(CＧ６′),１１５．５(CＧ２′),
１１５．０(CＧ５′),１０３．１(CＧ１０),９８．３(CＧ６),９３．７(CＧ
８).以上数据与周荣光等(２０１２)报道一致,故鉴定
为槲皮素.
化合物８　黄色无定形粉末,ESIＧMSm/z:
４６５[M ＋ H]＋;１HＧNMR (DMSOＧd６,６００MHz)
８８５ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３５卷
δ:１２．４７(１H,s,５ＧOH),７．６１(１H,d,J＝２．０
Hz,HＧ２′),７．５８(１H,dd,J＝８．５,２．０Hz,HＧ
６′),６．８７(１H,d,J＝８．５Hz,HＧ５′),６．４１(１H,
d,J＝２．０Hz,HＧ８),６．１９(１H,d,J＝２．０Hz,
HＧ６),５．４５(１H,d,J ＝７．２Hz,HＧ１″);１３CＧNMR
(DMSOＧd６,１５０MHz)δ:１７６．７(CＧ４),１６４．１(CＧ
７),１６０．９(CＧ５),１５６．５(CＧ９),１５４．７(CＧ２),１４７．５
(CＧ４′),１４４．９(CＧ３′),１３４．７(CＧ３),１２１．７(CＧ１′),
１２０．４(CＧ６′),１１５．５(CＧ２′),１１５．０(CＧ５′),１０３．３
(CＧ１０),１０１．４(CＧ１″),９８．６(CＧ６),９３．９(CＧ８),
７８．０(CＧ５″),７６．８(CＧ３″),７４．５(CＧ２″),６９．７(CＧ
４″),６１．６(CＧ６″).以上数据与安海洋等(２０１１)报
道一致,故鉴定为槲皮素Ｇ３ＧOＧβＧDＧ葡萄糖苷.
化合物９　白色针晶 (氯仿),mp１４０~１４２℃,
硫酸Ｇ乙醇显色为紫红色.薄层层析显示,化合物９
与βＧ谷甾醇标准品混合,点样后经多个展开系统展
开,结果显示均为１个斑点.与βＧ谷甾醇标准品混
合后,熔点不变,化合物９鉴定为βＧ谷甾醇.
４　讨论与结论
本研究结果表明,毛药忍冬干燥花蕾中最佳抗
氧化活性部位为乙酸乙酯极性萃取部位,进一步对
乙酸乙酯萃取部位进行化合物的提取分离和结构鉴
定,从中分离得到９个化合物,主要为酚酸类化合物
和黄酮类化合物,这些结果为抗氧化类相关产品开
发提供了重要的科学依据.
酚酸类化合物和黄酮类化合物,都含有数目不
一的酚羟基官能团,这些化合物均具有良好的抗氧
化活性(段世廉等,２０１１;孙静等,２０１２).刘慧琼等
(２００４)的研究表明,βＧ谷甾醇在植物中普遍存在,具
有较强的抗氧化作用.因此,民间药用植物毛药忍
冬花蕾在天然抗氧化剂方面具有一定的开发前景.
参考文献:
AnHY (安海洋),LiuS (刘顺),ShanQ (单淇),etal．
２０１１．StudyonchemicalconstituentsofPotentilladiscolor(翻
白草的化学成分研究)[J]．ChinTrad HerbDrugs(中草
药),４２:１２８５－１２８８
BrandWW,CuvelierME,BersetC．１９９５．Useofafreeradical
methodtoevaluateantioxidantactivity[J]．LWTＧFoodSci
Technol,２８(１):２５－２９
CompilationCommitteeofFloraSinicae(中国植物志编辑编委
会)．１９８８．FloraofChina(中国植物志)[M]．Beijing(北京):
SciencePress(科学出版社):１６６
DuanSL (段世廉),TangSA (唐生安),QinN (秦楠),et
al．２０１２．ChemicalconstituentsofPhymatopterishastate
andtheirantioxidantactivity(金鸡脚化学成分及其抗氧化
活性)[J]．ChinJChinMatMed (中国中药杂志),３７
(１０):１４０２－１４０７
GuZY(谷志云),ZhuSX (朱世新),GuoZF(郭振锋),et
al．２００８．ResearchonmedicinalplantresourcesofLonicera
Linn．inHenan(河南忍冬科药用资源研究)[J]．JHenan
AgricUniv(河南农业大学学报),４２:４１９－４２２
HuangYL(黄永林),ChenYY(陈月圆),YanXJ(颜小捷),et
al．２０１４．ChemicalconstituentsfromtheleavesofAlchornea
trewioides(１)－Phenolicacidsandrelatedcompounds(红背山
麻杆叶的化学成分研究(Ⅰ)酚酸类及相关化合物)[J]．
Guihaia(广西植物),３４(１):１２６－１２９
KandaswamiC,MiddletonE．１９９４．Freeradicalscavengingand
antioxidantactivityofplantflavonoids[J]．AdvExp Med
Biol,３６６:３５１－３５６
LiHJ(李洪娟),LuoYG (罗应刚),HeZH (何志恒),et
al．２００７．ChemicalconstituentsfromLonicerasaccata(袋花忍
冬的化学成分研究)[J]．ChinJApplEnvironBiol(应用与
环境生物学报),１３:１８８－１９１
LiuHQ(刘慧琼),GuoSH (郭书好),ShenYS(沈英森),et
al．２００４．StudyinantioxidativeeffectofβＧsitosterol(半夏中βＧ
谷甾醇的抗氧化作用研究)[J]．JGuangdongCollPharm
(广东药学院学报),２０(３):２８１－２８３
SunJ(孙静),HuangY (黄芸),SunGB (孙桂波),etal．
２０１２．StudyoninvitroantioxidantactivityofflavonoidsconＧ
tainedinHebeibalmychrysanthemumandstructureＧactivity
relationship(河北香菊中黄酮类成分体外抗氧化活性研究及
构效关系探讨)[J]．ChinJChinMatMed(中国中药杂志),
３７(１３):１９５８－１９６２
TianY (田云),LuXY (卢向阳),HeXJ(何小解),etal．
２００５．Scavengingcapacitiesonoxygenradicalsofnaturalplant
antioxidants(天然植物抗氧化剂清除氧自由基特性研究)
[J]．FoodSci(食品科学),２６(６):１２３－１２５
WengYX(翁裕馨),ChenXH(陈湘宏),LiuZH(刘占厚),et
al．２０１１．Chemicalconstituentsofchlorogenicacidsfromthe
driedleavesofLonicerasimilisHemsl(细毡毛忍冬叶绿原酸
类化学成分研究)[J]．JAnhuiAgricSci(安徽农业科学),
３９:１６５６６－１６５６８
ZhouRG(周荣光),YangZX(杨兆祥),WangJ(王金),et
al．２０１２．ChemicalconstituentsfromleavesofMangiferaperＧ
siciformis(扁桃叶的化学成分研究)[J]．ProdResDev (天
然产物研究与开发),２４:１２１７－１２１９
９８５４期　　　　　　　　　李树立等:毛药忍冬花蕾抗氧化活性部位化学成分研究