全 文 ：　 Ｇｕｉｈａｉａ　 Ｊｕｌ. ２０１６ꎬ ３６(７):８１２－８１７
ｈｔｔｐ: / / ｊｏｕｒｎａｌ.ｇｘｚｗ.ｇｘｉｂ.ｃｎ
ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍ
ＤＯＩ: １０.１１９３１ / ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１４０７０５０
王桂娟ꎬ 肖文祥ꎬ 唐寿贤. 云南南部野生大叶千斤拔资源遗传多样性的 ＩＳＳＲ分析 [Ｊ]. 广西植物ꎬ ２０１６ꎬ ３６(７):８１２－８１７
ＷＡＮＧ ＧＪꎬ ＸＩＡＯ ＷＸꎬ ＴＡＮＧ ＳＸꎬ ｅｔ ａｌ. Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｆｒｏｍ Ｓｏｕｔｈ Ｙｕｎｎａｎ ｂｙ ＩＳＳＲ [Ｊ]. Ｇｕｉｈａｉａꎬ ２０１６ꎬ
３６(７):８１２－８１７
云南南部野生大叶千斤拔资源遗传多样性的 ＩＳＳＲ分析
王桂娟∗ꎬ 肖文祥ꎬ 唐寿贤
( 中国科学院西双版纳热带植物园ꎬ 云南 勐腊 ６６６３０３ )
摘　 要: 应用 ＩＳＳＲ分子标记技术ꎬ对云南南部 ７ 个地区的野生大叶千斤拔(Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ)居群进行
了遗传多样性分析ꎮ 结果表明:云南野生大叶千斤拔具有较高的遗传多样性ꎮ 在物种水平上ꎬ平均每个位点
的多态位点百分率(ＰＰＬ)为 ９４.８５％ꎬ有效等位基因数(Ｎｅ)为 １.４６２ ７ꎬＮｅｉ’ｓ基因多样性指数(Ｈｅ)为 ０.２８１ ５ꎬ
Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ多样性信息指数(Ｈｏ)为 ０.４３３ ７ꎻ在居群水平上ꎬＰＰＬ ＝ ４３.４４％ꎬＮｅ ＝ １.２９８ １ꎬＨｅ ＝ ０.１７０ ４ꎬＨｏ ＝
０.２４９ ９ꎮ 基于 Ｎｅｉ’ｓ遗传多样性分析可得出ꎬ居群间的遗传分化系数(Ｇｓｔ)为 ０.３９７ ５ꎬ表明居群内的遗传变异
为 ６０.２５％ꎬ居群间的遗传变异为 ３９.７５％ꎬ这说明居群间的遗传分化要低于居群内的遗传分化ꎮ 根据遗传多样
性分析和聚类结果ꎬ应在大叶千金拔遗传多样性较高的勐腊易武(ＭＹ)、丘北(ＱＢ)和宁洱(ＮＥ)地区ꎬ设立保
护点对其进行就地保护ꎮ
关键词: 大叶千金拔ꎬ 遗传多样性ꎬ ＩＳＳＲ
中图分类号: Ｑ９４９.７　 　 文献标识码: Ａ　 　 文章编号: １０００￣３１４２(２０１６)０７￣０８１２￣０６
Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ
ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｆｒｏｍ Ｓｏｕｔｈ Ｙｕｎｎａｎ ｂｙ ＩＳＳＲ
ＷＡＮＧ Ｇｕｉ￣Ｊｕａｎ∗ꎬ ＸＩＡＯ Ｗｅｎ￣Ｘｉａｎｇꎬ ＴＡＮＧ Ｓｈｏｕ￣Ｘｉａｎ
( Ｘｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｍｅｎｇｌａ ６６６３０３ꎬ Ｃｈｉｎａ )
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ １３５ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ７ ｗｉｌｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ ｗａｓ ｅｓｔｉ￣
ｍａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＩＳＳＲ ｍｅｔｈｏｄ. Ａｎ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｗｉｌｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｆ. ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ ｆｒｏｍ
Ｓｏｕｔｈ Ｙｕｎｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ. Ａｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｌｅｖｅｌꎬ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ ＰＰＬ ＝ ９４.８５％ꎬ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ
Ｎｅ ＝ １.４６２ ７ꎬ Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｅ ＝ ０.２８１ ５ꎬ ａｎｄ Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ Ｈｏ ＝ ０.４３３ ７ꎻ ａｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｌｅｖ￣
ｅｌꎬ ＰＰＬ ＝ ４３.４４％ꎬ Ｎｅ ＝ １.２９８ １ꎬ Ｎｅｉ’ ｓ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｅ ＝ ０.１７０ ４ꎬ ａｎｄ Ｓｈａｎｎｏｎ’ ｓ ｉｎ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ Ｈｏ ＝
０.２４９ ９. Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ( ３９. ７５％) ａｍｏｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
(６０.２５％). Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓꎬ ｗｅ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ａｒｅａｓ ｏｆ Ｆ. ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｂｕｉｌｄ ｉｎ ＭＹꎬ ＱＢ ａｎｄ
ＮＥ ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａꎬ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ＩＳＳＲ
收稿日期: ２０１４￣０７￣３０　 　 修回日期: ２０１５￣０１￣３１
基金项目: 中国科学院西双版纳热带植物园创新工程试点项目(０５０１０７３００３) [ Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｐｉｌｏｔ Ｆｕｎｄｉｎｇ ｏｆ Ｘｉｓｈｕａｎｇｂａｎａ
Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ(０５０１０７３００３)]ꎮ
作者简介: 王桂娟(１９７４￣)ꎬ女ꎬ内蒙古通辽人ꎬ硕士ꎬ实验师ꎬ主要从事生物多样性研究ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｗａｎｇｇｊ＠ ｘｔｂｇ.ｏｒｇ.ｃｎꎮ
∗通讯作者
　 　 大叶千斤拔 ( Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ)属豆科
(Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ)千金拔属(Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ Ｒｏｘｂ.)ꎬ分布于
印度、孟加拉、缅甸、老挝、越南、柬埔寨、马来西亚和
印度尼西亚等亚洲热带和亚热带地区ꎮ 在中国主要
分布于云南、广西、贵州、广东、台湾、海南和四川ꎬ其
中以云南的资源最为丰富(韦裕宗ꎬ１９９１)ꎮ 大叶千
斤拔常生长于海拔 ２６０ ~ １ ８００ ｍ 的草地和灌木丛ꎬ
其根部具有祛风除湿、舒筋活络、强筋壮骨及消炎止
痛等功效ꎬ是妇科千金片、金鸡胶囊、复方挫伤灵和
活络止痛丸等中成药的主要原料 (张丽霞等ꎬ
２００７)ꎮ 大叶千金拔种子、叶片及嫩枝可作为畜禽
的优质蛋白饲料ꎬ是优良的牧草资源(赵茜ꎬ２００２)ꎮ
此外ꎬ由于大叶千金拔具有较强的固氮作用ꎬ还可以
用来改良土壤(吕福基等ꎬ１９９１)ꎮ 近年随着对大叶
千金拔需求的加大ꎬ以及大量荒山和坡地被开垦ꎬ野
生的大叶千金拔资源日趋减少ꎬ因此对其遗传资源
的研究及保护工作已十分必要ꎮ
ＩＳＳＲ( Ｉｎｔｅｒ￣Ｓｉｍｐｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｒｅｐｅａｔ)作为一种
分子标记方法ꎬ由于其技术简单方便、费用低、通用
性好ꎬ在植物的遗传多样性研究中被广泛使用(向
振勇等ꎬ２００７ꎻＷａｎｇ ｅｔ ａｌꎬ２０１２ꎻＬｉｕ ｅｔ ａｌꎬ２０１３)ꎮ 张
忠廉等(２０１１)应用 ＩＳＳＲ技术对千斤拔属的 １４种植
物亲缘关系进行分析ꎬ表明千斤拔属植物具有丰富
的遗传多样性ꎮ 千斤拔属植物的主要活性成分为黄
酮类物质ꎬ此外还含有香豆素类、萜类、挥发性油类、
脂肪酸类等物质ꎬ具有抗炎镇痛、抗病原微生物、抗
氧化、抗血栓、保护神经及脑组织等功能(李莉等ꎬ
２００９ꎻ李宝强等ꎬ２００９ꎻ李昌松等ꎬ２０１１)ꎮ 此外ꎬ对大
叶千金拨的地理分布及种子生物学等方面也有一定
的研究(管艳红等ꎬ２００９ꎻ管志斌等ꎬ２０１１)ꎮ 本研究
采用 ＩＳＳＲ分子标记技术对云南省分布的野生大叶
千金拔居群进行研究ꎬ对其居群遗传多样性水平和
遗传结构进行分析ꎬ为科学合理地保护和利用现有
的野生大叶千金拔资源提供理论依据和技术支持ꎮ
１　 材料与方法
１.１ 植物材料
研究材料采自云南的澜沧、宁洱、丘北、象明、易
武、杨武和嘎洒地区(图 １)ꎬ共计 ７ 个居群ꎬ１３５ 个
样本ꎮ 采集过程中ꎬ对于个体数大于 ２０株的居群按
照均匀分布、随机取样的原则进行采样ꎬ而对于个体
少于此数的居群进行全部个体采样ꎬ采集新鲜叶片ꎬ
记录各居群的采集地、生境、海拔、地理位置ꎬ所有样
本均在中国科学院西双版纳热带植物园进行迁地保
存(表 １ꎬ图 １)ꎮ
１.２ 基因组 ＤＮＡ提取
采用改良后的 ＣＴＡＢ 法提取基因组 ＤＮＡꎬ用
０.８％的琼脂糖凝胶电泳检测其质量ꎬ并在紫外分光
光度计(Ｂｅｃｋｍａｎ ＤＵ ８００)下检测其质量和浓度ꎬ最
后稀释标定到 １０ ｎｇ􀅰μＬ￣１ꎬ 放入－２０ ℃冰箱里储存
备用ꎮ
１.３ 引物筛选与 ＰＣＲ扩增
所用引物参照加拿大哥伦比亚大学 ＵＢＣ 公司
公布的第 ９套 ＩＳＳＲ 引物序列ꎬ由生工生物工程(上
海)股份有限工司合成ꎮ 每个居群选取 ２ 个模版在
２０ μＬ 的反应体系中进行扩增筛选ꎬ从前 ６０ 个引物
中选取 １１个扩增条带清晰、重复性好的引物(表 ２)
用于全部 ７个居群样本分析ꎮ
ＰＣＲ扩增反应在 Ｂｉｏ￣Ｒａｄ ＰＣＲ 仪上进行ꎬ经过
比较与优化确定最佳的 ＩＳＳＲ 扩增条件为 ２０ μＬ 的
反应体系ꎬ内含 １ × Ｂｕｆｆｅｒꎬ２.０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ￣１ ＭｇＣｌ２ꎬ ２５０
μｍｏｌ􀅰μＬ￣１ ｄＮＴＰｓꎬ０.５ μｍｏｌ􀅰μＬ￣１引物ꎬ０.５ Ｕ Ｔａｑ
ＤＮＡ聚合酶(ＴＯＹＯＢＯ)ꎬ２５ ｎｇ 模版 ＤＮＡꎮ ＰＣＲ 扩
增程序为 ９５ ℃预变性 ７ ｍｉｎꎻ之后进行 ３５ 个循环:
９５ ℃变性 ４５ ｓꎬ４６ ~ ５４ ℃退火(退火温度随引物而
定ꎬ表 ２)４５ ｓꎬ７２ ℃延伸 ４２ ｓꎻ７２ ℃温育 ７ ｍｉｎꎮ
１.４ 产物检测
ＰＣＲ扩增产物用 １％的琼脂糖凝胶进行电泳ꎬ
溴化乙锭染色ꎬ在 ８０ Ｖ 电压下电泳 ３０ ｍｉｎ 左右ꎬ
Ｍａｒｋｅｒ用 １００ ｂｐ ＤＮＡ ｌａｄｅｒ(昆明云科生物技术有
限公司)ꎬ在凝胶成像系统(ＵＶＰ)中观察、记录和保
存图像ꎮ
１.５ 数据统计分析
对电泳图谱中同一位置上 ＤＮＡ 带的有无进行
统计ꎬ有带的记为“１”ꎬ无带的记为“０”ꎬ仅记录清
晰、稳定、且长度在 ３００~１ ５００ ｂｐ范围内的扩增带ꎬ
形成 ０ / １矩阵图输入计算机ꎮ 应用 ＰＯＰＧＥＮＥ 软件
(Ｙｅｈ ｅｔ ａｌꎬ１９９７)对全部居群和各单个居群分别进
行遗传参数分析ꎬ分别计算了多态位点百分率
(ＰＰＬ)、观测等位基因数 (Ｎａ)、有效等位基因数
(Ｎｅ)、Ｎｅｉ’ｓ(１９７３)基因多样性指数(Ｈｅ)、Ｓｈａｎｎｏｎ
信息指数(Ｈｏ)、居群总基因多样性(Ｈｔ)、居群内基
因多样性 (Ｈｓ)、居群间的遗传分化系数 ( Ｇｓｔ)、
Ｎｅｉ’ｓ(１９７８)遗传距离(Ｄ)和遗传一致度( Ｉ)ꎮ 根
据Ｎｅｉ’ｓ遗传距离ꎬ利用ＮＴＳＹＳ￣ｐｃ２.１软件进行居群
３１８７期　 　 　 　 　 　 　 王桂娟等: 云南南部野生大叶千斤拔资源遗传多样性的 ＩＳＳＲ分析
表 １　 云南野生大叶千金拔居群取样分布的采集地、生境、海拔、地理位置及采样数
Ｔａｂｌｅ １　 Ｌｏｃａｌｉｔｙꎬ ｈａｂｉｔａｔꎬ ａｌｔｉｔｕｄｅꎬ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ ｏｆ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ Ｙｕｎｎａｎ
居群编号
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｄｅ
采集地及生境
Ｌｏｃａｌｉｔｙ ａｎｄ ｈａｂｉｔａｔ
采样数
Ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ
海拔
Ａｌｔｉｔｕｄｅ (ｍ)
地理位置
Ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌ ｌｏｃａｔｉｏｎ
澜沧(ＬＣ)
宁洱(ＮＥ)
丘北(ＱＢ)
勐腊象明(ＸＭ)
勐腊易武(ＭＹ)
玉溪杨武(ＹＹ)
景洪嘎洒(ＧＳ)
普洱市澜沧县城附近公路边次生林
Ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｆｏｒｅｓｔ ｉｎ Ｌａｎｃａｎｇꎬ Ｐｕｅｒ Ｃｉｔｙ
普洱市宁洱县黎明乡政府附近田边
Ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ ｉｎ Ｌｉｍｉｎｇꎬ Ｎｉｎｇｅｒꎬ Ｐｕｅｒ Ｃｉｔｙ
文山州邱北县城附近田边
Ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ ｉｎ Ｑｉｕｂｅｉꎬ Ｗｅｎｓｈａｎ Ｃｉｔｙ
勐腊县象明乡政府附近次生林
Ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｆｏｒｅｓｔ ｉｎ Ｘｉａｎｇｍｉｎｇꎬ Ｍｅｎｇｌａꎬ Ｊｉｎｇｈｏｎｇ Ｃｉｔｙ
勐腊县易武乡政府附近次生林
Ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｆｏｒｅｓｔ ｉｎ Ｙｉｗｕꎬ Ｍｅｎｇｌａꎬ Ｊｉｎｇｈｏｎｇ Ｃｉｔｙ
玉溪市杨武至石屏公路旁次生林
Ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｆｏｒｅｓｔ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｙａｎｇｗｕ ａｎｄ Ｓｈｉｐｉｎｇꎬ Ｙｕｘｉ Ｃｉｔｙ
景洪市嘎洒镇南林乡轮歇地
Ｔｈｅ ｓｗｉｄｄｅｎ ｌａｎｄ ｉｎ Ｎａｎｌｉｎꎬ Ｇａｓａꎬ Ｊｉｎｇｈｏｎｇ Ｃｉｔｙ
１７
２０
２０
２０
１８
２０
２０
１ ２００
１ ５００
１ ６００
１ １５０
１ ３００
１ ５００
７８０
　 　 ２３°３４′ Ｎꎬ
　 　 ２２°５０′ Ｎꎬ
　 　 ２３°５１′ Ｎꎬ
　 　 ２２°０８′ Ｎꎬ
　 　 ２１°４１′ Ｎꎬ
　 　 ２３°１５′ Ｎꎬ
　 　 ２１°３０′ Ｎꎬ
９９°５７′ Ｅ　
１００°５９′ Ｅ　
１０４°３６′ Ｅ　
１０１°２０′ Ｅ　
１０１°３８′ Ｅ　
１０２°２０′ Ｅ　
１００°３０′ Ｅ　
图 １　 ７个云南野生大叶千金拔居群的
取样分布图　 居群代号同表 １
Ｆｉｇ. １　 Ｌｏｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ７ ｓａｍｐｌｅｄ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　 Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｄｅｓ ａｒｅ ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｔａｂｌｅ １
ＵＰＧＭＡ聚类分析(Ｒｏｈｌｆꎬ２０００)ꎮ 居群间的基因流
用公式 Ｎｍ ＝ ０.５(１－Ｇｓｔ) / Ｇｓｔ间接推算ꎮ
２　 结果与分析
２.１ 物种和群体水平的遗传多样性分析
用筛选到的 １１条 ＩＳＳＲ引物ꎬ共检测到 ９７ 个位
点(每条引物产生 ６ ~ １１ 个位点)ꎬ其中多态性位
点９ ２个ꎮ在物种水平上ꎬ多态位点百分率(ＰＰＬ)为
表 ２　 对大叶千金拔 ７个居群ꎬ １３５株
个体进行扩增的 ＩＳＳＲ引物
Ｔａｂｌｅ ２　 ＩＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ＩＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ
ｆｒｏｍ １３５ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｏｆ ７ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
引物
Ｐｒｉｍｅｒ
序列 (５′￣３′)
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
(５′￣３′)
退火温度
(℃)
Ａｎｎｅａｌｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
统计位点数
Ｎｏ. ｏｆ
ｂａｎｄｓ
ｓｃｏｒｅｄ
多态位点数
Ｎｏ. ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
ｂａｎｄｓ
８０８
８１０
８１３
８１４
８１６
８１８
８２５
８２８
８３５
８５５
８５６
(ＡＧ) ８Ｃ
(ＧＡ) ８Ｔ
(ＣＴ) ８Ｔ
(ＣＴ) ８Ａ
(ＣＡ) ８Ｔ
(ＣＡ) ８Ｇ
(ＡＣ) ８Ｔ
(ＴＧ) ８Ａ
(ＡＧ) ８ＹＣ
(ＡＣ) ８ＹＴ
(ＡＣ) ８ ＹＡ
５３
４６
４８
４６
４６
５４
４６
４６
５３
４８
４８
８
９
９
６
１０
１０
９
８
１１
１０
７
７
９
９
４
１０
１０
９
８
１０
１０
６
　 Ｎｏｔｅ: Ｙ＝(ＣꎬＴ).
９４.８５％ꎬＮｅｉ’ ｓ 基因多样性指数(Ｈｅ)为 ０. ２８１ ５ꎬ
Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数(Ｈｏ)为 ０.４３３ ７(表 ３)ꎮ 在居群
水平上ꎬ每个位点等位基因数 (Ｎａ)为 １. ２５７ ７ ~
１.６２８ ９ꎬ平均为 １.４３４ ４ꎮ 有效等位基因数(Ｎｅ)为
１.１６１ ６~１.４３６ ０ꎬ平均为 １.２９８ １ꎮ 多态位点百分率
(ＰＰＬ)在 ２５.７７％ ~６２.８９％之间ꎬ平均为 ４３.４４％ꎬ最
高的是勐腊易武(ＭＹ)居群ꎬ 最低的是玉溪杨武
(ＹＹ)居群ꎮ 居群的 Ｎｅｉ’ｓ基因多态性指数 (Ｈｅ)在
４１８ 广　 西　 植　 物　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ３６卷
表 ３　 大叶千金拔居群的遗传多样性
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
居群
Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ
观察
等位
基因数
Ｎａ
有效
等位
基因数
Ｎｅ
Ｎｅｉ′ｓ
基因
多样性
Ｈｅ
Ｓｈａｎｎｏｎ
信息
指数
Ｈｏ
多态位点
百分率
ＰＰＬ
(％)
澜沧(ＬＣ)
宁洱(ＮＥ)
丘北(ＱＢ)
勐腊象明(ＸＭ)
勐腊易武(ＭＹ)
玉溪杨武(ＹＹ)
景洪嘎洒(ＧＳ)
１.３５０ ５
１.４８４ ５
１.５５６ ７
１.３８１ ４
１.６２８ ９
１.２５７ ７
１.３８１ ４
１.２４９ ５
１.３１５ ３
１.４１８ ６
１.２５８ ８
１.４３６ ０
１.１６１ ６
１.２４７ ０
０.１４０ ５
０.１８５ ９
０.２３２ １
０.１４８ ５
０.２４７ ５
０.０９４ ９
０.１４３ ５
０.２０４ ７
０.２７５ ３
０.３３５ ６
０.２１７ ８
０.３６２ １
０.１４１ １
０.２１２ ５
３５.０５
４８.４５
５５.６７
３８.１４
６２.８９
２５.７７
３８.１４
平均 Ｍｅａｎ １.４３４ ４ １.２９８ １ ０.１７０ ４ ０.２４９ ９ ４３.４４
物种水平
Ａｔ ｓｐｅｃｉｅｓ ｌｅｖｅｌ
１.９４８ ５ １.４６２ ７ ０.２８１ ５ ０.４３３ ７ ９４.８５
　 Ｎｏｔｅ: Ｎａ. Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓꎻ Ｎｅ. Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓꎻ
Ｈｅ. Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ Ｈｏ. Ｓｈａｎｎｏｎ’ ｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘꎻ ＰＰＬ. Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ.
表 ４　 大叶千金拔居群基因多样性 Ｎｅｉ′ｓ(１９８７)分析
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｎｅｉ’ｓ(１９８７) ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｉｎ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
项目
Ｉｔｅｍ
总基因
多样性
Ｈｔ
居群内
基因
多样性
Ｈｓ
基因分
化系数
Ｇｓｔ
基因流
Ｎｍ
平均 Ｍｅａｎ
标准差 Ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ
０.２８２ ８
０.０２５ ５
０.１７０ ４
０.０１２ １
０.３９７ ５ ０.７５８ ０
　 Ｎｏｔｅ: Ｈｔ. ｔｏｔａｌ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎻ Ｈｓ. ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓꎻ Ｇｓｔ. ｃｏｅｆ￣
ｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎꎻ Ｎｍ. ｇｅｎｅ ｆｌｏｗ.(Ｎｍ ＝ ０.５(１－ Ｇｓｔ) / Ｇｓｔ)
０.０９４ ９~０.２４７ ５ 之间ꎬ平均为 ０.１７０ ４ꎮ Ｓｈａｎｎｏｎ 信
息指数 (Ｈｏ)在 ０. １４１ １ ~ ０. ３６２ １ 之间ꎬ平均为
０.２４９ ９ꎮ 两者大小与居群多态位点百分率的趋势
基本一致(表 ３)ꎬ由高到低依次为勐腊易武(ＭＹ) >
丘北(ＱＢ)> 宁洱(ＮＥ) > 勐腊象明(ＸＭ) > 景洪嘎
洒镇南林山(ＧＳ)> 澜沧(ＬＣ)> 玉溪杨武(ＹＹ)ꎮ 各
居群间均有遗传多样性差异ꎮ 其中勐腊易武(ＭＹ)
居群的遗传多样性水平最高ꎬＰＰＬ ＝ ６２.８９％ꎬＮｅ ＝
１.４３６ ０ꎬＨｅ ＝ ０.２４７ ５ꎬ Ｈｏ ＝ ０.３６２ １ꎻ玉溪杨武居
群的遗传多样性水平最低ꎬＰＰＬ ＝ ２５. ７７ꎬ Ｎｅ ＝
１.１６１ ６ꎬＨｅ ＝ ０.０９４ ９ꎬ Ｈｏ ＝ ０.１４１ １ꎮ
２.２ 居群间遗传分化程度的比较
大叶千金拔各居群间存在着一定的遗传分化
(表 ４)ꎮ ７ 个自然居群总的遗传多样性 Ｈｔ ＝
０.２８２ ８ꎬ其中居群内遗传多样性 Ｈｓ ＝ ０.１７０ ４ꎬ居群
间的基因多样度(Ｄｓｔ ＝ Ｈｔ－Ｈｓ)为 ０.１１２ ４ꎬＮｅｉ’ｓ基
因分化系数 Ｇｓｔ ＝ ０.３９７ ５ꎬ表明有 ３９.７５％的遗传变
异存在于居群间ꎬ有 ６０.２５％的遗传变异存在于居群
内ꎬ居群内的遗传分化大于居群间的分化ꎮ 居群间
基因流(Ｎｍ ＝ ０.５(１－Ｇｓｔ) / Ｇｓｔ)为 ０.７５８ ０ꎮ
２.３ 聚类分析
大叶千金拔 ７ 个居群间的 Ｎｅｉ’ ｓ 遗传一致度 Ｉ
值的变化范围为 ０.７８３ ２ ~ ０.９０４ １ꎬ遗传距离 Ｄ 值
的变化范围为 ０.１００ ８ ~ ０.２４４ ４(表 ５)ꎮ ＵＰＧＭＡ
法聚类分析表明ꎬ景洪嘎洒(ＧＳ)和玉溪杨武(ＹＹ)
居群的遗传一致度最高(０.９０４ １)ꎬ遗传距离最近
(０.１００ ８)ꎬ因此ꎬ在图中这两个居群首先聚在一起ꎻ
而景洪嘎洒(ＧＳ)与澜沧(ＬＣ)居群的遗传一致度最
低(０.７８３ ２)ꎬ遗传距离最远(０.２４４ ４)ꎬ在图中的距
离也最远(图 ２)ꎮ
３　 讨论
３.１ 大叶千斤拔的遗传多样性
本研究利用 １１条 ＩＳＳＲ引物从大叶千斤拔 ７ 个
居群的 １３５个样品中共检测到 ９７ 个位点ꎬ其中 ９２
个是多态性位点ꎮ 在物种水平上ꎬＮｅｉ’ ｓ 基因多样
性指数(Ｈｅ)为 ０.２８１ ５ꎬ高于双子叶植物的平均值
(Ｈｅ ＝ ０. １９１) ( Ｎｙｂｏｍ ＆ Ｂａｒｔｉｓｈꎬ ２００４ꎻ Ｎｙｂｏｍꎬ
２０００)ꎬ表现出较高的遗传多样性ꎬ但在居群平均水
平上 Ｈｅ 为 ０.１７９ ４ꎬ相对较低ꎮ 物种水平上的遗传
多样性较高ꎬ可能是由于大叶千斤拔分布于物种多
样性丰富的热带和亚热带地区ꎬ生境差别较大ꎬ有利
于多样性的形成ꎮ 广布种比狭布种分布的物种具有
更高的遗传多样性ꎬ物种分布的地理范围与遗传多
样性紧密相关ꎬ物种分布越广泛ꎬ其遗传多样性越丰
富(Ｈａｍｒｉｃｋ ｅｔ ａｌꎬ１９９１ꎻＨａｍｒｉｃｋ ＆ Ｇｏｄｔꎬ１９８９)ꎮ 本
文云南野生大叶千斤拔的 ＰＰＬ ＝ ９４. ８５％ꎬＮａ ＝
１.９４８ ５ꎬＨｅ ＝ ０.２８１ ５ꎬＧｓｔ ＝ ０.３９７ ５ꎬ大叶千斤拔的
多态位点百分率(ＰＰＬ)ꎬ基因多样性指数(Ｈｅ)及遗
传分化系数(Ｇｓｔ)均明显偏高ꎬ说明大叶千斤拔具有
较高的遗传多样性ꎬ这可能与大叶千斤拔是多年生
植物ꎬ花期长ꎬ异花传粉的习性ꎬ有利于基因间的交
流有关ꎮ 在大叶千斤拔各居群中ꎬ勐腊易武(ＭＹ)
居群的遗传多样性最高ꎬ多态性位点百分率 ＰＰＬ 为
６２.８９％ꎬＨｅ为 ０.２４７ ５ꎬ推测该居群是云南南部大叶
５１８７期　 　 　 　 　 　 　 王桂娟等: 云南南部野生大叶千斤拔资源遗传多样性的 ＩＳＳＲ分析
表 ５　 大叶千金拔 ７个居群间的 Ｎｅｉ′ｓ(１９７８)遗传一致度 (Ｉ) 和遗传距离 (Ｄ)
Ｔａｂｌｅ ５　 Ｎｅｉ’ｓ(１９７８) ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ７ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
澜　 沧
(ＬＣ)
宁　 洱
(ＮＥ)
丘　 北
(ＱＢ)
勐腊象明
(ＸＭ)
勐腊易武
(ＭＹ)
玉溪杨武
(ＹＹ)
景洪嘎洒
(ＧＳ)
澜沧(ＬＣ) ∗∗∗∗ ０.８４４ ４ ０.８４２ ６ ０.８１５ ９ ０.８１３ １ ０.８４３ ５ ０.７８３ ２
宁洱(ＮＥ) ０.１６９１ ∗∗∗∗ ０.８８０ ６ ０.８２９ ６ ０.７９０ ４ ０.８４４ ３ ０.８２６ １
丘北(ＱＢ) ０.１７１ ２ ０.１２７ ２ ∗∗∗∗ ０.８６９ ９ ０.８８１ ０ ０.８８３ ８ ０.８０９ ６
勐腊象明(ＸＭ) ０.２０３ ４ ０.１８６ ８ ０.１３９ ４ ∗∗∗∗ ０.８８８ ９ ０.８８８ ２ ０.８５７ ２
勐腊易武(ＭＹ) ０.２０６ ９ ０.２３５ ２ ０.１２６ ７ ０.１１７ ８ ∗∗∗∗ ０.８７９ ２ ０.８２０ ６
玉溪杨武(ＹＹ) ０.１７０ ２ ０.１６９ ３ ０.１２３ ５ ０.１１８ ６ ０.１２８ ８ ∗∗∗∗ ０.９０４ １
景洪嘎洒(ＧＳ) ０.２４４ ４ ０.１９１ ０ ０.２１１ ２ ０.１５４ ０ ０.１９７ ８ ０.１００ ８ ∗∗∗∗
　 注: Ｎｅｉ’ｓ遗传一致度 (对角线上) 和遗传距离 (对角线下)ꎮ
　 Ｎｏｔｅ: Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ (ａｂｏｖｅ ｄｉａｇｏｎａｌ) ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ (ｂｅｌｏｗ ｄｉａｇｏｎａｌ) .
图 ２　 大叶千斤拔居群间的 Ｎｅｉ’ｓ遗传
一致度 ＵＰＧＭＡ聚类图
Ｆｉｇ. ２　 ＵＰＧＭＡ ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ ７ Ｆｌｅｍｉｎｇｉａ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｎｅｉ’ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ
千斤拔较早的分布中心ꎮ 象明和易武都属勐腊地
区ꎬ但象明居群(ＸＭ)的多态位点百分率 ＰＰＬ 仅为
３８.１４％ꎬＨｅ仅为 ０.１４８ ５ꎬ产生这么大差异的原因可
能是由于云南特殊的地理位置ꎬ复杂的山川所致ꎮ
３.２ 大叶千斤拔的遗传结构
大叶千斤拔的遗传变异分析结果表明ꎬ居群内
的遗 传 变 异 ( ６０. ２５％) 大 于 居 群 间 的 变 异
(３９.７５％)ꎬ遗传变异主要发生在居群内ꎬ推断可能
在居群内存在一定的基因交流障碍ꎬ由于海拔、降雨
量和地理环境等因素的影响ꎮ 因此ꎬ在进行大叶千
斤拔的就地或迁地保护时ꎬ应注意考虑同一居群内
的不同种质资源ꎮ 大叶千斤拔居群间的基因流 Ｎｍ
为 ０.７５８ ０ < １ꎬ显示居群间也存在着一定的基因交
流障碍ꎬ这很可能由于云南的地理环境和气候条件
形成ꎮ 大叶千斤拔的聚类分析表明(图 ２)ꎬ７ 个大
叶千斤拔居群大致可以分为两大支ꎬ即澜沧、宁洱、
丘北为一支ꎻ玉溪杨武、为一支ꎮ 地理距离较远的居
群ꎬ如丘北与澜沧和宁洱ꎬ玉溪杨武与象明、勐腊易
武和景洪嘎洒ꎬ在亲缘关系上却较近ꎬ可能与云南地
区的特殊地理环境和气候条件有或人为因素有关ꎮ
象明和易武居群在地理距离和亲缘关系都较近ꎬ建
议在进行种质资源收集时ꎬ可作为一个地点进行样
品采集ꎮ
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( 上接第 ７８２页 Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｆｒｏｍ ｐａｇｅ ７８２ )
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