全 文 ：书广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ　３２（５）：６４４－６４９　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ２０１２年 ９ 月 　
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１２．０５．０１５
濒危植物猪血木人工繁殖幼苗的遗传
多样性及对种群复壮的启示
申仕康１，刘丽娜２，王跃华１＊，吴富勤１，赖建华１
（１．云南大学 生命科学学院 植物科学研究所，昆明６５００９１；２．云南农业大学 园林园艺学院，昆明６５０２０１）
摘　要：猪血木为山茶科特有的单型属珍稀濒危植物，目前仅在广东省阳春市八甲镇有分布，且种群数量不
足２００株，为给濒危植物猪血木的种群成功回归自然和种群复壮提供科学依据，采用ＡＦＬＰ分子技术，对７个
种源人工繁殖的猪血木幼苗遗传多样性进行研究。结果表明：６对引物共检测到位点数为１１５个，其中多态位
点数为６８个，多态位点所占比率为５９．１３％，观察等位基因数（Ｎａ）为１．５８２６、有效等位基因数（Ｎｅ）为
１．３８１３、Ｎｅｉ′ｓ基因多样性（Ｈ）为０．２２１５、Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数（Ｉ）为０．３２８０。ＵＰＧＭＡ聚类将７个种源的幼
苗划分为３支，不同种源间幼苗的遗传距离与种源地理距离存在显著相关性（Ｐ＜０．０５）。说明不同种源人工
繁殖猪血木幼苗仍保持较高的遗传多样性。建议采集不同种源种子进行人工繁殖和人工种群构建，促进物种
的种群复壮。
关键词：濒危植物；猪血木；遗传多样性；ＡＦＬＰ；种群复壮
中图分类号：Ｑ９４８．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００－３１４２（２０１２）０５－０６４４－０６
＊Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｙ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
ｏｆ　ａ　ｃｒｉｔｉｃａｌｙｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ　Ｅｕｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｅｘ－
ｃｅｌｓｕｍａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｆｏｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ＳＨＥＮ　Ｓｈｉ－Ｋａｎｇ１，ＬＩＵ　Ｌｉ－Ｎａ２，ＷＡＮＧ　Ｙｕｅ－Ｈｕａ１＊，
ＷＵ　Ｆｕ－Ｑｉｎ１，ＬＡＩ　Ｊｉａｎ－Ｈｕａ１
（１．Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｙｕｎｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５００９１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ
ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ，Ｙｕｎｎａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｕｎｍｉｎｇ　６５０２０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｕｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｅｘｃｅｌｓｕｍ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｅｎｄｅｍｉｃ　ｔｏ　Ｃｈｉｎａ，ｉｓ　ａｎ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｍｏｎｏｔｙｐｉｃ　ｇｅｎｕｓ　Ｅｕ－
ｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎｉｎ　ｔｈｅ　ｆａｍｉｌｙ　Ｔｈｅａｃｅａｅ．Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｓ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　ｔｏ　ｏｎｅ　ｒｅｍｎａｎｔ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ　２００ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ
ｉｎ　Ｂａｊｉａ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　Ｙａｎｇｃｈｕｎ　Ｃｏｕｎｔｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｉｔ　ｉｓ　ｌｉｓｔｅｄ　ａｓ　ａ　ｓｅｃｏｎｄ　ｃｌａｓｓ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ　ｆｏｒ　ｓｔａｔｅ　ｐｒｏ－
ｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｔｕｄｙ，ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　７ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｅ．ｅｘｃｅｌｓｕｍａｒｔｉｆｉｃｉａｌｙ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄ－
ｌｉｎｇｓ　ｗａｓ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｆｒａｇｍｅｎｔ　Ｌｅｎｇｔｈ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＡＦＬＰ）．Ｗｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ　ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　１１５ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ｂａｎｄｓ　ｕｓｉｎｇ　６ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ＡＦＬＰ　ｐｒｉｍｅｓ，６８ｏｆ　ｗｈｉｃｈ（ＰＰＢ＝５９．１３％）ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ．Ｔｈｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌ－
ｌｅｌｅｓ（Ｎａ）ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌｅｌｅｓ（Ｎｅ）ｗｅｒｅ　１．５８２６ａｎｄ　１．３８１３，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　Ｎｅｉ′ｓ
ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ（Ｈ）ａｎｄ　Ｓｈａｎｎｏｎ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎｄｅｘ（Ｉ）ｗｅｒｅ　０．２２１５ａｎｄ　０．３２８０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｅ．ｅｘｃｅｌｓｕｍａｒｔｉｆｉｃｉａｌｙ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｆｒｏｍ　７ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ｉｎｔｏ　ｔｈｒｅｅ　ｇｒｏｕｐｓ　ｂｙ　ＵＰＧＭＡ　ｄｅｎ－
ｄｒｏｇｒａｍ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｐｒｅｓｅｎｔ
＊ 收稿日期：２０１２－０４－１０　　修回日期：２０１２－０７－０９
基金项目：国家自然科学基金（３１０７０３０６）；云南大学植物科学研究所青年教师基金（ＺＷ２０１００４）［Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（３１０７０３０６）；Ｙｏｕｎｇ　Ｔｅａｃｈｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｆｕｎｄ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｙｕｎｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＺＷ２０１００４）］
作者简介：申仕康（１９８２－），男，湖南邵东人，博士，从事生物多样性保护和恢复生态学研究，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｓｓｋ１６８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ。
＊通讯作者：王跃华，教授，从事保护生物学研究，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｗａｎｇｙｈ５８２１２＠１２６．ｃｏｍ。
ｓｔｕｄｙ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　Ｅ．ｅｘｃｅｌｓｕｍａｒｔｉｆｉｃｉａｌｙ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｆｒｏｍ　７ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ　ｈａｄ　ａ　ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｈｉｇｈ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｇｅ－
ｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｗｅ　ｓｕｇｇｅｓｔ　ｔｈｅ　ｆｕｔｕｒｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ　ｃｏｕｌｄ　ｃｏｌｅｃｔ　ｓｅｅｄｓ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ
ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ａｂｏｖｅ　７ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ　ｔｏ　ｋｅｅｐ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｗｏｕｌｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｐｒｏｆｏｕｎｄ　ｂａｓｉｓ
ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　Ｅ．ｅｘｃｅｌｓｕｎｍ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ；Ｅｕｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｅｘｃｅｌｓｕｍ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＡＦＬＰ；ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ
　　物种的遗传多样性是长期进化的产物，也是其
生存和发展的前提，对稀有和濒危物种遗传多样性
研究，是揭示其进化历史和适应潜力的基础，并进一
步探讨物种的濒危机制，制定科学的保护和种群恢
复措施提供依据（Ｈｅｄｒｉｃｋ　＆ Ｋａｌｉｎｏｗｓｋｉ，２０００）。
保护生物学的关键问题就是保护物种，具体地说就
是保护物种的遗传多样性或进化潜力（康明等，
２００５）。种内遗传多样性或变异越丰富，物种对环境
变化的适应能力就越强，其进化的潜力也就越大，这
不仅有助于保护物种和整个生态系统的多样性，还
可以减慢由于适应或进化所导致的灭绝过程
（Ｆｒａｎｋｈａｍ等，２００２；Ｅｌｉｓ等，２００６）。故无论是从
进化的角度还是从保护生物学的角度，物种遗传多
样性的研究对揭示物种的进化历史和潜能，以及进
一步探讨其濒危机制具有重要意义，并能为濒危物
种保护措施的制定提供重要依据 （ＭｃＫａｙ 等，
２００５）。同时，对于受胁迫的濒危物种而言，基于种
群遗传多样性的种群恢复策略是物种人工种群构
建、迁地保护和种群成功回归自然的主要途径（康明
等，２００５；韦霄等，２００５；Ｓｉｎｃｌａｉｒ　＆ Ｈｏｂｂｓ，２００８）。
猪血木（Ｅｕｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｅｘｃｅｌｓｕｍ）是中国特有
的山茶科单型属猪血木属的珍稀濒危植物，现仅分
布于广东省阳春县八甲镇地区，且仅残存一个居群，
种群数量不足２００株，同时，由于受当地高强度人为
干扰的影响，猪血木残存种群被隔离成斑块状分布
且种群自然更新存在瓶颈效应，因此，该物种已经处
于极度濒危状态，其被列为国家二级重点保护野生
植物，并被国际自然保护与联盟（ＩＵＣＮ）收录为极
危种（Ｃｒｉｔｉｃａｌｙ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ）（ＩＵＣＮ，２０１０）。前期
研究表明：猪血木自然种群仍然保留较高的遗传多
样性，这为猪血木种群的就地保护方案制定提供了
依据（Ｗａｎｇ 等，２００６；罗晓莹等，２００５；王博轶，
２００９），导致物种濒危的主要原因是外界高强度人为
干扰对生境及植株个体的破坏（Ｓｈｅｎ等，２００９）。然
而，对于因外界因素致濒的物种来说，种群的重建与
迁移被认为是拯救该物种的极为有效的方法（Ａｒｍ－
ｓｔｒｏｎｇ　＆Ｓｅｄｄｏｎ，２００８；Ｐｒｉｍａｃｋ和马克平，２００９），
因此，在猪血木人工种群构建和迁地保护过程中，如
何选择合适的遗传结构？如何配置幼年个体的遗传
多样性？从而保证猪血木人工种群对环境因子的长
期适应性及其进化潜能，则是该物种种群成功回归
自然和实现其种群有效保育的关键问题。鉴于此，
本文通过对不同种源（即不同斑块种子）下种子采
集，人工繁育幼苗，采用扩增片段长度多态性（Ａｍ－
ｐｌｉｆｉｅｄ　Ｆｒａｇｍｅｎｔ　Ｌｅｎｇｔｈ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＡＦＬＰ）分
子标记技术检测猪血木人工繁殖幼苗的遗传多样
性，从而为猪血木人工种群构建、迁地保护及其种群
成功回归自然提供科学依据。
１　材料与方法
１．１试验材料
猪血木种子于２００８年１月采集于八甲镇的冲
田、木力、中田、竹根富、石角、解塘和澄洞７个有结
实成年植株的斑块。各斑块植株分布现状及生境特
征详见Ｓｈｅｎ等（２００９）。种子采集后于２００８年３月
份在云南大学洋浦校区温室进行种子萌发和幼苗培
育试验，不同种源幼苗采用日常温室管理进行育苗，
待幼苗生长１２个月后，采集不同种源幼苗的叶片进
行ＤＮＡ提取和不同种源幼苗的ＡＦＬＰ遗传多样性
分析。
１．２试验方法
１．２．１材料总ＤＮＡ提取　实验采用改良的ＣＴＡＢ
法（Ｄｏｙｌｅ　ＪＪ　＆ Ｄｏｙｌｅ　ＪＬ，１９８７）进行基因组 ＤＮＡ
提取，提取后的ＤＮＡ用０．５％琼脂糖凝胶电泳和紫
外分光光度计检测纯度，－２０℃下保存备用。
１．２．２ＡＦＬＰ实验　试验流程主要采用 Ｖｏｓ等
（１９９５）的方法略作改动。包括酶切、连接、预扩增和
选择性扩增及凝胶电泳、银染等步骤。酶切采用２０
μＬ反应体系：ｄｄＨ２Ｏ　１１μＬ，１０×ｂｕｆｆｅｒ　２μＬ，ＭｓｅＩ
和ＥｃｏＲＩ各１μＬ，Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　５μＬ，反应程序为
３７℃，２．５ｈ；６５℃，１５ｍｉｎ；１６℃，终止。酶切后，
在酶切体系中加入接头连接反应体系，ＥｃｏＲＩ和
Ｍｓｅ　Ｉ接头的上下游接头序列见表１，连接反应体系
为ｄｄＨ２Ｏ　５μＬ，１０×ｂｕｆｆｅｒ　２μＬ，ＭｓｅＩ和ＥｃｏＲＩ接
头 各１μＬ，Ｔ４ＤＮＡ　Ｌｉｇａｓｅ　１μＬ，Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　５
５４６５期　　　　　申仕康等：濒危植物猪血木人工繁殖幼苗的遗传多样性及对种群复壮的启示
μＬ，Ｄｉｇｅｓｔｅｄ　ＤＮＡ　１０μＬ，反应程序为：１６℃，１０ｈ；
７２℃，１０ｍｉｎ。预扩增和选择性扩增引物均由上海
生工生物工程技术服务有限公司合成，具体序列见
表１，预扩增采用２５μＬ的反应体系：模板ＤＮＡ　２
μＬ，１０×ｂｕｆｆｅｒ　２．５μＬ，ＭｇＣｌ２２μＬ，ＭｓｅＩ　２μＬ，
ＥｃｏＲＩ　２μＬ，ｄＮＴＰ　１μＬ，Ｔａｑ酶１μＬ，ｄｄＨ２Ｏ　１２．５
μＬ，ＰＣＲ反应程序为：９４℃４０ｍｉｎ；９４℃１ｍｉｎ，５６
℃１ｍｉｎ，７２℃１ｍｉｎ；７２℃延伸１０ｍｉｎ；运行３５个
循环，终止。预扩增产物于０．５％琼脂糖凝胶上检
测，然后将预扩增产物稀释并在－２０℃下保存作为
选择性扩增模板。选择性扩增引物参照文献（邹喻
苹等，２００１）提供的６４对引物组合，从中选择６对条
带清晰的引物组合将进行 ＡＦＬＰ分析（表１），反应
体系为：１０×ｂｕｆｆｅｒ　２．５μＬ；ＭｇＣｌ２２μＬ；Ｍｓｅ　Ｉ　２
μＬ；ＥｃｏＲＩ　２μＬ；ｄＮＴＰ　１μＬ；Ｔａｑ酶１μＬ；ｄｄＨ２Ｏ
１３．５μＬ；模板ＤＮＡ（稀释５倍后的溶液）１μＬ，ＰＣＲ
反应程序则为：９４℃４ｍｉｎ；９４℃１ｍｉｎ，５６℃１
ｍｉｎ，７２ ℃ １ｍｉｎ运行３５个循环，７２ ℃延伸１０
ｍｉｎ；１６℃终止。选择性产物进行５％的聚丙烯酰
胺凝胶电泳和银染，并进行照相。
表１　猪血木幼苗ＡＦＬＰ实验接头和扩增引物序列
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｄａｐｔｅｒｓ　ａｎｄ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｏｆ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＡＦＬＰ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｏｆ　Ｅ．ｅｘｃｅｌｓｕｍｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
　　　　　　接头和引物 Ａｄａｐｔｅｒｓ　ａｎｄ　ｐｒｉｍｅｒｓ 序列Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
接头Ａｄａｐｔｅｒｓ　 Ｍｓｅ　Ｉ－１　 ５′－ＧＡＣＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧ－３′
Ｍｓｅ　Ｉ－２　 ３′－ＴＡＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＡＴ－５′
ＥｃｏＲＩ－１　 ５′－ＣＴＣＧＴＡＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣ－３′
ＥｃｏＲＩ－２　 ３′－ＣＡＴＣＴＧＡＣＧＣＡＴＧＧＴＴＡＡ－５′
预扩增引物Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｏｆ　ｐｒｅ－ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　 ＥｃｏＲＩ＋１　 ５′－ＧＡＣＴＧＣＧＴＡＣＣＡＡＴＴＣ－３′
Ｍｓｅ　Ｉ＋１　 ５′－ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡ－３′
选择性扩增引物
Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｅ－ＣＡＡ　 ５′－ＧＡＣ　ＴＧＣ　ＧＴＡ　ＣＣＡ　ＡＴＴ　ＣＡＡ－３′
Ｅ－ＣＣＡ　 ５′－ＧＡＣ　ＴＧＣ　ＧＴＡ　ＣＣＡ　ＡＴＴ　ＣＣＡ－３′
Ｍ－ＡＧＡ　 ５′－ＧＡＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ　ＴＧＡ　ＧＴＡ　ＡＧＡ－３′
Ｍ－ＡＴＡ　 ５′－ＧＡＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ　ＴＧＡ　ＧＴＡ　ＡＴＡ－３′
Ｍ－ＡＧＣ　 ５′－ＧＡＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ　ＴＧＡ　ＧＴＡ　ＡＧＣ－３′
Ｍ－ＡＣＴ　 ５′－ＧＡＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ　ＴＧＡ　ＧＴＡ　ＡＣＴ－３′
Ｍ－ＡＣＧ　 ５′－ＧＡＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ　ＴＧＡ　ＧＴＡ　ＡＣＧ－３′
Ｍ－ＡＣＣ　 ５′－ＧＡＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣ　ＴＧＡ　ＧＴＡ　ＡＣＣ－３′
１．２．３数据收集和统计分析　根据所照相片的图谱
记录条带。针对某一条带而言，有记为“１”，无记为
“０”，只记载清晰易辨的扩增带，将６对选择扩增引
物产生的ＤＮＡ扩增带数据输入到数据矩阵，得到
了０、１数据表。运用ＤＣＦＡ　１．１（Ｚｈａｎｇ，２００２）对得
到的ＡＦＬＰ数据进行处理后，运用ＰＯＰＧＥＮＥ　１．３２
（Ｙｅｈ等，１９９７）进行遗传多样性分析，计算得到以下
遗传多样性参数：多态位点百分率ＰＰＢ，平均等位
基因数Ｎａ（ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌｅｌｅｓ　ｐｅｒ　ｌｏｃｉ），有
效等位基因数 Ｎｅ（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌｅｌｅｓ　ｐｅｒ
ｌｏｃｉ）（Ｋｉｍｕｒａ　ａｎｄ　Ｃｒｏｗ，１９６４），Ｎｅｉ′ｓ基因多样性
指数ｈ（ｇｅｎｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）（Ｎｅｉ，１９７３），Ｓｈａｎｎｏｎ信息
指数Ｉ（Ｓｈａｎｎｏｎ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　Ｉｎｄｅｘ）（Ｌｅｗｏｎｔｉｎ，
１９７２）；利用 ＮＴＳＹＳ　２．１（Ｒｏｌｆ，２０００）中的 Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｄｉｓｔａｎｃｅ程序，采用 Ｎｅｉ７２方法（Ｎｅｉ，ｌ９７２），计算样
品间的遗传距离，运用 ＴＦＰＧＡ　１．３（Ｍｉｌｅｒ，１９９７）
检测不同种源间遗传距离和地理距离的相关性。根
据Ｎｅｉ′ｓ遗传距离运用 ＮＴＳＹＳ　２．１中的 ＵＰＧＭＡ
（Ｎｅｉ等，２０００）进行聚类分析。同时运用ＳＰＳＳ　１３．０
软件来分析各种遗传指标之间的相关性。
２　结果与分析
２．１不同种源幼苗的遗传多样性
用６对引物对不同种源人工繁育猪血木幼苗的
基因组ＤＮＡ的 ＡＦＬＰ分析显示，每个引物检测到
的位点数为１５～２５个之间，６对引物共检测到位点
数为１１５个，平均每对引物检测到１９．１７个位点，试
验所选择的６对引物均能检测到多态位点。总共检
测到的多态位点数为６８个，多态位点所占比率为
５９．１３％（表２）。
　　根据所有引物检测的数据得到的观察等位基因
数为１．５８２６±０．４９５３、有效等位基因数为１．３８１３±
０．３７８９、Ｎｅｉ′ｓ基因多样性为０．２２１５±０．２０３４、
Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数为０．３２８０±０．２９１９，各引物所
检测的多态位点比率及遗传多样性指数见表２，采
６４６ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３２卷
用ＳＰＳＳ１３．０软件进行多态位点比率ＰＰＢ、观察基
因等位数、有效等位基因数、Ｎｅｉ′ｓ基因多样性和
Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数５项指标进行相关性分析，结
果显示两两参数之间有显著的相关性（Ｐ＜０．０５）。
表２　不同种源猪血木幼苗的基因多样性
Ｔａｂｌｅ　２　Ｇｅｎｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ　ｏｆ　Ｅ．ｅｘｃｅｌｓｕｍ
引物组合
Ｐｒｉｍｅｒ　ｐａｉｒｓ
多态位点比率
ＰＰＢ（％）
观察等位基因数
Ｎａ
有效等位基因数
Ｎｅ
Ｎｅｉ′ｓ基因多样性
Ｈ
Ｓｈａｎｎｏｎ指数
Ｉ
Ｅ－ＣＡＡ＋Ｍ－ＡＴＡ　 ５３．３３　 １．５３３３±０．５２６４　 １．４５１６±０．４６６９　 ０．２３９５±０．２３９９　 ０．３４０４±０．３３６６
Ｅ－ＣＡＡ＋Ｍ－ＡＧＡ　 ４７．３７　 １．４７３７±０．５１３０　 １．２３０５±０．２８０７　 ０．１５０４±０．１７２７　 ０．２３３９±０．２６１８
Ｅ－ＣＣＡ＋Ｍ－ＡＧＣ　 ５８．８２　 １．５２９４±０．５１４５　 １．３３２４±０．３６９３　 ０．１９６９±０．２０４２　 ０．２９３５±０．２９６３
Ｅ－ＣＣＡ＋Ｍ－ＡＣＴ　 ６２．５０　 １．６２５０±０．５０００　 １．４３６１±０．３９２５　 ０．２５００±０．２１１８　 ０．３５６３±０．３０３２
Ｅ－ＣＣＡ＋Ｍ－ＡＣＧ　 ６９．５７　 １．６９５７±０．４７０５　 １．４３９１±０．３８４８　 ０．２５５５±０．１９７４　 ０．３８１０±０．２７８８
Ｅ－ＣＣＡ＋Ｍ－ＡＣＣ　 ６０．００　 １．６０００±０．５０００　 １．３９８６±０．３７９９　 ０．２３１８±０．２０６４　 ０．３４２４±０．２９６７
Ｔｏｔａｌ　 ５９．１３　 １．５８２６±０．４９５３　 １．３８１３±０．３７８９　 ０．２２１５±０．２０３４　 ０．３２８０±０．２９１９
表３　猪血木７个种源幼苗的遗传距离（对角线下方）和遗传一致度（对角线上方）
Ｔａｂｌｅ　３　Ｎｅｉ′ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｂｅｌｏｗ　ｄｉａｇｏｎａｌ）ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ａｂｏｖｅ　ｄｉａｇｏｎａｌ）ｏｆ
ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｆｒｏｍ　ｓｅｖｅｎ　ｓｅｅｄ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　Ｅ．ｅｘｃｅｌｓｕｍ
种源
Ｓｅｅｄｓ　ｓｏｕｒｃｅ
冲田
Ｃｈｏｎｇｔｉａｎ
木力
Ｍｕｌｉ
中田
Ｚｈｏｎｇｔｉａｎ
澄洞
Ｃｈｅｎｇｄｏｎｇ
石角
Ｓｈｉｊｉａｏ
解塘
Ｊｉｅｔａｎｇ
竹根富
Ｚｈｕｇｅｎｆｕ
冲田Ｃｈｏｎｇｔｉａｎ ＊＊＊＊ ０．７３０４　 ０．６７８３　 ０．７５６５　 ０．７４７８　 ０．７０４３　 ０．７７３９
木力 Ｍｕｌｉ　 ０．３１４１ ＊＊＊＊ ０．６８７０　 ０．７８２６　 ０．７５６５　 ０．７６５２　 ０．７６５２
中田Ｚｈｏｎｇｔｉａｎ　 ０．３８８２　 ０．３７５５ ＊＊＊＊ ０．６７８３　 ０．６６９６　 ０．６６０９　 ０．６２６１
澄洞Ｃｈｅｎｇｄｏｎｇ　 ０．２７９０　 ０．２４５１　 ０．３８８２ ＊＊＊＊ ０．８０００　 ０．８４３５　 ０．７３９１
石角Ｓｈｉｊｉａｏ　 ０．２９０６　 ０．２７９０　 ０．４０１１　 ０．２２３１ ＊＊＊＊ ０．８５２２　 ０．８１７４
解塘Ｊｉｅｔａｎｇ　 ０．３５０５　 ０．２６７６　 ０．４１４２　 ０．１７０２　 ０．１６００ ＊＊＊＊ ０．７３９１
竹根富Ｚｈｕｇｅｎｆｕ　 ０．２５６３　 ０．２６７６　 ０．４６８３　 ０．３０２３　 ０．２０１６　 ０．３０２３ ＊＊＊＊
２．２不同种源幼苗的遗传距离和聚类分析
用ＰＯＰＧＥＮＥ算出７个不同种源人工繁殖的
猪血木幼苗之间的遗传距离，其变化范围介于
０．１６００～０．４６８３之间（表３），其中澄洞和石角之间
的遗传距离最小，只有０．１６００，经 ＵＰＧＭＡ聚类后
聚在一起。而竹根富和中田之间的遗传距离最大，
为０．４６８３，在 ＵＰＧＭＡ聚类图中亦相隔很远，ＵＰ－
ＧＭＡ聚类分析中，冲田和竹根富聚成一支，木力、
澄洞、石角和解塘聚成一支，而中田则单独为一支
（表３，图１）。采用 Ｍａｎｔｌｅ检测，不同种源间幼苗的
遗传距离与种源地理距离存在显著相关性（Ｐ＜
０．０５），这与ＳＰＳＳ１３．０检测种源间幼苗的遗传距离
与种源地理距离存在显著正相关性（ｒ＝０．９５８，Ｐ＝
０．０１２）的结果一致。
３　结论与讨论
３．１不同种源人工繁殖幼苗遗传多样性
物种的遗传多样性是生命进化和适应的基础，
种内遗传多样性越高，物种对环境变化的适应能力
就越强，通常认为特有物种、濒危种和狭域种具有较
图１　基于Ｎｅｉ′ｓ遗传距离猪血木幼苗的ＵＰＧＭＡ聚类图
Ｆｉｇ．１　ＵＰＧＭＡ　ｔｒｅｅ　ｏｆ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ
ｆｒｏｍ　ｓｅｖｅｎ　ｓｅｅｄ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　Ｅｕｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎ
ｅｘｃｅｌｓｕｍ　ｂａｓｅｄｏｎ　Ｎｅｉ′ｓ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ
低的遗传多样性（Ｆｒａｎｋｈａｍ等，２００２），但是对大量
的濒危植物遗传多样性检测亦发现，许多濒危或稀
有物种亦具有较高的遗传多样性，而也有一些广布
物种的遗传多样性则很低（Ｋａｎｇ等，２０００）。
猪血木为山茶科单型属，且仅局限分布于八甲
地区，种群数量稀少，属于狭域分布的地方特有濒危
物种，Ｗａｎｇ等（２００６）和罗晓莹等（２００５）分别采用
ＲＡＰＤ分子标记检测猪血木自然居群的遗传多样性
７４６５期　　　　　申仕康等：濒危植物猪血木人工繁殖幼苗的遗传多样性及对种群复壮的启示
发现，其多态位点所占比率ＰＰＢ和Ｎｅｉ′ｓ基因多样
性Ｈ 分别为５１．８０％和０．１８２１、６０．９０％和０．１９９３，
这比 Ｈａｍｒｉｋ　＆ Ｇｏｄｔ（１９８９）对１６５属４４９个种的
植物等位酶研究得出植物多态位点百分率平均为
５０％的结论要高；王博轶（２００９）通过扩大样本数量，
采用ＡＦＬＰ分子标记亦检测到猪血木自然居群
ＰＰＢ和Ｈ 分别为６３．１３％和０．１５２６，表明猪血木
自然种群仍然保留较高的遗传多样性；在本研究中，
猪血木人工繁殖幼苗的ＰＰＢ和Ｈ 分别为５９．１３％
和０．２２１５，表明猪血木在子代中仍然保留较丰富的
遗传多样性和较高的进化潜力，但是二者在Ｎｅｉ′ｓ
基因多样性Ｈ 的不一致性可能是由于取样和选择
性引物差异所导致的（邹喻苹等，２００１；Ｆｒａｎｋｈａｍ
等，２００２）。与山茶科其它植物相比，猪血木种群遗
传多样性高于稀有种杜鹃红山茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ　ｃｈａｎ－
ｇｉｉ，３８．８３％），低于稀有种金花茶（Ｃ．ｎｉｔｉｄｉｓｓｉｍａ，
７２．５０％）、圆子荷（Ａｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍａ　ｏｂｌａｔｅ，８０．２６％）
和广布种川鄂连蕊茶（Ｃ．ｒｏｓｔｈｏｍｉａｎａ，７６．００％）
（Ｔａｎｇ等，２００６；罗晓莹等，２００５）。
张德全等（２００８）通过对２３５篇文献关于３１４种
种子植物遗传多样性参数统计分析表明，ＲＡＰＤ和
ＡＦＬＰ分子标记的参数相关性较大，具有较好的可
比性，在本研究中，基于 ＡＦＬＰ对猪血木幼苗遗传
多样性得出的结果与罗晓莹等（２００５）和 Ｗａｎｇ等
（２００６）基于ＲＡＰＤ的结果存在一定的差异，其可能
是由于分子标记和取样的差异所造成。一般认为，
ＡＦＬＰ比ＲＡＰＤ能够检测出更多的位点，覆盖了基
因组中更多的片段，而在对濒危物种遗传多样性研
究取样过程中，样本覆盖面积占整个群体面积的比
例越 大，对 遗 传 参 数 引 起 的 偏 差 可 能 越 小
（Ｆｒａｎｋｈａｍ 等，２００２）。此外，本研究与王博轶
（２００９）采用ＡＦＬＰ分子标记，分别对自然居群和人
工繁殖幼苗的研究结果亦存在一定的差异，其可能
是由于取样和扩增引物的差异所导致，同时，猪血木
为两性花，异花授粉，本研究人工繁殖幼苗为种子繁
殖苗，故亲本和子代个体在遗传结构上的变异亦可能
导致自然居群与人工繁殖幼苗在遗传参数上的差异。
Ｈａｍｒｉｃｋ　＆Ｌｏｖｅｌｅｓｓ（１９８９）认为：物种丰富的
遗传多样性是与其生活史特征和生态特性密切相关
的，猪血木自然种群和人工繁育幼苗具有较高遗传
多样性的原因可能为：（１）猪血木在八甲镇曾成片分
布，其种群数量急剧减少是由于近几十年的人为干
扰所致，故对于猪血木这种高大的乔木物种而言，物
种可能在种群数量衰减的一段时间内仍然会保留较
高的遗传多样性；（２）猪血木自然种群仍然保持较高
的遗传多样性，而本实验所检测的材料仅为自然居
群中成年个体的第一代幼年个体，依然反应出自然
居群中成年个体的遗传水平；（３）猪血木种子为以鸟
类散布为主，通过动物传播种子的物种可增加物种
之间的基因交流，有利于保持物种的遗传变异和突
变；（４）猪血木为两性花，其具有较高的授粉率，属异
花传粉植物，主要依赖昆虫进行传粉，这也是猪血木
人工繁育幼苗具有较高的遗传多样性的原因之一。
３．２幼苗遗传多样对种群保护与复壮的启示
目前猪血木仍保留较高的遗传多样性，就种群
本身遗传变异而言，其对生存环境仍具有较好的适
应性，但通过野外种群生态学调查和分析发现，猪血
木主要分布于高强度人为干扰的村庄附近，外界干
扰导致种群生境破碎化且自然更新困难，从而严重
影响种群的正常生存和繁衍，故对该物种的保护既
要加强现有植株的就地保护，同时也要积极开展物
种的人工繁殖和种群回归自然研究与实践（罗晓莹
等，２００５）。一般认为，种群能否成功回归自然取决
于３个方面：（１）适宜物种种群恢复和回归自然的生
境；（２）种群不同生长阶段的统计学信息如存活率、
繁殖力和种群活力；（３）在前两条都满足的基础上，
物种的遗传多样性则是决定物种能否适应环境变
化、维持变异潜能及其长期生存繁衍的关键因素，故
在濒危物种的种群恢复和回归自然中，选择合适的
生境条件和保持物种的遗传多样性对物种保育具有
重要应用价值（Ｓｉｎｃｌａｉｒ　＆ Ｈｏｂｂｓ，２００８；Ｂｉｓｃｈｏｆｆ
等，２０１０）。猪血木种群数量稀少，但成年植株开花
结实正常，且结实量大（申仕康等，２００８ｂ）。
建议通过采集不同种源种子进行幼苗人工繁
殖，进行猪血木人工种群恢复和迁地保护，扩大种群
数量。同时通过对现有居群生境质量和生态因子的
调查，探明物种生存繁衍过程对生境条件的需求，选
择合适的生境条件进行人工居群构建和种群回归自
然研究，对猪血木人工繁育幼苗的遗传多样性分析
表明，猪血木幼苗仍然保留较大的遗传多样性，故可
以通过采集不同斑块的猪血木种子进行人工繁育，
保证种群回归过程中的遗传多样性与遗传变异。但
是，如何基于遗传差异最大化来配置不同种源猪血
木幼苗的数量及式样，从而成功实现物种的复壮和
种群回归自然仍然有待进一步研究。
致谢　云南大学２００６级生物技术专业本科生
８４６ 广　西　植　物　　　 　　　　　　　　　　　　　　３２卷
韩振伟、卢孟孟和唐明勇等参与了相关试验，特此
致谢！
参考文献：
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王博轶．２００９．濒危植物猪血木的保护生物学研究［Ｄ］．昆明：
云南大学
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［Ｍ］／／Ｂｏｃｋ　ＪＨ，Ｌｉｎｈａｒｔ　ＹＢ（ｅｄｓ）．Ｐｌａｎｔ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　Ｅｃｏｌｏｇｙ．
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ｖａｔｉｏｎ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｒａｒｅ　ｅｎｄｅｍｉｃ　Ａｂｅｌｉｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｄｉｓｔｉｃｈｕｍ
Ｎａｋａｉ（Ｏｌｅａｃｅａｅ）ｉｎ　Ｋｏｒｅａ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓ，１１３：１２７－１３８
Ｋｉｍｕｒａ　Ｍ，Ｃｒｏｗ　ＪＦ．１９６４．Ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ａｌｅｌｅｓ　ｔｈａｔ　ｃａｎ　ｂｅ
ｍａｉｎｔａｉｎｅｄ　ｉｎ　ａ　ｆｉｎｉｔｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，４９：７２５－７３８
Ｌｅｗｏｎｔｉｎ　ＲＣ．１９７２．Ｔｈｅ　ａｐｐｏｒｔｉｏｎｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ［Ｊ］．
Ｅｖｏｌ　Ｂｉｏｌ，６：３８１－３９８
Ｌｕｏ　ＸＹ（罗晓莹），Ｔａｎｇ　ＧＤ（唐光大），Ｘｕ　Ｈ（许涵），ｅｔ　ａｌ．２００５．
Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｅｎｄｅｍｉｃ　ａｎｄ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｆａｍｉｌｙ　Ｔｈｅａｃｅａｅ　ｉｎ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ（山茶科３种中国特有濒
危植物的遗传多样性研究）［Ｊ］．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓ　Ｓｃｉ（生物多样性），
１３（２）：１１２－１２１
ＭｃＫａｙ　ＪＫ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ　ＣＥ，Ｈａｒｒｉｓｏｎ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．２００５．“Ｈｏｗ　ｌｏｃａｌ　ｉｓ
ｌｏｃａｌ？”———Ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｎｄ　ｃｏｎｃｅｐｔｕａｌ　ｉｓｓｕｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｅ－
ｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｒｅｓｔｏｒ　Ｅｃｏｌ，１３：４３２－４４０
Ｍｉｌｅｒ　ＭＰ．１９９７．Ｔｏｏｌｓ　ｆｏｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ（ＴＦＰＧＡ），
ｖｅｒｓｉｏｎ　１．３：ａ　Ｗｉｎｄｏｗｓ　ｐｒｏｇｒａｍ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａｌｏｚｙｍｅ　ａｎｄ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄａｔａ
Ｎｅｉ　Ｍ．１９７２．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｍ
Ｎａｔ，１０６：２８３－２９２
Ｎｅｉ　Ｍ．１９７３．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　ｓｕｂｄｉｖｉｄｅｄ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，７０：３　３２１－３　３２３
Ｎｅｉ　Ｍ，Ｋｕｍａｒ　Ｓ．２０００．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓ
［Ｍ］．ＮｅｗＹｏｒｋ：Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ：８７
Ｒｏｌｆ　ＪＦ．２０００．ＮＴＳＹＳ－ｐｃ．Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ　ｔａｘｏｎｏｍｙ　ａｎｄ　ｍｕｌｔｉ－
ｖａｒｉａｔｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ　２．１．Ｅｘｅｔｅｒ　Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ：Ｓｅｔａｕｋｅｔ
Ｓｈｅｎ　ＳＫ（申仕康），Ｈｕ　ＸＬ（胡晓立），Ｗａｎｇ　ＹＨ（王跃华）．２００８．
Ｏｒｎｉｔｈｏｃｈｏｒｙ　Ｅｕｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｅｘｃｅｌｓｕｍａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｉｎ　ｃｏｎ－
ｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｂｉｏｌｏｇｙ（鸟类对猪血木种子的散步及在其保护中的
意义），［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ（广西植物），２８（５）：６５０－６５４
Ｓｈｅｎ　ＳＫ，Ｗａｎｇ　Ｙ，Ｍａ　ＨＹ，ｅｔ　ａｌ．２００９．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｓｔａｎｄ　ｃｈａｒ－
ａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｈａｂｉｔａｔ　ｏｆ　ａ　ｃｒｉｔｉｃａｌｙ　ｅｎｄａｎｇｅｒｅｄ　ｐｌａｎｔ　Ｅｕｒｙｏｄｅｎ－
ｄｒｏｎ　ｅｘｃｅｌｓｕｍ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｔｏ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｓｐｅｃ　Ｂｉ－
ｏｌ，２４（２）：１３３－１３８
Ｓｉｎｃｌａｉｒ　ＥＡ，Ｈｏｂｂｓ　ＲＪ．２００８．Ｓａｍｐｌｅ　ｓｉｚｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｅｓｔｉｍａｔｅｓ　ｏｆ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｓｔｏｒａ－
ｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｒｅｓｔｏｒ　Ｅｃｏｌ，１７：８３７－８４４
Ｔａｎｇ　ＳＱ，Ｂｉｎ　ＸＹ，Ｗａｎｇ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．２００６．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｙｅｌｏｗ　Ｃａｍｅｌｌｉａ（Ｃ．ｎｉｔｉｄｉｓｓｉｍａ）ｉｎ
Ｃｈｉｎａ　ａｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ＲＡＰＤ　ａｎｄ　ＡＦＬＰ　ｍａｒｋｅｒｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ
Ｇｅｎｅｔ，４４：４４４－４５６
Ｗａｎｇ　Ｔ，Ｓｕ　ＹＪ，Ｙｅ　ＨＧ，ｅｔ　ａｌ．２００６．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　１４ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ　Ｅｕｒｙｏｄｅｎｄｒｏｎ　ｅｘｃｅｌ－
ｓｕｍｅｎｄｅｍｉｃ　ｔｏ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｆｒｏｎｔ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｉｎ，１：６８－７０
Ｗｅｉ　Ｘ（韦霄），Ｗｅｉ　ＪＱ（韦记青），Ｊｉａｎｇ　ＳＹ（蒋水元），ｅｔ　ａｌ．２００５．
Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘ－ｓｉｔｕ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｃａｍｅｌｌｉａ
ｎｉｔｉｄｓｓｉｍａ（迁地保护的金花茶遗传多样性评价）［Ｊ］．Ｇｕｉｈａｉａ
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Ｖｏｓ　Ｐ，Ｈｏｇｅｒｓ　Ｒ，Ｂｌｅｅｋｅｒ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．１９９５．ＡＦＬＰ：ａ　ｎｅｗ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ
ＤＮＡ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ，２３：４　４０７－４　４１４
Ｙｅｈ　ＦＣ，Ｙａｎｇ　ＲＣ，Ｂｏｙｌｅ　ＴＢＪ，ｅｔ　ａｌ．１９９７．ＰＯＰＧＥＮＥ，ｔｈｅ　Ｕｓｅｒ－
Ｆｒｉｅｎｄｌｙ　Ｓｈａｒｅｗａｒｅ　ｆｏｒ　Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｍ］．Ｃａｎａｄａ：
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｌｂｅｒｔａ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｒｅ
Ｚｈａｎｇ　ＤＱ（张德全），Ｙａｎｇ　ＹＰ（杨永平）．２００８．Ａ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ａｎｄ
ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｍａｒｋｅｒｓ（几种常见分子标记遗传多样性参数的统计分析）［Ｊ］．
Ａｃｔａ　Ｂｏｔ　Ｙｕｎｎａｎ（云南植物研究），３０（２）：１５９－１６７
Ｚｈａｎｇ　ＦＭ．２００２．ＤＣＦＡ　１．１，Ａ　Ｐｒｏｇｒａｍ　Ｃｏｍｐａｎｉｅｄ　ｗｉｔｈ
ＡＭＯＶＡ　ｔｏ　Ｃｏｍｐｕｔｅ　ｔｈｅ　Ｍａｔｒｉｘ　ｏｆ　Ｄｉｓｔａｎｃｅ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　Ｂｏｔａｎｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，ｔｈｅ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
９４６５期　　　　　申仕康等：濒危植物猪血木人工繁殖幼苗的遗传多样性及对种群复壮的启示