全 文 ：书广 西 植 物 Ｇｕｉｈａｉａ ３２（４）：５３１－５３５ ２０１２年 ７ 月
ＤＯＩ：地１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－３１４２．２０１２．０４．０２０
中国石竹离体快繁与试管苗玻璃化研究
程云清１，刘剑锋１，刘春明１，邹振峰２，王淑范３
（１．吉林师范大学 生命科学学院，吉林 四平１３６０００；２．四平市林业科学研究院，
吉林 四平１３６０００；３．四平市园林管理局，吉林 四平１３６０００）
摘 要：研究了培养基组成成分对中国石竹品种Ｄｉａｎａ Ｆ１Ｗｈｉｔｅ组培程序中种子萌发、诱芽增殖、试管苗玻璃
化及生根等重要环节的影响。结果表明：（１）种子适宜的萌发培养基为１／２ＭＳ，在此培养基中种子萌发率为
８３．３３％，播种后３０ｄ时无菌苗高度达６．９９ｃｍ，叶片数达２６．７。（２）在芽诱导阶段玻璃化苗发生率最高可达
５３．８５％。将光照强度提高至２ ０００ｌｘ后，采用培养基ＭＳ＋６－ＢＡ ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．３ｍｇ／Ｌ＋琼脂８．０ｇ／Ｌ
＋蔗糖８．０ｇ／Ｌ进行诱芽培养，玻璃化苗发生率降至３．３３％，外植体出芽率达到９０％，单个外植体出芽数达
到７．２个。（３）适宜的生根培养基为１／２ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋琼脂８ｇ／Ｌ＋蔗糖４０ｇ／Ｌ，培养３０ｄ时生根率
为１００％，平均根条数达到２４．７条，平均根长度达到４．７ｃｍ。试管苗在消毒后的腐殖土中移栽，成活率达
９５％。该研究结果为Ｄｉａｎａ Ｆ１试管苗的快速繁殖提供科学依据。
关键词：中国石竹；组培快繁；玻璃化
中图分类号：Ｓ７９２．１１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００－３１４２（２０１２）０４－０５３１－０５
＊ Ｓｔｕｄｙｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ
ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ＣＨＥＮＧ Ｙｕｎ－Ｑｉｎｇ１，ＬＩＵ Ｊｉａｎ－Ｆｅｎｇ１，ＬＩＵ Ｃｈｕｎ－Ｍｉｎｇ１，
ＺＯＵ Ｚｈｅｎ－Ｆｅｎｇ２，ＷＡＮＧ Ｓｈｕ－Ｆａｎ３
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊｉｌｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｉｐｉｎｇ １３６０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｉｐｉｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｉｐｉｎｇ １３６０００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｇａｒｄｅｎ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆ Ｓｉｐｉｎｇ Ｃｉｔｙ，Ｓｉｐｉｎｇ １３６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｅｄｉｕｍ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｏｎ ｓｅｅｄｓ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｂｕｄｓ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｃｕｌ－
ｔｉｖａｒ Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｐｒｏｐｅｒ ｓｅｅｄｓ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ １／２ＭＳ，ａｎｄ ｓｅｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｉｏ ｗａｓ ８３．３３％．Ｈｅｉｇｈｔ ｏｆ ａｓｅｐｔｉｃ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｏ ６．９９ｃｍ，ａｎｄ ｌｅａｆ ｎｕｍｂｅｒ ｐｅｒ ｐｌａｎｔ ｗａｓ ２６．７ｏｎ ３０ｔｈ ｄａｙ
ａｆｔｅｒ ｓｏｗｉｎｇ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ．Ｍａｘ．ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｌａｎｔ ｒａｔｉｏ ｗａｓ ８３．３３％ｄｕｒｉｎｇ ｂｕｄ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｐｅｒｉｏｄ ｆｏｒ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ｏｆ Ｄｉ－
ａｎａ Ｆ１Ｗｈｉｔｅ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｂｕｄｓ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｗａｓ ＭＳ＋６－ＢＡ ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．３ｍｇ／Ｌ＋ａｇａｒ ８．０ｇ／
Ｌ＋ｓｕｇａｒ ８．０ｇ／Ｌ ａｆｔｅｒ ｌｉｇｈｔ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｗａｓ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｔｏ ２ ０００ｌｘ．Ｂｕｄ ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｂｕｄｓ ｎｕｍｂｅｒ ｐｅｒ ｅｘｐｌａｎｔ
ｗｅｒｅ ９０％ａｎｄ ７．２ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｏ ３．３３％ａｆｔｅｒ ３０ｄａｙｓ’ｃｕｌｔｕｒｅ．
Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ １／２ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋ａｇａｒ ８ｇ／Ｌ＋ｓｕｇａｒ ４０ｇ／Ｌ，ａｎｄ ｒｏｏｔｉｎｇ ｐｅｒｃｅｎｔ，ｒｏｏｔｓ
ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ａｖｅｒａｇｅ ｒｏｏｔ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ １００％，２４．７ａｎｄ ４．７ｃｍ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｆｔｅｒ ３０ｄａｙｓ’ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｕｂｅ
ｐｌａｎｔ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ９５％ａｆｔｅｒ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｉｎ ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｅｄ ｈｕｍｕｓ．Ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｏｕｌｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｓｃｉｅｎ－
ｔｉｆｉｃ ｂａｓｅ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｃｕｌｔｉｖａｒ Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ；ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
＊ 收稿日期：２０１１－０８－２０ 修回日期：２０１１－１２－２９
基金项目：国家自然科学基金（３１０００６９１）［Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（３１０００６９１）］
作者简介：程云清（１９７７－），女，湖北枝江人，博士，讲师，主要从事植物生物技术等研究，（Ｅ－ｍａｉｌ）Ｃｈｅｎｇｙｕｎｑｉｎｇ１９７７＠１６３．ｃｏｍ。
中 国 石 竹 （Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）是 石 竹 科
（Ｃａｒｙｏｐｈｙｌａｃｅａｅ）石竹属（Ｄｉａｎｔｈｕｓ）的多年生草本
花卉植物，是我国传统名花之一。中国石竹原产于
东北、华北、长江流域及东南亚地区，除华南以外，几
乎全国各地均有分布。中国石竹在世界各地广为栽
培，品种繁多，然而由我国自行培育的优良品种很少
（黄莺等，２００３）。中国石竹常用播种、扦插和分株等
方式进行繁殖。四平市林业科学研究院于２００９年
自荷兰引入一批石竹新品种，其中品种 Ｄｉａｎａ Ｆ１
Ｗｈｉｔｅ颇具观赏价值，但因是杂交种，并不适宜留种
繁殖，建立组培快繁技术体系对其栽培应用具有重
要的现实意义。香石竹（Ｄ．ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｕｓ）的组培快
繁技术已有较多报道，香石竹可通过叶片、茎段再生
途径进行扩繁，也可通过体细胞胚胎发生途径进行
增殖（Ａｐａｒｎａ等，２００３；Ｆｅｄｅｒｉｃｏ等，２０１０；Ｋａｒａｍｉ
等，２００６；Ｋａｒａｍｉ等，２００７；Ｐａｒｅｅｋ等，２００３）。与之
相比较，中国石竹的组培技术快繁研究较少，已有的
研究主要集中于试管花的诱导、体细胞胚胎诱导等
方面（陈以俊等，１９９９；黄莺等，２００３；唐定台等，
１９９６），利用茎段再生进行快繁的研究尚不多见，未见
到试管苗玻璃化的报道。为建立完善的中国石竹
（Ｄｉａｎｔｈｕｓ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）品种Ｄｉａｎａ Ｆ１Ｗｈｉｔｅ组培快繁技
术体系，作者进行了两年的研究，现对中国石竹品种
Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ完善的组培快繁技术体系进行报道。
１ 材料与方法
１．１材料
中国 石 竹 品 种 Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ（Ｄｉａｎｔｈｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）的种子引自荷兰，由四平市林业科学研究
院提供。室内试验于２００９～２０１１年在吉林师范大
学生命科学学院组培室进行。
１．２方法
１．２．１材料表面消毒处理 取Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ
种子，置流水冲洗数次，用洁净滤纸吸干表面水分，
７０％（Ｖ／Ｖ）乙醇浸泡３０ｓ，用无菌水冲洗４～５次后
转入质量百分比为０．１％的升汞（含 Ｔｗｅｅｎ－２０数
滴）中浸泡１０ｍｉｎ，用无菌水冲洗４～５次去除升汞
与乙醇残留。
１．２．２初代培养 经过表面消毒的种子接入 ＭＳ与
１／２ＭＳ两种基本培养基中进行初代培养，及时去除
污染的外植体材料。如培养基中添加ＧＡ３，ＧＡ３ 经
过滤除菌后在无菌条件下加入到温热培养基中。培
养时间约为３０ｄ，比较培养基种类与ＧＡ３ 对种子萌
发与无菌苗生长的影响（表１）。
１．２．３增殖培养 取初代培养中获得的无菌苗，切
分成２ｃｍ左右的茎段，接入附加不同浓度６－ＢＡ与
ＮＡＡ的 ＭＳ培养基中（表２），比较植物生长物质浓
度配比对中国石竹芽增殖的影响。
１．２．４琼脂、蔗糖浓度对玻璃化苗发生率的影响
比较培养基中不同琼脂、庶糖浓度对玻璃化苗发生
率的影响（表３）。
１．２．５生根培养 基本培养基选用１／２ＭＳ，添加不
同质量浓度ＮＡＡ、ＩＢＡ进行生根诱导培养，比较不
同浓度ＮＡＡ、ＩＢＡ对试管苗生根的影响（表４）。
１．２．６培养条件 以上培养基ｐＨ 为５．８～６．０，在
１．２ｋｇ／ｃｍ２ 压力下高温灭菌２０ｍｉｎ。接种后置于
培养温度（２５±２）℃，光照强度为１ ５００～２ ０００ｌｘ，
每天光照１２ｈ的组培室条件下进行培养。
１．２．７统计分析 以上试验重复３次，每次重复１０瓶
以上，实验结果为３次重复的平均值。采用统计软件
ＳＡＳ８．２中的ＧＬＭ过程进行差异显著性分析。结果
如为百分数，经反正弦转换后进行统计分析。
２ 结果与分析
２．１培养基种类与ＧＡ３ 对中国石竹种子萌发与无菌
苗生长的影响
由表１可见，Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ种子在这四种培
养基中萌发率均较高，最低也可达７０％，其中，采用
１／２ＭＳ培养基的两个处理其种子萌发率显著高于
采用 ＭＳ培养基的两个处理（Ｐ＜０．０５）。采用相同
培养的处理相比较，ＧＡ３ 的加入没有显著提高种子
萌发率（Ｐ＞０．０５）。接种于４种培养基中的无菌苗
高度存在一定的差异，采用 ＭＳ培养基的两个处理
其无菌苗高度显著高于采用１／２ＭＳ培养基的两个
处理（Ｐ＜０．０５）。采用相同培养的处理相比较，
ＧＡ３ 的加入对无菌苗高度也无显著影响（Ｐ＞
０．０５）。Ｄｉａｎａ Ｆ１Ｗｈｉｔｅ接种后３０ｄ时，无菌苗叶片
数均可达２０片以上，不同处理相比较，无菌苗叶片
数以１／２ＭＳ＋ＧＡ３ 和１／２ＭＳ为最高。种子萌发
后无菌苗的生长情况如图１：Ａ所示。
２．２植物生长物质浓度配比对中国石竹芽增殖的影响
取上述无菌苗，切分为２ｃｍ左右的茎段，置于
培养基 ＭＳ＋３０ｇ蔗糖＋６ｇ琼脂中进行培养，光照
强度为１ ０００～１ ５００ｌｘ，培养周期为３０ｄ。然后取
２３５ 广 西 植 物 ３２卷
试管苗再切分为２ｃｍ左右的茎段进行培养，３轮循
环培养后，获得大量可用于增殖培养的试管苗（图
１：Ｂ）。为进一步提高繁殖效率，以２ｃｍ左右的试
管苗茎段为外植体，采用 ＭＳ为基本培养基，通过添
加不同浓度的６－ＢＡ与ＮＡＡ，组成５种诱芽培养基
配方，芽诱导的结果如表２所示。随着６－ＢＡ浓度
的升高和ＮＡＡ浓度的下降，出芽率、单个外植体出
芽数、玻璃化苗发生率均呈逐渐上升趋势。从出芽
率和单个外植体出芽数来看，６－ＢＡ浓度大于或等于
３．０ｍｇ／Ｌ的３个处理出芽率明显高于６－ＢＡ浓度
小于３．０ｍｇ／Ｌ的２个处理；从玻璃化苗发生率来
看，６－ＢＡ浓度超过３．０ｍｇ／Ｌ后，玻璃化苗发生率
迅速上升。综上所述，在本研究的５个处理中，ＭＳ
＋６－ＢＡ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．３ｍｇ／Ｌ对于芽诱导比
较适 宜，但 玻 璃 化 苗 发 生 率 仍 然 偏 高，达 到
２６．６７％。玻璃化苗的大量存在大幅降低了 Ｄｉａｎａ
Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ组培快繁的效率（图１：Ｃ），因此，有必要采
取措施降低玻璃化苗发生率。
表１ 培养基种类与ＧＡ３对Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ种子萌发与无菌苗生长的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｔｙｐｅ ａｎｄ ＧＡ３ｏｎ ｓｅｅｄ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｅｒｉｌｅ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
培养基
Ｍｅｄｉｕｍ
ＧＡ３ 浓度
ＧＡ３ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
外植体数目
Ｎｏ．ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ
种子萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｅｅｄ（％）
无菌苗高度
Ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ｓｔｅｒｉｌｅ
ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ（ｃｍ）
无菌苗叶片数
Ｌｅａｆ Ｎｏ．ｏｆ
ｓｔｅｒｉｌｅ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ
ＭＳ ０．２ ３０ ７３．３３ｂ ７．７２ａ ２３．４ｂ
ＭＳ ０ ３０ ７０．００ｂ ７．３７ａｂ ２２．６ｂ
１／２ＭＳ ０．２ ３０ ８６．６７ａ ６．８３ｂ ２４．６ａｂ
１／２ＭＳ ０ ３０ ８３．３３ａ ６．９９ｂ ２６．７ａ
注：以上培养基含琼脂６ｇ／Ｌ，蔗糖２５ｇ／Ｌ。同列数据后不同字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。下同。
Ｎｏｔｅ：６ｇ／Ｌ ａｇａｒ ａｎｄ ２５ｇ／Ｌ ｓｕｃｒｏｓｅ ｗｅｒｅ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｂｏｖｅ．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｅｔｔｅｒ ｗｉｔｈｉｎ ａ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｔ ０．０５ｌｅｖｅｌｓ．
Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
表２ 植物生长物质浓度配比对中国石竹芽增殖的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒａｔｉｏ ｏｎ ｂｕｄｓ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
６－ＢＡ浓度
６－ＢＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ浓度
ＮＡＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
外植体数目
Ｎｏ．ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔ
出芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｉｏ（％）
单个外植体出芽数
Ｂｕｄｓ Ｎｏ．
ｐｅｒ ｅｘｐｌａｎｔ
玻璃化苗发生率
Ｒａｔｉｏ ｏｆ ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ（％）
５．０ ０．１ ３９ ９２．３１ａ ７．９ａ ５３．８５ａ
４．０ ０．２ ３２ ９０．６３ａ ７．４ａｂ ３７．５０ｂ
３．０ ０．３ ３０ ８６．６７ａ ６．９ｂｃ ２６．６７ｃ
２．０ ０．４ ２７ ７０．３７ｂ ６．４ｃ ２２．２２ｄ
１．０ ０．５ ３６ ６３．８９ｂ ５．２ｄ １９．４４ｄ
表３ 琼脂、蔗糖含量对中国石竹玻璃化苗发生率、出芽率和单个外植体出芽数的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａｇａｒ ａｎｄ ｓｕｃｒｏｓｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｎ ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｂｕｄｓ Ｎｏ．ｏｆ Ｄ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ
光照强度
Ｌｉｇｈｔ
ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（ｌｘ）
琼脂浓度
Ａｇａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｇ／Ｌ）
蔗糖浓度 （ｇ／Ｌ）
Ｓｕｃｒｏｓｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
外植体数目
Ｎｏ．ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ
玻璃化苗发生率
Ｒａｔｉｏ ｏｆ ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ（％）
出芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｉｏ（％）
单个外植体出芽数
Ｂｕｄｓ Ｎｏ．
ｐｅｒ ｅｘｐｌａｎｔ
１ ５００ ７ ３０ ３０ ２６．６７ａ ８６．６７ｂｃ ６．９ｃｄ
２ ０００ ７ ３０ ３０ １６．６７ｂ ９０．００ａｂ ８．３ａ
２ ０００ ８ ３０ ３０ １０．００ｃ ８６．６７ｂｃ ７．５ｂ
２ ０００ ９ ３０ ３０ １０．００ｃ ８０．００ｃｄ ６．４ｄｅ
２ ０００ ７ ４０ ３０ ６．６７ｄ ９３．３３ａ ８．５ａ
２ ０００ ８ ４０ ３０ ３．３３ｅ ９０．００ａｂ ７．２ｂｃ
２ ０００ ９ ４０ ３０ ３．３３ｅ ８３．３３ｂｃ ６．２ｅ
２ ０００ ７ ５０ ３０ ６．６７ｄ ７３．３３ｄｅ ６．４ｄｅ
２ ０００ ８ ５０ ３０ ３．３３ｅ ６６．６７ｅｆ ５．３ｆ
２ ０００ ９ ５０ ２８ ３．５７ｅ ５７．１４ｆ ４．７ｇ
注：以上培养基含６－ＢＡ ｍｇ／Ｌ ３．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ ０．３ｍｇ／Ｌ。
Ｎｏｔｅ：３．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｍｇ ａｎｄ ０．３ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ ｗｅｒｅ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ｉｎ ｍｅｄｉｕｍ ａｂｏｖｅ．
３３５４期 程云清等：中国石竹离体快繁与试管苗玻璃化研究
表４ 不同浓度的ＮＡＡ与ＩＢＡ对中国石竹组培苗生根的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＮＡＡ ａｎｄ ＩＢＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ Ｄ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
植物生长物质类型
Ｔｙｐｅ ｏｆ ｐｌａｎｔ
ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
外植体数目
Ｎｏ．ｏｆ ｅｘｐｌａｎｔ
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｉｏ（％）
平均根条数
Ａｖｅｒａｇｅ ｒｏｏｔ
Ｎｏ．ｐｅｒ ｐｌａｎｔｌｅｔ
平均根长度
Ａｖｅｒａｇｅ ｒｏｏｔ
ｌｅｎｇｔｈ（ｃｍ）
ＮＡＡ ２．０ ３０ ９０．００ｂ ２２．４ｂ ２．５ｄ
１．０ ３０ ９３．３３ｂ １７．２ｃ ２．３ｄ
０．５ ３０ ７３．３３ｃ ９．８ｅ １．７ｅ
ＩＢＡ ２．０ ３０ １００．００ａ ２３．６ａｂ ３．４ｃ
１．０ ３０ １００．００ａ ２４．７ａ ４．７ａ
０．５ ３０ ９３．３３ｂ １２．９ｄ ４．２ｂ
图１ 中国石竹组培快繁体系建立过程 Ａ．种子萌发形成的无菌苗；Ｂ．继代后的无菌苗；Ｃ．玻璃化苗；Ｄ．增殖培养中的试管苗；
Ｅ．用于生根的健壮试管苗；Ｆ．试管苗生根。
Ｆｉｇ．１ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｄ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ａ．Ｓｔｅｒｉｌｅ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ ｆｒｏｍ ａ ｓｅｅｄ；Ｂ．Ｓｔｅｒｉｌｅ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ
ａｆｔｅｒ ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ；Ｃ．Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ；Ｄ．Ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ｄｕｒｉｎｇ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ；Ｅ．Ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ｂｅｆｏｒｅ ｒｏｏｔｉｎｇ；Ｆ．Ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔ ａｆｔｅｒ ｒｏｏｔｉｎｇ．
２．３琼脂、蔗糖含量对中国石竹玻璃化苗发生率、出
芽率和单个外植体出芽数的影响
为降低玻璃化苗发生率，本研究将光照强度增
加至２ ０００ｌｘ，在此光照条件下，检测培养基中琼
脂、蔗糖浓度增加后对玻璃化苗发生率、出芽率和单
个外植体出芽数等指标的影响，结果如表３所示。
与采用１ ５００ｌｘ光照条件的处理相比较，２ ０００ｌｘ条
件下玻璃化苗发生率下降了１０％。总的看来，２ ０００
ｌｘ光照强度、相同蔗糖浓度条件下，随着琼脂浓度
的增加，玻璃化苗发生率下降，同时，出芽率与单个
外植体出芽数也随之下降；２ ０００ｌｘ光照、相同琼脂
浓度条件下，随着蔗糖浓度的增加，玻璃化苗发生率
下降，出芽率与单个外植体出芽数也随之下降。因
此，适当增加琼脂浓度与蔗糖浓度对于降低玻璃化
苗发生率均是有效的。在本研究中，琼脂浓度如超
过８ｇ／Ｌ，或蔗糖浓度超过４０ｇ／Ｌ，继续增加琼脂或
蔗糖浓度不能降低玻璃化苗发生率，而出芽率和单
个外植体出芽数则呈继续下降趋势。在本研究的
１０个处理中，琼脂浓度与蔗糖浓度分别以８ｇ／Ｌ和
４０ｇ／Ｌ的处理玻璃化苗发生率较低，仅３．３３％，出
芽率和单个外植体出芽数分别可以达到９０％和７．２
个，培养３０ｄ后，增殖效率高，试管苗的生长健壮，
如图１：Ｄ所示。
２．４不同浓度的ＮＡＡ与ＩＢＡ对中国石竹组培苗生
根的影响
诱导获得的芽体如长度小于３ｃｍ，在 ＭＳ＋６－
ＢＡ ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．３ｍｇ／Ｌ＋琼脂８ｇ／Ｌ＋蔗
糖４０ｇ／Ｌ的培养基上继代１次，继代后的试管苗生
长健壮。继代培养周期为２０ｄ，试管苗长度一般可
达５ｃｍ（图１：Ｅ）。取长度５ｃｍ以上，叶片数大于
４３５ 广 西 植 物 ３２卷
２０的试管苗用于生根培养。基本培养基采用１／２
ＭＳ，培养基中的琼脂与蔗糖浓度分别为８ｇ／Ｌ和
４０ｇ／Ｌ，附加不同种类与浓度的植物生长物质用于
生根诱导，培养４～７ｄ后开始在基部形成白色的根
须。由表４可见，ＮＡＡ与ＩＢＡ诱导Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ
生根的能力明显不同，采用ＩＢＡ进行生根诱导的３
个处理其生根率显著高于相同浓度的ＮＡＡ处理（Ｐ
＜０．０５）。使用１／２ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ培养基的
处理试管苗生根率可达１００％，其生根数目与平均
根长度也高于其它处理，根系的生长十分旺盛（图
１：Ｆ）。因此，Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ的生根诱导以１／２ＭＳ
＋１．０ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋琼脂８ｇ／Ｌ＋蔗糖４０ｇ／Ｌ为宜。
２．５中国石竹组培苗的移栽
健壮的生根苗可移栽至育苗温室进行栽培。移
栽时将组培瓶移入温室放置３～５ｄ，然后开盖继续
炼苗２～３ｄ。栽培土壤需要消毒，每１００ｋｇ土施
５０％的多菌灵粉剂５克，拌土后，覆盖塑料薄膜３～
５ｄ。移栽时，用镊子取出小苗并洗净根部琼脂，置
于５００ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ溶液中浸泡１０ｍｉｎ，移栽于消毒
后的腐殖土中，浇透水，并加盖透光塑料膜保湿。每
天检查幼苗存活情况，每２天揭膜通风１次，每次通
风时间为３０ｍｉｎ，２周后完全揭开塑料膜。此时，组
培苗有较多新根发生，成活率在９５％以上。
３ 结论与讨论
石竹科植物种子有休眠的特征（Ｖａｎｄｅｌｏｏｋ等，
２００８），因此，以种子为初始培养材料进行石竹科植
物的组培快繁研究需要考虑种子的休眠问题。ＧＡ３
被证实对许多种子打破休眠十分有效（Ｗｉｌｉａｍ等，
２００６），在本研究中，Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ种子在４种种
子萌发培养基中萌发率最低也可达７０％，种子播种
于１／２ＭＳ培养基中萌发率可达８３．３３％，播种后
３０ｄ，无菌苗高度可达６．９９ｃｍ，叶片数达２６．７，长
势良好。ＧＡ３ 是一种热敏性物质，不耐高温灭菌，
需要经过过滤除菌后加入到温热培养基中，这明显
增加了实际操作的复杂性。然而，培养基中加入
ＧＡ３ 没有显著提高种子的萌发率（Ｐ＞０．０５）（表
１），在本研究中，Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ种子在培养基中的
萌发似乎无需ＧＡ３ 处理来打破其休眠。强休眠水
稻品种４６２８种子内源激素赤霉素（ＧＡ）等含量低于
休眠性差品种９９６，这被认为与两者休眠期差异相
关（张桂莲等，２０１１）。本研究中ＧＡ３ 处理没有显著
提高种子的萌发率可能与Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ种子具浅
休眠的特征或种子在萌发前已经越过休眠期有关。
综上，在本研究中Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ种子萌发培养基
采用１／２ＭＳ较为适宜。
在本研究中，Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ试管苗生长速度
快，在培养基中播种后３０ｄ，试管苗高度在６．５ｃｍ
以上（表１；图１：Ａ）。Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ试管苗存在玻
璃化苗比例偏高的问题，最高达５３．８５％（表２）；从
形态上看，玻璃化的Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ试管苗高大细
弱，许多叶片白化呈水浸状（图１：Ｃ）。６－ＢＡ的浓度
与玻璃化苗发生率呈正相关关系（余彭娜等，２００９），
本研究玻璃化苗发生率随着６－ＢＡ浓度的增加而加
大，考虑到外植体出芽率与单个外植体出芽的数量，
６－ＢＡ ３．０ｍｇ／Ｌ和 ＮＡＡ ０．３ｍｇ／Ｌ的组合为最优，
其出芽率、单个外植体出芽数保持在８６．６７％和６．９
个，但玻璃化苗发生率仍达到２６．６７％（表２）。光照
强度、琼脂和蔗糖浓度与试管苗的玻璃化发生率呈
负相关关系（Ｔｓａｙ等，１９９８），考虑到光照强度的增
加将大幅增加试管苗生产过程中的成本，因此，本研
究只将光照强度提高至２ ０００ｌｘ，主要通过增加琼
脂与蔗糖用量的方法进一步降低玻璃化苗比例，结
果表明，培养基中的琼脂浓度与蔗糖浓度分别增加
至８ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ时，可有效降低玻璃化苗发生
率，在此条件下玻璃化苗发生率仅３．３３％，出芽率
和单个外植体出芽数分别达到９０％和７．２个（表
３），培养３０ｄ后，试管苗增殖效率高，试管苗的生长
健壮（图１：Ｄ）。Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ试管苗的生根以１／
２ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ＋琼脂８ｇ／Ｌ＋蔗糖４０ｇ／Ｌ为
宜，在此培养基中，试管苗生根可达１００％（表４），根
须数量多而长（图１：Ｆ），有利于试管苗向土壤中移
栽。本研究成功建立了中国石竹品种 Ｄｉａｎａ Ｆ１
Ｗｈｉｔｅ的组培快繁技术体系，并较好解决了快繁过
程中试管苗高速生长导致的玻璃化问题，其结果为
Ｄｉａｎａ Ｆ１ Ｗｈｉｔｅ试管苗的生产提供科学依据。
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９－１２
（上接第５３５页Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｆｒｏｍ ｐａｇｅ ５３５）
ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ａｎｄ ｓｉｌｖｅｒ ｎｉｔｒａｔｅ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉ－
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