全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 30(5)：707— 709 2O1O年 9月
胶束电动毛细管色谱法测定红丝线
提取物 中紫蓝素的含量
李 娟 ．谢运 昌 ，蒋小华
( 毳广西植物研究所，广西桂林541006)
摘 要：建立 了胶束电动毛细管 电泳色谱法(MECC)测定红丝线提取物中紫蓝素的含量的方法。毛细管柱内
径 75 I．KI]，长 50．2 Cn]：运行电压 25 kV，检测波长 585 nm，温度 25℃ ；缓冲液为 25 mmol／L，p～CD 10 mmol／L，
硼酸盐一20 乙腈(pH值 8．O)；进样方式 ：压力进样，进样时间 5 S。结果表明紫蓝素在 1O～100 txmol／L浓度
范围内具有 良好的线性关系(r一0．9995)，回收率为 95．3Ko～103．2 。该方法快速 、简便、并且较为准确，适
用于测定红丝线提取物中紫蓝索的含量。
关键词 ：胶束电动毛细管电泳色谱法 ；紫蓝素；红丝线提取物
中图分类号 ：Q946 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3142(2010)05—0707-03
1r、 ● 』● ■● ●l ● J ● 』 n Detern1lllatl0n 0芰zianlne cOntentS in extracts Ot
Perish’ophe baphica by Micellar Eletrokinetic
Capillary Chromatography(MECC)
LI Juan，XIE Yun-Chang ，JIANG Xiao～Hua
(Guang．ri Institute of BoZany．Guang．：-i Zhu．~TzK 4ulonoenou Region and the Chinese Academy of Sciences，Guilin 541006，China)
Abstract：The method of MECC was established tO determine zilanine contents in extracts of P．baphica．The
capillary column was 5O．2 cm long and 75 lira in internal diameter；the operation voltage was 25 kV，testwave—
length 585 nrrl，column temperature 25。C；tile mobile buffer was 25 mmol／L boric acid一20 acetonitrile(pH
8．O)with 10 mmol／I G—CD；the sampling was conducted by pressure for 5 S．The results showed that the line—
ar range of determination for zilanine was 10～ 100／~mol／L(r一 0．9995)．The average recovery rate was
95．3 一 103．2 ．The method was fast，simple，convenient，comparatively accurate，and could be used to de—
terminate zilanine contents in extract of尸．baphica．
Key words：MECC；Zilanine；extract of Peristrophe baphica
红丝线 (Peristroph baphica)，又名红兰草、紫
蓝，山蓝，观音草等，为爵床科观音草属植物(中国科
学院中国植物志编辑委员会 ，2002)。据文献 记载 ，
红丝线药用具有化瘀 、活血 、止血 、解 毒、化痰、消肿
等功效，用于治疗咳血 、肺热咳嗽 、尿路感染、跌打肿
痛等症(国家中医药管理局中华草本编委会 ，1999)。
紫蓝素为原创 自主知识产权化合物，是新的氨基酸
化合物，分子式为 Cl H 08·3H O，分子量 457，
含氨基酸、酚、酰胺、醌类基 团，具有很强的抗氧化 、
抑制蛋白酪氨酸酯酶、抗糖尿病、抗乙型肝炎病毒等
作用(谢运昌等，2003，2O05)。高效毛细管电泳以高
压直流电场为驱动力，以毛细管作分离通道，依据样
收 稿 日期 ：2009—08 2 7 修 回 日期 ：20l0-Oj一0．5
基金项 目：国家科技攻关计划“西部开发”重大项 目(2005BA901A10)；广西科技计划项目(051120o123A3)；广西植物研究所基本业务费(桂植业
09023)rSupported by National Key Technologies Research and Development Program of China(2005BAg01AlO)；the Project of Science and Tech—
nology of Guangxi(0511200123A3)；the Proieet of Guangxi Institute of Botany(09023)J
作者简介：李娟(1982一)，女 ．湖南湘乡人，助理研究员 ，从事天然药物研究。
通讯作者(Author for c0rrespondence，E-mail：yue0 J8@163．corn)
708 广 西 植 物 3O卷
品之间电离度和分配行为上 的差 异而实现分离 ，具
有高效、快速、样品用量少等优点 ，与传统的高效液
相色谱分析法相 比，它进样体积小 (陈义 ，2000)、用
时短，而且不会污染柱，在中药有效成分分析中已得
到了广泛应用 。本文探索应用 MECC法测定红丝
线提取物中紫蓝素的含量 ，该方法简便 、快速、准确 、
重复性好 ，为制定红丝线提取物 的质量标准提供 了
可靠的依据 。
1 仪器与材料
高 效 毛 细 管 电 泳 仪 Beckman Coulter P／
ACETM MDQ Capillary E1ectrophoresis System，
配有二极管陈列检测器。熔融石英毛细管(内径 75
m，总长度 50．2 cm，有效长度 40 cm，河北永年光
学纤维厂生产)；数据处理软件 系统 ：32karat 5．0。
试剂：乙腈为色谱纯(美国)，水为超纯水(自制)，其
它试剂均为分析纯。红丝线 (P．baphica)栽培于广
西植物研究所 ，经韦发南研究员鉴定。红丝线提取
物用新鲜的红丝线样品，采用热水提取、反复上大孔
树脂柱、加酸沉淀、溶剂洗涤、干燥的方法制备(谢运
昌等 ，2005)。紫蓝素对照品为本实验室从红丝线中
分离得到并经光谱数据分析和理化性质测定鉴定结
构(纯度>99％)。
2 方法与结果
2．1 MECC分析条件
分析条件．毛细管柱为无涂层熔融石英毛细管，
75／~m(ID)×50．2 cm。背景缓 冲液：25 mmol／L，／3一
CD 10 mmol／L，硼酸盐一2O 乙腈 (pH值 8．0)。进
样方式 ：压力进样 ，进样时间 5 S。运行电压 25 kV，
检测波长 585 nm，温度 25℃。
毛细 管 冲洗 方 法 ：新 毛 细 管 在 使 用 前 用 l
mmol／L NaOH 冲洗 15 min，然后依次用实验用水
和背景缓冲液冲洗 10 min。每 日开始工作前用 0．1
mmol／L NaOH冲洗毛细管柱 5 min，然后分别用水
和背景缓冲液冲洗 10 rain。每次分析间隔，用背景
缓冲液冲洗 5 min。在该 色谱条件下 ，紫蓝素对 照
品和紫蓝素样品的色谱图见图 1。
2．2供试品的制备
精密称 取经 真空 干燥 的红 丝线 提 取 物细 粉
4O．3 mg，以 0．01 mol／L碳 酸氢铵水 溶液超声 溶
解 ，过滤，滤液置于 500 mL容量瓶 中，用水稀释至
刻度再精密量取 10．0 mL，置 100 mL容量瓶 中，加
水稀释至刻度 ，取样过微孔滤膜。
图 1 红丝线提取物中紫蓝素的 MECC分析
Fig．1 MECC analysis of zilanine in extract of P．baphica
A．紫蓝素Zilanine；B．红丝线提取物Extract of P．baphica
2．3线性关系考察
精 密称取经 真空 干燥 的紫蓝 素对 照品 4O．3
mg，置于 500 mL容量瓶中，用 0．01 mol／L碳酸氢
铵水溶液超声溶解并用水稀释至刻度。此溶液质量
浓度为 100 umol／L溶液。以此溶液作为母液，配
制浓度为 100，80，6O，40，20，10／~mol／L对照 品溶
液。微孔滤膜过滤，取滤液按上述色谱条件进行测
定。以峰面积y对进样质量浓度X(umol／L)绘制
标准 曲线 。计 算 得 回归 方 程 为 ：Y一 808，4X+
289．05，相关系数 ：r一0．9995，结果表明：紫蓝素在
1O～100 umol／L范围内具有 良好的线性关系。
2．4精密度试验
取 40／~mol／L的对照品溶液，连续进样 6次，测
定峰面积积分值 ，代人回归方程，计算紫蓝素含量，
考察仪器精密度。结果表明仪器精密度良好，其
RSD为 ：2．9 (”一6)。
2．5重现性试验
取紫蓝素样品，按“2．2”项方法制备后 ，在上述
色谱条件下进行分析 ，6次平行实验 ，峰面积分别
为 ：48796，51136，48613，48310，50207，52042，其
RSD值为 3．0 ，表明样品处理过程和测定方法均
有良好的重现性。
5期 李娟等：胶束电动毛细管色谱法测定红丝线提取物中紫蓝素的含量 709
2．6加样 回收实验
在已知紫蓝素含量的红丝线提取物溶液 中定量
加入标准品溶液，按前述供试 品处理方法制备样 品
溶液 ，测定 3份，测定结果见表 1。
表 1 加样 回收率试验结果 ( 一3)
Table 1 Recovery of the MECC determination
2．7稳定性试验
精密吸取紫蓝素对 照品溶液 ，每 隔 2 h进样 测
定 ，结果表明对照品溶液在 12 h内稳定 。RSD 为
3．5 9／6。
2．8最低检测限
在选定色谱条件下 ，取上述对照品贮备液，逐步
稀释 ，进样，直至信噪 比 S／N≥3时 ，此时进样量即
为最低检测限。紫蓝素最低检测限为 0．5／~mol／L。
3 结果
取3批红丝线提取物供试品按上述色谱条件进
行分析 ，记 录色谱图(图 1)，计算紫蓝素 的含量 (表
2)。
表 2 红丝线提取物中紫蓝素的含量测定结果
Table 2 Content of zilanine in extract of
Peristrophe baphica (一 3)
4 讨论
我们也曾采用 HPLC法测定红丝线提取物中
紫蓝素的含量(蒋小华等，2007)，但高效毛细管电泳
具有分离效率高 ，样品预处理简单 ，分析时间短及适
用范围广等优点 ，受到广大分析工作者的青睐，在生
命科学、药物研究等领域中的应用 日趋广泛(Elg—
stone等，2001)。与 HPLC相 比，毛细管 电泳具有
成本低 ，只需少量 (几毫升)流动相和价格低廉的石
英毛细管；对环境污染小 ；样 品少 ，只需 nL级的进
样量 ；另外 ，结合毛细管电泳在样品浓缩方面独特的
优势 ，采用适当的样品浓缩方法 ，可以大大的提高检
测的灵敏度 ，为紫蓝 素在体 内的药代动力学研究等
提供了良好的分析方法。
实验 中先后采用毛细管区带电泳法和胶束电动
毛细管电泳色谱法测定紫蓝 素含量 ，结果表明胶束
电动毛细管 电泳色谱法灵 敏度更高 ，重现线更好 。
同时我们对表面活性剂 SDS，Brij，}3一CD等进行了平
行对比实验，以 —CD的峰形更好，因此我们选择 p—
CD为添加剂的胶束电动毛细管电泳色谱法。
本试验用二极管阵列检测器对紫蓝素色谱峰在
200~600 niTl范 围内进行光谱扫描 ，在波长 585 nm
处不但响应值高，而且检测专一性高，信噪比最高，
故选择 585 lq_m作 为检测波长。同时 ，我们采用 了
硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液作为电
解缓冲液，结果表明硼砂的检测效果更好。在确定
使用硼砂盐缓冲液后，对其浓度、pH值、运行电压、
温度以及有机改性剂的含量等参数进行了考察，从
而确定最终的电泳条件 ，待测组分出峰时间早，峰形
最佳 ，灵敏度最高，未见其他杂峰。
参考文献 ：
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