全 文 ：广 西 植 物 Guihaia 27(6)：958—960 2007年 11月
RP—HPLC测定红丝线提取物中紫蓝素的含量
蒋小华，谢运昌 ，黄永林
(； 篝 要广西植物研究所，广西桂林54106)
摘 要：建立了红丝线提取物中紫蓝素的测定方法。采用反相高效液相色谱法，色谱柱为 ZORBAX XDB—
C18(4．6 mm×150 mm，5 m)；流动相：V(乙腈)：v[75 mmol／L乙酸铵+0．5 mmol／L EGTA(pH7．O)1—8：
92；流速：1 mL／min；检测波长 590 am。紫蓝素的线性范围为2．5～50 mg／L(r一0．999 9)，回收率 97．9 ～
101．5 。该法简便、准确，重复性好，适用于测定红丝线提取物中紫蓝素的含量 。
关键词：高效液相色谱法；紫蓝素；红丝线提取物
中图分类号：Q946 文献标识码 ：A 文章编号：1000—3142(2007)06—0958—03
Ana1) n zilanine in extract Peristro phelySlS otZl t 0t
baphica by RP1．1iPD LC K
JIANG Xiao—HHa，XIE Yun-Chang ，HUANG Yong-Lin
(Guangxi Institute ofBotany，Cn~ngxiZhuangzu Autonomous Region and the ChineseAcademy of Sciences，Guilin 541006，CNna)
Abstract：The paper established a Rp-HPLC method for the determination of the content of zilanine in extract
of Peristrophe baphica．RP—HPLC was conducted on a ZORBAX XDB—C18(4．6 mm× 150 mm，5 m)with
CH3CN-[CH3COONH4(75 mmol／L)+EGTA(O．5 mmol／L，pH=7．o)]=8：92；flow rate 1．0 mL／min，the
detection wavelength was set at 590 am．The linear range of zilanine was 2．5～50 mg／L(r一0．9999)．The re—
coveries were 97．9 ～ 101．5 ．The method is simple and accurate with good reproducibility，it is suitable／or
the determination of zilanine content in extract of P．baphica．
Key words：HPLC；zilanine；extract of Peristrophe baphica
红丝线(Peristrophe baphica)又名红兰草、野
靛青、紫蓝，为爵床科观音草属植物(中国科学院中
国植物志编辑委员会，2002)，草本，民间用于治疗糖
尿病、高血压等症，食品上已用于制作五色米饭，工
业生产红兰酒。据报道，红丝线提取物有降血压，降
血脂，保护心、肾功能的作用(吕俊华等，2004)。文
永新等(2003)对红丝线的加工方法进行了研究。本
课题组从红丝线中分离得紫蓝素，并于2003年申请
了“紫蓝素化合物、其制备方法及其用途”的专利，于
2005年获得国家专利权(谢运昌等，2005)。紫蓝素
有较强的抗乙型肝炎病毒、很强的抗氧化、抑制蛋白
酪氨酸酯酶、抗糖尿病作用。为将红丝线提取物开
发为新药，本文建立了高效液相色谱法测定红丝线
提取物中紫蓝素含量的方法。该方法操作简便、快
速、准确，适用于红丝线提取物的质量控制。
1 仪器与材料
Agilent—I100分析型高效液相色谱仪(配备二
极管阵列检测器、四元梯度泵、在线真空脱气机、
7725i手动进样器、HP化学工作站，Agilent公司)；
超纯水仪(Millipore公司)。超声仪。
收稿日期：2006—05一l2 修回日期 ：2007-01—25
基金项 目：国家自然科学基金(30360117)；广西自然科学基金(0342002-2)；国家科技攻关计划“西部开发”重大项目(20O5BA9O1A1O)；广西科技计划项目
(05112001—3A3)[Supported by the National Natural Science Foundation of c 1a(3036Ol17))Natural Science Foundation of Guangxi(0342002-2))National Key
Technologies Research and Development Program of China(2005BA901A1O)；the project of Science and Technology of Guangxi(05112001—3A3)]
作者简介：蒋小华(1977一)，女，广西临桂人，研究实习员，从事天然药物研究。
通讯作者(Author for c0rrespDndence，E-mail：yue018@163．com)
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6期 蒋小华等：RP—HPLC测定红丝线提取物中紫蓝素的含量 959
乙腈为色谱纯(美国)，水为超纯水(自制)，其它
试剂均为分析纯 。
红丝线(P．baphica)栽培 于广 西植物研究所 ，
经韦发南研究员鉴定 。红丝线提取物用新鲜 的红丝
线样品，采用热水提取 、反复上大孔树脂柱、加酸沉
淀、溶剂洗涤、干燥的方法制备(谢运昌等，2005)。
紫蓝素对照品为本实验室从红丝线中分离得到并经
光谱数据分析和理化性质测定鉴定结构 。
2 实验方法
2．I色谱条件
色谱柱 ：ZORBAX XDB—C18柱(4．6 mm×150
mm，5 m)；柱温：32℃；流动相：V(乙腈)：V[75
mmol／L乙酸铵+0．5 mmol／L EGTA(pH7．0)]一
8：92；流速 ：1 mL／min；三维光谱 扫描确定检测波
长 590 nm；进样量 ：2O p-L。定 量方法 ：外标 法。在
上述条件下对红丝线提取物中紫蓝素进行色谱分
析，紫蓝素色谱峰与其它组分达到了良好分离(Sny—
der等，1997)。
2．2供试品的制备
精密称取经磨细成粉末状的红丝线提取物样品
50．0 mg，以 0．01 mol／L碳酸氢铵水溶液超声溶
解，过滤，滤液置于 500 mL容量瓶中，用水稀释至
刻度再精密量取 10．0 mL，置 100 mL容量瓶中，加
水稀释至刻度 ，取样过微孔滤膜 。
2．3线性关 系考察
精密称取经磨细成粉末状 的紫蓝素对照 品
50．0 mg，置于 500 mL容量瓶中，用 0．01 mol／L碳
酸氢铵水溶液超声溶解并用水稀释至刻度。此溶液
A质量浓度为 100 mg／L溶液。以此溶液作为母
液，配制浓度为 5O，4O，3O，2O，1O，5，2．5 mg／L对照
品溶液。微孔滤膜过滤，取滤液按 上述色谱条件进
行测定 。以峰面积 Y对进样 质量浓度 X(mg／L)绘
制标准曲线。计算得回归方程为：Y=165．46X+
4．838，相关 系数 ：r一0．999 9，结果表 明：紫蓝素在
2．5～5O mg／L范围内具有良好的线性关系。
2．4精密度试验
精密称取红丝线提取物 50．0 mg于 500 mL容
量瓶中，用 0．01 mol／L碳酸氢铵水溶液超声溶解，
并用水稀释至刻度。精密量取此溶液 10．0 mL于
100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，取样过微孔滤
膜。按上述色谱条件进行测定。连续进样 6次，测
定峰面积积分值，代人回归方程，计算紫蓝素含量，
考察仪器精密度。结果表明仪器精密度良好。其
RSD为 ：2．5 o,4(n一6)。
2．5重复性试验
精密称取 5份红丝线提取物 50．0 mg，按“2．2”
项方法制备后，在上述色谱条件下进行分析，计算紫
蓝素含量，考察方法重复性，结果表明方法重复性良
好，其 RSD值为：1．6 (n一5)。
2．6加样回收实验
在 已知紫蓝素含量的红丝线提取物溶液中定量
加入标准品溶液，按前述供试品处理方法制备样品
溶液，测定 5份 ，测定结果见表 1。
表 1 回收率的测定
Table 1 Recovery of the HPLC determination(n一 3)
编号 黼 黻 加
y
值
、N
。
o
～
．
Concentra -
)
Added
( )
A
(
v era
)
ge
RS D
tion(mg／I (mg／L) (mg／L)
9．91
9．96
10．22
9．97
9．78
98．3
97．9
101．5 99．1 1．5
99．4
98．3
2．7稳定性试验
精密吸取紫蓝素对照品溶液，每隔 2 h进样测
定，进样量 20 L，结果表明对照品溶液在 24 h内稳
定 。RSD为 1．8 。
2。8最低 检测限及最低定量限
在选定色谱条件下，取上述对照品贮备液，逐步
稀释，进样，直至信噪比s／N≥3时，此时进样量即为
最低检测限，S／N=10时即为最低定量限。紫蓝素最
低检测限为0．01 mg／L，最低定量限为0．05 mg／L。
3 结果
取 8批红丝线提取物供试品按上述色谱条件进
行分析，记录色谱图(图 1)，计算紫蓝素的含量。含
量测定结果见表 2。
4 讨论
4．1流动相的选择
在实验过程中曾先后选用了水一甲醇、(乙酸铵
+EDTA)一甲醇 、(乙酸铵 +EGTA)一甲醇 、水 一
乙腈、乙酸水一乙腈、(乙酸铵+EDTA)一乙腈等溶
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96O 广 西 植 物 27卷
Z|lanine
^
J f
．
八 ． t
A
B
O 2 4 6 8 1O 1 2 14
Time(min)
图 1 红丝线提取物中紫蓝素的 HPLC分析
Fig．1 HPLC analysis of zilanine in extract
of Peristrophe baphica
A．紫蓝素；B．红丝线提取物。
A．Zilanine；B．Extract of P．ba．phica．
表 2 红丝线提取物中紫蓝素的含量测定结果
Table 2 Content of zilanine in extract of
Peristrophe baphica (n一3)
(上接第 943页 Continue from page 943)
无毒的。(2)肝损伤实验研究结果表明，黄根醇提物
对实验性小鼠肝损伤有显著的保护作用。在各肝损
伤实验中有低剂量组较好的趋势，分析其原有二：①
黄根含有一定量的蒽醌类化合物，而蒽醌类化合物
有致泻的作用，在实验中高剂量组含有的蒽醌类化
合物要高于低剂量组，因此致泻的作用也就要强于
低剂量组，结果导致高剂量组药物吸收减少。而低
剂量组因含有较少的蒽醌类化合物，致泻的作用就
明显减轻，反而低剂量组吸收程度要比高剂量组好，
因此出现了高剂量组药效低于低剂量组的情况。②
同时在以前的一些实验中也曾经报道过黄根具有轻
剂系统作为流动相对样品进行分析，结果最佳的流
动相为(75 mmol／L乙酸铵 +0．5 mmol／L EGTA)
一 乙腈(92：8)，样品峰与杂质峰分离度好，专属性
强，保留时间合适，峰形尖锐，对称性好。
4．2检测波长的选择
本试验用二极管阵列检测器对紫蓝素色谱峰在
200~600 nm范 围内进行光谱扫描，在波长 250 nm
及 590 nm处有最大吸收，但波长 590 nm处响应值
比波长 250 nm处的响应值大，在 590 nm处杂质峰
少，故选择 590 nm作为检测波长。
参考文献：
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