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Pharmacodynamics study of extracts from Superior 2 Folium Mori

特优2号桑叶不同提取物的药效学研究



全 文 :广 西 植 物 Guihaia 29(6):866—870 2009年 l1月
特优 2号桑叶不同提取物的药效学研究
蓝鸣生 ,陈 路,王 硕
(广西壮族自治区药用植物园,南宁 530023)
摘 要 :采用小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管通透性、大鼠足趾肿胀和四氧嘧啶致小 鼠高血糖等动物模型
对广西推广的高产桑叶品种‘特优 2号’桑叶的不同提取物开展药效学研究。结果表明:该桑叶醇提取物能明
显减轻动物的炎症反应(P<0.O1);水提物及醇提物能明显降低小 鼠由于四氧嘧啶引起的高血糖症 (P<
0.01),对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有一定的抑制作用;水提醇沉物对大肠杆菌有一定 的抑制作用。该文为
对特优 2号桑叶药效学实验的首次报道。
关键词 :特优 2号桑叶;抗炎;降血糖 ;抑菌
中图分类号:R946 文献标识码:A 文章编号:10o0—3142(2009)06—0866—05
Pharmacodynamics study 0f extracts
from Superior 2 Folium M ori
LAN Ming—Sheng ,CHEN Lu,、 NG Shuo
(GuangxiBotanical Garden ofMedicinal Plants,Nanning 530023,China)
Abstract:The pharmacodynamics of Superior 2 Foliun Mori(a high-yield Mori species popularizing in Guangxi)was
studied by using the models of mice swelling auricles,the penetrating ability of mice abdominal capilaries,the models of
weling digits of big mice,and the models of mice high blood glucose caused by aloxan.The results showed that the al—
eohol extract form the F Mori could obviously lighten the animal inflammation reactions(P< 0.01);the extractS of water
and alcohol could obviously lower down the mice high blood glucose caused by alloxan(P% 0.01),and restrain golden
yellow staphylococci,F,scherichia coli in certain extent;the extract of water extracting-alcohol precipitating could also re—
strain E.coli in certain extent.These pharmacodynamic experiments were the first report for Superior 2 F.Mpri.
Key words:Superior 2 Foliun Mori;anti-inflammation;hypoglycemic;restrain bacteria
桑叶为桑料植物桑(Morus alba)的叶,其药用
价值最早见于《神农本草经》,桑叶性寒,味苦,归肺、
肝经,具有祛风清热、凉血明 目等功效(徐爱良等,
2005)。现代化学研究表明:桑叶含有黄酮及黄酮苷
类;甾 类 成 分 如 微 量 的 p一谷 甾 醇、蛇 麻 脂 醇
(Lapeo1)、内消旋肌 醇(Myoinosito1)、昆虫变态激
素、牛膝甾醇 (Inokosterone)和蜕皮 甾酮 (Ecdyste-
rone),溶血素(Hemolysin),绿原酸 ;挥发性成分如
乙酸 、丙酸、丁酸、异丁酸 、戊酸 、异戊酸、水杨酸 甲
酯、愈创木酚(Guaiaco1)、酚(Pheno1)、邻苯甲酚、间
苯甲酚、丁香油酚(Eugeno1)等;氨基酸类如天门冬
氨酸、谷氨酸等 l7种氨基酸;降血压物质 一氨基丁
酸含量高达 226 mg/100g;维生素类如维生素 A、维
生 素 BJ、维 生 素 B2、烟 酸、维 生 素 c、视 黄 醇
(retine1)、胡萝 卜素及食物纤维等。糖类成分是蔗
糖 、果糖 、葡萄糖 (江苏新医学院,1997)。微量元素
铜 1O、锌 l6、硼 35、锰 270等都有一定含量(金丰秋
等 ,2000)。从桑叶 中分离 出 6种生物碱,即 DNJ、
N—M—I)NJ、GAL—DNJ,fagomine、DAB、calysteginB2
(Asano等,1994)。药理研究表明,桑叶对人体极为
安全(三、/矢正安 ,2002),且具有降血糖 (方晓等,
1999;陈摇君等,1996;李有业等,2000)、抗凝血(彭
延古等 ,2002)、降血 脂 、抗 动 脉粥样 硬 化 (王谦,
1997;Doi,2002)、抗炎(陈福君,1995)、延缓衰老(唐
收稿日期:2009—06—24 修回日期 :2009—10—20
基金项目;广西科技攻关项目(0718002—4—8)[SupFOrted by Key Teehnoloaes Research and Development Program of Guanxi(0718002~4 8)3
作者简介:蓝鸣生(1957一),男 ,广西宜州人,副主任药师,主要从事中药新产品开发和化学研究。
通讯作者(Author for correspondence,E—mail:lanmingsheng@126.corn)
6期 蓝呜生等 :特优 2号桑叶不同提取物的药效学研究 867
法娣,2000)、抑菌 (花蕾等,2007)、抗病毒 (Budhan
等,1993;Emmanuel等 ,1997)、抗肿瘤 (Kim,2000)
等多种治疗功能。特优 2号是广西推广的高产桑叶
品种。广西作为全 国最大的蚕桑生产基地和桑叶药
材生产基地,该品种桑叶将会在桑叶药材中占有重
要 比例。本文对该桑叶(下简称 ‘桑叶’)不同提取物
的抗炎、降血糖和抑菌等药理作用进行研究 ,以期为
进一步证实其药效性提供依据。
1 实验材料与方法
1.1药 物
桑叶醇提浸膏(每 l g相当于生药量 4.2 g)、水
提浸膏(每 1 g相当于生药量 2.96 g)、水提醇沉浸
膏(每 l g相当于生药量 l0.44 g),由广西药用植物
园制药厂提供 。阳性对 照药地塞米松 (浙江仙琚制
药股份有限公 司,批 号 071010)。阳性对照药盐酸
二甲双胍肠溶片(贵,kJ、I圣济堂制药有限公司,批号:
20070501)。四氧嘧啶(Fluka公司),角叉菜胶、金
黄色葡萄球菌 、大肠杆菌、乙型溶血性链球菌(中国
药品生物制品检定所提供)。
1.2动物
清洁级 KM小鼠,体重 l8~22 g,雄性,由广西
医科大学医学实验动物中心提供,实验动物生产许
可证 号 :SCXK 桂 2003—0003。清洁级 SD雄性 大
鼠,体重 llO~l40 g,由浙江省实验动物 中心提供 ,
实验动物生产许可证号:SCXK(浙)2003—0001。
1.3仪器与试剂
EL204万分之一克电子天平(梅特勒~托利多仪
器上 海有 限公 司)。Lambda35 UV Perkin Elmer
(美国珀金艾尔默公司),LG16-W 型高速离心机(北
京医用离心机厂)。PV一200足趾容积测量仪(成都
泰盟科技有限公司),血糖 GOD—PAP法检测试剂盒
(四川省迈克科技有限责任公司,批号 :0308091)。
1.4统计学处理
应用统计软件 SPSS1 1.0对所得实验数据进行
f一检验。
1.5实验方法
1.5.1抗炎作用 (1)抗炎作用有效提取物的筛选:
将雄性小鼠随机分为 5组,分别为空白对照组(生理
盐水)、阳性对照组(地塞米松 ,6 mg/kg)、桑叶水提
组 (40 g生药/kg)、桑叶醇提组 (40 g生药/kg)、桑
叶水提醇沉组(40 g生药/kg)。灌胃给药,1次/d,
给药容量为 2O mL/kg,连续 7 d。末次给药后 60
rain,每鼠以二甲苯 0.02 mL滴于右耳致炎 ,15 rain
后处死 ,沿耳廓基线剪下二耳。用 6 mlTl直径打孔
器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片,称重 ,以左
右耳重量差作为肿胀度。
(2)桑叶醇提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的
影响:将雄性小鼠随机分为 5组 ,分别为空白对照组
(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松,6 mg/kg)、桑
叶醇提物高 (40 g生药/kg)、中(2O g生药/kg)、低
(10 g生药/kg)三个剂量组。灌 胃给药,1次/d,给
药容量 为 20 mL/kg,连 续 7 d。末 次 给 药后 6O
rain,各 鼠以 0.02 mL二甲苯滴于右耳致炎,15 min
后处死 ,沿耳廓基线剪下二耳。用 6 mm 直径打孔
器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片,称重,以左
右耳重量差作为肿胀度。
(3)桑叶醇提物对醋酸致小 鼠腹腔毛细血管通
透性的影响:将雄性小鼠随机分为5组,分别为空白
对照组(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松,6 rag/
kg)、桑叶醇提物高(4O g生药/kg)、中(2O g生药/
kg)、低(10 g生药/kg)三个剂量组。灌胃给药,1次
/d,给药容量为 20 mL/kg,连续 7 d。末次给药后
60 rain,各鼠尾静脉注射 0.25 伊文斯兰 0.1 mE/
log,同时腹腔 注射 0.6 醋酸溶 液 0.1 mI /1Og。
l5 rain后处死 ,立即注入 6 mL生理盐水冲洗腹腔 ,
剪开 腹腔 ,滤 出腹腔 洗 出液,2 000 rpm 离 心 10
rain,取上清液于 590 nm处测定 OD值。
(4)桑叶醇提物对角叉菜胶致大 鼠足趾肿胀 的
影响 :取雄性大鼠 6O只,随机分为空白对照组(生理
盐水),阳性对照组(地塞米松 ,4.5 mg/kg),桑叶醇
提浸膏高剂量(28 g生药/kg)、中剂量(14 g生药/
kg)、低剂量(7 g生药/kg)三个剂量组。灌 胃给药,
1次/d,给药容量为 2O mL/kg,连续 7 d。末次给药
l h后 ,将 0.08 mL l 角叉菜胶注人大鼠右后足趾
皮下 ,用足趾容积测量仪分别测 量注射前 、注射后
1、2、3、4、5 h大 鼠足趾至踝关节容积,并用公式计
算其肿胀度(肿胀度 E( )一(Vt—Vn)/Vn×
100 ,其中Vn和 Vt分别代表用致炎剂前后足趾
容积值)。
1.5.2降血糖作用 (1)有效提取物的筛选 :取禁食
不禁水 24 h后的小鼠,随机分为正常对照组和造模
对照组。正常对照组腹 腔注射生理盐水,造模对照
组按 65 mg/kg体重腹腔注射四氧嘧啶,72 h后(禁
食不禁水 12 h)各鼠眼眶静脉丛取血测血糖值,选
868 广 西 植 物 29卷
择血糖值在 1O~33 mmol/L的小鼠为造模成功小
鼠,按血糖水平随机分为四氧嘧啶模型对照组,二甲
双胍阳性对照组(O.75 g/kg)、桑叶水提组(40 g生
药/kg)、桑叶醇提组(40 g生药/kg)、桑叶水提醇沉
组(40 g生药/kg)。灌 胃给药 ,1次/d,给药容量为
2o mL/kg,连续 7 d,正常对照组和模型对照组给同
容量生理盐水 。末次给药后 (禁食不禁水 12 h)6O
rain,于眼眶静脉丛取血,按血糖测定试剂盒操作测
定血糖值 ,筛选出桑叶的有效提取物 。
(2)对四氧嘧啶性高血糖小鼠血糖 的影响:取禁
食不禁水 24 h后的小鼠,随机分为正常对照组和造
模对照组。正常对照组腹腔注射生理盐水,造模对
照组按 65 mg/kg体重腹腔注射四氧嘧啶,72 h后
(禁食不禁水 l2 h)各鼠眼眶静脉丛取血测血糖值 ,
选择血糖值在 10~33 mmol/L的小鼠为造模成功
小鼠,按血糖水平随机分为四氧嘧啶模型对照组,二
甲双胍阳性对照组(0.75 g/kg)、桑叶水提物高 (40
g生药/kg)、中(20 g生药/kg)、低(10 g生药/kg)
三个剂量组、桑叶醇提物高(28 g生药/kg)、中(14 g
生药/kg)、低 (7 g生药/kg)三个 剂量组。灌 胃给
药,1次/d,给药容量为 2O mL/kg,连续 7 d,正常对
照组和模型对照组给同容量生理盐水 。末次给药后
(禁食不禁水 l2 h)6O rain,于跟眶静脉丛取血,按血
糖测定试剂盒操作测定血糖值,筛选 出桑叶有效提
取物的有效剂量。
1.5.3体外抑 茵实验 采用 固体培养基连续稀释
法,将 l3.5 mI 琼脂培养基分别 同 1.5 mL桑叶各
提取物稀释药物混合 ,倾注平皿 ,凝 固后接种金黄色
葡萄球菌、大肠杆菌置 37℃培养箱孵育 24 h后观
察,以最低药物浓度不长菌者作为该菌珠最低抑菌
浓度(MIC)。采用固体培养基连续稀释法,将 13.5
mL血琼脂培养基分别同 1.5 mL桑叶各提取物稀
释药物混合,倾注平皿,凝固后接种乙型溶血性链球
菌置 37℃培养箱孵育 24 h后观察 ,以最低药物浓
度不长菌者作为该菌珠最低抑菌浓度(MIC)。
2 结果与分析
2.1桑叶各提取物对耳廓肿胀度的影响
从表 l看出,小 鼠由二 甲苯诱导产生的耳廓肿
胀程度 ,从空白对照组的(0.0049±0.0023)g明显
降低为桑 叶醇提 组 的 (0.O012±0.0006)g(P<
0.01),证明桑叶醇提物能对抗炎症急性期 的渗出,
是桑叶抗炎的有效提取物。
表 l 桑叶各提取物对小鼠耳廓肿胀度的影响 ( ±s)
Table 1 Influence of the Folium Mori extracts
on mice swelling auricles
组别
Groups
动物数 剂量
No.of Dosage
animals(g /kg)
耳廓l】lI】胀度(g)
Swelling
aUrIcfes
空白对照组 Control 12
阳性 对照组 SD positive 12
桑叶水提组 Water extracts 12
桑叶醇提组 Ethanol extracts 12
桑 叶 水 提 醇 沉 组 Water 】2
extracted—alcohol precipi—
tated extractS
— — 0.0049_-4-0.O023
0.006 0.0030±0.O014
40 0.0053士0.O01 2
40 0.O01 2±0.0006
40 0.0074±0.O031
注:与空白对照组比较 P表 2 桑叶醇提物对耳廓肿胀度( ±S,n一15)和腹腔毛细血管通透性的影响( ±S,n一12)
Table 2 Influence of the folium mori ethanol extracts on mice swelling
auricles and penetrating ability of mice abdominal capillaries
2.2桑叶醇提物对耳廓肿胀度和腹腔毛细血管通透
性的影响
桑叶醇提物高、中剂量组分别使小鼠的耳廓肿
胀的程度由空白组的(0.0070±0.0037)g,降低到
(O.0041±0.0029)g,和(0.0028±0.0022)g,几乎
接近阳性对照药地塞米松 的水平,均可显著减轻二
甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的程度能对抗炎症急性期的
渗出(P低剂量组使醋酸致腹腔毛细血管通透性增加的作用
由空 白组的 0.2124±0.05800分别降低为 0.1429±
6期 蓝鸣生等:特优 2号桑叶不 同提取物的药效学研究 869
0.0205、0.1315±0.0460和 0.1650±0.03380,均有明
显抑制醋酸致腹腔毛细血管通透性增加 的作用 (P<
0.O5~O.01),提示均能对抗炎症急性期的渗出。
2.3桑叶醇提物对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的影响
根据表 3结果 ,桑叶醇提物高 、中、低剂量组于
末次给药后 1 h、2 h、3 h、4 h、5 h均有不同程度地
抑制角叉菜胶所致 大鼠足趾肿胀 的程度(P<0.05
~ 0.01),提示均能对抗炎症急性期的渗出。
2.4桑叶各部位对对四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的
影响
从表 4看出,桑叶水提物组及醇提物组使 由于
四氧嘧啶所致小鼠高血糖值从模型对照组的(14.65
±5.42)mmol/L分别降低至(6.51±4.25)mmol/
L和(8.43±3.10)mmol/L(PdO.05~0.0I),说明
这两类提取物能够明显降低 四氧嘧啶致小 鼠的血糖
升 高 。
2.5桑叶有效提取物对四氧嘧啶性高血糖小鼠血糖
的影响
表 5的统计结果证明 :桑叶水提物及醇提物高、
中、低剂量组均能明显抑制 四氧嘧啶所致小 鼠高血
糖(P< 0.05~0.01),能降低 四氧嘧啶所致小鼠血
糖的升高,而且降低血糖升高的作用强度与服用剂
量呈正相关的关系。
2.6桑叶各部位对体外抑菌作用的影响 .
从表 6结果说 明,桑叶水提取物对金黄色葡萄
球菌、大肠杆 菌有 一定 的抑 制作用 (MIC为 6.25
mg/mL),对乙型溶血性链球菌抑制作用极弱 ;桑叶
醇提取物对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌有一定的抑
制作用(MIC分别为 12.5、6.25 mg/mL),对乙型溶
血性链球菌抑制作用极弱 ;桑叶水提醇沉物对大肠
表 3 桑叶醇提物对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀的影响 ( 士S,n一12)
Table 3 Influence of the folium mori ethanol extracts on the big mice sweling feet caused by carrageenan
表 4 桑叶各提取物对对四氧嘧啶致高血糖小鼠血糖的影响 ( ±S,n一12)
Table 4 Influence of the folium mori ethanol extracts on mice high blood glucose caused by alloxan
杆菌有一定的抑制作用(MIC为 50 mg/mL),但对
金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌的抑菌作用都
很弱。
3 小结
通过本研究发现 ,特优 2号桑 叶醇提部位能 明
显减轻二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀程度、减少伊文
斯兰在腹腔的渗出、减轻角又菜胶引起的大鼠足趾
肿胀程度 ,为桑叶抗炎作用的有效提取物;桑叶水提
及醇提部位能明显减轻四氧嘧啶造模引起的小鼠高
血糖,为桑叶降血糖作用的有效提取物;水提及醇提
部位对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有一定的抑制作
用;水提醇沉部位对大肠杆菌有一定的抑制作用。
87O 广 西 植 物 29卷
空 白对照组 Blank Control
模型对照组 SHR—C
阳性对 照组 SD Positive
桑叶水提高剂量组 Water extracts high Do.
桑叶水提中剂量组 Water extracts middle Do.
桑叶水提低剂量组 Water extracts low Do.
桑叶醇提高剂量组 Ethanol extracts high Do.
桑I-P醇提中剂量组 Ethanol extracts Middle Do
桑叶醇提低剂量组 Ethanol extracts low Do.
0.75
40
2O
1O
40
2O
1O
3.37土 1.6
23.40士 6
23.65士 5
22.45± 6
21.07±5
22.31士 7
24.91士 6
22.O8士 7
22.2O士 6
5
75
62
44
98
O2
87
29
92
3.O1士2.26
13.97-t-7.71
0.91±1.09
5.96±3.27
7.074-3.87*
7.62± 5.41*
3.72土4.09
6.34士 5.63*
7.73± 5.5O*
表 6 桑叶各提取物对体外抑菌作用的影响 ( 士s)
Table 6 Influence of the folium mori extracts on
the outside—body antibacterial ability
组别
Groups
金黄色 大肠杆菌 乙型溶血
葡萄 MIC 性链球菌
球菌 (mg/m1)MIC(mg/mL)
M IC Esche- Beta Hemoly一
(mg/mI ) richia tic Strepto-
SA coil COCCUS
M IC MlC M lC
其上述作用机制有待进一步研究 。
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