全 文 ：收稿日期:2002-04-15
作者简介:胡凤祖 ,女 ,副研究员 , Tel:(0971)6132750.
通讯联系人:师治贤 ,研究员 , Tel:(0971)6132750.
基金项目:中国科学院 、中央组织部西部之光资助项目(9902001).
青藏高原龙胆科植物药用有效成分的高效液相色谱分析
胡凤祖 , 　宋娅莉 , 　刘　梅 , 　师治贤
(中国科学院西北高原生物研究所 , 青海 西宁 810001)
摘要:采用高效液相色谱法 , 对青藏高原上 9 种龙胆科植物中的 3 种有效成分齐墩果酸 、芒果甙和当药黄素进行了
分离和分析。所用色谱柱为 Supelco INC C18柱(150 mm×1.5 mm i.d., 5μm);在选定的色谱条件下每种成分在各
自的浓度范围内均具有较好的线性相关性。样品的加标回收率为 102.4%～ 106.7%, 相对标准偏差为 0.55%～
3.01%。
关键词:反相高效液相色谱;齐墩果酸;芒果甙;当药黄素;龙胆科
中图分类号:O658　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-8713(2003)01-0063-03
Analysis of Medicinal Bioactive Composition of Gentianaceae in Qinghai-
Tibet Plateau by High Performance Liquid Chromatography
HU Feng zu , SONG Yali , LIU Mei , SHI Zhixian
(Northwest Plateau Institute of Biology , The Chinese Academy of Sciences , Xining 810001 , China)
Abstract:Oleanolic acid , mangiferin and swertisin w ere important bioactive components in Gen-
tianaceae.The contents of these compounds in nine Gentianaceae plants found in Qinghai-Tibet
plateau w ere determined by reversed-phase high perfo rmance liquid chromatog raphy.Supelco INC C18
column(150 mm ×1.5 mm i.d., 5 μm)was used.The good linear relationships w ere obtained under
the optimum conditions for every component.The recoveries of the standards added w ere 102.4%-
106.7%while the relatively standard deviations were within the range of 0.55% to 3.01%.
Keywords:reversed-phase high performance liquid chromatog raphy;oleanolic acid;mangiferin;swer-
tisin;Gentianaceae
　　青藏高原龙胆科(Gentianaceae)植物 ,是藏医
用于治疗肝 、胆系统疾病的有效药物[ 1 ,2] 。其中獐
牙菜属植物 , “晶珠本草”记载:苦寒 、清目利胆 ,具清
热解毒 、消炎愈痔等功效 ,疗效确切 。现代医学研究
证明 ,其主要有效成分齐墩果酸可强心 、抗炎 、抗过
敏 ,芒果甙和当药黄素有抗炎 、利胆之疗效[ 3 ,4] 。文
献[ 5]报道了齐墩果酸的含量测定方法。为了更好
的利用和开发青藏高原龙胆科植物 ,我们用高效液
相色谱对龙胆科植物的獐牙菜属 、花锚属 、龙胆属和
肋助花属特有的或重要的 9种植物的药用有效成分
进行了分离和分析得到了满意的结果。这将对研究
青藏高原生物多样性 ,发现和扩大新药源具有十分
重要的意义。
1　实验部分
1.1　样品的采集
　　龙胆科植物样品于 1999年 8 ～ 9月采集于青藏
高原 4 000米以上的玉树 、果洛等地。样品除去泥
沙 ,自然风干 ,粉碎后置于阴凉干燥处保存 。
1.2　仪器和试剂
　　Waters 600E 高效液相色谱仪 , 486 紫外检测
器 ,746 数据处理系统 , Millipore 溶剂过滤系统;氯
仿 、无水乙醇 、磷酸 、甲酸均为 AR级试剂 ,甲醇 、乙
腈为色谱纯 ,实验室用水为去离子水 。
　　齐墩果酸(oleanolic acid)(中国药品生物制品检
定所);芒果甙(mangiferin)、当药黄素(swertisin)标
准品由本所植化室提供 。
1.3　色谱条件
　　齐墩果酸属三萜皂甙化合物 ,芒果甙是双氢黄
酮 ,当药黄素是黄酮甙类化合物 ,根据三者化学结构
的特性及差异 ,经实验选择确定了 3 种不同的分离
和检测条件 。
　　色谱柱:Supelco INC C18柱(150 mm ×1.5 mm
i.d., 5 μm)。分离检测齐墩果酸的流动相为乙腈-
2003年 1月
January 2003
色 谱
Chinese Journal of Chromatography
Vol.21 No.1
63 ～ 65
水(体积比为85∶15),检测波长215 nm ;分离检测芒
果甙的流动相为甲醇-水(体积比为 10∶90)(其中含
0.2%的甲酸),检测波长 254 nm;分离检测当药黄
素的流动相为甲醇-水(体积比为 45∶55)(其中含
0.2%的 磷酸), 检 测 波长 270 nm 。流 速:1
mL/min。柱温:室温 。进样量:10 μL。
1.4　标准溶液的配制
　　精确称取齐墩果酸对照品 5.0 mg 、芒果甙对照
品 5.0 mg 和当药黄素对照品 4.5 mg ,分别用体积
分数为 100%, 50%和 75%的甲醇溶解并定容在 5
mL 容量瓶中 ,得 1.0 g/L的齐墩果酸 、1.0 g/L的芒
果甙和 0.9 g/ L的当药黄素对照品贮备液。
1.5　样品的制备
　　精确称取 3份粉碎的植物样品各 5.00 g ,分别
置于 100 mL 蒸馏烧瓶中 ,用氯仿提取齐墩果酸 、
50%乙醇提取芒果甙 、75%乙醇提取当药黄素 。在
水浴上回流提取 3次(每次 2 h),冷却 ,过滤 ,收集滤
液。将滤液置水浴锅上浓缩至干 ,残留物分别用
100%甲醇 、50%甲醇和 75%甲醇溶解并定容至 100
mL 容量瓶中 ,置于冰箱中待用。
2　结果与讨论
2.1　色谱条件的选择
2.1.1　齐墩果酸
　　齐墩果酸是脂溶性成分 ,易溶于氯仿 、乙醚等有
机溶剂 ,由于齐墩果酸在紫外吸收区的吸收波长较
低(215 nm),使用甲醇洗脱 ,背景值高 ,易造成基线
漂移 。因此本实验选用了透光率较好的乙腈为流动
相 ,收到了较为理想的分析结果。色谱图见图 1。
图 1　齐墩果酸标准品(a)与川西獐牙菜样品(b)的色谱图
Fig.1　Chromatograms of oleanol ic acid standard(a)
and sample of Swert ia mussotii (b)
1.oleanolic acid.
2.1.2　芒果甙
　　芒果甙易溶于水和稀醇 ,极性较大。仅选择甲
醇-水为洗脱系统时 ,峰形拖尾。经比较 ,在流动相
中加入 0.2%(体积分数)的甲酸后 ,分离度大为改
善 。色谱图见图 2。
图 2　芒果甙标准品(a)与川西獐牙菜样品(b)的色谱图
Fig.2　Chromatograms of mangi ferin standard(a)
and sample of Swertia mussoti i (b)
1.mangiferin.
2.1.3　当药黄素
　　当药黄素在醇及稀醇中的溶解度较大 ,较大吸
收波长在 270 nm 和 336 nm 处 。实验选择 270 nm
为检测波长 ,在此波长处 ,样品中的杂质峰对测定干
扰小。在流动相的选择实验中发现 ,在甲醇-水系统
中加入 0.2%(体积分数)的磷酸 ,其分离效果较好 ,
色谱图见图 3。
图 3　当药黄素标准品(a)与四数獐牙菜样品(b)的色谱图
Fig.3　Chromatograms of swerti sin standard(a)
and sample of Swert ia tet raptera(b)
1.sw erti sin.
2.2　标准曲线制作与检出限
　　将对照品储备液逐级稀释 ,分别配制一系列浓
度在 40 ～ 200 mg/L 、18 ～ 90 mg/L 、0.5 ～ 3 mg/L的
齐墩果酸 、当药黄素和芒果甙对照品溶液 ,取各标准
溶液按相应色谱条件分别进样 10 μL ,以相应组分
的色谱峰面积(Y)对其浓度(X , mg/L)进行线性回
归 ,计算回归方程如下:Y =-23.9+490.1X , r =
0.997 4(齐墩果酸);Y =97.5+192 000.5X , r =
0.999 8(芒果甙);Y =31.3+133.5X , r=0.999 4
(当药黄素)。
　　以信噪比为 2作为标准确定检出限 ,则齐墩果
酸的最小检出限为 78 ng ,当药黄素的最小检出限为
·64· 色 谱 第 21卷
3.2 ng ,芒果甙的最小检出限为 0.17 ng 。
2.3　精密度和回收率实验
　　在已知含量样品中定量加入标准品溶液 , 按
“1.5”节方法制备样品液 ,进样测定 。每个样品重复
测定 3次 ,求平均值 ,对方法的准确度进行考察 ,实
验结果见表 1。
表 1　回收率的测定(n=3)
Table 1　Resul ts of recovery(n=3)
Compound
Background/
(mg/ L)
Added/
(mg/ L)
Found/
(mg/ L)
Average
recovery/ %
RSD/
%
Oleanolic
acid
48.0 20.0 69.0 105.1 1.19
Mangiferin 168.0 40.0 209.0 102.4 0.55
Swertisin 65.0 9.0 74.6 106.7 3.01
2.4　样品分析
　　在选定的色谱条件下 ,以保留时间和标准样加
入法定性 ,外标法定量 ,分别测定了龙胆科 9种植物
中的 3种有效成分 ,结果见表 2。
　　从得到的结果来看 ,每种龙胆科植物各具特色。
齐墩果酸和芒果甙含量最高的为川西獐牙菜
(Swertia mussot ii),最低的为四数獐牙菜(Swert ia
tetraptera);而当药黄素最高的为辐花肋助花(Lo-
matogonium rotatum),最低的为川西獐牙菜 。从样
品测定的回收率和相对标准偏差来考察 ,该方法对
龙胆科植物药用有效成分的分析简单 、准确 、可靠。
可用于药材和药物制剂的质量控制 ,对鉴定龙胆科
的真假药材是一种方便 、快速 、准确的方法 。
表 2　样品测定结果(n=3)
Table 2　Determination resul ts of samples(n=3)
Species
Oleanolic acid
w/ % RSD/ %
M angi ferin
w/ % RSD/ %
Sw ertisin
w/ % RSD/ %
Swer tia m ussot ii 0.480 1.17 1.680 1.10 0.065 2.49
Swer tia f ranchetiana 0.289 1.21 0.199 0.86 0.225 2.87
Swer tia peyewa lskii j 0.175 0.98 0.291 0.97 0.263 3.12
Swer tia eryth rosticta 0.365 1.27 0.056 0.78 0.360 3.24
Swer tia tetrap tera 0.018 1.34 0.006 1.17 0.251 2.91
Gentianopsis pa ludosa 0.130 1.28 0.192 1.12 0.110 2.78
Halenia el lip tica 0.159 1.21 0.158 0.95 0.417 2.34
Lomatogonium rotatum 0.173 1.16 0.161 0.87 0.840 2.52
Gentiana fer reri 0.172 1.19 0.178 0.96 0.114 2.78
参考文献:
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·65·　第 1期 胡凤祖等:青藏高原龙胆科植物药用有效成分的高效液相色谱分析