全 文 ：广 西 植 物 Gu ih ai a0 1( 3 ): 211一 213. 1 90 9
松香草体细胞染色体银染色研究
熊 治 廷
(中国科学院武汉植物研究所 , 武汉 )
摘要 松香草 ( S 订P hl’ o m P o rj oI l’a ut 。 , Z n = 14) 全部染色体着丝点和第 5 及第 7对染色体趁短
臂端部显示稳定的A g 一带 。第 1 , 2 和 6对染色体长臂居间区各有一居间带呈不秸定银染正反应 。
推测第 5 和第 7 对染色体为N O R染色体趁N O R分别位于两对染色体短臂末端。
自从染色体银染技术建立以来 〔“ 〕 , 已被广泛用作检测高等真核 生物 染色体核仁组成区
( N O R ) 的一种有效方法 。 然而 , 一系列报道表明 , 无论动植物 材 料 , 银 染后染色 体并非
仅限于 N O R 被区分染色 ( 或浸渗 ) , 其他部位如着丝点 、 居间区及端粒区 视不 同材料和不
同处理程序而异 , 也可以发生银染正反应 。 最近 , 一 李憋学 〔’ 〕对此项技术的 原理与 应用做了
全面综述 。 本文报道松香草根尖细胞染色体银染结果 , 确定 N O R 的染色 体 位置 , 供 进一步
理论研究和松香草遗传育种参考 。
材 料 与 方 法
取当年收获松香草 ( S订P从 “ m P er f ol `at o m ) 种子 , 自来 水 浸 泡 3 小时 , 25 ℃温度下
萌发 。 待初生根长至约 1 c m 时 , 切取根尖浸于饱和对二氯苯水溶 液 预处 理 2 一 3 小时 ( 约
25 ℃ ) 。 水洗 2 一 3 次后处理如下 : 卡诺固定液 30 分钟` 蒸馏水巧分钟 , 1 . 5% ( W /V ) 纤
维素酶与果胶酶混合液 60 分钟 ( 约 2 5℃ ) ~ 水洗 15 分钟` 卡诺固定液 5分钟 , 45 %醋酸 5一
砂分钟” 45 % 醋酸压片斗 ” % 膺精脱片咔 ,晰 瘤精 6 分钟 , 尤水沼梢 。 分钾净卞节回正限 ”分钟 , 火焰干燥 , 室温贮存 。
取一清 洁载片 , 其上铺以单层 擦镜纸 , 滴 2 一 3 滴 75 % A g N 。 : ( W / V )水溶液 , 取片龄一
周以 内的制片盖于擦镜纸上 。 置于铺有湿滤纸的培养皿内 ( 保持湿度 ) , 57 ℃温箱内温育 20
小 时以上 。 镜检合适制片用蒸馏水彻底冲洗 , 空气干燥 48 小 时 以 上 , 二 甲苯透明 2 一 4 小
时 , 中性树胶封片 , 镜检 , 照相 。
结 果 与 讨 论
染色体按其绝对长度依序编号 ( 图 1 , A . 图 2 ) 。 常规染色未见次溢痕 。
银 染后 , 大部分制片染色体能显 A g 一带 。 接位置可分为着丝点带 、 端 带 和 居 间带 ( 图
1
,
A
, 右 ; c , D及图 2 ) 。 带 的 形 状通常呈两圆点状 , 也 有 呈横纹状的 。 全部染色体
可见着丝点带 。 只有第 5 和第 7 两对染色体短臂端部具有端带 , 一般情况下其大小与着丝点
带的相当 , 固定性也相同 , 但有时其银染反应明显 比着丝点带强烈 ( 图 1 、 D ) 。 居间 带位
于第 1 、 第 2 和第 6 对染色体长臂 , 其大小与着丝点带无明显差别 。 但居间带一个显著特点是
广 西 植 物1 0卷
枣嵘
图 I A: 松香草核型( 左) 和 Ag带( 右) , 箭头示核仁组成区 ( N O R )
问期核 , 示 4 个核仁 ( x l s o o ) :
C 和D : 中期染色体A g带 , 箭头示居间带 ( x 1 5 0 0 , x Zc o o ) ;
E : 前期分裂相 , 示 4 个核仁分别与 4 条染色体端部连接 ( X 1 70 ) .
不稳定 , 同一分裂相中一条同源染色体可显居间带 , 另一条则可能不出现其对应带 。 此外 ,
前期染色体有时亦可见着丝点带 , 但很不稳定 , 更 多的情形是未见银染反应 。
间期核经银染后可见 1一 4 个核仁 ( 图 1 , B 示 4 个核仁 ) 。 在分裂前期 , 核仁明显与
绝对长度较短的染色体连接着 ( 图 1 , E ) , 通常位于染色体空间取向的一极 。 由于 松香草
染色体组灭具次溢痕 , 可以根据间期核最高核仁数推测核仁组成区数 目 , 而且 万p R 应肖毋
现银 染正反应 。 因此 , 我们推断第 5 和第 7 对 染色体为核仁组织者染色 体 , 4 个 N OR 分别
位于它们的短臂末端 。 G ie m sa C带处理证实这两对 染色体短晕毅末端亦为 C带 , 因此表明松
香草染色体具端部 N O R , 不存在次溢痕 。
关于着丝点带和居间带显带的细胞化学机制 , 目前是一个悬而 未 决的间题 。 有 不 少研
究者提出过种种解释 〔 ` 〕 , 但没有一种解释得到了普 遍 承认 。 不过 , 许多研究银染色机理的
3期 熊治廷
: 松香草体细胞染色体银染色研究
实验结果大都认为 N OR 的银染物 质 为 酸 性 蛋
白 〔 31。 事实上 , 这种酸性蛋白很可 能 包 括一大
类在分子量 、 等电点及表面抗原等均不相同 的 蛋
白分子 。 因此有理由推测 N O R 与着 丝点居间区
的银染反应化学基础是有可能不 相同 的。 例如 ,
有人曾将与 N O R 连接的异染色质命名为N 一异 染
色质以区分其与着丝点异染色质的差异 [` 〕 。
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1 2 份 心 5 6 7
图 2 松香草核型 ( 左 ) 和 A g 一带 ( 右 )
模式图。 二示可变带 。
正如李愁学所评论的 , 银染是继荧光和 G ie m抓 显带后最重要的染色体研究技术 ` , 本
文结果表明 ,就同时显示 N O R和着丝点及居间区带而言 , 银染色法是比 G ie m抓 C 带法更有效
的方法 , 值得在植物染色体显带研究中推广 。
主 婆 今 考 文 做
( 1 〕 李愚学 , 1 989 : 植物染色体的银染技术、 原理及应用 。 武汉植物学研究 : 7 : 87 一 96 。
〔 2 〕 G o o d那 s t u r e , C . a n d B lo o m , S . E 二 19 75 : V i s u a l i z a t i o n o f n u e l e o 纽 r o r g a n i z e r
r e g i o n s i n m a m m a l i a n e h r o m o s o m e s u s i n g
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d e p e n d e n e e b e t w e e n A g
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7 : 2 75一 2 5 1 .
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