全 文 ：·药物制剂与药品质量控制 ·
两种景天属植物药中总黄酮的提取纯化＊
陈雨洁 1 ,皮珍平 2 ,刘新桥 1 ,万定荣 1
(1.中南民族大学药学院 ,武汉 430074;2.湖北省京山县人民医院内科 , 430024)
[摘 要 ] 目的 探讨有效富集垂盆草 、佛甲草总黄酮的方法。 方法 样品液加于大孔吸附树脂柱顶部 , 以乙醇
洗脱富集总黄酮。再将大孔树脂富集物干法上样于聚酰胺柱 ,以乙醇洗脱富集总黄酮。结果 通过大孔树脂-聚酰胺联
用技术 , 使垂盆草 、佛甲草的提取纯化物黄酮含量明显提高 ,总黄酮含量分别达 68.9%和 54.0%。 结论 该方法可较好
地富集两种景天属植物药的总黄酮。
[关键词 ] 垂盆草;佛甲草;总黄酮;纯化
[中图分类号 ] R282.71;R284.2 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1004-0781(2011)03-0345-03
StudyonIsolationandPurificationforTotalFlavonoidsfromTwoSedumPlantDrugs
CHENYu-jie1 , PIZhen-ping2 , LIUXin-qiao1 , WANDing-rong1(1.ColegeofPharmacy, South-Central
UniversityforNationalities, Wuhan430074, China;2.PeoplesHospitalofJinshanCountyinHubeiProvince,
Jingshan430024, China)
ABSTRACT Objective ToestablishamethodtopurifyandenrichtotalflavonoidsfromtwoGenusSedumplantdrugs
(Sedum.sarmentosumMigo.andS.lineareThunb.). Methods Theplantextractionwasloadedonthetopofmacroporous
resincolumn, enrichedbyethanolelution, andthenloadedonpolyamidecolumnandenrichedagainbyethanol. Results
TheenrichedflavonoidsproductsfromSedumsarmentosumBunge.andS.lineareThunb.wereremarkablyraisedbythis
combiningtechniquesofmacroporousresinandpolyamide, whichwere68.9% and54.0%, respectively. Conclusion The
methodworkedwelinenrichingtotalflavonoidsfromtwosedumplantdrugs.
KEYWORDS Sedum.sarmentosumMigo.;S.lineareThunb.;Totalflavonoids;Purification
垂盆草 、佛甲草是来源于景天属的中药及民族药 ,
使用广泛。其中垂盆草主要治疗各种肝炎 ,为垂盆草
单方与复方制剂的原料药材。同属近缘种佛甲草的全
草抗肝炎 、止血 、解毒等疗效类同垂盆草。化学研究表
明 ,垂盆草含有垂盆草苷 、黄酮类 、生物碱类及三萜类
等成分 [ 1-3] 。其中 ,垂盆草苷及某些黄酮类成分都是保
肝降酶的有效成分[ 4-6] 。佛甲草含有柯伊利素 、红车轴
草异黄酮等黄酮类成分 [ 7] ,笔者通过高效液相色谱
(HPLC)法及薄层色谱法研究证实 ,二者都含有黄酮
类成分 。因此 ,提取与纯化该两种植物药黄酮类成分
对进一步研究及开发利用该两药具有重要意义 。笔者
比较了 3种总黄酮提取纯化方法 ,摸索出一条可行的
提取纯化方 案 , 最终通过 大孔树脂 -聚酰 胺联
[收稿日期 ] 2010-06-07 [修回日期 ] 2010-07-16
[基金项目 ] ＊湖北省自然科学基金资助项目(基金编
号:2009CDB419)
[作者简介 ] 陈雨洁(1986 -), 女 , 山东淄博人 , 在读硕
士 , 主要研究方向:中药和民族药的鉴定与品质研究。电话:
027-87775372, E-mail:chenyujie.1986@163.com。
[通讯作者 ] 万定荣 , 教授 , 硕士生导师。 电话:(0)
18986065360, E-mail:wandr666@163.com。
用技术 ,提高了总黄酮提取物的黄酮含量 ,为应用开发
研究提供了实验依据 。
1 仪器与试药
1.1 仪器 UV757CRT紫外-可见分光光度计(上海
棱光技术有限公司), KQ-500E型超声波清洗器(昆山
市超声仪器有限公司 ,功率 500 W, 频率 40 kHz),
AL204型电子分析天平(上海托利多仪器有限公司 ,精
度:万分之一)。
1.2 试药 两种药材分别采集于中南民族大学花圃
内和湖北省黄梅县 ,均由中南民族大学药学院万定荣
教授鉴定为景天科植物垂盆草 (Sedumsarmentosum
Bunge.)、佛甲草(S.lineareThunb.)的干燥全草。芦
丁对照品购于中国药品生物制品检定所 (批号:
100080-200707 ,供含量测定用), D101大孔树脂(天津
南开大学化工厂);柱色谱用聚酰胺(天津市海光化工
有限公司)。其他试剂试药均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 药材总黄酮含量的测定
2.1.1 对照品溶液的制备及标准曲线的绘制 精密
称取芦丁对照品 19 mg,置于 100 mL量瓶 ,加入 80%
乙醇适量 ,超声处理使溶解 ,放冷 ,用 80%乙醇稀释至
·345·医药导报 2011年 3月第 30卷第 3期
刻度 ,摇匀 ,即得 0.19mg·mL-1芦丁对照品溶液 。
精密量取对照品溶液 0.0(空白), 0.2, 0.5, 1.0,
2.0, 3.0 , 4.0 mL,分别置于 10 mL量瓶中 ,加入 5%亚
硝酸钠溶液 0.4 mL,使混匀 ,放置 6 min,加 10%硝酸
铝溶液 0.4 mL,摇匀 ,放置 6min,加入 4%氢氧化钠溶
液 4 mL,再加水至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min,以相应的
试剂为空白 ,在 500 nm波长处测定吸光度 ,以吸光度
(A)为纵坐标 ,浓度(C)为横坐标 ,绘制标准曲线并进
行线性回归分析 , 得回归方程为:A=10.448C-
0.014, r=0.999 8。A与 C在 0.003 8 ～ 0.076 0mg·
mL-1L范围内有良好的线性关系。
2.1.2 供试品溶液的制备 药材供试品溶液:取药材
样品粉末 1.0 g,精密称定 ,置圆底烧瓶中 ,加入 80%
乙醇 60 mL,回流提取 90 min,趁热滤过 ,收集滤液。
滤渣再加入 80%乙醇 40 mL,回流提取 60min,趁热滤
过 ,合并滤液 ,适当浓缩后用石油醚(90 ～ 120℃)萃取
3次 ,每次 40mL,弃去石油醚。醇溶液置于 100mL量
瓶中 ,补足溶剂至刻度 ,摇匀 ,即得供试品溶液。大孔
树脂柱和聚酰胺柱洗脱液直接用作其(总)黄酮成分
含量测定的供试液。
2.1.3 两种植物药材总黄酮含量的测定 分别取垂
盆草 、佛甲草供试品溶液 4 mL, 置 10 mL量瓶中 ,按
“ 2.1.1”项下自 “加入 5%亚硝酸钠溶液 0.4 mL”起操
作 ,于 500nm波长处测 A值。按标准曲线法计算垂盆
草及佛甲草的总黄酮含量 ,分别为 1.27%及 1.05%。
2.2 垂盆草总黄酮纯化方法的比较 本研究分别应
用碱溶酸沉法 、大孔树脂法及大孔树脂与聚酰胺联用
法对垂盆草总黄酮进行了富集与纯化 ,以选择最佳方
案 。
2.2.1 碱溶酸沉法 取垂盆草药材粉末 100 g置圆
底烧瓶中 ,加入 80%乙醇 600 mL,回流提取 90min,趁
热滤过 ,收集滤液 。滤渣再加入 80%乙醇 400 mL,回
流提取 60 min,趁热滤过 ,合并滤液。减压浓缩至约
100mL,用石油醚(90 ～ 120℃)萃取 3次 ,每次40 mL,
弃去石油醚液 ,乙醇液蒸干 ,加入乙酸乙酯 30 mL,超
声使溶解 ,滤过 ,得乙酸乙酯部位。残渣加入水饱和正
丁醇 30 mL,超声使溶解 ,过滤得正丁醇部位。用 5%
碳酸钠溶液分别萃取两部位 ,每次 30 mL,直至水溶液
层无色 。合并水溶液层 ,用盐酸调 pH至 4 ,静置过夜 ,
使黄酮类成分充分析出 ,得褐色沉淀 ,抽滤 ,水洗 ,干燥
至恒重 ,得沉淀 345 mg。用一定量 80%乙醇超声使溶
解 ,置 25 mL量瓶并定容 。取 1 mL,按照 “2.1.1”项下
的方法显色 ,测得平均 A值为 0.315。按标准曲线法
计算黄酮含量为 22.83%。
2.2.2 大孔树脂法
2.2.2.1 大孔树脂的预处理 树脂以 95 %乙醇浸泡处
理后 ,湿法装柱 ,用 95 %乙醇在柱上流动清洗 ,检查
流出的乙醇液 ,至乙醇液按 1：5与水混合不呈白色浑
浊为止 ,然后用纯化水洗至无醇味 ,备用。
2.2.2.2 上样溶液的制备 取垂盆草药材粉末 40 g置圆
底烧瓶中 ,加入 80%乙醇 240 mL,回流提取 90 min,
趁热过滤 , 收集滤液。滤渣中再加入 80%乙醇
400mL,回流提取 60 min,趁热滤过 ,合并滤液 ,减压
浓缩并挥至无醇味 ,即得。
2.2.2.3 上样与洗脱 将上样溶液加入已处理好的大孔
树脂柱(内径 24.0 mm,高 290.0 mm)上 ,上样后静置
30 min。先用 2倍柱体积的纯化水洗脱除杂 。再分别
用 6倍柱体积的 10%, 30%, 50%及 70%的乙醇洗脱 ,
收集各部位的洗脱液 ,测定总黄酮的量 。其中 10%乙
醇部位含有 41.2mg黄酮 , 30%乙醇部位有 104.9mg,
50%乙醇部位有 216.7 mg, 而 70%乙醇部位有
28.6mg黄酮 。由此可见 , 30%, 50%乙醇部位所含的
黄酮最多。将 10%, 30%, 50%乙醇部位合并混匀后
干燥 ,得固体 876.3 mg,计算其总黄酮含量为 41.4%,
总黄酮转移率达 71.4%。
2.2.3 大孔树脂与聚酰胺联用法 由于过大孔树脂
后的纯化物黄酮含量仍然有限 ,而聚酰胺对黄酮类 、酚
类 、醌类等物质的分离较其他方法优越 ,具有可逆 、分
离效果高等特点 [ 8-9] ,因此考虑将过大孔树脂后的富集
物再过聚酰胺柱 。
2.2.3.1 聚酰胺的预处理 将聚酰胺树脂用 95%乙醇浸
泡 24 h后 ,用纯化水洗至无醇味 ,再用 4%氢氧化钠溶
液浸泡 24h,滤掉碱液 ,再以纯化水洗至中性 ,然后用
4%盐酸浸泡 24h,再用纯化水洗至中性 ,以纯化水浸
泡备用 。
2.2.3.2 上样及洗脱 称取 “2.2.2.3”项下所得初步的
固体黄酮纯化物一半 ,加入适量 95%乙醇超声溶解 ,
拌和入 0.5g干燥的聚酰胺树脂 ,挥去溶剂后干法上样
于已处理好的聚酰胺柱上 (内径 24.0 mm, 高
290.0 mm)。用 2倍量柱体积纯化水洗脱后弃去。再
分别用 6倍柱体积 10%, 30%, 50%及 70%的乙醇溶
液洗脱 ,收集洗脱液 , 测定所含总黄酮分别为 7.8,
21.8, 93.1及 21.1 mg。可见 10%乙醇洗脱液所含黄
酮类成分很少 。合并 30%, 50%, 70%部位 ,干燥后得
固体黄酮类纯化物 197.5 mg,黄酮含量可达 68.9%,
该步提取率为 75.0%,总提取率为 53.6%。
2.3 佛甲草总黄酮的纯化 按照垂盆草总黄酮的提
取纯化方法来提取纯化佛甲草总黄酮 。取佛甲草粉末
·346· HeraldofMedicineVol.30 No.3March2011
40 g,其余按 “2.2.2.2”项下的方法制备佛甲草的上样
溶液。上样于已处理好的大孔树脂柱上 ,静置一段时
间后 ,分别用 2倍柱体积的纯化水 、6倍柱体积 10%,
30%, 50%及 70%的乙醇洗脱 。收集洗脱液 ,测定各
溶剂洗脱部位分别含黄酮 24.1, 96.8, 134.1及
87.0mg。将 30%, 50%, 70%乙醇洗脱部位合并并干
燥后 ,得固体 798.7 mg,黄酮含量达 39.8%,总黄酮提
取率达 75.7%。干法上样于已处理好的聚酰胺柱上。
分别用 2倍柱体积水 、6倍柱体积 10%, 30%, 50%及
70%的乙醇溶液洗脱 ,收集洗脱液 ,分别挥干后得各部
位 。合并各部位后所得佛甲草富集物 412.2 mg,黄酮
含量可达 54.0%,该步提取率为 70.0%,总提取率为
53.1%。
3 讨论
在测定波长确定时 ,笔者曾称取了药材样品 、富集
物样品及芦丁对照品各适量 , 制备成溶液后按
“ 2.1.3”项下自 “加入 5%亚硝酸钠溶液 0.4 mL”起操
作 ,在 400 ～ 700 nm范围内分别扫描测定吸收光谱。
结果对照品溶液在 510 nm处有最大吸收 ,佛甲草供试
品溶液在 500 nm处有最大吸收 ,而垂盆草在稍小于
500nm处有较强吸收。综合考虑 ,选定 500 nm作为
测定波长。此外 ,笔者曾对总黄酮含量测定方法进行
了方法学考察 ,结果精密度 、重复性及加样回收率等均
达到含量测定的要求 ,表明该方法可行。
常用碱溶酸沉法富集总黄酮 ,方法简便易行 ,但黄
酮含量偏低 。大孔树脂 、聚酰胺是分离黄酮类物质的
常用材料 ,由于其吸附机制不同 ,两者在分离纯化中各
有优缺点[ 8-13] 。本研究将大孔树脂与聚酰胺联用 ,充
分发挥了两者优势 ,弥补了不足 。通过联用技术 ,使垂
盆草 、佛甲草的总黄酮提取率明显升高 ,说明该方法具
有较好的富集效果 ,应用上具有可行性。
本联用技术虽使两种植物药黄酮富集物的总黄酮
含量都 >50%,但总黄酮的提取率尚有限 ,因此如何获
得纯度 、回收率都更高的两种植物药总黄酮富集物 ,还
有待对联用工艺的进一步优化 。
[ DOI] 10.3870/yydb.2011.03.028
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