全 文 ：北方园艺２０１６（０５）：１３７～１４０ ·生物技术·
第一作者简介：李绍吉（１９９３－），男，贵州施秉人，本科，研究方向为
药材成分。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｘｆｅｉ７８９＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：蒋向辉（１９７４－），男，博士，副教授，现主要从事药材成分
等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｘｆｅｉ７８９＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：贵州省科技计划厅联合基金资助项目（黔科合ＬＨ字
［２０１４］７２１９）；贵州省教育厅重点资助项目（黔教合ＫＹ字［２０１４］２８１）。
收稿日期：２０１５－０９－２５
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０５０３６
忍冬属四种不同种质农艺学
性状比较及ＤＮＡ条形码鉴定研究
李 绍 吉，蒋 向 辉
（凯里学院 化学与材料工程学院，贵州 凯里５５６０１１）
　　摘　要：以忍冬属不同来源的４种种质为试材，采用形态分类学的方法，根据株高、叶长、叶
宽、叶的形状、花开时间等农艺性状，对不同种质进行了比较分析，同时采用分子生物学的方法，
以５对引物对４份种质的ＤＮＡ条形码序列进行ＰＣＲ扩增和测序，构建聚类图，并分析物种的亲
缘关系。结果表明：忍冬属４种种质在农艺学性状上差异不明显，如采用形态学的方法进行鉴别
容易导致误判，然而这４种种质在ＤＮＡ条形码序列上存在着丰富的遗传多样性，研究认为在对
金银花种质进行亲缘关系鉴定时，借助ＤＮＡ条形码序列特性与农艺学性状相结合能有效区分物
种之间的差异，鉴定结果相对可靠。
关键词：忍冬属；金银花；农艺学性状；ＤＮＡ条形码
中图分类号：Ｓ　５６７．７＋９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０５－０１３７－０４
　　金银花（Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　Ｔｈｕｎｂ．）属忍冬科忍冬
属多年生常绿藤本植物，又名金花、银花和忍冬花，是我
国中医和民族民间医生常用的药材，其药用价值较高，
具有广谱抗菌和散风消肿的功效，常用于治疗清热解
毒、痈肿疔疮、丹毒和血痢等病症［１］。国内外对金银花
的研究主要集中在对其化学成分、药用价值等方面［２－４］，
然而药用金银花种质品种繁多，药用成分各有差异，２０１０
版药典规定金银花为忍冬（Ｌ．ｊａｐｏｎｉｃａ）干燥的花蕾或者
是初开的花［１］，在我国中医或民间医生都已习惯地把山
银花也当作金银花使用，并且近年来我国河北、河南、湖
南等省份已连续培育出了金银花新品种，准确鉴定不同
的金银花种质，对金银花的合理用药有十分重要的意义。
金银花的农艺学性状主要包括株形、株高、叶形、叶
色、叶长、叶宽、花形、花色等指标，而这些性状又难以用
准确的文字将所有的金银花种质区分开来。随着ＤＮＡ
条形码技术的不断完善和发展，其在药用植物物种鉴别和
多样性分析中的应用越来越广泛，ＤＮＡ条形码技术的核
心内容是从生物细胞细胞质或细胞核中选择相对保守
的序列进行ＰＣＲ扩增与测序，通过序列特征分析进行物
种鉴别［５］，当前已开发的主要有ＩＴＳ（ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ
ｓｐａｃｅｒ）、ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ、ｒｂｃＬ、ｍａｔＫ和ｒｂｃＬ＋ｍａｔＫ等序列
或序列组合，这些序列扩增条件不苛刻，且物种特异性
强，在生物多样性分析中已经成为了常用的候选序列［６－８］。
该研究选取ＩＴＳ、ｐｓｂＡ－ｔｒｎＨ、ｒｂｃＬ、ｍａｔＫ和ｒｂｃＬ＋
ｍａｔＫ等５个热点候选序列针对忍冬科忍冬属４份种质
进行了比较研究，并通过ＤＮＡ条形码与农艺学性状相
结合验证了各候选序列在忍冬属种质鉴定中的可靠性，
为ＤＮＡ条形码技术应用于忍冬属种质的鉴定提供参考。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试材料来自贵州凯里、湖南怀化、山东平邑、浙江
杭州，于２０１３年种植于凯里学院试验基地，试验地肥力
中等。
ＰＣＲ相关试剂ｄＮＴＰｓ和ＤＮＡ　Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ购自宝
生物工程有限公司试剂；植物基因组ＤＮＡ提取用试剂
为实验室自行配制：２×ＣＴＡＢ缓冲液（ｐＨ　８．０），Ｔｒｉｓ－
ｂｏｓｅ　１００ｍｍｏｌ／Ｌ，ＮａＣｌ　１．４ｍｏｌ／Ｌ，ＥＤＴＡ　２０ｍｍｏｌ／Ｌ
（２％巯基乙醇用时加），ＴＥ　ｂｕｆｅｒ（ｐＨ　８．０），Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ
１０ｍｍｏｌ／Ｌ，ＥＤＴＡ　１ｍｍｏｌ／Ｌ，无 ＤＮＡ 酶的 ＲＮａｓｅＡ
１０ｍｇ／ｍＬ。　
１．２　试验方法
１．２．１　农艺学性状　对４种忍冬属种质的株型、叶长、
叶宽、花形、开花时间及花色进行测量观察，分析其外部
形态的差异。
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·生物技术· 北方园艺２０１６（０５）：１３７～１４０
１．２．２　ＤＮＡ提取与ＰＣＲ扩增　４种忍冬属种质基因
组ＤＮＡ提取采用蒋向辉等［９］改良的ＣＴＡＢ法，用于进
行ＰＣＲ扩增的５对引物序列如表１所示，ＰＣＲ反应程序
为：９４℃预变性３ｍｉｎ；９４℃变性４０ｓ，５７℃退火４０ｓ，７２℃
延伸４０ｓ，３５个循环；７２℃后延伸５ｍｉｎ；最后１６℃保温。
表１ 引物名称及序列
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｐｒｉｍｅｒ　ｎａｍｅ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
引物代号
Ｐｒｉｍｅｒ　ｃｏｄｅ
引物名称
Ｐｒｉｍｅｒ　ｎａｍｅ
序列（５′－３′）
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（５′－３′）
碱基数
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｂａｓｅ
Ａ
ｔｒｎＬ－ｃＦ　 ＣＧＡＡＡＴＣＧＧＴＡＧＡＣＧＣＴＡＣＧ　 ２０
ｔｒｎＦ－ｆＲ　 ＡＴＴＴＧＡＡＣＴＧＧＴＧＡＣＡＣＧＡＧ　 ２０
Ｂ
ＰＩｐｅｔＢＦ　 ＣＴＧＣＣＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＴＡＡＴＧ　 ２０
ＰＩｐｅｔＤＲ　 ＡＡＴＴＴＡＧＣＴＣＴＴＡＡＴＡＣＡＧＧ　 ２０
Ｃ
Ｓ－ｔｒｎＫ－Ｆ　 ＴＡＣＴＣＴＡＣＣＡＴＴＧＡＧＴＴＡＧＣＡＡＣ　 ２３
Ｓ－ｒｐｓ１６－Ｒ　 ＡＡＡＧＧＴＧＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣ　 ２３
Ｄ
Ｓ－ｔｒｎＨ－３－Ｆ　 ＴＧＡＡＣＣＣＧＣＧＣＡＴＧＧＴＧＧＡＴＴ　 ２１
Ｓ－ｐｓｂＡ－３－Ｒ　 ＧＴＡＡＴＧＣＡＣＧＡＡＣＧＴＡＡＴＧＣＴＣＡ　 ２３
Ｅ
ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ　 ２０
ＩＴＳ
　
ＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧ　 ２１
１．３　数据分析
登入ＮＣＢＩ网站，将４种忍冬属种质相对应的ＤＮＡ
条形码序列在ＮＣＢＩ中进行ＢＬＡＳＴ搜索，进行物种鉴
定，将结果和已经登录ＮＣＢＩ的序列进行相似性比对，检
验序列的准确度；用ＭＥＧＡ　４．０软件对４个物种的序列
进行比对，并根据每对引物做出一个聚类图。
２　结果与分析
２．１　农艺学性状比较
由表２可知，黄褐毛忍冬与毛花柱忍冬叶长差异不
明显，山银花叶片最长，忍冬叶片最短。山银花叶片最
宽，忍冬叶片最窄，黄褐毛忍冬与毛花柱忍冬叶宽无明
显差异。４种忍冬属种质叶型全为卵圆形。忍冬、毛花
柱忍冬与山银花的花梗长没有明显差异，黄褐毛忍冬的
花梗明显比其它３种要短。忍冬、山银花与毛花柱忍冬
的集中开花期都在５—６月，山银花有一年开多次的现
象，黄褐毛忍冬的集中开花期都在６—７月，比其它３种
　　　　
种质要晚开花。４种忍冬属种质的花色主要有白色与黄
色２种，且都是前期白色后期黄色。
表２　不同金银花种质的农艺学性状比较
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ａｇｒｏｎｏｍｉｃ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ
性状
Ｃｈａｒａｃｔｅｒ
忍冬
Ｌｏｎｉｃｅｒａ
ｊａｐｏｎｉｃａ
山银花
Ｆｌｏｓ　ｌｏｎｉｃｅｒａｅ
Ｃｏｎｆｕｓａｅ
黄褐毛忍冬
Ｌｏｎｉｃｅｒａ
ｆｕｌｖｏｔｏｍｅｎｔｏｓａ
毛花柱忍冬
Ｌｏｎｉｃｅｒａ
ｄａｓｙｓｔｙｌａ　Ｒｅｈｄ．
叶长Ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｌｅａｆ／ｃｍ　 ４．２±２．５　 ６．５±１．５　 ５．５±２．０　 ５．８±１．５
叶宽Ｌｅａｆ　ｗｉｄｔｈ／ｃｍ　 ３．５±２．０　 ４．７±１．５　 ４．０±１．５　 ４．３±１．５
叶形Ｌｅａｆ　ｓｈａｐｅ／ｃｍ 卵圆形 卵圆形 卵圆形 卵圆形
花梗长Ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｐｅｄｉｃｅｌ／ｍｍ　２．０±０．５　 ２．０±０．５　 １．５±０．５　 ２．０±０．５
开花期Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄ　 ５—６月 ５—６月 ６—７月 ５—６月
花色Ｆｌｏｗｅｒ　ｃｏｌｏｒ 白色、黄色 白色、黄色 白色、黄色 白色、黄色
２．２　ＰＣＲ扩增及产物检测
由图１～３可知，５对引物在４种忍冬属种质中扩增
条带在４７５～１　０００ｂｐ，带型清晰而且稳定。Ａ引物（ｔｒｎＬ－
ｃＦ与ｔｒｎＦ－ｆＲ）ＰＣＲ扩增产物长度约１　０００ｂｐ左右，并且
条带清晰，无杂带。Ｂ引物（ＰＩｐｅｔＢＦ与ＰＩｐｅｔＤＲ）ＰＣＲ得
到的扩增产物条带都在１　０００ｂｐ左右。Ｃ引物（Ｓ－ｔｒｎＫ－
Ｆ与Ｓ－ｒｐｓ１６－Ｒ）的扩增产物在７５０～１　０００ｂｐ。Ｄ引物（Ｓ－
ｔｒｎＨ－３－Ｆ与Ｓ－ｐｓｂＡ－３－Ｒ）扩增产物的条带在５００ｂｐ左右。
Ｅ引物（ＩＴＳ）扩增产物条带长度为５００～８００ｂｐ。
２．３　物种鉴定
在对ＰＣＲ产物进行回收纯化后，对产物直接进行
测序，测得的序列在ＮＣＢＩ数据库中进行ＢＬＡＳＴ序列
相似性比对，并将序列在ＮＣＢＩ数据库进行登录（其中
ＩＴＳ序列登录号ＪＱ７８０９９１．１、ＪＱ７８０９９０．１、ＪＱ７８０９８６．１、
ＪＱ７３１７１１４．１）。已有大量的研究表明［１０－１１］，ＩＴＳ在物种
鉴定与多样性分析中可靠性相对较强，该研究将ＩＴＳ扩
增后得到的序列在ＮＣＢＩ中进行ＢＬＡＳＴ检索，结果显示
序列相似度较高的物种分别是忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）、
山银花（Ｆｌｏｓ　ｌｏｎｉｃｅｒａｅ　Ｃｏｎｆｕｓａｅ）、黄褐毛忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ
ｆｕｌｖｏｔｏｍｅｎｔｏｓａ）、毛花柱忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｄａｓｙｓｔｙｌａ　Ｒｅｈｄ．），
表明试验中所用的４个物种分别为忍冬、山银花、黄褐
毛忍冬、毛花柱忍冬。
注：Ｍ为标准ＤＮＡ；１、２、３、４号分别为忍冬、山银花、黄褐毛忍冬、毛花柱忍冬。
Ｎｏｔｅ：Ｍ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ＤＮＡ；１，２，３，４ａｒｅ　Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ，Ｆｌｏｓ　ｌｏｎｉｃｅｒａｅ　Ｃｏｎｆｕｓａｅ，Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｆｕｌｖｏｔｏｍｅｎｔｏｓａ，Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｄａｓｙｓｔｙｌａ　Ｒｅｈｄ．，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
图１　４种种质ｔｒｎＬ引物（左）与ＰＩｐｅｔＢ－Ｄ引物（右）ＰＣＲ扩增图
Ｆｉｇ．１　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｉｇｕｒｅ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂｙ　ｔｒｎＬ　ｐｒｉｍｅｒ（ｌｅｆｔ）ａｎｄ　ＰＩｐｅｔＢ－Ｄ　ｐｒｉｍｅｒ（ｒｉｇｈｔ）
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北方园艺２０１６（０５）：１３７～１４０ ·生物技术·
注：Ｍ为标准ＤＮＡ；１、２、３、４号分别为忍冬、山银花、黄褐毛忍冬、毛花柱忍冬。
Ｎｏｔｅ：Ｍ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ＤＮＡ；１，２，３，４ａｒｅ　Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ，Ｆｌｏｓ　ｌｏｎｉｃｅｒａｅ　Ｃｏｎｆｕｓａｅ，Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｆｕｌｖｏｔｏｍｅｎｔｏｓａ，Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｄａｓｙｓｔｙｌａ　Ｒｅｈｄ．，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
图２　４种金银花Ｓ－ｔｒｎＫ－ｒｐｓ１６引物（左）与Ｓ－ｔｒｎＨｐｓｂＡ－３引物（右）ＰＣＲ扩增图
Ｆｉｇ．２　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｉｇｕｒｅ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂｙ　Ｓ－ｔｒｎＫ－ｒｐｓ１６ｐｒｉｍｅｒ（ｌｅｆｔ）ａｎｄ　Ｓ－ｔｒｎＨｐｓｂＡ－３
　　注：Ｍ为标准ＤＮＡ；１、２、３、４号分别为忍冬、山银花、黄褐毛忍冬、毛
花柱忍冬。
Ｎｏｔｅ：Ｍ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ＤＮＡ；１，２，３，４ａｒｅ　Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ，Ｆｌｏｓ　ｌｏｎｉｃｅｒａｅ
Ｃｏｎｆｕｓａｅ，Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｆｕｌｖｏｔｏｍｅｎｔｏｓａ，Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｄａｓｙｓｔｙｌａ　Ｒｅｈｄ．，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
图３　４种金银花ＩＴＳ引物ＰＣＲ扩增图
Ｆｉｇ．３　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｆｉｇｕｒｅ　ｏｆ
ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂｙ　ＩＴＳ　ｐｒｉｍｅｒ
２．４　基于ＤＮＡ条形码序列的物种亲缘关系分析
由图４可以看出，利用ＤＮＡ条形码在分子水平上
对忍冬属４个种质进行鉴定结果显示，这４个种质亲缘
关系比较接近，但由于所用引物不同，系统发育树上的
聚类关系仍有一定的差异。在Ａ引物中，忍冬单独为一
枝，引物Ａ可以很好的作为忍冬鉴别的ＤＮＡ条形码引
物。在引物Ｂ、Ｃ、Ｄ扩增后的物种，黄褐毛忍冬全部单独
聚类为一枝，说明这３种引物对黄褐毛忍冬的鉴定特异
性高，相对稳定。Ｅ引物中，山银花单独为一枝，则引物
Ｅ可以很好的作为山银花鉴别的ＤＮＡ条形码引物。Ａ
引物扩增的结果显示，黄褐毛忍冬和毛花柱忍冬有极高
的相似性；Ｂ引物扩增的结果显示，忍冬和山银花的亲缘
关系更接近；Ｃ引物扩增结果显示忍冬和毛花柱忍冬亲
缘关系比较接近；基于Ｄ引物的亲缘关系分析显示山银
花和毛花柱忍冬的亲缘关系最为接近；Ｅ引物扩增结果
显示忍冬和毛花柱忍冬条形码序列更相似。
注：Ａ．ｔｒｎＬ－ｃＦ与ｔｒｎＦ－ｆＲ，Ｂ．ＰＩｐｅｔＢＦ与ＰＩｐｅｔＤＲ，Ｃ．Ｓ－ｔｒｎＫ－Ｆ与Ｓ－ｒｐｓ１６－Ｒ，Ｄ．Ｓ－ｔｒｎＨ－３－Ｆ与Ｓ－ｐｓｂＡ－３－Ｒ，Ｅ．ＩＴＳ。
Ｎｏｔｅ：Ａ．ｔｒｎＬ－ｃＦ　ａｎｄ　ｔｒｎＦ－ｆＲ　ｐｒｉｍｅｒ，Ｂ．ＰＩｐｅｔＢＦ　ａｎｄ　ＰＩｐｅｔＤＲ　ｐｒｉｍｅｒ，Ｃ．Ｓ－ｔｒｎＫ－Ｆ　ａｎｄ　Ｓ－ｒｐｓ１６－Ｒ　ｐｒｉｍｅｒ，Ｄ．Ｓ－ｔｒｎＨ－３－Ｆ　ａｎｄ　Ｓ－ｐｓｂＡ－３－Ｒ　ｐｒｉｍｅｒ，Ｅ．ＩＴＳ　ｐｒｉｍｅｒ．
图４　不同ＤＮＡ条形码分别构建的４种种质亲缘关系树状图
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｆｉｇｕｒｅ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ＤＮＡ　ｂａｒ　ｃｏｄｅ
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３　讨论
该研究从植株叶长、叶宽、开花时间及花的颜色等
方面对忍冬属４个种质的农艺学性状进行了比较分析，
结果发现这４个种质在农艺学上有许多共同的特点，只
存在部分细小的差异，仅根据农艺学性状很难将这些种
质准确分开。采用基于ＤＮＡ条形码序列的分析技术，
借助聚类分析的方法，对忍冬属４个种质进行遗传多样
性研究发现这忍冬属４个种质在ＤＮＡ条形码序列上存
在着丰富的遗传多样性，采用农艺学性状与ＤＮＡ条形
码相结合的方法在忍冬属种质鉴定中有很广泛的应用
前景和实践意义。
该研究筛选出的５对引物有４对是叶绿体基因片
段，ＩＴＳ引物为核基因组片段。序列ｔｒｎｌ－ｔｒｎＦ是叶绿体
内含子片段，属非编码序列，具有引物保守，容易扩增等
优点，但进化速度过慢，物种的识别率较低。大量的研
究表明叶绿体基因序列ｔｒｎＨ－ｐｓｂ在植物物种进化的历
程中是一个进化速率比较快的基因间隔序列［１２］，这个序
列的两边部分有相对保守的ｔｒｎＨ序列和ｐｓｂＡ序列，而
这２个保守序列之间又有多个缺失／插入的变异位点，
遗传信息较为丰富，用于进行鉴定的前景较为广阔，鉴
定效率相对较高。ＩＴＳ序列位于细胞核基因中，在已克
隆了该序列的所有物种中都是相对保守的，而该序列是
位于非编码区，相对其它基因序列而言其承受的自然选
择的压力相对较小，因此，其变异位点也相应较多，在物
种系统学分析中能提供较为详细的遗传信息，在分子水
平上对该序列的分析结果往往与物种表观性状分析结
果之间有明显的相关性，并且ＩＴＳ序列长度也相对保
守，在被子植物中长度一般小于７００ｂｐ［１３］。由于性状是
受基因与环境共同决定的加性遗传特性，形状指标聚类
受环境影响较大，而分子水平分析是建立在物种遗传基
础上的，聚类结果较形态学分析更可信。虽然ＤＮＡ条
形码技术不可能完全取代形态学分类法，但其在物种鉴
别与分类中表现的准确性、丰富性和可重复性，导致其
必将成为物种分类中的重要方法。
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Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　Ａｇｒｏｎｏｍｙ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ＤＮＡ　Ｂａｒｃｏｄｉｎｇ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ
Ｆｏｕｒ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｌｏｎｉｃｅｒａ
ＬＩ　Ｓｈａｏｊｉ，ＪＩＡＮＧ　Ｘｉａｎｇｈｕｉ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋａｉｌｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｌｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５６０１１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｌｏｎｉｃｅｒａａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｈｅ　ａｇｒｏｎｏｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｌｏｎｉｃｅｒａ，ｓｕｃｈ　ａｓ
ｔｈｅ　ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ，ｌｅａｆ　ｌｅｎｇｔｈ，ｌｅａｆ　ｗｉｄｔｈ，ｌｅａｆ　ｓｈａｐｅ　ａｎｄ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ
ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｏｂｖｉｏｕｓ，ｗｈｉｃｈ　ｅａｓｉｌｙ　ｃａｕｓｅｄ　ｍｉｓｊｕｄｇｍｅｎｔ　ｉｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ，ｔｈｅ
ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ａｇａｒｏｓｅ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ａｎｄ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｂａｒｃｏｄｅ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｆｏｒ
ｆｕｒｔｈｅｒ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｗｉｔｈ　ｆｉｖｅ　ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ．Ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂｙ　ＤＮＡ　ｂａｒｃｏｄｉｎｇ
ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｗａｓ　ｂｕｉｌｔ　ｂｙ　ＭＥＧＡ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｒｅ　ｗａｓ　ｎｏ
ｏｂｖｉｏｕｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ａｇｒｏｎｏｍｙ　ｔｒａｉｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ｗｈｉｃｈ　ｅａｓｉｌｙ　ｃａｕｓｅｄ　ｍｉｓｊｕｄｇｍｅｎｔ　ｉｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ
ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ａｇｒｏｎｏｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｂａｒｃｏｄｉｎｇ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ，ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｂａｒｃｏｄｉｎｇ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ａｇｒｏｎｏｍｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ　ｔｏｇｅｔｈｅｒ　ｗｈｅｎ　ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｓｐｅｃｉｅｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌｏｎｉｃｅｒａ；Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ；ａｇｒｏｎｏｍｉｃ　ｔｒａｉｔｓ；ＤＮＡ　ｂａｒｃｏｄｉｎｇ
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