全 文 ：新 疆 农 业 大 学 学 报　２０１１，３４（５）：３７４～３８０
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
文章编号：１００７－８６１４（２０１１）０５－０３７４－０７
野生兰属植物根部内生真菌多样性初步研究
代晓宇１，毛益婷１，马　荣１，２
（１．北京林业大学 森林培育和保护国家重点实验室，北京　１０００８３；２．新疆农业大学 林学与园艺学院，乌鲁木齐　
８３００５２）
摘　要：　采集生长在我国广西、贵州、云南的密林、开阔地两种生境的９种兰属植物，对其根部的内生真菌进行分
离，经过形态观察和ＩＴＳ序列测定相结合的鉴定。结果表明，分离得到的９９个菌株隶属于２９个菌属。对子囊菌和
担子菌分别进行的系统发育树构建结果显示，子囊菌为优势菌种，其中镰刀菌属 （Ｆｕｓａｒｉｕｍ，２２．２０％），炭角菌属
（Ｘｙｌａｒｉａ，６．０６％）和木霉属 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ，５．０５％）为优势菌属。物种丰富度和Ｓｉｍｐｓｏｎ多样性指数（Ｄ）分析结果
表明，密林生境的兰属植物的菌根真菌多样性高于开阔生境。
关键词：　兰属植物；内生真菌；多样性；子囊菌
中图分类号：Ｑ９４９．３１　　　　　　文献标识码：Ａ　
Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｆｕｎｇｉ　ｆｒｏｍ
Ｗｉｌｄ　ＣｙｍｂｉｄｉｕｍＰｌａｎｔｓ　Ｒｏｏｔｓ（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）
ＤＡＩ　Ｘｉａｏ－ｙｕ１，ＭＡＯ　Ｙｉ－ｔｉｎｇ１，Ｍａ　Ｒｏｎｇ１
，２
（１．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉ－
ｊｉｎｇ　１０００８３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕ－
ｍｑｉ　８３００５２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｔｈｅ　ｎｉｎｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｙｍ　ｂｉｄｉｕｍｐｌａｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｇｕａｎｘｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　ａｎｄ　Ｙｕｎｎａｎ　ｐｒｏｖ－
ｉｎｃｅｓ，ｔｈｅ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｒｏｏｔ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ，ｉｔｓ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅ－
ｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　９９ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ　２９ｇｅｎｅｒａ．Ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃ－
ｔｕｒｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｅｎｔｒｏｇｒａｍ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ　ａｎｄ　ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ａｓｃｏｍｙ－
ｃｏｔａ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｄｏｍｉｎａｎｔ　ｔｈａｎ　ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ．Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅｍＦｕｓａｒｉｕｍ （２２．２０％），Ｘｙｌａｒｉａ （６．０６％）ａｎｄ
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ（５．０５％）ｏｆ　Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｄｏｍｉｎａｎｔ　ｆｕｎｇｉ　Ｓｐｅｃｉｅｓ　ｎｕｍｂｅｒ　ａｎｄ　Ｓｉｍｐｓｏｎ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ－
ｄｅｘ（Ｄ）ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｏｒｃｈｉｄｓ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｉｎ　ｆｏｒｅｓｔ　ｈａｂｉｔａｔ　ｗｅｒｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｈａｂｉｔａｔ
ｏｆ　ｏｐｅｎｎｅｓｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ；ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ
　　兰属 （Ｃｙｍ　ｂｉｄｉｕｍ）植物是兰科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）
植物中最具观赏价值的类群之一。以其属内种类具
有较高的观赏、科研、生态和文化价值，受到了很高
的关注。该属全世界近７０种，其中有４８种在中国
境内广泛分布［１］。兰属植物依其生态类型可分为地
生兰、附生兰和半附生兰，罕有腐生，且全部为林栖
植物。
在自然生长状态下，兰属植物必须依赖与菌根
真菌建立共生关系才能够生存［２］。由于兰科菌根对
于兰科植物有着非常重要的意义，对兰科植物内生
真菌的多样性一直是兰科植物研究的重要领域。本
研究分别在广西雅长兰科植物自然保护区，贵州兴
义和云南大理选择了生长在不同生境下的９种兰属
植物作为研究对象，对它们的内生真菌进行了分离
收稿日期：２０１１－０５－２３
基金项目：国家科技支撑计划项目（２００８ＢＡＣ３９Ｂ０５）；新疆维吾尔自治区重点学科“森林培育学”资助
通讯作者：马　荣，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊａｕｍｒ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
　第５期 代晓宇，等：野生兰属植物根部内生真菌多样性初步研究
鉴定和多样性分析。研究的主要目的在于调查兰属
植物内生真菌的多样性，探讨不同生境下共生真菌
的变化规律。
１　材料与方法
１．１　样本采集
营养根的采集分别取自广西、贵州和云南的野
生兰属植物（春兰Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ、莎叶兰Ｃ．ｃｙｐｅｒｉ－
ｆｏｌｉｕｍ、兔耳兰Ｃ．ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ、多花兰Ｃ．ｆｌｏｒｉｂｕｎ－
ｄｕｍ、硬叶兰Ｃ．ｂｉｃｏｌｏｒ、西藏虎头兰Ｃ．ｔｒａｃｙａｎｕｍ、
寒兰Ｃ．ｋａｎｒａｎ、邱北冬蕙兰Ｃ．ｑｉｕｂｅｉｅｎｓｅ、莲瓣兰
Ｃ．ｌａｎｐａｎ）；鉴定材料为分离所获得的内生真菌。
兰属植物采样信息见表１。
表１　兰属植物采样信息
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｉｎｇ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＣｙｍｂｉｄｉｕｍ
ｐｌａｎｔｓ
植株
编号
植株名称 采集地点 采集时间 生态类型
ＣＡ 春兰 广西雅长 ２０１０．０５．２２ 地生兰
ＣＢ 莎叶兰 广西雅长 ２０１０．０５．２６ 地生兰
ＣＣ 兔耳兰 广西雅长 ２０１０．０５．２２ 半附生兰
ＣＤ 多花兰 广西雅长 ２０１０．０５．２２ 附生兰
ＣＬ 硬叶兰 广西雅长 ２０１０．０５．２６ 附生兰
ＣＰ 西藏虎头兰 广西雅长 ２０１０．０５．２２ 附生兰
ＴＥ 兔耳兰 贵州兴义 ２０１０．０６．１５ 半附生兰
ＳＹ 莎叶兰 贵州兴义 ２０１０．０６．１５ 地生兰
ＱＢ 邱北冬蕙兰 贵州兴义 ２０１０．０６．１５ 地生兰
ＫＬ 寒兰 云南大理 ２０１０．０８．０９ 地生兰
ＬＢ 莲瓣兰 云南大理 ２０１０．０８．０９ 地生兰
１．２　内生真菌的分离
方法一：将采集的兰属植物根段用流动的清水
冲洗１０ｍｉｎ后，在超净工作台内用７５％的酒精浸
泡１５ｓ，再用０．５％的ＮａＣｌＯ根表灭菌５ｍｉｎ，无菌
水清洗３５次后用滤纸吸干水分［３］。用无菌的刀片
将根段切成厚度约０．５ｍｍ 的若干薄片，平铺在
ＰＤＡ平板上，２５℃黑暗培养。当菌丝从根片中长
出后，将其纯化转移至灭菌ＰＤＡ培养基上，为防止
污染，所有的培养基都加入硫酸链霉素（５０μｇ／ｍＬ）
和氨苄青霉素（２．５μｇ／ｍＬ）
［４］，最后用试管于４℃
密封保存。
方法二：将采集的兰属植物根段用流动的清水
冲洗１５ｍｉｎ后，在超净工作台上，无菌水清洗３－
５次，再用滤纸吸干水分。用无菌的刀片将根段切
成厚度为０．５１．０ｍｍ薄片后在显微镜下镜检，找到
菌丝团并用无菌的接种针将其挑出，放于ＰＤＡ培
养基中进行２５℃暗培养［５］。之后步骤同方法一。
１．３　内生真菌的鉴定
１．３．１　形态鉴定
参考文献［６－７］，按照常规的真菌鉴定方法进
行鉴定。将菌株在水琼脂培养基平板上进行活化生
长，并低温处理后，取片观察。从菌落的形态、菌丝
是否分枝、孢子的形态及菌核特征等形态特征来进
行基本的分类。
１．３．２　分子鉴定
用ＰＤＡ培养基培养分离得到的内生真菌，取
菌块于液体ＰＤＡ培养基中培养，２５℃，２００ｒ／ｍｉｎ
振荡培养３５ｄ。无菌条件下，挑取长好的菌丝球３６
个放入１．５ｍＬ的离心管中。ｒＤＮＡ 的提取使用
ＴＩＡＮＧＥＮ普通植物基因提取试剂盒（离心柱型）。
利用常用引物ＩＴＳ１（５′－ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴ－
ＧＣＧＧ－３′） 和 ＩＴＳ４ （５′－ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴ－
ＧＡＴＡＴＧＣ－３′）对ｒＤＮＡ上的ＩＴＳ区域进行ＰＣＲ
扩增［８］。ＰＣＲ的反应体系（５０μＬ）包括：５μＬ　１０×
ＰＣＲ　ｂｕｆｆｅｒ，２μＬ的各种引物（５ｍｍｏｌ／Ｌ），３μＬ
ｄＮＴＰ（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ），０．５μＬ　Ｔａｑ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ，３５
μＬ　ｄｄＨ２Ｏ，２．５μＬ　ＤＮＡ。
ＰＣＲ反应条件参考 Ｇａｒｄｅｓ和Ｂｒｕｎｓ［９］。ＰＣＲ
产物由赛百盛硅胶模型ＴＭＰＣＲ产物（ＤＮＡ片段）
纯化试剂盒进行纯化回收。送由上海生工公司测
序。获得的序列文件用软件ＢｉｏＥｄｉｔ进行校对后，
登陆ＧｅｎＢａｎｋ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ）
进行在线比对。
１．４　系统发育树的构建
用ＣＬＵＳＴＡＬＸ　ｖｅｒｓｉｏｎ　１．８１对比，对序列进
行修饰后，用 ＭｒＢａｙｅｓ　３．１运算后获得系统发育树
形图［１０］。其中选取的外类群共６个，来自于子囊菌
门（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）和担子菌门（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）的不
同科或属。子囊菌门的外类群有肉座菌目的
Ｃｏｒｄｙｃｅｐｅｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ （ＥＦ４８８４３９），Ａｃｉｃｕｌｏｓｐｏｒｉｕｍ
ｔａｋｅ （ＥＦ３６３６８３ ） 和 Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ　ｓｐ．
（ＦＪ６０５２５９），炭角菌目的Ａｎｔｈｏｓｔｏｍｅｌｌａ　ｓｅｐｅｌｉｂｉｌｉｓ
（ＡＹ９０８９８９）。担子菌门的外类群有胶膜菌目的
Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ　ｐｒｕｉｎｏｓａ（ＡＹ３７３２９５），和鸡油菌目的
Ｃｅｒａｔｏｒｈｉｚａ　ｏｒｙｚａｅ－ｓａｔｉｖａｅ（ＡＦ３４５５５６）。序列信
息均来自ＧｅｎＢａｎｋ。
１．５　数据处理
本研究通过物种丰富度和Ｓｉｍｐｓｏｎ多样性指
数（Ｄ）来描述三个地区的兰属植物内生真菌的多样
性。物种丰富度反映了内生真菌的数量和丰富程
５７３
新　疆　农　业　大　学　学　报 ２０１１年　
度，Ｓｉｍｐｓｏｎ多样性指数（Ｄ）反映了群落内内生真
菌的丰富度和均匀度。
Ｓｉｍｐｓｏｎ多样性指数（Ｄ）的计算公式：
Ｄ＝１－∑ｎｉ（ｎｉ－１）
∑Ｎ（Ｎ－１）
式中：ｎｉ为第ｉ种兰花内生真菌种类的数目；Ｎ 表示
群落中所有内生真菌的种类总数。
２　结果与分析
２．１　内生真菌分离和鉴定状况
在两种不同的分离方法下，共在９种兰属植物
菌根中分离出可培养的内生真菌菌株９９株（表２）。
经过形态鉴定，能够鉴定到属的真菌菌株２８株，隶
属于４个菌属，分别是镰刀菌属 （Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、曲霉
属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、交链孢属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、角菌根菌
属（Ｃｅｒａｔｏｒｈｉｚａ），这些与分子鉴定的结果一致。结
合形态鉴定和ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列对比信息，在９种不
同生境下兰属植物的菌根中共分离得到内生真菌
２９种（表２）。其中镰刀菌 （Ｆｕｓａｒｉｕｍ），瘤菌根菌
（Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ）等菌属种类曾经被报道为兰属菌根
真菌［１１］。子囊菌的种类占有率明显高于担子菌
（２６∶３）。
表２　９种兰属植物中内生真菌分布
Ｔａｂｌｅ　２　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ９　Ｃｙｍｂｉｄｉｕｍｐｌａｎｔｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ
真菌种属 ＣＡ　 ＣＢ　 ＣＣ　 ＣＤ　 ＣＬ　 ＣＰ　 ＴＥ　 ＳＹ　 ＱＢ　 ＫＬ　 ＬＢ 总菌数 出现率（％）
Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　 ２　 ２　 ２．０２
Ａｒｔｈｒｉｎｉｕｍ　 １　 １　 １．０１
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｂｉｏｎｅｃｔｒｉａ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｃｅｒａｔｏｒｈｉｚａ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｃｈｒｏｍｏｓｐｏｒｉｕｍ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ　 １　 １　 １．０１
Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ　 １　 １　 １　 ３　 ３．０３
Ｄａｃｔｙｌｅｌｌａ　 １　 １　 １．０１
Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ　 １　 １　 １．０１
Ｄｉｄｙｍｏｐｓｉｓ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　 １　 ２　 ４　 ２　 ３　 ３　 １　 ３　 １　 １　 １　 ２２　 ２２．２０
Ｆｕｓｏｍａ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ　 １　 １　 １．０１
Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ　 １　 １　 １　 １　 ４　 ４．０４
Ｍｏｎｉｌｉａ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｎｏｄｕｌｉｓｐｏｒｉｕｍ　 １　 １　 ０．７４
Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ　 １　 １　 １．０１
Ｐａｐｕｌｏｓｐｏｒａ　 １　 １　 １．０１
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ　 １　 １　 １　 １　 ４　 ４．０４
Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ　 １　 １　 １．０１
Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ　 １　 １　 ２　 ２．０２
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ（Ａｎａ－
ｍｏｒｐｈｉｃ　Ｈｙｐｏｃｒｅａ）
１　 ２　 １　 １　 ５　 ５．０５
Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ　 ２　 １　 ２　 ５　 ５．０５
Ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｆｕｎｇｕｓ　 １　 １　 １　 １　 １　 ５　 ５．０５
Ｘｙｌａｒｉａ　 １　 １　 １　 １　 １　 １　 ６　 ６．０６
合计 １０　 ９　 １２　 ９　 ８　 ７　 ６　 ７　 ７　 ７　 ７　 ９９　 １００
６７３
　第５期 代晓宇，等：野生兰属植物根部内生真菌多样性初步研究
２．２　内生真菌聚类分析
将所得到的内生真菌根据鉴定信息进行ｒＤ－
ＮＡ－ＩＴＳ序列的系统发育聚类分析（表３）。其中包
含４个鉴定信息不明确的真菌。从发育树形图上显
示，兰属植物内生真菌子囊菌门以肉座菌目（Ｈｙｐｏ－
ｃｒｅａｌｅｓ）和炭角菌目（Ｘｙｌａｒｉａｌｅｓ）为主，担子菌门以
胶膜菌科（Ｔｕｌａｓｎｅｌａｃｅａｅ）为主（图１）。
表３　兰属植物内生真菌分离鉴定信息
Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＣｙｍｂｄｉｕｍｐｌａｎｔｓ
鉴定菌株　　　　　　 宿　主　　 登记号 置信概率（％）
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ　 ＧＵ７９７１４２　 ９９
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌａｎｉ　 Ｃ．ｃｙｐｅｒｉｆｏｌｉｕｍ　 ＧＵ５９５０３８　 ９８
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＨＭ８５２０８１　 ９９
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｔｒｉｃｉｎｃｔｕｍ　 Ｃ．ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ　 ＧＵ４４１５９６　 ９９
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ　 ＡＹ９２４２６９　 ９６
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ　 ＨＱ１３０７０６　 ９７
Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｋａｎｒａｎ　 ＦＪ１９６６０４　 ９９
Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ　ｓｐ． Ｃ．ｋａｎｒａｎ　 ＡＭ４１９０７４　 １００
Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ　ｓｐ． Ｃ．ｋａｎｒａｎ　 ＦＪ７０８６１１　 ９６
Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＦＪ６０５２５９　 ９７
Ｎｅｏｎｅｃｔｒｉａ　ｓｐ． Ｃ．ｋａｎｒａｎ　 ＧＱ１３１８７６　 ９９
Ｎｅｏｎｅｃｔｒｉａ　ｓｐ． Ｃ．ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ　 ＨＱ１３０６６２　 ９８
Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ　ｓｐ． Ｃ．ｔｒａｃｙａｎｕｍ　 ＧＵ０６６７０８　 ９８
Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ　ｓｐ． Ｃ．ｔｒａｃｙａｎｕｍ　 ＧＵ０６６６９１　 ９８
Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＨＭ０４２３０７　 １００
Ｘｙｌａｒｉａｌｅｓ　ｓｐ． Ｃ．ｃｙｐｅｒｉｆｏｌｉｕｍ　 ＡＢ２５５２４８　 ９８
Ｘｙｌａｒｉａｌｅｓ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＡＦ１５３７４１　 ９５
Ｘｙｌａｒｉａｌｅｓ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉ ＧＱ４６１７２５　 ９７
Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ　ｉｒｒｅｇｕｌａｒｉｓ　 Ｃ．ｌｉａｎｐａｎ　 ＡＹ２４３５１９　 ９６
Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ　ｐｒｕｉｎｏｓａ　 Ｃ．ｌｉａｎｐａｎ　 ＧＵ１６６４２１　 ９９
Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ　ｃａｌｏｓｐｏｒａ　 Ｃ．ｌｉａｎｐａｎ　 ＧＵ１６６４１０　 ９８
Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ　ｓｐ． Ｃ．ｌｉａｎｐａｎ　 ＦＪ６１３２６７　 ９４
Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ　ｓｐ． Ｃ．ｌｉａｎｐａｎ　 ＡＪ３１３４４８　 ９８
Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＦＪ２０５４６１　 ９８
Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉ ＥＵ２７３５１９　 ９９
Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｓｐ． Ｃ．ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ　 ＧＵ５９５０５１　 ９７
Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＧＵ５９２００５　 ９７
Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ　ｐｓｅｕｄｏｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ　 Ｃ．ｑｉｕｂｅｉｅｎｓｅ　 ＦＪ９０４９１３　 ９７
Ｄａｃｔｙｌｅｌｌａ　ｍａｍｍｉｌｌａｔａ　 Ｃ．ｑｉｕｂｅｉｅｎｓｅ　 ＤＱ０９３７７８　 ９７
Ｃｅｒａｔｏｒｈｉｚａ　ｏｒｙｚａｅ－ｓａｔｉｖａｅ　 Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＥＵ１５２８６０　 ９６
Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ　ｓｐ． Ｃ．ｂｉｃｏｌｏｒ　 ＧＵ９８５２１５　 ９５
Ａｒｔｈｒｉｎｉｕｍ　ｐｈａｅｏｓｐｅｒｍｕｍ　 Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＡＪ２７９４５６　 ９５
Ｎｏｄｕｌｉｓｐｏｒｉｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｌａｎｃｉｆｏｌｉｕｍ　 ＧＱ９０６９６３　 ９８
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＦＪ２０５４６０　 ９９
Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ　ｓｐ． Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＦＪ５２７８７９　 １００
Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　 Ｃ．ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ　 ＥＦ４８８４３９　 ９６
ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｕｓ　 Ｃ．ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ　 ＦＪ４４９９４９　 ９８
ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｕｓ　 Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＦＪ５２４３１０　 ９５
ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｓｏｉｌ　ｆｕｎｇｕｓ　 Ｃ．ｇｏｅｒｉｎｇｉｉ　 ＤＱ４２１０６９　 ９７
７７３
新　疆　农　业　大　学　学　报 ２０１１年　
图１　兰属植物内生真菌的系统聚类分析
Ｆｉｇ．１　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ａｎｄ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＣｙｍｂｄｉｕｍｐｌａｎｔｓ
２．３　内生真菌多样性分析
从图２中可以看出，广西雅长采集到的兰属植
物内生真菌物种丰富度明显高于贵州与云南。根据
Ｓｉｍｐｓｏｎ多样性指数来看，广西兰属植物内生真菌
的多样性指数最大（０．８２２　５８３），其兰属植物内生真
菌多样性最高。广西兰属植物生境除西藏虎头兰
（Ｃ．ｔｒａｃｙａｎｕｍ），均采自密林生境。贵州与云南的
兰属植物内生真菌指数（０．６６０　４７９，０．４９７　８２２）均
低于广西，且其采集地点大部分是开阔生境。
兰属植物分布的环境，很大程度上影响兰属植
物内生真菌的多样性。广西雅长兰科植物自然保护
区采集到的兰属植物均生长在密集的兰科植物自然
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　第５期 代晓宇，等：野生兰属植物根部内生真菌多样性初步研究
保护区，根系接触到的内生真菌相对较丰富。而在
贵州及云南兰属植物的采集样地，兰科植物种类较
少，且生长生境较开阔，所以指数相对较低。研究表
明，兰属植物内生真菌的多样性因生境不同存在
差异。
图２　不同兰花生境的内生真菌物种丰富度和多样性指数（Ｄ）
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｂｕｎｄａｎｃｅ　ａｎｄ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｃｙｍｂｄｉｕｍ
３　结论与讨论
从兰属植物菌根中分离到了镰刀菌属的２２个
菌株，与资料报道中的优势菌为丝核菌属不同［１２］，
这可能是由于兰科植物与内生真菌的生态专一性决
定的，与兰属植物的生境有关。同时，与兰属植物一
样，从 五 唇 兰［１３］、杏 黄 兜 兰 （Ｐａｐｈｉｏｐｅｄｉｌｕｍ
ａｒｍｅｎｉａｃｕｍ）［１４］以及１４株来自云南西双版纳的热
带兰菌根分离到的内生真菌中镰刀菌均为优势
菌［１５］。
此外，本次试验首次在莲瓣兰中分离到柱孢菌
属 （Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ）３株，在春兰菌根中分离到１
株炭角菌属 （Ｘｙｌａｒｉａ），可为兰属植物内生真菌分
离做一补充［１６］。本次所获担子菌中经序列聚类分
析胶膜菌属同瘤菌根菌属同源关系很近，这与国内
曾报道的结论是一致的［１７］（图１）。
生境对兰花与内生真菌间关系的影响较为重
要，在同样生境下的不同种兰花有着相似的内生真
菌，而不同生境下的同一种兰科植物却有不同的内
生真菌［１８］。在本次研究中，兰属植物在不同生境下
的内生真菌的丰富度有明显的不同：密林生境的植
株中内生真菌丰富度明显高于开阔生境，半附生的
兰属植株中内生真菌的丰富度明显高于地生兰属与
附生兰属植株。这可能与兰属植物与真菌结合的营
养来源有关。在自然条件下，兰科植物幼苗的生长
需要依赖与特定的内生菌根真菌，通常都是腐生
菌［１９］，其主要来源自根部周围。兰属植物内生真菌
的丰富度及Ｓｉｍｐｓｏｎ多样性指数（Ｄ）反映了不同生
境中内生真菌的分布情况，同时可以借此来估测更
适于兰属植物生存的环境。
利用贝叶斯法后验概率作为各分支聚类的指标
得出的系统发育树，可以看到子囊菌为优势菌种，其
中镰 刀 菌 属 （Ｆｕｓａｒｉｕｍ，２２．２０％），炭 角 菌 属
（Ｘｙｌａｒｉａ，６．０６％）和 木 霉 属 （Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ，
５．０５％）为 优 势 属。而 担 子 菌 中，胶 膜 菌 属
（Ｔｕｌａｓｎｅｌｌａ，５．０５％）和瘤菌根菌 （Ｅｐｕｌｏｒｈｉｚａ，
２．０２％）属为优势属。同一种兰属植物在不同的生
境下（莎叶兰Ｃ．ｃｙｐｅｒｉｆｏｌｉｕｍ）分离得到的菌属差
异性交大，优势菌属也不同，表明兰属植物内生真菌
多样性受生境的影响比植株类型的影响大，这与
Ｔａｌｏｙ和Ｂｒｕｎｓ等的研究结果相似［２０］。
在本研究中，由于各地区样品的采集时间不同，
兰属植物的生长阶段不同，且在分离时菌根内部可
能还存在一些不可培养的内生真菌，这些都在一定
程度上影响兰属植物内生真菌多样性。在基本了解
了兰属植物内生真菌分布规律的基础上，希望为进
一步的研究提供参考数据。
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‘ｃｈｅａｔｉｎｇ’ｏｒｃｈｉｄｓ　Ｃｏｒａｌｌｏｈｉｚａ　ｍａｃｕｌａｔｅ　ａｎｄ　Ｃ．
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