全 文 ：第３９卷　第１１期
２０１１年１１月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．３９ Ｎｏ．１１
Ｎｏｖ．２０１１
ＤＯＩ：ＣＮＫＩ：６１－１３９０／Ｓ．２０１１０９０７．１０５４．０１０ 网络出版时间：２０１１－０９－０７　１０：５４
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３９０．Ｓ．２０１１０９０７．１０５４．０１０．ｈｔｍｌ
基于ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的青藏高原
棘豆属植物分子系统学研究
＊
李云霞，兰芙蓉，常朝阳，郭泽坤
（西北农林科技大学 生命科学学院，陕西 杨凌７１２１００）
［摘　要］　 【目的】探讨青藏高原棘豆属植物的系统学关系，为该属植物的研究提供分子系统学方面的资料。
【方法】以青藏高原１６种棘豆属植物２７个地理种群标本为试材，提取其总ＤＮＡ后，分别对ＩＴＳ序列和ｔｒｎＬ－Ｆ序列
进行ＰＣＲ扩增、纯化及测序，并对所测序列进行同源性比对，用Ｋｉｍｕｒａ　２－ｐａｒａｍｅｔｅｒ距离模型计算各序列间的进化距
离，以乌拉特黄耆（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｈｏａｎｔｃｈｙ）和多枝黄耆（Ａ．ｐｏｌｙｃｌａｄｕｓ）为外类群，利用 ＭＥＧＡ软件构建基于ＩＴＳ序列
和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的青藏高原棘豆属植物的系统发育进化树。【结果】ＩＴＳ序列对位后长度为７１０ｂｐ，有５８个简约信息
位点，Ｇ＋Ｃ平均含量为５４．３％，该序列的平均进化距离为０．０１６，但进化距离总体较小。ｔｒｎＬ－Ｆ序列对位后长度为
８６７ｂｐ，有９４个简约信息位点，Ｇ＋Ｃ平均含量为３３．７％，该序列的平均进化距离为０．０１８，总体进化距离较ＩＴＳ序列
大。ＩＴＳ序列较叶绿体ｔｒｎＬ－Ｆ序列含有较多的系统发育信息。在基于２个序列构建的系统发育树中，大花棘豆亚属
除少数居群外均形成单系分支，说明以心皮有无隔膜来划分棘豆属属下分类系统可以较好地获得分子系统学的支
持；但在其他亚属及组水平上，并不构成单系。【结论】棘豆属各类群间系统发育信息含量明显较低，说明棘豆属物种
分化发生较晚，尤其是在青藏高原这样一个始于第三纪造山运动的年轻区域，其棘豆属物种的新近起源和形态的快
速分化还难以在遗传水平上固定下来。
［关键词］　棘豆属；ＩＴＳ序列；ｔｒｎＬ－Ｆ序列；系统发育；青藏高原
［中图分类号］　Ｑ１１１ ［文献标识码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１１）１１－０１８７－０７
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．ｏｆ　Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ
Ｐｌａｔｅａｕ　ｂｙ　ＩＴＳ　ａｎｄ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ＬＩ　Ｙｕｎ－ｘｉａ，ＬＡＮ　Ｆｕ－ｒｏｎｇ，ＣＨＡＮＧ　Ｚｈａｏ－ｙａｎｇ，ＧＵＯ　Ｚｅ－ｋｕｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｅｘｐｌｏｒｅｄ　ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．ｏｆ　Ｑｉｎｇ－
ｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ　Ｐｌａｔｅａｕ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｍｏｒｅ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．【Ｍｅｔｈｏｄ】
Ｔｏｔａｌ　ＤＮＡ　ｏｆ　１６ｓｐｅｃｉｅｓ（２７ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ）ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｆｒｏｍ　Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ　Ｐｌａｔｅａｕ
ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ｔｈｅｎ
ｔｈｅ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ＩＴＳ　ａｎｄ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　Ｋｉｍｕｒａ　２－ｐａｒａｍｅｔｅｒ　ｍｏｄｅｌ．Ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ
ＭＥＧＡ　ｓｏｆｔｗａｒｅ　ａｎｄ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｈｏａｎｔｃｈｙａｎｄ　Ａ．ｐｏｌｙｃｌａｄｕｓ　ｗｅｒｅ　ｏｕｔｇｒｏｕｐｓ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ　ａｌｉｇｎｅｄ　ｌｅｎｇｔｈ
ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｓ　７１０ｂｐ，ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　５８ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅ　ｓｉｔｅｓ　ａｎｄ　５４．３％ Ｇ＋Ｃ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ
ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｓ　０．０１６，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｉｓ
＊ ［收稿日期］　２０１１－０４－０７
［基金项目］　国家自然科学基金项目（３０８７０１５５）
［作者简介］　李云霞（１９８４－），女，山西忻州人，在读硕士，主要从事分子进化与系统发育学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｙｕｎｘｉａ２００５＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
［通信作者］　郭泽坤（１９６９－），男，黑龙江齐齐哈尔人，教授，博士，博士生导师，主要从事分子细胞生物学研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｚｋ＠ｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｓｍａｌ．Ｔｈｅ　ａｌｉｇｎｅｄ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｓ　８６７ｂｐ，ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　９４ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅ　ｓｉｔｅｓ　ａｎｄ
３３．７％ Ｇ＋Ｃ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｓ
０．０１８，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｉｓ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｃｏｎｔａｉｎｓ　ｍｏｒｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｎ－
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｔｈａｎ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒｅｅｓ　ｏｆ　ＩＴＳ　ａｎｄ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｏｒｏｂｉａ（Ｂｕｎｇｅ）
Ｃ．Ｗ．Ｃｈａｎｇ　ｆｏｒｍ　ａ　ｗｅｌ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｃｌａｄｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｗｈｅｔｈｅｒ　ｈａｖｉｎｇ　ｓｅｐｔｕｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃａｒｐｅｌ
ｏｒ　ｎｏｔ　ｉｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒ　ｆｏｒ　ｉｎｆｒａｇｅｎｅｒｉｃ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｏｔｈｅｒ　ｓｕｂｇｅ－
ｎｕｓ　ａｎｄ　ｓｅｃｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｔｒｅｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎ　ｌｏｗ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｃｔｉｏｎｓ　ｃａｎ　ｎｏｔ　ｆｏｒｍ　ｍｏｎｏ－
ｐｈｙｌｅｔｉｃ　ｇｒｏｕｐ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ　ｌｏｗ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ
ｍａｙ　ｂｅ　ｌａｔｅ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｙｏｕｎｇ　ｆｌｏｒｉｓｔｉｃ　ｒｅｇｉｏｎ　ｌｉｋｅ　Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ　Ｐｌａｔｅａｕ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　Ｔｅｒｔｉａｒｙ　ｏｒｏ－
ｇｅｎｉｃ　ｍｏｖｅｍｅｎｔ，ｃｉｒｃｕｍｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｏｓｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｎｅｅｄｓ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｍｏｒｅ　ｄａｔａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．；ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ；ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ；ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ；Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ
Ｐｌａｔｅａｕ
　　 棘豆属（Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．）植物属于豆科（Ｌｅｇｕ－
ｍｉｎｏｓａｅ）山 羊 豆 族 （Ｇａｌｅｇｅａｅ （Ｂｒ．）Ｔｏｒｒｅｙ　ｅｔ
Ｇｒａｙ）黄耆亚族（Ａｓｔｒａｇａｌｉｎａｅ（Ａｄａｎｓ．）Ｂｅｎｔｈ．ｅｔ
Ｈｏｏｋ．ｆ．），约有３００多种，主要分布于亚洲、欧洲、
非洲和北美［１］。在我国有１３０多种，分为６个亚属，
其中大花棘豆亚属和棘豆亚属在《中国植物志》［１］中
主要是以心皮有无隔膜来划分的。棘豆属植物以内
蒙古和新疆的种类居多，其次是青藏高原及西南山
区［２］。该属植物具有重要的药用价值，尤其在藏药
中被广泛使用［３］。目前国内对棘豆属植物的研究多
集中在形态分类、细胞学、化学成分的危害、预防和
治疗及其开发利用等方面［３－１０］，在分子水平上的研
究较少。对棘豆属植物进行系统研究的仅见于Ｊｏｒ－
ｇｅｎｓｅｎ等［１１］对北美一些种的研究以及高静等［１２］对
内蒙古棘豆属的研究，而对青藏高原棘豆属植物的
分子系统学研究目前尚未见报道。
始于第三纪的造山运动不仅使青藏高原成为了
世界屋脊，也使其成为了一个特殊的自然地理综合
体。其极端复杂的环境造就了区域内植物区系的特
殊性和复杂性，近年来报道的青藏高原棘豆属新种就
有１０多个［１３－１７］。由于核ＤＮＡ　ＩＴＳ序列基因内保守
但基因间存在一定变异，且便于设计通用引物，所以
常被用来分析植物属及属下水平的系统发育关
系［１８］，如 Ｍａｔｔｈｉａｓ等［１９］通过比较黄耆属和棘豆属植
物的ＩＴＳ序列，发现在遗传多样性方面棘豆属植物更
值得保护。而叶绿体ＤＮＡ　ｔｒｎＬ－Ｆ序列所受选择压力
较小，进化较快，也常被用于属间及属下分类阶元的
系统发育分析［２０］。本研究对青藏高原１６种棘豆属植
物２７个地理种群单株的ＩＴＳ序列和叶绿体ｔｒｎＬ－Ｆ序
列进行了分析，以乌拉特黄耆（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｈｏａｎｔｃｈｙ）
和多枝黄耆（Ａ．ｐｏｌｙｃｌａｄｕｓ）为外类群，结合形态学资
料探讨青藏高原棘豆属植物的系统学关系，以期为棘
豆属植物研究提供分子系统学方面的资料。
１　材料与方法
１．１　材　料
供试的１６种棘豆属植物及外类群多枝黄耆标
本由常朝阳等在２００９年采自西藏、甘肃、四川等地，
均经野外烘干处理而成，凭证标本存放于西北农林
科技大学植物标本馆（ＷＵＫ），具体情况见表１。外
类群乌拉特黄耆的ＩＴＳ 序列来自 ＧｅｎＢａｎｋ 库
（ＡＦ５２１９５２．１）。
表１　供试棘豆属植物标本的基本情况
Ｔａｂｌｅ　１　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ
物种
Ｓｐｅｃｉｅｓ
采集地
Ｌｏｃａｌｉｔｙ
凭证标本号
Ｖｏｕｃｈｅｒ
采集日期
Ｃｏｌｅｃｔｉｎｇ　ｄａｔｅ
海拔／ｍ
Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ
毛瓣棘豆Ｏ．ｓｅｒｉｃｏｐｅｔａｌａ
Ｐｒａｉｎ　ｅｔ　Ｃ．Ｅ．Ｃ．Ｆｉｓｃｈ．
西藏日喀则市柳乡
Ｌｉｕｘｉａｎｇ，Ｒｉｋａｚｅ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ６８７　 ０７－３１　 ４　０００
西藏曲水茶巴拉乡
Ｃｈａｂａｌａｘｉａｎｇ，Ｑｕｓｈｕｉ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ６５５　 ０７－３０　 ３　６００
西藏日喀则市甲措雄乡
Ｊｉａｃｕｏｘｉｏｎｇｘｉａｎｇ，Ｒｉｋａｚｅ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ６８３　 ０７－３０　 ３　８５８
甘肃棘豆Ｏ．ｋａｎｓｕｅｎｓｉｓ　Ｂｕｎｇｅ 甘肃碌曲尕秀村 Ｇａｘｉｕｃｕｎ，Ｌｕｑｕ，Ｇａｎｓｕ　 ＱＺ１５０　 ０７－１５　 ３　５００
西藏工布江达县 Ｇｏｎｇｂｕｊｉａｎｇｄａ，Ｘｉｚａｎｇ　 ＱＺ６２９　 ０７－２８　 ４　４００
四川炉霍更知乡
Ｇｅｎｇｚｈｉｘｉａｎｇ，Ｌｕｈｕｏ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＱＺ３９２　 ０７－２１　 ３　７００
８８１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３９卷
续表１　Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ　ｔａｂｌｅ　１
物种
Ｓｐｅｃｉｅｓ
采集地
Ｌｏｃａｌｉｔｙ
凭证标本号
Ｖｏｕｃｈｅｒ
采集日期
Ｃｏｌｅｃｔｉｎｇ　ｄａｔｅ
海拔／ｍ
Ｅｌｅｖａｔｉｏｎ
密花棘豆
Ｏ．ｉｍｂｒｉｃａｔａ　Ｋｏｍ．
甘肃夏河县阿寨乡
Ａｚｈａｉｘｉａｎｇ，Ｘｉａｈｅ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ０８９　 ０７－１４　 ２　６６４
祁连山棘豆Ｏ．ｑｉｌｉａｎｓｈａｎｉｃａ
Ｃ．Ｗ．Ｃｈａｎｇ　ｅｔ　Ｃ．Ｌ．Ｚｈａｎｇ
西藏拉孜县热绒乡
Ｒｅｒｏｎｇｘｉａｎｇ，Ｌａｚｉ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ７１２　 ０７－３１　 ４　４００
黄花棘豆
Ｏ．ｏｃｈｒｏｃｅｐｈａｌａ　Ｂｕｎｇｅ
四川色达县翁达镇
Ｗｅｎｇｄａｚｈｅｎ，Ｓｅｄａ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＱＺ２６５　 ０７－１９　 ４　０００
甘肃和政县太子山
Ｔａｉｚｉｓｈａｎ，Ｈｅｚｈｅｎｇ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ００７　 ０７－１３　 ２　５００
甘肃夏河县拉卜楞
Ｌａｂｕｌｅｎｇ，Ｘｉａｈｅ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ１１６　 ０７－１４　 ３　０００
小叶棘豆
Ｏ．ｍｉｃｒｏｐｈｙｌｌａ（Ｐａｌ．）ＤＣ．
西藏拉孜县柳乡
Ｌｉｕｘｉａｎｇ，Ｌａｚｉ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ６９８　 ０７－３１　 ４　２０２
西藏定日县果热加措乡
Ｇｕｏｒｅｊｉａｃｕｏｘｉａｎｇ，Ｄｉｎｇｒｉ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ７１６　 ０７－３１　 ４　５００
冰川棘豆Ｏ．ｇｌａｃｉａｌｉｓ
Ｂｅｎｔｈ．ｅｘ　Ｂｕｎｇｅ
西藏江孜县热隆乡
Ｒｅｌｏｎｇｘｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｚｉ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ６７８　 ０７－３０　 ５　０６１
兴隆山棘豆Ｏ．ｘｉｎｇｌｏｎｇ－
ｓｈａｎｉｃａ　Ｃ．Ｗ．Ｃｈａｎｇ
甘肃夏河县清水乡
Ｑｉｎｇｓｈｕｉｘｉａｎｇ，Ｘｉａｈｅ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ０４３　 ０７－１４　 ２　２７３
洮河棘豆
Ｏ．ｔａｏｃｈｅｎｓｉｓ　Ｋｏｍ．
甘肃夏河县清水乡
Ｑｉｎｇｓｈｕｉｘｉａｎｇ，Ｘｉａｈｅ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ０３２　 ０７－１４　 ２　２７３
细小棘豆
Ｏ．ｐｕｓｉｌｌａ　Ｂｕｎｇｅ
西藏八宿吉中乡
Ｊｉｚｈｏｎｇｘｉａｎｇ，Ｂａｓｕ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ５２０　 ０７－２５　 ４　２００
软毛棘豆
Ｏ．ｍｏｌｌｉｓ　Ｒｏｙｌｅ　ｅｘ　Ｂｅｎｔｈ．
四川炉霍县旦都乡
Ｄａｎｄｕｘｉａｎｇ，Ｌｕｈｕｏ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＱＺ３７９　 ０７－２１　 ３　４５０
四川德格县柯洛洞乡
Ｋｅｌｕｏｄｏｎｇｘｉａｎｇ，Ｄｅｇｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＱＺ４４０　 ０７－２２　 ３　４００
西藏江达县岗托乡
Ｇａｎｇｔｕｏｘｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｄａ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ４５４　 ０７－２３　 ３　１００
拉伯兰棘豆Ｏ．ｌａｐｐｏｎｉｃａ
（Ｗａｈｌｅｎｂ．）Ｊ．Ｇａｙ
西藏工布江达嘎木龙玛
Ｇａｍｕｌｏｎｇｍａ，Ｇｏｎｇｂｕｊｉａｎｇｄａ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ６３６　 ０７－２８　 ４　４００
西藏八宿县邦达镇
Ｂａｎｇｄａｚｈｅｎ，Ｂａｓｕ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ５２８　 ０７－２５　 ４　５００
少花棘豆
Ｏ．ｐａｕｃｉｆｌｏｒａ　Ｂｕｎｇｅ
西藏江孜县热隆乡
Ｒｅｌｏｎｇｘｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｚｉ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ６７６　 ０７－３０　 ５　０６１
线苞棘豆
Ｏ．ｌｉｎｅａｒｉｂｒａｃｔｅａｔａ　Ｐ．Ｃ．Ｌｉ
西藏江达县同普乡
Ｔｏｎｇｐｕｘｉａｎｇ，Ｊｉａｎｇｄａ，Ｘｉｚａｎｇ ＱＺ４６７　 ０７－２３　 ４　５００
黄毛棘豆
Ｏ．ｏｃｈｒａｎｔｈａ　Ｔｕｒｃｚ．
甘肃夏河县博拉乡
Ｂｏｌａｘｉａｎｇ，Ｘｉａｈｅ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ１３７　 ０７－１５　 ２　９００
四川炉霍县旦都乡
Ｄａｎｄｕｘｉａｎｇ，Ｌｕｈｕｏ，Ｓｉｃｈｕａｎ ＱＺ３８４　 ０７－２１　 ３　４５０
宽苞棘豆
Ｏ．ｌａｔｉｂｒａｃｔｅａｔａＪｕｒｔｚ．
甘肃夏河县拉卜楞
Ｌａｂｕｌｅｎｇ，Ｘｉａｈｅ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ１１０　 ０７－１４　 ３　０００
多枝黄耆Ａ．ｐｏｌｙｃｌａｄｕｓ
Ｂｕｒ．ｅｔ　Ｆｒａｎｃｈ．
甘肃夏河县拉卜楞
Ｌａｂｕｌｅｎｇ，Ｘｉａｈｅ，Ｇａｎｓｕ ＱＺ１０７　 ０７－１４　 ３　０００
１．２　方　法
１．２．１　供试植物材料总ＤＮＡ的提取　用改良的
ＣＴＡＢ法［２１］提取各植物样品的总ＤＮＡ。经琼脂糖
凝胶电泳检测后，保存于４℃冰箱中备用。
１．２．２　目的序列的ＰＣＲ扩增　外类群乌拉特黄耆
的ＩＴＳ序列来自ＧｅｎＢａｎｋ（ＡＦ５２１９５２．１），其余ＩＴＳ
序列ＰＣＲ扩增所用引物均为ＩＴＳ５和Ｃ２６Ａ［１１］，采用
降落ＰＣＲ，反应体系５０μＬ：ＤＮＡ模板１μＬ，ＰＣＲ
ｂｕｆｅｒ　５μＬ，ＭｇＣｌ２４μＬ，ｄＮＴＰｓ　１μＬ，引物各２μＬ，
ｄｄＨ２Ｏ　３４．７５μＬ，Ｔａｑ酶（１０Ｕ）０．２５μＬ。扩增程序
为：９５℃预变性２ｍｉｎ；９４℃变性１ｍｉｎ，５５℃复性１
ｍｉｎ，７２℃延伸１．５ｍｉｎ，３个循环；９４℃变性１ｍｉｎ，
５３℃复性１ｍｉｎ，７２℃延伸１．５ｍｉｎ，３个循环；９４℃
变性１ｍｉｎ，５１℃复性１ｍｉｎ，７２℃延伸１．５ｍｉｎ，２０个
循环；最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。
ｔｒｎＬ－Ｆ序列ＰＣＲ扩增所用引物为通用引物ｃ
和ｆ［２２］，ＰＣＲ反应体系５０μＬ：ＤＮＡ 模板 １μＬ，
ＰＣＲ　ｂｕｆｆｅｒ　５μＬ，ＭｇＣｌ２４μＬ，ｄＮＴＰｓ　１μＬ，引物各
１．５μＬ，ｄｄＨ２Ｏ　３５．７５μＬ，Ｔａｑ酶（１０Ｕ）０．２５μＬ。
扩增程序为：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性１ｍｉｎ，
５６℃复性１ｍｉｎ，７２℃延伸１．５ｍｉｎ，３０个循环；最
后７２℃延伸１０ｍｉｎ。
ＩＴＳ序列的ＰＣＲ产物用ＡｘｙＰｒｅｐ　ＰＣＲ清洁试
剂盒进行纯化；ｔｒｎＬ－Ｆ序列的ＰＣＲ产物用ＡｘｙＰｒｅｐ
ＤＮＡ凝胶回收试剂盒进行纯化。由北京三博远志
技术有限责任公司完成测序，其中ＩＴＳ序列采取正
向测序，ｔｒｎＬ－Ｆ序列采取双向测序并对测序结果进
行手工校对和拼接，拼接软件为Ｃｏｎｔｉｇｌ软件。
１．３　数据处理与分析
用ＣｌｕｓｔａｌＸ２软件进行多序列比对，用 ＭＥＧＡ
９８１第１１期 李云霞，等：基于ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的青藏高原棘豆属植物分子系统学研究
进行最大简约法分析，构建系统发育进化树，用
Ｋｉｍｕｒａ　２－ｐａｒａｍｅｔｅｒ距离模型计算序列间进化距
离，自展Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ检验评价发育树，１　０００次重复。
２　结果与分析
２．１　棘豆属植物ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的特点
表２显示，ＩＴＳ序列长度为６８０～７００ｂｐ，对位
后长度为７１０ｂｐ，包括１２４个变异位点，５８个简约
信息位点，６５个单一位点，Ｇ＋Ｃ含量为５３．５％～
５５．１％，平均为５４．３％。ｔｒｎＬ－Ｆ序列长度为６９０～
７９０ｂｐ，对位后长度为８６７ｂｐ，包括１５０个变异位
点，９４个简约信息位点，５５个单一位点，Ｇ＋Ｃ含量
为３２．８％～３４．５％，平均为３３．７％。
２．２　棘豆属植物ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列间的进化距离
ＩＴＳ序列间的Ｋｉｍｕｒａ　２－ｐａｒａｍｅｔｅｒ遗传距离在
０．０００～０．０１８，平均距离为０．０１６，但总体遗传距离
较小。其中甘肃棘豆 ＱＺ３９２、ＱＺ１５０、ＱＺ６２９间，宽
苞棘豆 ＱＺ１１０与黄毛棘豆 ＱＺ３８４、ＱＺ１３７间，软毛
棘豆ＱＺ４４０、ＱＺ３７９与ＱＺ４５４间及黄花棘豆ＱＺ２６５
与ＱＺ００７间的遗传距离均为０。小叶棘豆 ＱＺ７１６
与细小棘豆 ＱＺ５２０间的遗传距离最大，为０．０１８。
细小棘豆ＱＺ５２０与其他各序列间的遗传距离都较
大。
ｔｒｎＬ－Ｆ序列间的遗传距离在０．０００～０．０４０，平
均距离为０．０１８，总体遗传距离较ＩＴＳ序列大，只有
毛瓣棘豆ＱＺ６５５与ＱＺ６８７间的距离为０。
表２　青藏高原棘豆属植物ＩＴＳ序列和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的相关参数
Ｔａｂｌｅ　２　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｆｏｒ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
序列
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
对位后长度／ｂｐ
Ａｌｉｇｎｅｄ
ｌｅｎｇｔｈ
变异位点／ｂｐ
Ｖａｒｉａｂｌｅ
简约信息位点／ｂｐ
Ｐａｒｓｉｍｏｎｙ
ｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅ
简约信息位点／％
Ｐａｒｓｉｍｏｎｙ
ｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅ　ｓｉｔｅ
Ｇ＋Ｃ含量／％
Ｇ＋Ｃ　ｃｏｎｔｅｎｔ
单一位点
Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ　ｓｉｔｅ
ＩＴＳ　 ７１０　 １２４　 ５８　 ８．２　 ５４．３　 ６５
ｔｒｎＬ－Ｆ　 ８６７　 １５０　 ９４　 １０．８　 ３３．７　 ５５
２．３　棘豆属植物ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列系统发育分析
以多枝黄耆和乌拉特黄耆为外类群对ＩＴＳ序
列、以多枝黄耆为外类群对ｔｒｎＬ－Ｆ序列，采用最大
简约法构建青藏高原棘豆属植物的系统发育树，结
果见图１和图２。其中ＩＴＳ序列的严格一致树树长
为２９４，ｔｒｎＬ－Ｆ序列的严格一致树树长为４２０。
图１　基于最大简约法构建的青藏高原棘豆属植物ＩＴＳ序列系统发育树
分支上的数字为自展支持率（％），图２同
Ｆｉｇ．１　Ｍａｘｉｍａｌ　ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓ　ｔｒｅｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＴＳ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓｏｆ　Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ　Ｐｌａｔｅａｕ
Ｎｕｍｂｅｒｓ　ａｂｏｖｅ　ｂｒａｎｃｈｅｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｂｏｏｔｓｔｒａｐ　ｖａｌｕｅｓ（％），ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｆｉｇ．２
０９１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３９卷
图２　基于最大简约法构建的青藏高原棘豆属植物ｔｒｎＬ－Ｆ序列系统发育树
Ｆｉｇ．２　Ｍａｘｉｍａｌ　ｐａｒｓｉｍｏｎｉｏｕｓ　ｔｒｅｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ　Ｐｌａｔｅａｕ
　　从图１可以看出，多枝黄耆和乌拉特黄耆处于
分支的基部，所有棘豆属的种类自成一支，自展支持
率为９９％。除黄花棘豆甘肃夏河居群ＱＺ１１６与甘
肃和政居群 ＱＺ００７、四川色达居群 ＱＺ２６５，小叶棘
豆西藏拉孜居群ＱＺ６９８与定日居群ＱＺ７１６，以及毛
瓣棘豆西藏日喀则居群 ＱＺ６８７和日喀则的另一个
居群ＱＺ６８３及曲水居群 ＱＺ６５５外，相同物种不同
地理种群均能够聚为一类，自展支持率均超过
５０％。大花棘豆亚属的种类除小叶棘豆拉孜居群
ＱＺ６９８外形成一个单系分支，自展支持率为８１％；
其余棘豆亚属的种类为软毛棘豆与细小棘豆聚为一
支，自展支持率为５８％；毛瓣棘豆与冰川棘豆聚为
一支，自展支持率为６２％；小叶棘豆拉孜居群与黄
花棘豆聚为一支，自展支持率为９５％；甘肃棘豆与
密花棘豆及毛瓣棘豆的ＱＺ６８７居群聚为一支，自展
支持率为５４％，少花棘豆与线苞棘豆聚为一支，自
展支持率为５２％。
从图２可知，大花棘豆亚属的种类形成一个单
系分支，自展支持率为９９％，其余棘豆亚属种类与
ＩＴＳ序列构建的系统发育树差异较大，而且很多相
同物种不同地理种群未聚在一起，有很多物种间的
自展支持率为０，形成了多岐分支。
３　讨　论
目前对棘豆属的系统学研究主要是以传统形态
学特征为依据，通过分子学手段探讨其系统演化及
物种间关系的研究还较少。本研究依据核基因ＩＴＳ
序列和叶绿体ｔｒｎＬ－Ｆ序列，构建了青藏高原１６种
棘豆属植物２７个居群的系统发育树，结果显示，
ＩＴＳ序列比叶绿体ｔｒｎＬ－Ｆ序列含有更多的系统发
育信息。赵海光等［２３］在基于ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列对
繁缕及其近缘种的亲缘关系分析中指出，ｔｒｎＬ－Ｆ序
列的鉴别能力较ＩＴＳ序列弱，这与本研究结果一
致。有研究表明，被子植物中叶绿体ＤＮＡ的进化
速率比核ＤＮＡ低，而大多数植物中以无性生殖方
式进行遗传的细胞器基因的突变速度比核基因的
低［２４］，这可能是导致本研究中ＩＴＳ序列和ｔｒｎＬ－Ｆ
序列构建的系统发育树差别较大的原因。
康云等［２５］通过ＩＴＳ序列研究了中国簇毛黄耆
亚属植物的系统学问题，发现棘豆属植物均聚在了
１９１第１１期 李云霞，等：基于ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的青藏高原棘豆属植物分子系统学研究
一个大分支上，支持率达到了１００％。本研究构建
的基于ＩＴＳ序列和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的系统发育树也显
示，棘豆属植物和黄耆属植物分属同一大支，支持了
棘豆属单系起源的观点［１２］。王丽等［２６］在对青藏高
原上棘豆属和黄耆属７种植物的核型研究中得出，
小叶棘豆普兰种群的核型属于２Ｂ型，而其拉孜种
群为１Ａ型。本研究中基于ＩＴＳ序列构建的进化树
中，小叶棘豆拉孜种群与定日种群未聚在一起，这支
持了小叶棘豆不同地理种群间有一定差异的观
点［２６］；王丽等［２６］还发现，冰川棘豆与毛瓣棘豆的核
型均属２Ａ型，但前者有２个Ｂ染色体且第４对染
色体短臂上具随体。本研究基于ＩＴＳ序列构建的
进化树中，毛瓣棘豆与冰川棘豆聚在了一起，说明二
者有较近的亲缘关系。
　　本研究构建的ＩＴＳ序列进化树中，大花棘豆亚
属除小叶棘豆拉孜居群（ＱＺ６９８）外均可构成单系，
而在以多枝黄耆为外类群构建的ｔｒｎＬ－Ｆ序列系统
发育树中，大花棘豆亚属形成单系分支。显然，以心
皮有无隔膜来划分棘豆属属下分类阶元，能获得分
子系统学比较好的支持。但新修订的《中国植物志
（英文版）》［２７］取消了大花棘豆亚属，并将其亚属下
的植物均归入棘豆亚属中，本研究不支持这一观点。
同时，在《中国植物志》［１］中，少花棘豆和线苞棘豆分
别属于棘豆组和蓝花棘豆组，黄花棘豆和小叶棘豆
也分属于不同亚属，但在《中国植物志（英文版）》［２７］
中将少花棘豆和线苞棘豆都归入了矮生棘豆组中，
将黄花棘豆和小叶棘豆均归为同一亚属。本研究结
果也显示，少花棘豆与线苞棘豆、黄花棘豆与小叶棘
豆分别聚在了一起。
另外，本研究中相同种的不同地理种群在基于
ＩＴＳ序列构建的系统发育树中也基本能够聚为一
类，说明它们具有相同的遗传背景。但在组的水平
上，传统分类所承认的组并没有构成单系。显然，对
棘豆属属下分类系统的界定仍需进行更深入的研
究。
　　Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ等［１１］对阿拉斯加棘豆属２个复合群
的研究及高静等［１２］对内蒙古棘豆属的分子系统学
研究，均出现了遗传变异位点偏低及信息含量较低
的现象。本研究结果与此类似，说明棘豆属的物种
分化发生较晚，尤其对于青藏高原这样一个年轻的
区域，物种的新近起源和形态的快速分化还没有在
遗传上固定下来。因此，今后的研究应选取更多的
棘豆属物种及居群数量，并选择更好的基因序列，以
期能更准确地说明它们的系统发育关系。
［参考文献］
［１］　张振万，徐朗然，韦　直，等．中国植物志 ［Ｍ］．第四十二卷第
二分册．北京：科学出版社，１９９８：１－１４５．
Ｚｈａｎｇ　Ｚ　Ｗ，Ｘｕ　Ｌ　Ｒ，Ｗｅｉ　Ｚ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ［Ｍ］．Ｔｏｍｕｓ
４２（２）．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ，１９９８：１－１４５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２］　吴征镒．西藏植物志 ［Ｍ］．第二卷．北京：科学出版社，１９８３．
Ｗｕ　Ｚ　Ｙ．Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｔｉｂｅｔａｎ ［Ｍ］．Ｖｏｌｕｍｅ　２．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｐｒｅｓｓ，１９８３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［３］　华　桦，赵军宁．藏药棘豆的化学、药理及临床应用研究进展
［Ｊ］．中国民族民间医药杂志，２００８（８）：３０－３３．
Ｈｕａ　Ｈ，Ｚｈａｏ　Ｊ　Ｎ．Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｈ－
ａｒｎｍａｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｉｂｅｔａｎ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ［Ｊ］．
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ，２００８
（８）：３０－３３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［４］　李玉林，廖志新，杜玉枝．棘豆属植物化学成分研究概况 ［Ｊ］．
天然产物研究与开发，２００２（５）：７５－７９．
Ｌｉ　Ｙ　Ｌ，Ｌｉａｏ　Ｚ　Ｘ，Ｄｕ　Ｙ　Ｚ．Ａ　ｓｕｒｖｅｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｒｅ－
ｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２（５）：７５－７９．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［５］　敖力布，巴根那，陈红梅．蒙药多叶棘豆和硬毛棘豆总黄酮含量
的比较研究 ［Ｊ］．中国民族医药杂志，１９９８，４（增刊）：６６－６７．
Ａｏ　Ｌ　Ｂ，Ｂａ　Ｇ　Ｎ，Ｃｈｅｎ　Ｈ　Ｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｉｎ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｍｙｒｉｏｐｈｙｌｌａａｎｄ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｈｉｒｔａ　ｕｓｅｄ　ａｓ　Ｍｏｎｇｏ－
ｌｉａｎ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｍａｄｉｃａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　＆ Ｐｈａｒｍａｃｙ　ｏｆ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｉｎｏｒｉｔｉｅｓ，１９９８，４（Ｓｕｐｐｌ．）：６６－６７．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［６］　Ｌｏｕ　Ｃ　Ｈ，Ｗａｎｇ　Ｍ　Ｙ，Ｙａｎｇ　Ｇ　Ｍ．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ａｎｔｉ－
ｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　２′，４′－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈａｌｃｏｎｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｈｅｒｂａ
Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ＭＧＣ－８０３ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉ－
ｃｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，２００９，２３（５）：９０６－９１０．
［７］　李建科．中国棘豆属植物开发利用研究现状及前景评述 ［Ｊ］．
草与畜杂志，１９９７（４）：３－５．
Ｌｉ　Ｊ　Ｋ．Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ａｎｄ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｅｖｅｌ－
ｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ［Ｊ］．Ｆｏｒａｇｅ　ａｎｄ
Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ，１９９７（４）：３－５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［８］　李俊年．黄花棘豆对藏系绵羊食物消化率的作用 ［Ｊ］．中国畜
牧杂志，２００２（３）：３３－３４．
Ｌｉ　Ｊ　Ｎ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｏｃｈｒｏｃｅｐｈａｌａ　ｉｎ　ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ
Ｔｉｂｅｔａｎ　ｓｈｅｅｐ’ｓ　ｆｏｏｄ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ，２００２
（３）：３３－３４．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［９］　席琳乔，马丽萍．草地毒草棘豆的研究现状及进展 ［Ｊ］．草原与
草坪，２００３（３）：１９－２２．
Ｘｉ　Ｌ　Ｑ，Ｍａ　Ｌ　Ｐ．Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｏｎ　ｇｒａｓｓｌａｎｄ　ｐｏｉ－
ｓｏｎｏｕｓ　ｗｅｅｄｓ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ［Ｊ］．Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　ａｎｄ　Ｔｕｒｆ，２００３（３）：１９－
２２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　张振万．中国棘豆属新分类群 ［Ｊ］．西北植物学报，１９９３，１３
（４）：３２２－３２３．
Ｚｈａｎｇ　Ｚ　Ｗ．Ｎｅｗ　ｔａｘｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．ｆｒｏｍ　Ｃｈｉ－
ｎａ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｂｏｒｅａｌｉ－Ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａ　Ｓｉｎｉｃａ，１９９３，１３
（４）：３２２－３２３．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１１］　Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ　Ｊ　Ｌ，Ｓｔｅｈｌｉｋ　Ｉ．Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ
ＲＡＰＤ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔａｘｏｎｏｍｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　ｔｈｅ
Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ　ａｎｄ　Ｏ．ａｒｃｔｉｃａ（Ｆａｂａｃｅａｅ）ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ　ｉｎ
２９１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３９卷
Ａｌａｓｋａ［Ｊ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，２００３，９０（１０）：１４７０－
１４８０．
［１２］　高　静，卢　萍，王金妞，等．基于ＩＴＳ序列的几种内蒙古棘豆
属植物分子系统学研究 ［Ｊ］．华北农学报，２００９，２４（６）：１６８－
１７３．
Ｇａｏ　Ｊ，Ｌｕ　Ｐ，Ｗａｎｇ　Ｊ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ｏｆ　ｓｅｖｅｒａｌ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ［Ｊ］．Ａｃｔａ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａ　Ｂｏｒｅａｌｉ　Ｓｉｎｉｃａ，２００９，２４（６）：１６８－１７３．（ｉｎ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ）
［１３］　Ｚｈｕ　Ｘ　Ｙ，Ｄｕ　Ｙ　Ｆ．Ａ　ｎｅｗ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）
ｆｒｏｍ　Ｘｉｚａｎｇ（Ｔｉｂｅｔ）ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｎｏｖｏｎ，２００２，１２：４３０－４３２．
［１４］　Ｗｏｌｆ　Ｂ　Ｄ，Ｍｏｎｉｋａ　Ｋ．Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｉｒｉｄｕｍ（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ），ａ　ｎｅｗ
ｓｐｅｃｉｅｓ　ｆｒｏｍ　ＳＥ　Ｔｉｂｅｔ（Ｘｉｚａｎｇ，Ｃｈｉｎａ），ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｐｈｙｔｏｇｅｏ－
ｇｒａｐｈｉｃａｌ　ｎｏｔｅｓ［Ｊ］．Ｗｉｌｄｅｎｏｗｉａ，２００６，３６：８５７－８６５．
［１５］　吴玉虎．青海棘豆属三新种 ［Ｊ］．云南植物研究，１９９７，１９（１）：
３３－３７．
Ｗｕ　Ｙ　Ｈ．Ｔｈｒｅｅ　ｎｅｗ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．（Ｌｅ－
ｇｕｍｉｎｏｓａｅ）ｆｒｏｍ　Ｑｉｎｇｈａｉ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｙｕｎ－
ｎａｎｉｃａ，１９９７，１９（１）：３３－３７．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１６］　吴玉虎．青海棘豆属新分类群 ［Ｊ］．植物分类学报，１９９７，３５
（４）：３４８－３５２．
Ｗｕ　Ｙ　Ｈ．Ｎｅｗ　ｔａｘａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ｆｒｏｍ　Ｑｉｎｇｈａｉ，
Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈｙｔｏｔａｘｏｎｏｍｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ，１９９７，３５（４）：３４８－
３５２．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１７］　吴玉虎．青海棘豆属一新种 ［Ｊ］．西北植物学报，１９９７，１７（１）：
１０９－１１１．
Ｗｕ　Ｙ　Ｈ．Ａ　ｎｅｗ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｕｓ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ＤＣ．（Ｌｅｇｕ－
ｍｉｎｏｓａｅ）ｆｒｏｍ　Ｑｉｎｇｈａｉ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｂｏｒｅａｌｉ－
Ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉａ　Ｓｉｎｉｃａ，１９９７，１７（１）：１０９－１１１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１８］　Ｂｒｕｃｅ　Ｇ，Ｂａｌｄｗｉｎ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｕｔｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ
ｓｐａｃｅｒｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ：Ａｎ　ｅｘａｍｐｌｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，１９９２，１
（１）：３－１６．
［１９］　Ｍａｔｔｈｉａｓ　Ｓ，Ｍａｒｋｕｓ　Ｇ，Ｇｕｉｄｏ　Ｗ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｌｉｃｔｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ
ｇｅｎｕｓ　ｃｏｍｐｌｅｘ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ／Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ（Ｆａｂａｃｅａｅ），ａｎｄ　ｔｈｅ
ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｂｙ　ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ｍｅａｎｓ［Ｊ］．Ｒｅｌｉｃｔ　Ｓｐｅ－
ｃｉｅｓ：Ｐｈｙｌｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ　ａｎｄ　Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，２：１０５－
１１７．
［２０］　Ｂａｙｅｒ　Ｂ　Ｊ，Ｓｔａｒｒ　Ｊ　Ｒ．Ｔｒｉｂａｌ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ　ｂａｓｅｄ
ｏｎ　ｔｗｏ　ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｔｈｅ　ｔｒｎＬ　ｉｎｔｒｏｎ　ａｎｄ
ｔｒｎＬ／ｔｒｎＦ　ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ　ｓｐａｃｅｒ［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍｉｓｓｏｕｒｉ　Ｂｏ－
ｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ，１９９８，８５：２４２－２５６．
［２１］　顾红雅．植物分子生物学实验手册 ［Ｍ］．北京：高等教育出版
社，１９９８：４－１１．
Ｇｕ　Ｈ　Ｙ．Ｐｌａｎｔ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ｌａｂ　ｍａｎｕａｌ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：
Ｈｉｇｈｅｒ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　Ｐｒｅｓｓ，１９９８：４－１１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２２］　Ｔａｂｅｒｌｅｔ　Ｐ，Ｇｉｅｌｙ　Ｌ，Ｐａｕｔｏｕ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｆｏｒ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ　ＤＮＡ
［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９１，１７：１１０５－１１０９．
［２３］　赵海光，周建建，曹珊珊，等．基于ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列碱基差
异的繁缕及其近缘种的亲缘关系分析 ［Ｊ］．植物资源与环境
学报，２００９，１８（１）：１－５．
Ｚｈａｏ　Ｈ　Ｇ，Ｚｈｏｕ　Ｊ　Ｊ，Ｃａｏ　Ｓ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅ－
ｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ａｍｏｎｇ　Ｓｔｅｌｌａｒｉａｍｅｄｉａａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂａｓｅｄ
ｏｎ　ＩＴＳ　ａｎｄ　ｔｒｎＬ－Ｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ
Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，２００９，１８（１）：１－５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２４］　唐　萍，彭　程．叶绿体基因组进化的速率和方式 ［Ｊ］．生物
学通报，２０１０，４５（６）：８－１０．
Ｔａｎｇ　Ｐ，Ｐｅｎｇ　Ｃ．Ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ　ＤＮＡ　ｅ－
ｖｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｕｌｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，４５（６）：８－１０．（ｉｎ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ）
［２５］　康　云，张明理，陈之瑞．基于ＩＴＳ序列对中国簇毛黄耆亚属
（黄耆属）系统学问题的初步研究 ［Ｊ］．植物学报，２００３，４５
（２）：１４０－１４５．
Ｋａｎｇ　Ｙ，Ｚｈａｎｇ　Ｍ　Ｌ，Ｃｈｅｎ　Ｚ　Ｒ．Ａ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ
ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｇｅｎｕｓ　Ｐｏｇｏｎｏｐｈａｃｅ（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ）ｉｎ　Ｃｈｉｎａ
ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｄａｔａ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ，２００３，
４５（２）：１４０－１４５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２６］　王　丽，顾志建，孙　航．青藏高原几种黄耆和棘豆植物核型
的初步研究 ［Ｊ］．云南植物研究，１９９４，１６（１）：５３－５９．
Ｗａｎｇ　Ｌ，Ｇｕ　Ｚ　Ｊ，Ｓｕｎ　Ｈ．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｋａｒｙｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔｓ　ｉｎ　ｇｅｎｅｒａ　Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ　ａｎｄ　Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｆｒｏｍ
Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｘｉｚａｎｇ　Ｐｌａｔｅａｕ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ　Ｙｕｎｎａｎｉｃａ，１９９４，
１６（１）：５３－５９．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２７］　Ｘｕ　Ｌ　Ｒ，Ｃｈｅｎ　Ｄ　Ｚ，Ｚｈｕ　Ｘ　Ｙ．Ｆｌｏｒａ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ：Ｆａｂａｃｅａｅ［Ｍ］．
Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ，２０１０：４５３－５００．
３９１第１１期 李云霞，等：基于ＩＴＳ和ｔｒｎＬ－Ｆ序列的青藏高原棘豆属植物分子系统学研究