全 文 ：LIVESTOCK AND POULTRY INDUSTRY NO．278
杨树花提取液对分离自灵长类动物
大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌试验
刘位斌1 王 凝2
（1.四川省简阳市畜牧局，四川 简阳 6414002；2.四川农业大学）
中图分类号：S859.3 文献标识码：A 文章编号：1008-0414(2012)06-0016-03
摘 要 目的 评价杨树花提取液的中药制剂对分离自灵长类动物体内大肠菌
及沙门氏菌的抑菌效果。 方法 通过牛津杯法测试了其对大肠杆菌以及沙门氏菌的抑
菌圈大小，以及用二倍稀释法测定了其最低抑菌浓度（MIC）。 结果 试验表明，杨树花
提取液对大肠杆菌（EMB-LZ-5-14和 EMB-LZ-5-3株）表现为高度敏感，对沙门氏菌
（SS-LZ-5-7株）表现为中度敏感，而对沙门氏菌（SS-LZ-5-14株）和大肠杆菌（EMB-
LZ-4-2株）则表现为低度敏感。其MIC值也应不同菌种而呈现出一定的差异。结论 杨
树花提取液对分离自灵长类动物体内大肠杆菌以及沙门氏菌具有一定的抑菌效果。
关键词 杨树花提取液 灵长类动物 大肠杆菌 沙门氏菌
Antibacterial of Populus tomentosa extract on Escherichia
coli and Salmonella isolated from Primates
LIOU Wei－bin1， WANG Ning2
(1.Bureau of Animal Husbandry of JianYang Sichan, JianYang Sichan
6414002,China;2. Sichuan Agricultural University)
Abstracts: Objective This study was undertaken to determine the antibacterial
effect of Populus tomentosa Carr. extract, a traditional Chinese medicine, on Escherichia
coli and Salmonella isolated from primates in Lanzhou zoo. Methods The agar well
diffusion system (the method of Oxford -cup tests) was performed for detecting the
bacteriostasis rings and minimal inhibitory concentrations (MIC) were determined by tube
double dilution method. [1-2] Results Populus tomentosa Carr. extract was highly sensitive
to EMB-LZ -5 -14 and EMB-LZ -5 -3，moderately sensitive to SS -LZ -5 -7，low -grade
sensitive to SS-LZ-5-14 and EMB-LZ-4-2. Conclusion Populus tomentosa Carr. extract ,
with good antibacterial effect , can be applied in control of infection caused by Escherichia
coli．and Salmonella in clinical.
Keywords:Populus tomentosa Carr. Extract；Primates；Escherichia coli；Salmonella
灵长动物属于哺乳纲的一目，动
物界最高的最高等类群， 也是世界最
珍贵物种之一。 中国是世界上少数几
个灵长类动物最丰富的国家之一 ,在
全世界现生存的200余种灵长类动物
中 , 中国分布有 4科 7属 2 3种共 39
亚种。 其中5种是中国特有的，且中国
所有的灵长类都是濒危物种。 由此看
来，关注灵长类动物的生存，保护其健
康发展已刻不容缓。
据国内外报道， 大肠杆菌和沙门
氏菌严重危害着灵长类动物的健康，
感染后常引发其他疾病的发生， 最终
导致动物的死亡。 随着化学类药物在
兽医临床的广泛和不规范应用， 造成
了临床大量耐药菌的产生， 这给动物
疫病的防控带来较大困难， 中兽药作
为我国传统兽医学的一部分， 应用于
兽医临床具有高效、低毒、无残留和耐
药性等特点， 甚至部分中兽药具有消
除细菌耐药质粒的作用， 因此加强对
中兽药药理、 药效及毒理学等方面的
系统研究， 为开发中兽药新药应用于
兽医临床具有重要意义。 杨树花不仅
含有较丰富的营养物质 （含粗蛋白质
30%左右），而且具有清热解毒、健脾
养胃、止泻止痢等功能，在畜牧业生产
上有诸多妙用。 本实验通过分离的灵
长类动物体内大肠杆菌， 进行药敏试
验，分析出其耐药谱，进一步研究此中
药制剂对灵长类动物的抑菌特点，旨
在开发一种新型的中药抑菌制剂，为
药用植物的综合利用开辟一条新途
径，更好保护灵长类动物的健康。
1 实验材料
1.1 杨树花提取液制剂
由四川农业大学动物医学院预防兽
医学实验室提供。
1.2 菌株
大肠杆菌以及沙门氏菌菌株由四
川农业大学动物医学院预防兽医学实
验室提供。
1.3 培养基
（1）普通营养肉汤 :牛肉膏1 g、蛋
白胨2 g、氯化钠1 g、自来水200 mL,调
节pH7.4;（2）普通琼脂培养基：普通肉
汤150 mL，琼脂2.5 g。
分别放入两个锥形瓶内121℃高
温灭菌30 min，将平板倒好，冷却检查
无菌后放于4℃冰箱内备用。
1.4 实验仪器
牛津杯，4℃冰箱，Promaga公司微
量移液器，Tip吸头，电子精密天平，隔水
式电热恒温培养箱，电子天平，电热炉，
恒温摇床，高压灭菌锅，超净工作台。
2 实验方法
2.1 体外抑菌活性测定
2.1.1 菌悬液的制备: 将每种细菌分
别挑取并接种于新鲜营养肉汤培养基
中，置于37℃恒温箱中培养了18～24 h
时制成菌液备用。
2.1.2 致病菌液涂布: 用微量移液枪
取菌液0．2 mL置于制备好的营养琼脂
检测平板内。 用无菌玻耙将指示菌液
在平板上涂布均匀。 37℃恒温干燥20
min以固定菌液。使菌液渗入培养基表
层内,取出后即可进行抑菌试验。
2.1.3 加入杨树花制剂: 用镊子夹取
无菌牛津杯轻轻放人检测平板培养皿
中。 在水平放置的平皿中轻轻放下牛
津杯，吸取益生菌菌液0．08 mL至牛津
杯中 (注意不要将益生菌菌液溢出杯
外)。 然后将加好益生菌菌液的培养皿
正面放置37℃恒温培养箱中培养18～
24 h。 观察制剂对两种致病菌的抑菌
情况。观察纸片周围有无抑菌圈，记录收稿日期：2012－03－28
兽医研究16· ·
2012年 6月 畜禽业总 278期
结果。测量抑菌圈的直径，比较个菌株
对各种抗菌药的敏感性。 药敏判定标
准见表1[10,11]。
2.2 最低抑菌浓度（MIC值）的测定
杨树花提取液抑菌效果测定试验
采用试管二倍稀释法测定药物的最低
抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concent
ration,MIC）。 用表2的方法，将每组菌
样取10支灭菌试管排于试管架上，用
加样器吸取营养肉汤在1号试管中加
入1.5 mL肉汤， 其余试管中各加入1
mL[12]。 吸取药物原液（生药浓度为1 g/
mL）0.5 mL加入第1管, 混匀后, 吸取1
mL移入第二管,混匀后,再由第二管吸
取1 mL于第三管，依此类推，直至第九
管，吸取1 mL弃去，第十管不加药液作
对照。 在每个试管中加入培养的稀释
后的菌液各0.05 mL, 同时设置营养肉
汤、菌液对照组,置37 ℃恒温箱中培养
24 h,观察结果。 无细菌生长的试管的
稀释倍数即为该药液对菌株的最低抑
菌浓度[13]。
3 结果
3.1 体外抑菌活性的测定结果
研究杨树花提取液对于大肠杆菌
和沙门氏菌的抑菌作用时， 从杨树花
提取液对实验菌的抑制效果 （表3）可
见 ，杨树花对于大肠杆菌 （EMB-LZ-
5-14和EMB-LZ-5-3） 表现为高度敏
感 ，对沙门氏菌 （SS-LZ-5-7）表现为
中度敏感 ，而对于沙门氏菌 （SS-LZ-
5-14）和大肠杆菌 （EMB-LZ-4-2）则
表现为低度敏感[14，15]。
3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定结果
研究杨树花提取液对于大肠杆菌
和沙门氏菌的最低抑菌浓度时， 根据
抑菌圈测定结果，只做三个样品实验，
分别为沙门氏菌（SS-LZ-5-7）和大肠
杆菌 （EMB-LZ-5-14和EMB-LZ-5-
3）。 杨树花提取液对于沙门氏菌的抑
菌效果比较弱， 相比之下的大肠杆菌
对这种药物更为敏感（表4）。
4 讨论与分析
4.1 利用试管二倍稀释法结合牛津
杯法测定杨树花提取液对大肠杆菌和
沙门氏菌的体外抑菌作用。 其结果判
定直观、 简单。 从体外抑菌作用观察
看， 杨树花提取液对大肠杆菌和沙门
氏菌均有抑菌作用， 但抑菌效果上有
差异。
4.2 通过进行杨树花提取液对于大
肠杆菌和沙门氏菌的抑菌效果实验，
可以初步断定杨树花提取液对大肠杆
菌有相对良好的抑菌效果， 而对于沙
门氏菌也有一定的抑制作用。
4.3 试验采用中草药煎剂来测定
MIC，且所用药物均加热煮沸，并进行
了高压灭菌。 但高压会使某些中草药
煎剂的药理活性降低； 加热煮沸也可
能会使中草药的部分有效成分被破
坏，从而导致药物的MIC值偏高，这会
造成一定的试验误差。
4.4 本次实验的体外抑菌实验的效
果没有预计的明显， 我们以为杨树花
除了本身的抑菌效果以外， 还能对动
物机体的免疫系统有促进和增强作
用， 要对此进一步验证还需要进行更
加深入的实验。
4.5 化学类药物在兽医临床的广泛
和不规范应用， 造成了临床大量耐药
菌的产生， 这给动物疫病的防控带来
较大困难， 中兽药作为我国传统兽药
的一部分， 具有高效， 安全低毒的特
点。为此，我们应该加大在这个领域的
相关研究。 杨树花作为传统中药的一
种， 且在很多实践工作中已经为人们
所认识， 但市面上一直缺少比较系统
的相关研究， 所以希望能通过此类实
验加深人们对中兽药的认识。
参考文献
[1] VandenBogaard,A.E.,N.London,C.Driess
＞20 mm
极敏感
15～20 mm
高度敏感
抑菌圈直径
抑菌效果判定
10～15 mm
中度敏感
＜10 mm
低度敏感
表1 牛津杯药敏判定标准
表2 二倍稀释法
1
0.05
2
0.05
类别
菌液
1.5 1.0肉汤
3
0.05
1.0
4 7
1.0 1.0
0.05 0.05
8
1.0
0.05
9
10（对
照）
1.0 1.0
0.05 0.05
中药原液 0.5 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
1.0
（弃）
中药稀释液 1/4 1/8 1/16 1/32 1/256 1/512 1/1024 0
5
1.0
0.05
1.0
1/64
6
1.0
1.0
1/128
0.05
菌株编号
EMB-LZ-5-3
菌种
大肠杆菌
S-LZ-5-7沙门氏菌
最小抑菌浓度（MIC）：mg/mL
125
31.25
大肠杆菌 EMB-LZ-5-14 62.5
表3 抑菌圈测定结果
表4 最低抑菌浓度测定结果
大肠杆菌 EMB-LZ-4-2 9 - 2010-9-29
SS-LZ-5-7 11沙门氏菌 + 2010-9-29
大肠杆菌 EMB-LZ-5-14 15 + 2010-9-29
大肠杆菌 EMB-LZ-5-3 16 + 2010-9-29
SS-LZ-5-14 9.5沙门氏菌 - 2010-9-29
菌种 菌株编号 抑菌圈直径 敏感性 测量时间
兽医研究
mL
mm
17· ·
LIVESTOCK AND POULTRY INDUSTRY NO．278
摘 要 试验应用3种广谱驱虫药和1种驱吸虫药及不同组合模式对200只山
羊的体内寄生虫进行了驱除试验，结果表明，敌百虫、丙硫苯咪唑和阿维菌素3种广谱
驱虫药在投药后虫卵减少率分别为79.30%、87.75%和88.21%。 3种广谱驱虫药和1种
驱吸虫药(硝氯酚)不同组合的虫卵减少率分别为敌百虫+硝氯酚组80.75%，丙硫苯咪
唑+硝氯酚组88.53%，敌百虫+0.2%阿福丁组90.00%。 丙硫苯咪唑+敌百虫组89.90%，
0.2%阿福丁+硝氯酚90.09%，0.2%阿福丁+丙硫苯咪唑组90.47%， 空白对照组的虫卵
数未见减少，反而有增加的趋势。 给药前和给药后各组的日增重差异明显。
关键词 山羊 敌百虫 阿福丁粉剂 丙硫苯咪唑 硝氯酚
不同驱虫药及组合
对山羊体内寄生虫的驱除效果研究
侯喜娥（山西省偏关县畜牧兽医局，山西 偏关 036400）
中图分类号：S858.27 文献标识码：A 文章编号：1008-0414(2012)06-0018-03
寄生虫病是山羊普遍感染和危害
性极大的一种疾病，种类多、分布广，
能引起山羊的生产率及生产性能下降
和大批死亡， 其中某些人畜共患寄生
虫病，还直接危害人类的健康。长期以
来， 化学药物驱虫一直是寄生虫防治
的主要手段， 而且在今后相当长的一
段时间内仍将是防治家畜寄生虫的重
要手段。 但由于化学驱虫药的长期及
频繁使用， 使虫体对某些药物产生明
显的抗药性。 解决抗药性问题应提倡
联合用药。在临床实践中，常常合并使
用两种或多种药物进行治疗， 目的是
为提高疗效，减少用量，降低或避免毒
性，防止和延缓抗药性产生 [7，8]。 为此，
应用目前常用的3种广谱驱虫药(敌百
虫、丙硫苯咪唑和阿维菌素 )和1种驱
吸虫药(硝氯酚)及不同药物组合模式
对200只山羊的体内寄生虫进行了驱
除试验。
1 材料与方法
1.1 药品
敌百虫片，0.3 g/片 ; 0.2%阿福丁
粉剂；丙硫苯咪唑片100 mg/片;硝氯酚
片，100 mg/片。
1.2 动物
羊200只， 选自山西省偏关县自
然放牧的羊群， 年龄为1岁左右 ， 公
母均有。 试验前粪便虫卵检查为寄生
虫严重感染羊群。
1.3 动物分组、投药及饲养管理
将200只羊按体重大小随机分成
10组，每组20只，舍饲，每组的精料和
草料实行定量饲喂， 每天分2次投喂，
自由饮水，每天清粪1次，每15 d对圈
舍和场地进行1次消毒， 用10%～20%
的石灰乳和20%的漂白粉溶液， 喷洒
地面、墙、顶棚（每平方米1 L液体）；及
时发现发病羊，并及时给予治疗。投药
方式 :投药前对进行称重，根据重量，
准确计算的药量。敌百虫片，丙硫苯咪
唑片， 硝氯酚片先用适量干净水溶解
后， 用精料作为载体， 拌匀后投喂；
0.2%阿福丁粉剂按33 kg体重5 g，逐
头给药。给药后，观察试验组和对照组
羊只的精神、活动、食欲、反刍、粪便及
临床反应。 各组的投药情况见表1。
1.4 试验方法
1.4.1 驱杀羊体内寄生虫试验方案：
于2011年9月1日至10月30日进行为期
50 d驱虫试验。 给药前3 d均进行虫卵
检查，注意观察试验动物的健康状况，
检出的虫卵进行分类计数和鉴定，给
药后注意观察试验动物反应并检查排
出的虫体，定期( 每7 d 1次) 进行粪便
虫卵检查。
试验开始后即进行1次称重，结束
后再进行1次称重，根据2次称重结果，
计算出各组给药后的增重情况。
1.4.2 粪便虫卵检查：利用饱和盐水
漂浮法结合沉淀法检查虫卵， 所得两
数之和为每个粪样中的虫卵数， 分别
计算粪样中给药前和给药后的虫卵
数， 并计算出各组粪样中的虫卵减少
收稿日期：2012－03－31
作者简介：侯喜娥（1973－），女，山西人，主
要从事动物疫病防治工作
兽医研究
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