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四川畜牧兽医·2012·5期·总第 259期
试
验
研
究
灵长类是具有灵性的最高等哺乳动物，是所有动
物中最进步的一类，也是世界上最珍贵的物种之一。
非人灵长类是人类的近亲，在形态和机能上有很多与
人相似的部分，常作为很重要的实验动物，但是疾病的
广泛发生带来了巨大的经济损失。尤因非人灵长类是某
些人类传染病病原的易感动物，在肠道杆菌病研究中可
用作最理想的动物模型。杨树花为杨柳科植物毛白杨、
加拿大杨或同属树种植物的干燥雄花序，性味苦寒，具
有清热解毒，化湿止痢之功效。常用其水煮液治疗人和
家畜的各类细菌性痢疾和肠炎，临床效果良好。
本试验通过琼脂扩散法的牛津杯法测试了杨树
花提取液对大肠埃希氏菌以及沙门氏菌的抑菌圈大
小，此方法是国内外测定抗生素效价的通用方法，也
是各国药典规定的方法。进行抑菌活力测定时，如果
不能正确使用该法，很易使抑菌圈不清晰或无抑菌圈
出现，故而应该从多次重复试验中得出一些经验，以
供参考。并用二倍稀释法测定其最低抑菌浓度，此方
法是测定体外最低抑菌浓度的一般方法，可以在较为
便捷的方式下测出可靠结果。研究杨树花中药提取液
对动物园灵长类动物肠道中的大肠杆菌和沙门氏菌
的药物敏感性，可以为以后及时准确的诊断治疗和保
护野生动物及人类自身安全提供依据。
1 材料与方法
杨树花提取液对灵长类动物肠道
大肠杆菌和沙门氏菌的体外药敏试验
李金良 1，李 波 2，刘江涛 1
（1.四川省金堂县畜牧局，四川 金堂 610400；2.四川农业大学动物医学院，四川 雅安 625014）
中图分类号：S853.23 文献标识码：B 文章编号：1001-8964（2012）05-0028-02
摘要： 为了解和评价灵长类动物肠道致病性大肠杆菌和沙门氏菌分离株对杨树花提取液的敏感性
情况，开展了本研究。 本次检测结果表明，灵长类动物肠道中的致病性大肠杆菌和沙门氏菌对杨树花中
药提取液具有较高的敏感性，可用于临床的药物治疗研究。
关键词：杨树花提取液；灵长类；大肠杆菌；沙门氏菌；药敏检测
Antibacterial of Populus tomentosa extract on Escherichia coli and
Salmonella isolated from primates
LI Jin-liang1，LI Bo2，LIU Jiang-tao1
（1.Animal Husbandry Bureau of Jintang，Sichuan Jintang 610400；
2.Sichuan Agricultural University，Sichuan Ya’an 625014，China）
Abstract： In order to determine the antibacterial effect of Populus tomentosa Carr. extract， a
traditional Chinese medicine，on Escherichia coli and Salmonella isolated from primates，we started this
study. The result showed that Populus tomentosa Carr. extract had good antibacterial effect，it could be
applied in control of infection caused by Escherichia coli and Salmonella in clinical.
Key words：Populus tomentosa Carr. Extract；Primates；Escherichia coli；Salmonella
收稿日期：2012-03-20
作者简介：李金良（1964-），男，重庆铜梁人，大学本科，兽
医师，主要研究方向：兽医临床医学。
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1.1 试验材料
1.1.1 菌株 灵长类动物肠道致病性大肠杆菌和沙
门氏菌菌株由四川农业大学预防兽医学实验室提供。
1.1.2 仪器与试剂 电子精密天平、恒温培养箱、冰
箱、高压灭菌锅、恒温摇床、牛津杯、超净工作台、各种
玻璃器皿、营养琼脂平板等。
1.2 试验方法与设计
1.2.1 体外抑菌活性测定
1.2.1.1 菌悬液的制备 将每种细菌分别挑取并接种
于新鲜营养肉汤培养基中，然后在 37℃恒温箱中培养
24 h制成菌液备用。
1.2.1.2 致病菌液涂布 用微量移液枪取菌液 0.2 mL
置于制备好的营养琼脂检测平板内，用灭菌 L棒分别均
匀涂布于平板上，37℃恒温干燥 20min以固定菌液，使
菌液渗入培养基表层内，取出后即可进行抑菌试验。
1.2.1.3 加入杨树花制剂 用镊子夹取无菌牛津杯轻
轻放入检测平板培养皿中，在水平放置的平皿中轻轻
放下牛津杯，吸取杨树花制剂 0.08mL至牛津杯中。然
后将加好制剂的培养皿正面放置于 37℃恒温培养箱
中培养 24 h。观察该制剂对两种致病菌的抑菌情况。
1.2.2 最低抑菌浓度（MIC值）的测定 用二倍稀释法
测定各药物的最低抑菌浓度（MIC）。用表 1所示的方
法，取已编号的灭菌试管 10支，先在 1号试管加营养
肉汤 1.5 mL，在 2～9号试管加营养肉汤 1 mL，然后吸
取各中药原液（生药浓度为 1 g/mL）0.5mL移入 1号试
管，混匀后，取出 1 mL混合液移入 2号试管，依次操
作。至 9号管弃去 1mL，各管最终体积为 1mL，把药液
依次稀释成 1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、
1/1 024的不同浓度，即分别为 250、125、62.5、31.25、
15.6、7.8、3.9、1.95、0.98、0.48mg/mL的生药含量。向上
述每管加菌悬液 50μL，同时设营养肉汤、菌液对照
管，置 37℃恒温箱中培养 18～24 h后，肉眼观察试管
内液体澄清的最低药物浓度（该浓度记为 MIC值）。
2 试验结果
2.1 体外抑菌活性的测定结果 从表 2可见，杨树花
对沙门氏菌 SS-ZH-10-2株的作用很强，而对沙门氏
菌 SS-ZH-1-1 株和大肠杆菌 EMB-ZH-1-1 株、
EMB-ZH-3-1 株和 EMB-ZH-5-1 株的抑菌效果较
强，对沙门氏菌 SS-ZH-4-1株和 SS-ZH-7-1株，以及
大肠杆菌 EMB-ZH-7-1株的效果不明显。
2.2 最低抑菌浓度（MIC 值）的测定结果 从表 3 可
见，杨树花提取液对大肠杆菌的抑菌效果比较弱，相
比之下沙门氏菌对其更为敏感。
3 分析与讨论
近年来，动物园在饲养灵长类动物时为了控制和
预防细菌感染，广泛使用抗生素药物，导致大肠杆菌
和沙门氏菌普遍耐药。抗生素的作用机理一般是通过
进入致病菌体内破坏其赖以繁殖和生长所需物质的
生成，抑制其繁殖和生长，促使动物机体的免疫系统
发挥作用，或是直接将致病菌杀死。
3.1 比较杨树花提取液对大肠杆菌和沙门氏菌的抑
菌效果可以看出，杨树花提取液对大肠杆菌和沙门氏
菌都有一定的抑制作用，且沙门氏菌对其更为敏感。
3.2 本次试验中，因为采用的是体外抑菌试验，其效
果没有体内的明显，而杨树花除了本身的抑菌效果以
外，还可能对动物机体的免疫系统有促进和增强作
用，要对此进一步验证还需要深入研究。
3.3 化学类药物在兽医临床的广泛和不规范应用，造
成了临床上大量耐药菌的产生，这给动物疫病的防控
带来较大困难，中兽药作为我国传统兽药的一部分，
具有高效、安全低毒的特点，为此，我们应该加大在这
个领域的相关研究。 ■
参考文献：
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注：抑菌直径≥20mm 为极敏，用“+++”表示；15~19mm
为高敏，用“++”表示；10~14mm 为中敏，用“+”表示；抑菌直
径≦10mm 为低敏，用“-”表示。
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类别 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10（对照）
肉汤 1.5 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
中药原液 0.5 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0（弃）
中药稀释液 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1 024 0
菌液 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
表 1 二倍稀释法 mL
菌种 菌株编号 最小抑菌浓度（MIC）
沙门氏菌 ZH-1-1 62.5
沙门氏菌 ZH-10-2 62.5
大肠杆菌 ZH-1-1 125
大肠杆菌 ZH-3-1 125
大肠杆菌 ZH-5-1 62.5
表 3 杨树花提取液对肠道病原菌的最小抑菌浓度（MIC）值 mg/mL
菌种 菌株编号 抑菌圈直径 敏感性
沙门氏菌 ZH-1-1 13.9 +
沙门氏菌 ZH-4-1 0 -
沙门氏菌 ZH-7-1 0 -
沙门氏菌 ZH-10-2 15.1 ++
大肠杆菌 ZH-1-1 10.6 +
大肠杆菌 ZH-3-1 11.8 +
大肠杆菌 ZH-5-1 14.3 +
大肠杆菌 ZH-7-1 0 -
表 2 杨树花提取液对肠道病原菌的体外抑菌活性 mm
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收稿日期：2012-01-05
基金项目： 云南省高端科技人才引进计划子项目：PHA 复
合物对猪瘟疫苗和猪蓝耳病疫苗免疫效果的影响
（2009C1125-6）。
作者简介：徐波（1977-)，男，兽医师，云南罗平人，硕士研究生。
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口服 PHA复合物对
犬细小病毒疫苗免疫效果的影响
徐 波 1，肖 啸 2
（1.云南省罗平县罗雄镇畜牧兽医站，云南 罗平 655800；
2.云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 650201）
中图分类号：S852.45 文献标识码：B 文章编号：1001-8964（2012）05-0030-03
摘要： 为了更好地指导犬细小病毒病的防治， 减少犬患细小病毒病的几率， 本文通过试验验证了
PHA（植物血凝素）复合物是否对犬细小病毒疫苗有增效作用。 结果表明，PHA 复合物与英特威二联苗联
用可提高犬对英特威二联苗的抗体应答能力，可以更好地防治犬细小病毒病。
关键词：犬细小病毒；PHA复合物；免疫效果
Effect of PHA complex on the immune efficacy of Canine parvovirus vaccine
XU Bo1，XIAO Xiao2
（1.Animal Husbandry and Veterinary Station of Luoxiong Town，Yunnan Luoping 655800；
2.Animal Science and Technology College of Yunnan Agricultural University，Yunnan Kunming 650201，China）
Abstract：In order to guide prevention and treatment of canine parvovirus better，and reduce the
risk of canine parvovirus disease，PHA complexes were certified if it could enhance the effect of CPV
vaccine. The results showed that PHA complexes combined with intervet bivalent vaccine could improve
the dog′s antibody response capacity，prevention and treatment of Canine parvovirus.
Key words：Canine parvovirus；PHA complex；Immune efficacy
犬细小病毒感染是由犬细小病毒（CPV）引起的一
种急性传染病。临床表现以急性出血性肠炎和非化脓
性心肌炎为特征，目前广泛流行于世界各地，是危害
养犬业最为严重的传染病之一。PHA又叫植物血凝素
或者植物凝集素，是利用国际先进的超低温冷冻技术
试
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