全 文 :基金项目:教育部科学技术研究重点资助项目(DF2003078)
作者简介:冯卫生 ,男 ,教授 ,博士生导师 研究方向:中草药活性成分研究及新药开发 Tel:(0371)65680011 E-mail:fwsh@hactcm.
edu.cn
绣球花的化学成分研究
冯卫生 1 , 张艳丽 2 , 郑晓珂1 , 王彦志 1(1.河南中医学院药学院 , 郑州 450008;2.黑龙江中医药大学 , 哈尔滨 150040)
摘要:目的 研究虎耳草科植物绣球花 [ Hydrangeamacrophyla(Thunb.)Seringe]的化学成分。 方法 利用 DiaionHP-20,
ToyopearlHW-40, 硅胶等柱色谱技术进行分离纯化 , 根据化合物的光谱数据和理化性质鉴定结构。结果 分离并鉴定了 12
个化合物的结构 , 即甲基-β-芸香糖苷(Ⅰ ), 龙胆酸(Ⅱ), 邻苯二酚(Ⅲ), 8-表番木鳖酸(Ⅳ), caryoptoside(Ⅴ), 槲皮素-3-
O-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ ), 山柰酚-3-O-β-芸香糖苷(Ⅶ ), 5, 4′-二羟基山柰酚-7-O-β-芸香糖苷(Ⅷ ), 山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷
(Ⅸ ), 1, 2, 4-苯三酚(Ⅹ ), 7-羟基香豆素(Ⅺ), 芦丁(≫)。结论 化合物Ⅰ ~ Ⅹ 为首次从该植物中分离得到。
关键词:绣球属;绣球花;甲基-β-芸香糖苷;8-表番木鳖酸;化学成分
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1001-2494(2011)08-0576-04
StudyonChemicalConstituentsofHydrangeamacrophyla(Thunb.)Seringe
FENGWei-sheng1 , ZHANGYan-li2 , ZHENGXiao-ke1 , WANGYan-zhi1(1.SchoolofPharmacy, HenanColegeofTra-
ditionalChineseMedicine, Zhengzhou450008, China;2.HeilongjiangUniversityofTraditionalChineseMedicine, Harbin150040,
China)
ABSTRACT:OBJECTIVE TostudythechemicalconstituentsofHydrangeamacrophyla(Thunb.)Seringe.METHODS The
compoundswereisolatedandpurifiedbyDiaionHP-20, ToyopearlHW-40, andsilicagelcolumnchromatography, andtheirstruc-
tureswereidentifiedonthebasisofspectraldataandphysiochemicalproperties.RESULTS Twelvecompoundswereobtainedandi-
dentifiedasmethyl-β-rutinoside(Ⅰ ), gentisicacid(Ⅱ), pyrocatechol(Ⅲ), 8-epiloganicacid(Ⅳ), caryoptoside(Ⅴ), quercetin-3-
O-β-D-glucopyranoside(Ⅵ ), kaempferol-3-O-β-rutinoside(Ⅶ ), 5, 4′-dihydroxy-kaempferol-7-O-β-rutinoside(Ⅷ ), kaempferol-3-O-
β-D-glucopyranoside(Ⅸ ), 1, 2, 4-benzenetri(Ⅹ ), 7-hydroxycoumarin(Ⅺ)andrutin(≫).CONCLUSION CompoundsⅠ -Ⅹ
wereisolatedfromthisplantforthefirsttime.
KEYWORDS:Hydrangea;Hydrangeamacrophyla(Thunb.)Seringe;methyl-β-rutinoside;8-epiloganicacid;chemicalconstituents
绣 球 花 [ Hydrangea macrophyla(Thunb.)
Seringe]为虎耳草科(Saxifragaceae)绣球属多年生草
本植物。绣球属植物全世界约 80种 ,分布于亚洲及
拉丁美洲 、北美洲 ,我国有 45种[ 1] 。绣球花又名八仙
花 、紫阳花 ,为绣球属中的民间常用中药 ,分布广泛 ,
我国南北各地庭院中多有栽培 ,其全草具有清热解毒
抗疟之功效 ,主治疟疾 ,心热惊悸 ,烦躁等。民间将绣
球花的嫩叶用手搓揉去其绿汁 ,晒干制作为甜茶 ,治
疗疟疾。现代药理及临床研究表明绣球花具有良好
的抗疟 、抗过敏 、降脂 、降血糖等 [ 2]作用。为了更好的
利用绣球花药用植物资源 ,我们利用现代中药化学手
段对其化学成分做了深入的研究 ,从中分离并鉴定了
12个化合物的结构 ,即甲基-β-芸香糖苷(Ⅰ),龙胆酸
(Ⅱ),邻苯二酚(Ⅲ), 8-表番木鳖酸(Ⅳ), caryoptoside
(Ⅴ),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅵ ),山柰酚-3-O-β-
芸香糖苷(Ⅶ ), 5, 4′-二羟基山柰酚-7-O-β-芸香糖苷
(Ⅷ),山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅸ ), 1, 2, 4-苯三酚
(Ⅹ), 7-羟基香豆素(Ⅺ),芦丁(≫)。其中化合物Ⅰ ~
Ⅹ为首次从该植物中分离得到 。
1 仪器与试药
Kofler显微测熔仪 (未经校正);ShimadzuPC
8201红外光谱仪(KBr压片);ShimadzuUV-VIS2201
紫外分光光度计;PerkinElmerPolarimeter341微量
旋光仪;APEXI型傅立叶变换离子回旋质谱仪;
BrukerDPX-400型核磁共振仪 , TMS为内标;柱层
析填充剂所用 DiaionHP-20, ToyopearlHW-40
(日本三菱公司);硅胶(160 ~ 200目 ,青岛海洋化工
厂);所用试剂为分析纯 。
绣球花于 2008年 9月采自河南省栾川县 ,经河
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南中医学院董诚明教授鉴定为虎耳草科绣球属植物
绣球花 [ Hydrangeamacrophyla(Thunb.)Seringe]的
全草 ,标本保存在河南中医学院中药化学研究室。
2 提取与分离
绣球花新鲜全草 10 kg,用体积分数 50%丙酮
在闪式提取器中组织破碎提取 2次 ,过滤 ,合并滤液
低温减压浓缩得总干粉 400 g。总干粉用水分散溶
解离心 ,上清液低温减压浓缩干燥得到水溶物 240
g,适量水溶解上 DiaionHP-20柱 ,依次用水 、10%、
20%、50%含水甲醇及 70%含水丙酮洗脱 ,低温减
压浓缩得到水洗脱部位(158g)、10%甲醇洗脱部位
(13.3 g)、20%甲醇洗脱部位(7.9 g)、30%甲醇洗
脱部位(9.1 g)、40%甲醇洗脱部位(8.5 g)。其中
水洗脱部位水溶上 ToyopearlHW-40柱 ,依次用
水 、10%、20%※0%含水甲醇洗脱 ,得到的各流分再
反复通过 ToyopearlHW-40、SephadexLH-20、MCI
GelCHP-20、硅胶等柱 ,并结合制备液相得到化合
物 Ⅰ (20mg)、Ⅱ(15mg)、Ⅲ(22mg)、Ⅺ(300mg)。
同法 ,化合物Ⅳ(13 mg)、Ⅴ(17 mg);化合物 Ⅵ (35
mg)、Ⅶ (23mg)、≫(31mg);化合物 Ⅷ(17 mg)、Ⅸ
(28mg)、Ⅹ (20 mg)分别从 10%甲醇洗脱部位 、
30%甲醇洗脱部位 、40%甲醇洗脱部位分离得到 。
3 结构鉴定
化合物 Ⅰ:黄色油状(甲醇)。1H-NMR(CD3OD,
400MHz)δ:4.31(1H, d, J=7.4 Hz, H-1), 4.74
(1H, d, J=1.4 Hz, H-1′), 3.49(3H, s, OCH3);
13C-NMR(CD3OD, 100 MHz)δ:105.3 (C-1),
102.3(C-1′), 77.9(C-3), 76.8(C-5), 74.9(C-
2), 74.0(C-4′), 72.3(C-3′), 72.1(C-2′), 71.6
(C-4), 69.7(C-5′), 68.1(C-6), 57.2(OCH3),
18.0(C-6′)。以上数据与文献 [ 3]报道的甲基 -β-芸
香糖苷基本一致 。
化合物 Ⅱ:白色结晶(甲醇), mp204 ~ 206 ℃,
三氯化铁 -铁氰化钾反应阳性。1H-NMR(CD3OD,
400MHz)δ:7.27(1H, d, J=3.0 Hz, H-6), 6.77
(1H, dd, J=3.0, 8.7 Hz, H-4), 6.64(1H, d,
J=8.7 Hz, H-3);13C-NMR(CD3OD, 100 MHz)δ:
176.0(COOH), 155.5(C-2), 149.8(C-5), 121.3
(C-4), 120.4(C-6), 117.3(C-3), 117.1(C-1)。
以上数据与文献 [ 4]报道的龙胆酸基本一致 。
化合物 Ⅲ:白色针状结晶(甲醇), mp104 ~ 106
℃, 三氯化铁 -铁氰化钾反应阳性。1H-NMR(Ace-
tone-d6 , 400 MHz)δ:6.80(2H, m, H-2, 5), 6.67
(2H, m, H-3, 4);13C-NMR(Acetone-d6 , 100MHz)
δ:145.9(C-1, 6), 120.7(C-3, 4), 116.1(C-2,
5)。以上数据与文献[ 5]报道的邻苯二酚基本一致。
化合物Ⅳ:白色结晶(甲醇), mp129 ~ 130 ℃,
三氯化铁-铁氰化钾反应阳性 。1H-NMR(CD3OD,
400 MHz)δ:7.38(1H, s, H-3), 5.27(1H, d,
J=4.5 Hz, H-1), 4.65(1H, d, J=7.9Hz, H-1′),
4.04(1H, t, J=4.04 Hz, H-7), 2.24(1H, m, H-
6), 2.03(1H, m, H-9), 1.87(1H, m, H-8), 1.64
(1H, m, H-6), 1.09(3H, d, J=6.9 Hz, H-10);13
C-NMR(CD3OD, 100 MHz)δ:170.9(COOH),
152.1(C-3), 114.2(C-4), 100.0(C-1′), 97.6(C-
1), 78.3(C-5′), 78.0(C-3′), 75.1(C-7), δ74.7
(C-2′), 71.6(C-4′), 62.7(C-6′), 46.5(C-9),
42.7(C-6), 42.1(C-8), 32.1(C-5), 13.4(C-10)。
以上数据与文献[ 6]报道的 8-表番木鳖酸基本一致。
化合物Ⅴ:白色结晶(甲醇), mp137 ~ 139 ℃,
三氯化铁-铁氰化钾反应阳性 。1H-NMR(CD3OD,
400 MHz)δ:7.51(1H, s, H-3), 5.24(1H, d,
J=2.0 Hz, H-1), 4.78(1H, d, J=8.0Hz, H-1′),
3.70(3H, d, J=4.2 Hz, OCH3), 3.39(1H, m, H-
7), 3.20(1H, m, H-5), 2.82(1H, m, H-6), 2.02
(1H, m, H-9), 1.76(1H, m, H-6), 1.38(3H, d,
J=6.8 Hz, H-10);13C-NMR(CD3OD, 100 MHz)δ:
168.7(COOH), 154.5(C-3), 110.8(C-4), 100.0
(C-1′), 97.1(C-1), 78.5(C-5′), 78.3(C-8),
77.9(C-3′), 75.0(C-7), 74.7(C-2′), 71.6(C-
4′), 62.8(C-6′), 51.8(OCH3), 49.9(C-9), 37.3
(C-6), 32.0(C-5), 19.9(C-10)。以上数据与文
献[ 7]报道的 caryoptoside基本一致 。
化合物Ⅵ :黄色粉末(甲醇), mp231 ~ 232 ℃,
盐酸 -镁粉反应阳性 , Molish反应阳性 , 三氯化铁 -
铁氰化钾反应阳性 , 茴香醛-硫酸喷雾显黄色(105
℃)。1H-NMR(CD3OD, 400 MHz)δ:7.70(1H, d,
J=2.2 Hz, H-2′), 7.59(1H, dd, J=2.2, 8.8 Hz,
H-6′), 6.87(1H, d, J=8.6Hz, H-5′), 6.37(1H,
d, J=2.0Hz, H-8), 6.19(1H, d, J=2.0 Hz, H-
6), 5.24(1H, d, J=7.6 Hz, H-1″);13 C-NMR
(CD3OD, 100 MHz)δ:179.9(C-4), 166.0(C-7),
163.0(C-5), 159.8(C-2), 158.5(C-9), 149.7(C-
4′), 145.9(C-3′), 135.6(C-3), 123.5(C-6′),
123.0(C-1′), 117.6(C-5′), 116.0(C-2′), 105.5
(C-10), 104.4(C-1″), 100.1(C-6), 94.8(C-8),
·577·中国药学杂志 2011年 4月第 46卷第 8期 ChinPharmJ, 2011April, Vol.46No.8
78.4(C-5″), 78.1(C-3″), 75.7(C-2″), 71.2(C-
4″), 62.6(C-6″)。以上数据与文献 [ 8]报道的槲皮
素 -3-O-β-D-葡萄糖苷基本一致 。
化合物Ⅶ :黄色粉末(甲醇), mp223 ~ 224 ℃,
盐酸 -镁粉反应阳性 , Molish反应阳性 , 三氯化铁-铁
氰化钾 反应阳 性 , 茴 香醛-硫酸喷雾 显黄 色
(105℃)。1H-NMR(CD3OD, 400 MHz)δ:8.12(2H,
d, J=8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.93(2H, d, J=8.7 Hz,
H-3′, 5′), 6.71(1H, d, J=1.7 Hz, H-8), 6.49
(1H, d, J=1.7Hz, H-6), 5.03(1H, d, J=7.2Hz,
H-1″), 4.70(1H, d, J=1.3 Hz, H-1 ), 1.16(3H,
d, J=6.2 Hz, H-6 );13C-NMR(CD3OD, 100 MHz)
δ:177.6(C-4), 164.4(C-7), 162.3(C-5), 160.8(C-
4′), 157.7(C-9), 148.9(C-2), 137.5(C-3), 130.9
(C-2′, 6′), 123.6(C-1′), 116.4(C-3′, 5′), 106.3
(C-10), 102.1(C-1 ), 101.6(C-1″), 100.1(C-6),
95.8(C-8), 77.8(C-5″), 77.1(C-3″), 74.8(C-2″),
74.1(C-4 ), 72.4(C-3 ), 72.1(C-2 ), 71.3(C-4″),
69.8(C-5 ), 67.4(C-6″), 17.9(C-6 )。在 HMBC谱
中葡萄糖端基氢与黄酮醇 3位碳 δ137.5(C-3)有远程
相关 。以上数据与文献[ 9]报道的山柰酚-3-O-β-芸香
糖苷基本一致。
化合物 Ⅷ:黄色粉末(甲醇), mp266 ~ 268 ℃,
盐酸-镁粉反应阳性 , Molish反应阳性 , 三氯化铁-
铁氰化钾反应阳性 , 茴香醛 -硫酸喷雾显黄色(105
℃)。1H-NMR(CD3OD, 400 MHz)δ:8.11(2H, d,
J=8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.93(2H, d, J=8.4 Hz, H-
3′, 5′), 6.70(1H, s, H-8), 6.48(1H, d, J=1.7
Hz, H-6), 5.03(1H, d, J=7.0 Hz, H-1″), 4.70
(1H, d, J=0.8 Hz, H-1 ), 1.16(3H, d, J=6.2
Hz, H-6 );13C-NMR(CD3OD, 100 MHz)δ:177.5
(C-4), 164.3(C-7), 162.3(C-5), 160.8(C-4′),
157.6(C-9), 148.9(C-2), 137.5(C-3), 130.9(C-
2′, 6′), 123.5(C-1′), 116.4(C-3′, 5′), 106.3(C-
10), 102.1(C-1 ), 101.6(C-1″), 100.1(C-6),
95.8(C-8), 77.8(C-5″), 77.1(C-3″), 74.7(C-
2″), 74.0(C-4 ), 72.4(C-3 ), 72.1(C-2 ), 71.3
(C-4″), 69.8(C-5 ), 67.4(C-6″), 17.9(C-6 ),在
HMBC谱中葡萄糖端基氢与黄酮醇 7位碳 δ164.3
(C-7)有远程相关 。以上数据与文献 [ 10]报道的 5,
4′-二羟基山柰酚-7-O-β-芸香糖苷基本一致 。
化合物 Ⅸ :黄色粉末(甲醇), mp171 ~ 173 ℃,
盐酸-镁粉反应阳性 , Molish反应阳性 , 三氯化铁-
铁氰化钾反应阳性 , 茴香醛 -硫酸喷雾显黄色(105
℃)。1H-NMR(CD3OD, 400 MHz)δ:8.05(2H, d,
J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.89(2H, d, J=8.8Hz, H-
3′, 5′), 6.38(1H, d, J=1.6Hz, H-8), 6.19(1H,
d, J=1.6Hz, H-6), 5.24(1H, d, J=7.2 Hz, H-
1″);13C-NMR(CD3OD, 100 MHz)δ:179.5(C-4),
166.6(C-7), 163.3(C-5), 161.6(C-4′), 159.0(C-
2), 158.6(C-9), 135.4(C-3), 132.2(C-2′, 6′),
122.8(C-1′), 116.0(C-3′, 5′), 105.6(C-10),
104.1(C-1″), 100.0(C-6), 94.9(C-8), 78.4(C-
5″), 78.0(C-3″), 75.7(C-2″), 71.4(C-4″), 62.6
(C-6″)。以上数据与文献[ 11]报道的山柰酚 -3-O-β-
D-葡萄糖苷基本一致。
化合物Ⅹ :白色结晶(甲醇), mp140 ~ 142 ℃,
三氯化铁 -铁氰化钾反应阳性。1H-NMR(Acetone-d6 ,
400 MHz)δ:7.43(1H, d, J=8.0 Hz, H-5), 7.40
(1H, brs, H-3), 6.79(1H, J=8.0 Hz, H-6);13C-
NMR(CD3OD, 100 MHz)δ:151.2(C-4), 145.9
(C-2), 123.8(C-1), 118.7(C-6), 115.6(C-3,
5)。以上数据确定该化合物为 1, 2, 4-苯三酚。
化合物Ⅺ:白色结晶(甲醇), mp225 ~ 227℃,
三氯化铁-铁氰化钾反应阳性 。1H-NMR(CD3OD,
400 MHz)δ:7.84(1H, d, J=9.6 Hz, H-4), 7.50
(1H, d, J=8.4 Hz, H-5), 6.83(1H, dd, J=2.3,
8.4 Hz, H-6), 6.75(1H, d, J=2.3 Hz, H-8),
6.15(1H, d, J=9.6Hz, H-3);13C-NMR(Acetone-
d6 , 100 MHz)δ:161.8(C-7), 160.9(C-2), 156.8
(C-9), 144.6(C-4), 130.3(C-5), 113.6(C-3),
112.8(C-6), 112.7(C-10), 103.1(C-8)。以上数
据与文献 [ 12]报道的 7-羟基香豆素基本一致 。
化合物≫:黄色粉末(甲醇), mp178 ~ 180℃,
盐酸 -镁粉反应阳性 , Molish反应阳性 , 三氯化铁 -
铁氰化钾反应阳性 , 茴香醛-硫酸喷雾显黄色(105
℃)。1H-NMR(400 MHz, CD3OD)δ:7.66(1H, d,
J=2.0 Hz, H-2′), 7.61(1H, dd, J=2.0 , 8.6 Hz,
H-6′), 6.87(1H, d, J=8.6Hz, H-5′), 6.39(1H,
d, J=2.0Hz, H-8), 6.21(1H, d, J=2.0 Hz, H-
6), 5.09(1H, d, J=7.5 Hz, H-1″), 4.51(1H, d,
J=1.0 Hz, H-1 ), 1.12(3H, d, J=6.0 Hz, H-
6 );13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ:179.4(C-4),
166.0(C-7), 162.8(C-5), 159.3(C-2), 158.4(C-
9), 149.7(C-4′), 145.8(C-3′), 135.6(C-3),
123.5(C-6′), 123.1(C-1′), 117.7(C-5′), 116.1
(C-2′), 104.7(C-10), 102.4(C-1″), 101.9(C-
1 ), 99.9(C-6), 94.8(C-8), 78.1(C-5″), 77.2
·578· ChinPharmJ, 2011April, Vol.46No.8 中国药学杂志 2011年 4月第 46卷第 8期
(C-3″), 75.7(C-2″), 73.9(C-4 ), 72.2(C-3 ),
72.0(C-2 ), 71.3(C-4″), 69.6(C-5 ), 68.5(C-
6″), 17.8(C-6 )。以上数据与文献 [ 13]报道的芦丁
基本一致。
致谢:核磁共振图谱由郑州大学分析测试中心康建勋 、朱卫
国老师代测。
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(收稿日期:2010-10-11)
基金项目:国家海洋局海洋公益性行业科研专项经费项目(200905021);广东省社会发展领域科技计划项目(93043)
作者简介:方富永 ,男 ,副教授 研究方向:中药新产品的开发 *通讯作者:宋文东 ,男 ,博士 ,教授 研究方向:中药新产品的开发
Tel:(0759)2383477 E-mail:swd60@163.com
长牡蛎肉三酶水解工艺优化及水解物抗疲劳实验
方富永 ,苗艳丽 ,劳秋燕 ,陈木连 ,宋文东*(广东海洋大学 ,广东 湛江 524088)
摘要:目的 优选长牡蛎肉的中性蛋白酶 、木瓜蛋白酶 、菠萝蛋白酶三酶复合水解工艺 , 通过动物实验研究其水解物的抗疲劳
效果。方法 以水解度为考察指标 , 采用正交实验优选长牡蛎肉三酶复合水解的最佳工艺;水解物用昆明种小鼠试验 , 观察
负重游泳时间 、耐缺氧能力 ,测定抗疲劳相关生化指标 , 根据实验结果判断抗疲劳效果。结果 影响长牡蛎肉水解效果的主
要因素是酶用量(P<0.05);中性蛋白酶 、木瓜蛋白酶 、菠萝蛋白酶最佳条件分别为:pH7.0、6.5、7.0;温度 55、 55、50℃;料水
比 1∶4、1∶4、1∶8;酶用量 4 000、4 000、12 000 U· g-1;时间 3、3、5 h。不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳结果表明 ,水解物主要
成分相对分子质量(Mr)300 ~ 1 000。与对照组相比 ,长牡蛎肉水解物高剂量组小鼠耐缺氧能力明显升高(P<0.01)、运动后
血乳酸及血清尿素氮含量明显降低(P<0.01)、肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)活力明显升高(P<0.01),中 、高剂量组小鼠
肝糖原含量明显升高(P<0.01)、负重游泳时间明显延长(P<0.01)、红细胞(Hb)SOD活力明显升高(P<0.01)。结论 长
牡蛎肉三酶复合水解物经动物实验证明具有较好的抗疲劳效果。
关键词:长牡蛎肉;三酶复合水解;水解物;抗疲劳
中图分类号:R932 文献标志码:A 文章编号:1001-2494(2011)08-0579-06
OptimizationofThree-EnzymeHydrolysisProcessofOstreagigasThunbergMeatandAnti-Fatigue
ExperimentoftheHydrolysates
FANGFu-yong, MIAOYan-li, LAOQiu-yan, CHENMu-lian, SONGWen-dong*(GuangdongOceanUniversity,
Zhanjiang524088, China)
·579·中国药学杂志 2011年 4月第 46卷第 8期 ChinPharmJ, 2011April, Vol.46No.8