全 文 ：小金牛草的质量标准研究
曾利杰，陈晓坚，陈丽斯，程君璐，彭红英，陆颂规
(广州白云山敬修堂药业股份有限公司，广东 广州 510310)
摘要:目的 建立小金牛草的质量标准。方法 采用薄层色谱法(TLC)对小金牛草进行定性鉴别，采用高效液相色谱法(HPLC)测定芒
果苷含量。结果 TLC鉴别特征明显;芒果苷在 0． 103 ～ 5． 146 μg范围内与峰面积呈现良好的线性关系(r = 0． 999 9) ，平均回收率为
100． 29%，ＲSD为 1． 03%(n = 6)。结论 该方法简单、准确、重复性好，可用于小金牛草的质量控制。
关键词:小金牛草;质量标准;芒果苷
中图分类号:Ｒ282． 2 文献标志码:A 文章编号:1673 － 4610(2014)04 － 0240 － 03
基金项目:广州市荔湾区科信局科技计划项目基金(编号:20132115013)
作者简介:曾利杰，制药工程师，从事中药新药开发研究，Tel:020-81157722，E-mail:zenglijie6003@ 21cn． com
通讯作者:陆颂规，高级工程师，Tel:020-81157722
Quality Standard of Polygala Arvensis Willd．
ZENG Li-jie，CHEN Xiao-jian，CHEN Li-si，CHENG Jun-lu，PENG Hong-ying，LU Song-gui
(Guangzhou Baiyunshan Jingxiutang Pharmaceutical Compary Limited，Guangzhou，Guangdong 510310，China)
Abstract:Objective To establish the quality standard of Polygala arvensis Willd． Methods Polygala arvensis Willd were
identified by TLC． The content of mangiferin in Polygala arvensis Willd． was determined by HPLC． Ｒesults The quality
control study showed that the characteristic for the identification by TLC was distinct． The linear ranges of mangiferin was at
0． 103 －5． 146 μg (r = 0． 999 9)，the average recovery was 100． 29% with a ＲSD of 1． 03% (n = 6)． Conclusion The
method is fast，reliable，and accurate． It can be used for the quality control for Polygala arvensis Willd．
Key words:Polygala arvensis Willd．;quality standard;mangiferin
小金牛草为金喉散处方中的主药之一，为远志科
远志属植物小花远志 Polygala arvensis Willd． (P． tele-
phioides Willd．) ，以全草入药。秋季采集，晒干。味甘、
微苦，平。有散瘀止血，化痰止咳，解毒消肿之功效［1］，
其质量标准收载于 1994 年上海药材地方标准，此标准
中没有薄层色谱鉴别及含量测定项，不能有效地控制
小金牛草的药材质量。
通过研究发现，小金牛草中含芒果苷［2］，芒果苷具
有平喘止咳祛痰作用、抗人流感病毒作用、对呼吸道感
染菌有抑制作用、解热镇痛作用、免疫调节、降糖等作
用［3 － 9］。可见芒果苷的药理作用与小金牛草的功能主
治相关。本文采用薄层色谱法(TLC)对小金牛草进行
鉴别，采用正交试验设计优化供试品的制备方法，采用
高效液相色谱法(HPLC)测定芒果苷含量，完善了小金
牛草的质量标准，确保该原料药材质量的稳定可靠。
1 仪器与试药
Agilent 1260 液相色谱仪;二极管阵列(DAD)检测
器;超声仪:昆山市超声仪器有限公司 KQ-600DE 型;
薄层层析硅胶 G(青岛海洋化工有限公司) ;芒果苷购
自中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号为:
111607 － 200402;小金牛草购自广州清平中药材市场
及安国市药材市场，所购药材经中科院华南植物园叶
华谷研究员鉴定，取经鉴定的其中一批药材作为对照
药材;甲醇(色谱纯，honeywell)、自制蒸馏水。
2 方法与结果
2． 1 TLC鉴别
2． 1． 1 供试品溶液制备 取本品粉末(过 65目)0． 3 g，
加乙醇15 mL，超声处理25 min，滤过，滤液蒸干，加 5 mL
042
Pharmacy Today ·2014 04 Vol． 24 No． 04·
甲醇使溶解，作为供试品溶液。
2． 1． 2 对照品溶液的制 取芒果苷对照品，加甲醇制
成每 1 mL含 0． 2 mg的溶液，作为对照品溶液。
2． 1． 3 对照药材溶液制备 另取对照药材 0． 3 g，同
法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(《中国药典》2010 年版一部附录
VIB)试验，吸取上述溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶 G
上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 1)为展开剂，展
开，取出，晾干，喷以 5%三氯化铁乙醇溶液，放置片刻。
供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置
上，显相同颜色的斑点，薄层色谱图见图 1。
图 1 小金牛薄层鉴别色谱图
1 ～ 3．供试品;4．对照药材;5．芒果苷对照品
2． 2 芒果苷的含量测定
2． 2． 1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱:Agilent
Eclipse Plus C18(5 μm，4． 6 mm × 250 mm) ;流动相:乙
腈 － 0． 1%磷酸的水溶液(15 ∶ 85) ;检测波长:258 nm，
柱温:25 ℃，流速:1． 0 mL /min，进样量:5 μL，理论板数
按芒果苷峰计算应不低于 8 000。
2． 2． 2 对照品溶液的制备 取芒果苷对照品适量，精
密称定，加浓度为 60%的乙醇制备成浓度为 400 μg /mL
的对照品溶液，即得。
2． 2． 3 供试品溶液的制备 以不同的乙醇浓度、溶剂
量、超声处理时间及超声功率为主要考察因素，以芒果
苷含量为考察指标，选用 L9(3
4)正交表，进行方案设
计。按表 1、表 2 进行试验。试验结果见表 2、表 3。
表 1 试验因素 －水平设计表 L9(3
4)
水平
因素
A
(溶剂)
B
(料液比 =W/V)
C
(提取时间)
D
(提取功率 /%)
1 稀乙醇 1∶ 80 超声 15 min 60
2 60%乙醇 1∶ 100 超声 30 min 80
3 70%乙醇 1∶ 200 超声 45 min 100
从以上试验结果和方差分析可知，直观分析因素主
次由极差大小确定，可见在考察的 4个影响因素中，对芒
果苷提取效果的影响顺序为:A ＞ C ＞ D ＞ B。方差分析
显著性差异由 F值大小确定，对芒果苷提取效果有显著
性影响的因素为 A溶剂。最佳的提取工艺为 A2B3C3D2，
即系提取溶剂为 60%乙醇、料液比为 1∶ 200(W/V)、超声
提取时间为 45 min、超声提取功率为 80%。
表 2 提取工艺正交试验设计及结果 (n =2)
试验号
因素
A B C D
试验结果
芒果苷含量
(mg /g)
1 1 1 1 1 41． 45
2 1 2 2 2 42． 31
3 1 3 3 3 42． 61
4 2 1 2 3 42． 38
5 2 2 3 1 42． 13
6 2 3 1 2 42． 35
7 3 1 3 2 41． 00
8 3 2 1 3 40． 51
9 3 3 2 1 40． 75
珚K1 42． 123 41． 610 41． 437 41． 443
珚K2 42． 287 41． 650 41． 813 41． 887
珚K3 40． 753 41． 903 41． 913 41． 833
珚Ｒ 1． 534 0． 293 0． 476 0． 444
表 3 方差分析
因素 偏差平方和 自由度 F值 F临界值 显著性
A溶剂 4． 255 2 27． 993 19． 000 *
B料液比 0． 152 2 1． 000 19． 000
C提取时间 0． 379 2 2． 493 19． 000
D超声提取功率 0． 351 2 2． 309 19． 000
误差 0． 15 2
注:F0． 05(2，2)= 19． 00
故供试品溶液的制备方法为:取小金牛草药材粉末
约 0． 25 g，精密称定，置 100 mL具塞锥形瓶中，精密加入
浓度为 60%的乙醇 50 mL，密塞，称定重量，超声处理 45
min，放冷，再称定重量，用浓度为 60%的乙醇补足减失
的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2． 2． 4 线性关系考察 精密称取芒果苷对照品
0. 051 46 g，置 50 mL 量瓶中，加浓度为 60%的乙醇
溶解并定容至刻度，分别量取 2、2、2、2、5 mL 置 100、
50、25、10、10 mL的量瓶中，加浓度为 60%的乙醇定容
至刻度，连同母液配制成系列含量为 20． 584 ～ 1 029． 2
μg /mL的芒果苷对照品溶液。精密吸取上述对照品溶
液各 5 μL，在上述色谱条件测定，并与峰面积 Y为纵坐
标，浓度 X(n = 6)为横坐标进行线性回归，得回归方程
为 Y = 21． 207X － 10． 068，r = 0． 999 9，显示芒果苷对照
品在 0． 103 ～ 5． 146 μg 范围内与峰面积呈良好的线性
关系。
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·2014 年 04 月第 24 卷第 04 期· 今日药学
2． 2． 5 稳定性考察 精密吸取供试品溶液 5 μL在 0、
4、8、12、16、22 h，分别进样分析，测定芒果苷的峰面积，
ＲSD为 0． 26%。表明供试品溶液在 22 h内稳定。
2． 2． 6 仪器精密度试验 精密吸取芒果苷对照品溶
液 5 μL，重复进样 6 次，测定峰面积，计算芒果苷峰面
积的 ＲSD为 0． 08%(n = 6) ，表明仪器精密度良好。
2． 2． 7 重复性试验 按前述供试品溶液的制备方法
平行制备 6 份供试品溶液，测定峰面积，按照回归方程
计算芒果苷的含量。结果芒果苷含量的 ＲSD 为
0. 24%(n = 6) ，表明方法重复性良好。
2． 2． 8 加样回收试验 取已知含量的供试品 6 份，每
份约 0． 12 g，精密称定，置 100 mL 锥形瓶中，分别精密
加入 5 mL浓度为 1 029． 2 μg /mL 的对照品溶液，按照
供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并按“2． 1”项下
方法测定芒果苷含量，计算回收率。结果见表 4。
表 4 芒果苷加样回收试验结果(n =6)
编号
取样量
(g)
样品中芒果
苷含量(mg)
对照品加
入量(mg)
测得芒果苷
总含量(mg)
回收率
(%)
1 0． 119 3 4． 68 5． 15 9． 78 99． 03
2 0． 119 6 4． 69 5． 15 9． 92 101． 55
3 0． 120 5 4． 72 5． 15 9． 86 99． 81
4 0． 120 5 4． 72 5． 15 9． 86 99． 81
5 0． 119 6 4． 69 5． 15 9． 84 100． 00
6 0． 119 4 4． 68 5． 15 9． 91 101． 55
平均回收率 = 100． 29%，ＲSD = 1． 03%
2． 2． 9 样品含量测定 采用上述方法对 5 个不同产
地的小金牛草进行芒果苷的含量测定，精密吸取 5 μL，
依次进样，测定，计算含量，结果在 1． 1% ～ 3． 0%之间。
结果见表 5，HPLC色谱图见图 2 ～ 3。
表 5 不同产地的小金牛草中芒果苷含量测定结果
来源(产地) 芒果苷含量(按干燥品计算%)
广西贺州 3． 0
广西玉林 2． 9
韶关乳源 2． 1
韶关始兴 1． 5
广州从化 1． 1
图 2 小金牛药材 HPLC色谱图
图 3 芒果苷对照品 HPLC色谱图
3 讨论
在 TLC 鉴别中，考察了展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲
酸-水(9∶ 3∶ 1 ∶ 1)、乙酸乙酯-甲酸-水(8 ∶ 1 ∶ 1)、乙酸乙
酯-甲酸-水(10∶ 1 ∶ 1) ，试验结果表明展开剂为乙酸乙
酯-丁酮-甲酸-水(4∶ 3 ∶ 1 ∶ 1)时鉴别效果最好。还考察
了该相对湿度(32% ～ 75%)、温度(4 ～ 35 ℃)及不同
品牌的薄层层析硅胶 G 板对展开效果的影响，结果在
考察范围内的湿度、温度及不同品牌的薄层层析硅胶
G板对芒果苷的分离效果影响不大，表明本法对试验
条件具有良好的耐用性。
HPLC系统耐用性试验结果表明，流动相比例变化
± 2%，对芒果苷峰无明显的影响，考察流速变化 ±
10%，即 0． 9、1． 0 和 1． 1 mL /min，柱温 ± 5 ℃，即 20、
25、30 ℃，对芒果苷峰分离度及峰面积无，明显影响;还
考察了其它色谱柱 Phenemenex Synergi Fusion-ＲP (4
μm，4． 6 mm ×250 mm) ，Agilent TC-C18(5 μm，4． 6 mm
×250 mm) ，Agilent Eclipse Plus C18(5 μm，4． 6 mm ×
250 mm) ，结果表明，3 根不同型号的色谱柱测定同一
个供试品的芒果苷含量 ＲSD% =0． 47%(n = 6)。
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