全 文 ：收稿日期：2015- 12- 01
基金项目：黑龙江省青年科学基金项目（QC2012C064）；国家自然科学
基金青年科学基金项目（81303195）；国家重点基础研究发
展计划（973计划）2013CB531801
作者简介：孟永海（1978-），男，博士，副教授，从事中药药效物质基础
和质量控制研究。
通讯作者：王知斌（1976-），男，副教授，研究生导师，主要研究方向：
中药及复方药效物质基础研究和新药临床前药学研究。
DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tq. 20160527
Sum 248 No. 05
化 学 工 程 师
Chemical Engineer 2016年第 05期
分
析
测
试
短梗五加果（Acanthopanax sessiliflorus fruits）为
五加属植物的成熟干燥果实，具有强筋骨、补肝肾
等功效。现代中药化学研究表明药材中含有绿原
酸、原儿茶酸等酚酸类化合物，槲皮素、金丝桃苷等
黄酮类化合物和短梗五加苷 B、D等木脂素类化合
物[1- 5 ]。药理学研究中，表明酚酸类化合物成分有抗
炎、抗焦虑、镇静等药理作用[ 6 ]，本实验对短梗五加
果有效成分的测定方法进行了研究，为短梗五加果
的质量控制和深入研究提供科学依据。
1 实验部分
1.1 材料与仪器
安捷伦 1110高效液相色谱仪、安捷伦 1110紫
外检测器（Agilent公司），DL- 180超声仪（浙江省海
天电子仪器厂）；SZ- 93重蒸水仪、RE- 52旋转蒸发
仪（上海亚荣生化仪器厂）；METTLER TOLEDO电
子天平（上海梅特勒 - 托利多仪器有限公司）。
乙腈、甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），
醋酸、甲酸、甲醇、正丁醇（分析纯），重蒸水（自制），
原儿茶酸对照品（中国药品生物制品检验所提供），
短梗五加苷 D、东莨菪苷（自制，采用峰面积归一化
RP- HPLC 法同时检测
短梗五加果中 4个有效成分的含量 *
孟永海，王欣慰，吴高松，翟春梅，杨春娟，宋 洋，王知斌 *
（教育部北药基础与应用研究重点实验室，黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室，
黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040）
摘 要：目的：建立反相高效液相色谱 - 紫外法测定短梗五加果中 4个有效成分含量。方法：采用 Diamasil
C18色谱柱（200×4.6mm,5μm），以乙腈 - 0.05%磷酸为流动相，流速为 1mL·min-1，检测波长为 210nm，柱温为
25℃。结果：短梗五加果中 4个有效成分的分离度良好，标准曲线在检测范围内均呈良好线性，r=0.9997~
0.9999，平均回收率 95.6%~101.6%，RSD为 2.4%~3.3%。结论：该方法简便可靠，精密度高，重复性好，适用于
短梗五加果有效成分含量测定方法。
关键词：短梗五加果；有效成分；高效液相色谱法
中图分类号：R284 文献标识码：A
Simultaneous determination of four effective compounds of Acanthopanax sessiliflorus fruits by RP-HPLC*
MENG Yong-hai，WANG Xin-wei，WU Gao-song，ZHAI Chun-mei，YANG Chun-juan，
SONG Yang，WANG Zhi-bin*
（Key Laboratory of Chinese Materia Medica（Ministry of Education）, Heilongjiang Key Laboratory of TCM Pharmacidynamic
Material Bases, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China）
Abstract：Objective: To establish a RP-HPLC-UV method for the determination of four effective compounds
of Acanthopanax sessiliflorus. Methods: Chromatographic conditions were gave on an C18 column（200×4.6mm,
5μm）at 25℃, an isocratic mobile phase consisting of acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution at a flow rate of
1mL·min-1 and 210 nm detection wavelength. Results: four effective compounds of Acanthopanax sessiliflorus had
good separating and linearity. The linear range of four effective compounds was wide（r=0.9997~0.9999）, the aver－
age recovery was 95.6~101.6% and RSD was 2.4~3.3%. Conclusion: The method is simple and reliable, high pre－
cision, good reproducibility, and accurate for the quantitative analysis of four effective compounds of Acanthopanax
sessiliflorus.
Key words：the Acanthopanax sessiliflorus fruits；active compounds；HPLC
法，纯度大于 98%）、（-）- pinoresinol- 4,4- di- O-β-
D- glucopyranoside（PDG）。本实验分别收集了短梗
五加果青果（采收时间: 9 月）和成熟果实（采收时
间: 10月），购于五加高新农业科技开发公司丹东农
业科学院提供。
1.2 色谱条件
色谱柱：Diamasil C18 （迪 马 公 司 ，200 ×
4.6mm，5μm）；流动相：乙腈 - 0.05%磷酸，梯度洗脱
程 序 ：9/91 （0~14min），14/86（14~22min），18/82
（22~30min），流速：1mL·min-1；柱温：25℃；检测波
长：210nm；进样量：20μL。
1.3 对照品溶液的制备
精密称定适量原儿茶酸、东莨菪苷、PDG、短梗
五加苷 D，置于 10mL容量瓶中，用 70%甲醇溶解，
摇匀，定容至刻度，制得对照品储备液浓度：1.04
mg·mL-1原儿茶酸、1.08mg·mL-1东莨菪苷、2.21mg·
mL-1 PDG、1.22mg·mL-1短梗五加苷 D。分别精密量
取原儿茶酸、东莨菪苷、PDG、短梗五加苷 D对照品
储备液 1.0mL，置 25mL量瓶中，加 70%甲醇摇匀，
定容，制成对照品的混合溶液。
1.4 供试品溶液的制备
取短梗五加果药材，粉碎后过筛，精密称取粉
末 1.0g，置于 100mL三角形锥形瓶中，加正丁醇
40mL，超声处理 30min，抽滤，提取 2次，合并滤液，
制成浸膏，用 70%甲醇定容至 10mL量瓶中，摇匀，
0.45μm微孔滤膜滤过，续滤液即为供试品溶液。
1.5 线性范围考察
精密吸取对照品混合溶液 0.5、2.0、4.0、6.0、
8.0mL分别置于 10mL容量瓶中，用 70%甲醇摇匀，
定容。精密吸取对照品溶液和对照品混合溶液各
20μL，注入 HPLC色谱仪中，以质量浓度 （μg·
mL-1）为横坐标（x），色谱峰面积为纵坐标（y），绘制
标准曲线。原儿茶酸回归方程为 y=126.1x- 79.87，
r=0.9997，线性范围为 2.08~33.28g·mL-1，东莨菪苷
回归方程为 y=50.90x- 9.919，r=0.9998，线性范围为
2.16~34.56g·mL-1，PDG回归方程为 y=36.09x- 6.289，
r=0.9999，线性范围为 2.42~38.72g·mL-1，短梗五加
苷 D回归方程为 y=88.82x-49.77，r=0.9995，线性范
围为 2.44~39.04g·mL-1。
1.6 精密度试验
精密称取短梗五加果药材粉末 4份，按“1.4”项
下方法制备供试溶液，按“1.2”项下 HPLC色谱条件
进样分析，计算各成分含量的 RSD：原儿茶酸 2.7%、
东莨菪苷 2.6%、PDG 2.0%、短梗五加苷 D 2.7%、均
小于 3.0%，表明该方法的重复性良好。
1.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，在室温放置，分别于 0, 2,
4, 8, 12, 24h进样分析，所测定的 4个成分色谱峰峰
面积的 RSD在 12h内均小于 3.0%，说明在 12h内
供试品溶液稳定。
1.8 加样回收率试验
称取短梗五加果粉末 4份各 0.5g，分别加入相
当于所测成分含量 100%的混合对照品溶液适量，
按“1.4”项下方法制备供试溶液，按“1.2”项下 HPLC
色谱条件进样分析，计算回收率，结果原儿茶酸平
均回收率 95.6%，RSD=3.3%（n=6），东莨菪苷平均
回收率 99.0%，RSD=2.9% （n=6），PDG平均回收率
99.4%，RSD=2.5%（n=6），短梗五加苷 D平均回收
率 101.6%，RSD=2.4%（n=6）。
1.9样品的含量测定
取三批供试品溶液和“1.5”项下方法制备对照
品混合溶液 20μL，按“1.2”项下 HPLC色谱条件进
样分析，结果见色谱图 1。
取三批短梗五加青果和成熟期果实约 1.0g，各
3份，按“1.4”项下方法制备供试溶液，按“1.2”项下
HPLC色谱条件进样分析，结果见表 1。
（a）对照品溶液
（b）供试品溶液
1.原儿茶酸 2.东莨菪苷 3. PDG 4.短梗五加苷 D
图 1 色谱图
200
150
100
50
0
- 50
- 100
0 5 10 15 20 25
（a）210nm
1
2 3
4
m
AU
t/min
600
400
200
0
0 5 10 15 20 25
（b）210nm
2
3 4
1
m
AU
t/min
孟永海等：RP- HPLC 法同时检测短梗五加果中 4个有效成分的含量 *28 2016年第 05期
Fig.1 Typical chromatograms of reference compounds
（a）and samples（b）
表 1 短梗五加果中 4个成分含量测定结果（n=3）
Tab.1 The mean contents of four analytes in the A.
sessiliflorus fruits（n=3）
2 结果
本实验建立了 RP- HPLC法同时测定短梗五加
果中 4个活性成分的含量，检测结果表明：青果中
不含有原儿茶酸和东莨菪苷，而成熟果实果实和青
果中均含有 PDG和短梗五加苷 D。
3 讨论
3.1 检测波长选择
由紫外扫描知木脂素类化合物的最大吸收波
长为 210nm，原儿茶酸等在 210nm处有末端吸收，
为了兼顾所有化合物同时测定，增加检测灵敏度，
故选择 210nm作为检测波长。流动相选择：由于水
相中加入 H3PO4基线平缓，待测样品的理论踏板数
较高，所以选择加入 H3PO4，且加入 0.05%的 H3PO4，
相邻色谱峰均达到基线分离。同时，选择乙腈为有
机相可有效减少噪音干扰。提取溶剂选择：不同浓
度的甲醇、乙醇可将药材中大量的色素提取出来，
而正丁醇萃取后干扰峰较少，所以提取溶剂选择水
饱和正丁醇。提取方法的选择：实验采用正交实验
多次考察表明，提取时间对结果无显著影响，为了
节约时间和溶剂的用量，检测方法使用的提取时间
选择 30min，用量选择 40mL，而提取 2次杂质峰较
少，且提取率没有显著性差异。最终确定提取方法
为水饱和正丁醇 40mL，超声处理 30min，提取 2次。
本文建立的方法简便可靠，重复性好，为短梗五加
果有效成分的含量测定提供了有利的依据。
3.2 流动相选择
为了提高灵敏度，减少噪音干扰，有机相选择
本底较低的乙腈。由于水相中加入磷酸基线平缓，
所以选择加入 H3PO4，且加入 0.05%的 H3PO4，相邻
色谱峰均达到基线分离。
3.3 提取溶剂选择
不同浓度的甲醇、乙醇可将药材中大量的色素
提取出来，而水饱和正丁醇干扰峰少，所以提取溶
剂选择水饱和正丁醇。
3.4 提取方法的选择
实验采用正交实验多次考察表明，提取时间对
结果没有显著影响，为了升高提取率，节约时间和
用量，提取时间选择 30min，提取用量选择 40mL，而
提取 2次杂质峰较少，且提取率没有显著性差异。
最终确定提取方法为水饱和正丁醇 40mL，超声处
理 30min，提取 2次。
4 结论
本文建立的方法简便可靠，重复性好，为短梗
五加果有效成分的含量测定提供了有利的依据。
参 考 文 献
［1］ 安琪,杨春娟,宋洋,等.无梗五加果化学成分的研究［J］.天然
产物研究与开发, 2008, 20: 765- 769.
［2］ 郭晓璐,师子明,齐文,等.刺五加果 TLC鉴别及原儿茶酸、绿
原酸、金丝桃苷的含量测定［J］.沈阳药科大学学报, 2015, 32
（8）: 618- 622.
［3］ 韩莹.无梗五加果化学成分的分离分析及大鼠体内动力学研
究［D］.沈阳:沈阳药科大学, 2006: 1.
［4］ 史伟国,崔立勇,佟庆,等.响应面法优化短梗五加中刺五加苷
B 和 E 的超声提取工艺［J］. 安徽农业科学 , 2014, 42（18）:
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［5］ 王祝伟.红毛五加化学成分及其多维指纹图谱研究［D］.沈阳:
沈阳药科大学, 2005: 42- 44.
［6］ Bouayed J, Rammal H, Dicko A, et al. Chlorogenic acid, a polyphe-
nol from Prunus domestica（Mirabelle）, with coupled anxiolytic and
antioxidant effects［J］. Journal of the Neurological Sciences, 2007,
262（1- 2）: 77- 84.
青果 1
青果 2
青果 3
成熟果实 1
成熟果实 2
成熟果实 3
1
/μg·g-1
-
-
-
55.8
85.3
60.2
2
/μg·g-1
-
-
-
171.6
157.4
143.4
3
/μg·g-1
219.7
251.9
223.5
253.0
217.7
282.5
4
/μg·g-1
117.3
105.6
134.6
201.0
283.9
235.1
孟永海等：RP- HPLC 法同时检测短梗五加果中 4个有效成分的含量 *2016年第 05期 29