全 文 ：高效液相色谱法测定杏香兔耳风药材中绿原酸含量
★　宋友昕　吕武清　(江西省中医药研究院　南昌 330077)
关键词:杏香兔耳风;绿原酸;含量测定;HPLC
中图分类号:R 　　文献标识码:A
　　杏香兔耳风为菊科植物铁灯兔耳风 Ainsliaea
macroclinidioides Hay .或杏香兔耳风 Ainsliaea fra-
grans Champ.的干燥全草 ,收载于《江西省中药材标
准》1996版 。现代研究表明杏香兔耳风含无羁萜
酮 、羊齿烯醇 、三十二烷酸 、二十六醇 、β-谷甾醇[ 1] ;
还含有黄酮类 、倍半萜内酯 、丁香烯和豆甾醇
等[ 2 ,3] 。研究发现杏香兔耳风药材中含有绿原酸 ,
为此 ,我们用高效液相色谱法测定了杏香兔耳风药
材中绿原酸含量 ,实验方法如下 。
1　仪器与药品
HP-1100 高效液相色谱仪(美国:包括 1322A
在线脱气机 、G1311A 四元梯度泵 、G1315A 二极管
阵列检测器 、HP 化学工作站),SimplicityTM 个人型
超纯水系统(Millipore公司),CQ-250超声波清洗仪
(上海船舶电子设备研究所),绿原酸对照品(含量测
定用 ,批号:0753-200111 , 中国药品生物制品检定
所),甲醇为色谱纯 ,其它试剂均为分析纯。杏香兔
耳风药材经江西中医学院中药鉴定教研室诸小兰教
授鉴定为菊科植物铁灯兔耳风 Ainsliaea macroclin-
idioides Hay .及杏香兔耳风 Ainsliaea fragrans
Champ.的干燥全草。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
参照文献[ 4] 对杏香兔耳风中的绿原酸含量测
定进行实验研究 。色谱柱:Alltech C18 4.6 mm ×
250 mm;流动相:甲醇-2%冰醋酸(13∶87);流速 1
ml/min ,检测波长 327 nm ,柱温 25 ℃。最大吸收波
长与文献[ 5]报道一致 ,在此条件下对照品 、供试品
时 ,直接回流提取 3次 ,第 1 次 1.5小时 ,第 2 、3次
分别为 10分钟 ,合并提取液 ,冷却后分别用各自的
提取溶剂定容。上述 6份溶液分别用HPLC测定提
取率 ,结果提取率几乎相等 ,但因热水和乙醇的提取
液中含有较多的糖类和果胶类物质 ,影响色谱柱寿
命 ,故选用甲醇作用供试品的提取溶剂。
3.2　回流提取法加样回收试验　精密称取枳守则
样品约 0.25 g ,加入一定量的对照品 ,按回流提取法
制备供试品溶液度测定含量 ,柚皮苷平均回收率
101.62%, RSD 为 3.91%(n=6);新橙皮苷平均回
收率为 103.12%, RSD =3.22%(n =6)。
3.3　提取方法的确定　2000版药典中的提取方法
也是回流提取法 ,但过聚酰胺柱时影响因素多 ,重现
性差 ,不适合含量测定;超声波提取法虽简便 ,但回
收率低 ,可作为快速鉴别柚皮苷和新橙皮苷含量高
低的提取方法;索氏提取法和直接回流法提取率和
回收率高 ,但直接回流法提取时间较短 ,操作简便 ,
可用于枳壳药材中柚皮苷和新橙皮苷含量测定的提
取方法。
参考文献
[ 1] 李秀玲 ,李龙 ,肖红斌 ,等.反相高效液相色谱法测定枳壳 、枳壳
中橙皮甙的含量[ J] .色谱 , 2002 , 20(6):585
[ 2]杨书斌 ,王琦 ,张典瑞 ,等.薄层层析-分光光度法测定枳壳中的
橙皮甙和柚甙[ J] .中国中药杂志 , 1994 , 19(6):359
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(6):30
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中成药 , 1993 , 15(12):21
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含量的研究[ J] .中国中药杂志 , 1989 , 14(4):230
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中柚皮甙和橙皮甙的含量[ J] .中草药 , 1999 , 30(3):181
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工业出版社 , 2000.199
[ 8] 肖鸣 ,吴永忠 ,朱良辉 ,等.不同产地枳壳中柚皮甙及辛弗林的含
量测定[ J] .中药材 , 2000 , 23(5):268
(收稿日期:2004-10-21)
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江西中医学 院学报 2 0 0 5 年 4 月第 1 7 卷第 2期
JOURNAL OF JIANGXI UNI VERSITY OF TCM 2005 Vol.17 No.2
　
○中药现代化○
在约 12分钟相同时间有一色谱峰 ,见图 1。
图 1　对照品 、供试品 HPLC 色谱图
A.绿原酸 B.杏香兔耳风 C.铁灯兔耳风
2.2　对照品溶液制备
精密称取经五氧化二磷干燥过夜的绿原酸对照
品适量 ,加 50%甲醇制成每 l mL 约含 0.04 mg 的
溶液 ,作为对照品溶液 。
2.3　供试品溶液的制备
取杏香兔耳风药材粉末适量 ,精密称定 ,置 100
mL 具塞锥形瓶中 ,精密加入加 50%甲醇 50 mL ,称
定重量 ,超声提取 30分钟 ,放冷 ,称定重量 ,加 50%
甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,弃去初滤液 ,取续
滤液作为供试品溶液 。
2.4　方法学研究
2.4.1　线性关系的考察　精密称取经五氧化二磷
干燥过夜的绿原酸对照品适量 ,加 50%甲醇稀释成
以下浓度:0.007 72 、0.015 44 、0.023 16 、0.030 88 、
0.038 60 、0.096 50 、0.193 mg/mL。分别吸取 10
μL ,注入液相色谱仪中 ,按上述色谱条件测定对照
品峰面积 ,将样品浓度与峰面积进行回归处理 ,回归
方程为:Y =21.840 7X -0.464 5 , r =0.999 99(n
=7),绿原酸对照品在 0.007 72 ～ 0.193 mg/mL 范
围内浓度与峰面积呈良好的线性关系 。
2.4.2　稳定性试验　精密吸取供试品溶液 10 μL ,
按上述色谱条件 ,每隔 0.5小时或 1小时 ,测定供试
品溶液中绿原酸峰面积值 ,结果绿原酸峰面积在 8
小时内稳定 ,经数据处理 RSD 为 1.8%。
2.4.3　精密度试验　精密吸取供试品溶液 10 μL ,
按上述色谱条件 ,重复进样 5次 ,测定供试品溶液中
绿原酸峰面积值 ,结果经数据处理 RSD 为 0.8%。
2.4.4　重复性试验　取同一样品 ,共 6份 ,照 2.3
项下方法制成供试品溶液 ,按上述色谱条件进行测
定 ,测定结果经数据处理 RSD 为 2.7%。
2.4.5　加样回收率试验　精密称取同一样品杏香
兔耳风粉末适量 , 共 5 份 ,置 100 mL 具塞锥形瓶
中 ,各精密加入绿原酸对照品溶液(0.01 mg/mL)50
mL ,余同供试品溶液制备项下操作 ,制成供试品溶
液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10
μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,计算回收率 ,结果平均
回收率 97.4%, RSD =2.5%。
2.4　样品测定结果　分别精密称取不同品种来源 、
不同产地的杏香兔耳风药材 ,照供试品溶液制备项
下方法制备 ,精密吸取上述对照品溶液与各供试品
溶液 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,结果见表 1。
表 1　杏香兔耳风药材中绿原酸含量
品种 产地 绿原酸含量(%)
杏香兔耳风 江西赣州 0.327
杏香兔耳风 湖南益阳 0.265
铁灯兔耳风 江西吉安 0.025
铁灯兔耳风 安徽亳州 0.019
3　小结
(1)供试品溶液制备研究中分别考察了 50%甲
醇 、甲醇 、乙醇为溶剂对提取效果的影响 ,以 50%甲
醇提取效果最好;回流提取与超声提取效果无差异;
提取时间分别考察了 15分钟 、30 分钟 、60分钟 , 30
分钟组与 60分钟组提取效果无差异;提取溶剂用量
分别考察 25 mL 、50 mL 、100 mL , 50 mL 组与 100
mL 组提取效果无差异;确定以 50%甲醇 50 mL 超
声提取 30分钟制备供试品溶液。
(2)从测定结果分析 ,杏香兔耳风中绿原酸的含
量为铁灯兔耳风的 10倍以上 ,且不同产地药材含量
差别也较大 ,药材中绿原酸含量与品种来源 、产地 、
采收季节的关系如何及绿原酸与杏香兔耳风药效的
关系有待于进一步研究 。
参考文献
[ 1] 胡昌奇 ,王朴 等.杏香兔耳风的化学成分研究(Ⅰ)[ J] .中草药 ,
1983 , 14(11):486
[ 2] 中华本草编委会.中华本草(第 7册)[ M] .上海:上海科技出版
社, 1999.641
[ 3] 江西省卫生厅.江西省中药材标准 1996 年版[ M ] .南昌:江西科
学技术出版社 , 1997.122
[ 4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(2000 版一部)[ M ] .北
京:化学工业出版社 , 2000.257
[ 5] 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册(第一
版)[M ] .北京:人民卫生出版社 , 1986.642
(收稿日期:2005-03-19)
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宋友昕等:高效液相色谱法
测定杏香兔耳风药材中绿原酸含量
　
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