全 文 ：收稿日期:2014-05-21; 修订日期:2014-12-16
基金项目:贵州省教育厅自然科学研究基金项目(No． 20090119);
黔南民族医学高等专科学校科研基金项目(No． QNYZ201328)
作者简介:李雪营(1985-)，男(汉族)，广西来宾人，黔南民族医学高等专
科学校教师，学士学位，主要从事天然药物应用与开发研究工作．
* 通讯作者简介:魏学军(1972-)，男(汉族)，四川成都人，黔南民族医学
高等专科学校副教授，学士学位，主要从事中药与民族药质量控制研究工
作．
不同炒炭方法对铁苋菜止血及没食子酸含量的影响
李雪营，赵鸿宾，孙晓惠，余跃生，魏学军*
(黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558003)
摘要:目的 以小鼠出血、凝血时间及没食子酸含量为指标，探讨生品及不同炒炭方法对铁苋菜止血作用及没食子酸含量
的影响。方法 采用剪尾法及玻片法测定小鼠出、凝血时间;HPLC法测定没食子酸。结果 与空白组比较，生品及各炒炭
制品对小鼠的止血作用均有显著性(P ＜ 0． 01);与生品组比较，中火炒炭制品对小鼠的止血作用具显著性(P ＜
0． 05)，文火炒炭和武火炒炭制品比较无显著性。铁苋菜生品中没食子酸含量最高，炒炭制品随火力增加没食子酸含量
逐渐降低。结论 铁苋菜炒炭宜选用中火炒制，可发挥更好止血作用。
关键词:铁苋菜; 炒炭方法; 止血作用; 高效液相色谱法; 没食子酸量
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 03． 040
中图分类号:Ｒ283． 1;Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)03-0621-02
铁苋菜为大戟科植物铁苋菜 Acalypha australis L． 的干燥全
草，主含黄酮、生物碱、鞣质等化学成分，具有清热利湿、收敛止血
的功能［1］，在贵州苗族聚集区被广泛用于各种出血证候治疗，苗
药亦称“海蚌含珠”［2］，具有良好的开发应用前景。其所含没食
子酸具有抗菌消炎、止泻、止血、平喘等广泛的药理作用［3 ～ 5］，是
铁苋菜的重要活性成分。炒炭作为一种增强中药止血作用的技
术手段得到学术界公认，但有研究人员［6，7］提出炒炭止血作用因
炒炭程度不同而存在明显差异。基于以上观点，本实验设计对铁
苋菜不同程度炒炭制品开展止血作用研究并对没食子酸含量进
行测定，以探讨铁苋菜炒炭止血的可行性和止血的物质基础，为
下一步开展炮制机理研究提供试验依据。
1 器材
LC － 10ATvp 高效液相色谱仪(日本岛津公司);SPD －
10Avp检测器(日本岛津公司);WMLSP色谱工作站(南宁威玛龙
公司);Cary 100 型双光束紫外可见分光光度计(北京安捷伦公
司);SG － 4050C 型数显恒温水浴锅(上海硕光公司);2． 0Ｒ 型
低速离心机(德国 HEＲAEUS);DHG － 9240A真空干燥箱(上海
金山公司);AE240 型电子天平(瑞士 METTLEＲ);电炒锅;PK53A
红外线测温仪(苏州科力华公司)。没食子酸对照品购自中国食
品药品检定所(批号 110831 － 200803)，乙腈为色谱纯，水为重
蒸馏水，其他试剂均为分析纯。加工所用铁苋菜均于 2013 年 7
月采自校内植物园试验田地，经本校药学系朱文仁副教授鉴定为
大戟科植物 Acalypha australis L．铁苋菜的干燥全草。
2 方法与结果
2． 1 铁苋菜制品的制备
2． 1． 1 生品的制备 将新鲜净制的铁苋菜摘取全叶，切成 5 mm
宽丝;根、茎切成 10 mm长段，干燥后混匀即得［8］。
2． 1． 2 文火炒炭品的制备 取生品 100 g，按《中国药典》2010
年版附录ⅡD炮制通则“炒炭”项下要求，文火(温度 300 ℃)炒
至表面焦黑色，取出，放凉后密封保存。
2． 1． 3 中火炒炭品的制备 取生品 100 g，按《中国药典》2010
年版附录ⅡD炮制通则“炒炭”项下要求，中火(温度 400 ℃)炒
至表面焦黑色，取出，放凉后密封保存。
2． 1． 4 武火炒炭品的制备 取生品 100 g，按《中国药典》2010
年版附录ⅡD炮制通则“炒炭”项下要求，武火(温度 500 ℃)炒
至表面焦黑色，取出，放凉后密封保存。
2． 2 铁苋菜止血作用实验
2． 2． 1 供试品的制备 空白对照组:生理盐水溶液。云南白药
组:取云南白药粉末 1． 3 g，加入 100 ml蒸馏水即得。制品组:称
取不同制品铁苋菜各 20 g，以 70%乙醇为溶媒，用量 30 倍，水浴
温度 90℃，回流提取 2 次，每次 4 h。合并提取液，过滤、离心后
减压回收乙醇至近干，加蒸馏水定容至 20 ml 容量瓶，即得 1 ml
含原药材 1 g的各制品溶液。
2． 2． 2 小鼠出血时间的测定［9］ 取昆明种小鼠 60 只，雌雄各半，
随机分成 6 组，分别灌胃各制品溶液、云南白药和生理盐水，给药
体积为 20 ml / kg，每天 1 次，连续灌胃 5 d，末次给药 1 h后用解
剖剪距小鼠尾尖 3 mm处横向剪断，待血液自行溢出计时，每 30
s用滤纸吸血 1 次，直至血液自然停止，所需的时间即为出血时
间。
2． 2． 3 小鼠凝血时间的测定［9］ 取昆明种小鼠 60 只，雌雄各半，
动物分组、给药剂量、给药途径均同上。末次给药 1 h 后用毛细
管于小鼠左眼内球后静脉丛取血，滴两滴在玻片上并同时计时，
每 30 s用清洁大头针在玻片上挑血液 1 次，观察是否有血凝丝，
记录从出血至出现血凝丝的时间即为凝血时间。
2． 2． 4 数据统计 采用 SPSS17． 0 统计软件包对数据进行处理。
计量资料以 珋x ± s表示，组间比较采用 t检验，P ＜ 0． 05 表示有显
著性差异，P ＜ 0． 01 表示有极显著性差异。结果见表 1。
表 1 铁苋菜不同制炭品对小鼠出血、凝血时间的比较(珋x ± s)
组别
剂量
/g·kg － 1
出血时间
/ s
凝血时间
/ s
空白对照组 － 231． 00 ± 110． 40 88． 80 ± 21． 34
云南白药组 0． 26 78． 60 ± 25． 44a 54． 00 ± 12． 85a
生品组 20 93． 90 ± 37． 05a 70． 80 ± 16． 33b
文火炒炭组 20 103． 30 ± 51． 48a 74． 70 ± 23． 15b
中火炒炭组 20 63． 80 ± 45． 26 a* 54． 90 ± 21． 38b*
武火炒炭组 20 104． 20 ± 16． 77a 75． 30 ± 14． 63b
与空白组比较，aP ＜ 0． 01，bP ＜ 0． 05;与生品组比较，＊＊P ＜ 0． 01，* P ＜
0． 05
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 3 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 3 期
2． 3 没食子酸的测定
2． 3． 1 没食子酸测定的色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(250 mm
× 4． 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈 － 0． 05 ﹪磷酸(4∶ 96)，检
测波长 270 nm，柱温为室温，体积流量 1 ml·min －1，进样量 20
μl，理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于 6 000。色谱图
见图 1。
图 1 没食子酸对照品(A)和生品供试品(B)HPLC色谱图
2． 3． 2 供试品溶液的制备［10］ 精密称取过 3 号筛的不同制品铁
苋菜各 10 g，以 70%乙醇为溶媒，用量 30 倍，水浴温度 90℃，回
流提取 2 次，每次 4 h，提取液过滤、离心后定容至 100 ml容量瓶
中，摇匀，冷藏备用。
2． 3． 3 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品 22 mg，用
流动相定容至 100 ml量瓶中，摇匀后作为没食子酸对照品贮备
液。
2． 3． 4 标准曲线的制备 精密移取 1 ml没食子酸对照品贮备液
置 10 ml量瓶中，用流动相定容至刻度。精密移取不同体积对照
品溶液按“2． 3． 1”项色谱条件进行测定，以进样量为横坐标，峰
面积为纵坐标作标准曲线，得线性方程为 Y = 3． 522 3 × 107X
－ 1 025． 493 5(r = 0． 999 9)。试验结果表明对照品在 0． 022
～ 0． 22 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2． 3． 5 精密度试验 取没食子酸对照品溶液，连续进样 6 次，按
“2． 3． 1”项色谱条件测定，没食子酸的 ＲSD值为 1． 91%。
2． 3． 6 稳定性试验 取没食子酸对照品溶液，按“2． 3． 1”项色谱
条件，分别在 0，2，4，6，8 h测定，没食子酸的 ＲSD 值为 1． 60%，
说明没食子酸在 8h内稳定。
2． 3． 7 重复性试验 取生制品 5 份，按“2． 3． 2”项制备供试品溶
液，微孔滤膜(0． 45 μm)过滤，按“2． 3． 1”项色谱条件测定，没食
子酸的 ＲSD值为 2． 06%。
2． 3． 8 加样回收率试验 取已知含没食子酸量的生制品 5 份，加
入适量没食子酸对照品，按“2． 3． 2”项制备供试品溶液，在
“2． 3． 1”项色谱条件下测定，没食子酸平均回收率为 98． 85%，
ＲSD值为 1． 54%。
2． 3． 9 样品测定 精密移取不同制品提取所得供试品溶液，微孔
滤膜(0． 45 μm)过滤，按“2． 3． 1”项色谱条件测定没食子酸，测
定值为 3 批次的均值。结果见表 2。
表 2 铁苋菜不同炒炭制品与生品中没食子酸含量比较
样品 没食子酸 /mg·g － 1 ＲSD /﹪ 增加率 /﹪
生品 7． 66 1． 83 －
文火炒炭品 5． 83 2． 01 － 23． 89
中火炒炭品 5． 62 2． 23 － 26． 63
武火炒炭品 5． 34 1． 45 － 30． 29
n =3
3 讨论
实验结果表明，不同炒炭方法对铁苋菜止血作用有影响。与
空白对照组比较，阳性组、生品组与不同火力炒炭组均能显著缩
短小鼠出血时间(P ＜ 0． 01);阳性组(P ＜ 0． 01)、生品组(P ＜
0． 05)与不同火力炒炭组(P ＜ 0． 05)能显著缩短小鼠凝血时
间，说明铁苋菜生品及炒炭品具有止血作用。与生品组比较，中
火炒炭组对缩短小鼠出血、凝血时间有显著性(P ＜ 0． 05)，文火
炒炭组与武火炒炭组对小鼠出血、凝血时间无显著性，说明中火
炒炭品能增强生品的止血作用。
不同炒炭方法对铁苋菜中没食子酸量有影响。没食子酸量
以生品为高，随炒炭火力(温度)的增加呈逐渐降低趋势，究其原
因可能与没食子酸作为可水解鞣质的结构单元有关，随炒制火力
(温度)的升高，水分大量蒸发，不利于鞣质水解，因而含量逐渐
降低。
前期研究表明，铁苋菜叶中没食子酸含量较其他部位高，叶
占产量的比例最大。由于干燥后叶质地酥脆，切制后炒炭，随火
力的增加易成粉末状或灰化，一方面导致取样的均一性难以保
证，另一方面对止血作用效果也有较大影响。
综上所述，铁苋菜生品具有止血作用且没食子酸含量高，没
食子酸是其止血作用的活性成分，这与文献［3］报道相符。铁苋
菜炒炭具有止血作用而没食子酸含量降低，中火炒炭品能显著增
强生品的止血作用，说明铁苋菜炒炭止血的物质基础除没食子酸
外，可能还与炒制过程中其他物质的产生有关，如炭素、游离钙等
止血物质的形成。提示实际应用中采用炒炭方法增强铁苋菜的
止血作用，控制火力是关键，选用中火炒制为宜，这与中药炮制理
论提出的炒炭火力选择应与药材的性质相结合的要求相符，同时
也验证许腊英［6］、董翠弘［7］等提出的观点是有一定科学依据的。
而文火、武火炒炭品未能增强止血作用的原因可能与上述止血物
质的形成不足或流失有关，需作进一步的研究。
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 3 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 3