全 文 ：HPLC-ELSD法测定杏香兔耳风中 3个倍半萜内酯的含量
曲伟欣 1 ,张　璐 2 ,汪　豪3＊ ,杜迎翔1＊ ,叶文才 3 ,赵守训 3
中国药科大学 1分析化学教研室 , 2天然药物化学教研室 ,南京 210009;
3南京海辰药业有限公司
　　摘　要　目的:建立 HPLC-ELSD法同时测定药材杏香兔耳风中 3个倍半萜内酯含量的方法。方法:采用
Shim-packCLC-ODSC18色谱柱 (150 mm×6.0 mm, 5μm)以甲醇-2%醋酸为流动相 ,梯度洗脱 , 蒸发光散射检
测器 (ELSD)检测。结果:被测定峰能够与其他组分达到基线分离 , 成分为 8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-
zaluzaninC-3-O-β-D-glucopyranoside(1)、8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-zaluzaninC(2)和 zaluzaninC-3-O-β -D-
glucopyranoside(3)的线性范围分别为 0.78 ～ 7.80μg、 0.46 ～ 4.64 μg和 0.44 ～ 4.36 μg, 平均回收率分别为
103.5%、104.7%和 98.9%, RSD分别为 0.28%、0.13%和 0.13%。结论:该方法简便 、准确 ,分离效果好 , 可用
于对药材杏香兔耳风进行质量评价。
关键词　杏香兔耳风;倍半萜内酯;HPLC-ELSD法;含量
中图分类号 R927.2　　　文献标志码　A　　文章编号　1673-7806(2009)03-207-03
　作者简介　曲伟欣 ,女 ,硕士研究生 ,药物分析　Tel:025-85391099　E-mail:quwx 3177@ 126.com
　＊通讯作者　汪豪 ,男 ,副教授　Tel:025-85322132　E-mail:btwanghao@yahoo.com.cn　杜迎翔 , 男 ,教授　E-mail:yingxiangdu@ 163.com
Simultaneousdeterminationofthreesesquiterpenelactones
inAinsliaeafragransbyHPLC-ELSD
QUWei-xin1 , ZHANGLu2 , WANGHao3＊ , DUYing-xiang1＊ , YEWen-cai3 , ZHAOShou-xun3
1DepartmentofAnalyticalChemistry, 2DepartmentofNaturalMedicinalChemistry, ChinaPharmaceuticalUniversity,
Nanjing210009;3NanjingHicinPharmaceticalCo.Ltd, Nanjing210009, China
Abstract　Objective:TodevelopanHPLC-ELSDmethodforthedeterminationofthreesesquiterpene
lactoneconstituentsinAinsliaeafragrans, simultaneously.Methods:Theopticalconditionsofsepara-
tionanddetectionwereonaC18 columnwithagradienteluateofmethanol-2 % aceticacid.Results:
Thelinearrangesof8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-zaluzaninC-3-O-β-D-glucopyranoside(1), 8α-
hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-zaluzaninC(2)andzaluzaninC-3-O-β -D-glucopyranoside(3)were0.78
～ 7.80 μg, 0.46 ～ 4.64 μgand0.44 ～ 4.36 μg.Theaveragerecoverieswere103.5%, 104.7% and
98.9%withRSD0.28%, 0.13% and0.13%.Conclusion:Thedevelopedmethodwassimple, accu-
tatewithperfectresolution, andcanbeusedtoestimatethequalityofAinsliaeafragrans.
Keywords　Ainsliaeafragrans;Sesquiterpenelactones;HPLC-ELSD;Determinationofcontent
　　杏香兔耳风为菊科兔耳风属植物 Ainsliaea
fragransChamp.的干燥全草 ,主要分布于江苏 、浙
江 、江西 、福建等省。杏香兔耳风具有清热利湿 、凉
血解毒等功效 ,用于治疗虚劳咳血 、湿热黄疸 、水
肿 、痈疽肿毒等病症 ,已被 《江西省中药材标准 》收
载 [ 1] 。本植物主要化学成分为倍半萜内酯 、甾醇 、
黄酮等[ 2] 。邹盛勤等采用高效液相色谱法测定了
杏香兔耳风中总黄酮的含量[ 3] ;伍晓春等采用紫
外分光光度法测定了杏香兔耳风中总黄酮的含
量[ 4] ;张锐等采用高效液相色谱法测定了原儿茶
酚酸 、原儿茶醛和绿原酸的含量 [ 5] 。本课题组研
究发现 ,杏香兔耳风具有较大含量的倍半萜内酯 ,
207
　　　　　药学与临床研究　　　　 2009年 6月　
PharmaceuticalandClinicalResearch　 2009, 17 (3)
DOI :10.13664/j.cnki .pcr.2009.03.011
主要成分为 8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-za-
luzaninC-3-O-β-D-glucopyranoside(1)、8α-hydroxy-
11αH-11, 13-dihydro-zaluzaninC(2)和 zaluzanin
C-3-O-β-D-glucopyranoside(3),其结构式见图 1。
药效活性研究显示 ,该类成分具有较好的 COX-2
抑制活性 [ 2, 6] 。该植物中的愈创木烷倍半萜内酯
类化学成分大多无明显紫外吸收 ,故采用 HPLC-
ELSD法建立同一色谱条件下杏香兔耳风中 3个
倍半萜内酯含量测定方法。本方法简便 、准确 ,为
该中药的质量控制提供了科学依据。
　 1　R1 =O-β -D-Glc, R2 =OH;R3 =α-H, β -CH3　 2　R1 =OH, R2 =OH, R3 =α-H, β -CH3　 3　R1 =O-β -D-Glc, R2 =H, R3 =CH2
图 1　杏香兔耳风中 3个倍半萜内酯的结构式.Fig.1　StructureofthreesesquiterpenelactonesinA.fragrans.
1　仪器与材料
1.1　仪　器
Agilent1100高效液相色谱仪(高压二元泵 、自
动进样器);Chemstation色谱工作站;AltechELSD-
2000蒸发光散射检测器;BP211D十万分之一电
子天平 (Sartorius)。
1.2　样品与试剂
8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-zaluzanin-C-3-
O-β-D-glucopyranoside(1)、 8α-hydroxy-11αH-11,
13-dihydro-zaluzaninC(2)和 zaluzaninC-3-O-β -D-
glucopyranoside(3)为本课题组自制(本实验色谱
条件下经峰面积归一化法检测各对照品纯度 ≥
98%),其理化性质及波谱解析数据见文献 [ 6] ;杏
香兔耳风药材分别采集于江西婺源 、湖南邵阳及购
于安徽亳州药材市场 ,由中国药科大学生药学教研
室毕志明副教授鉴定为 A.fragrans。
甲醇为色谱纯;冰醋酸为分析纯;水为高纯水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:Shim-packCLC-ODSC18 (150 mm×
6.0 mm, 5 μm);流动相:A为 2 %醋酸 , B为甲醇 ,
梯度洗脱程序:0 ～ 15 min, 30% ～ 70% B;15 ～
18 min, 70% B;18 ～ 20 min, 70% ～ 90% B;20 ～
25 min:90% B;25 ～ 27 min, 90% ～ 30% B;流速
1.0 mL·min-1;柱温:25 ℃;进样量:20 μL;ELSD参
数:漂移管温度 90℃;气体流速:2.8 L·min-1。
2.2　对照品溶液的制备
精密称 取 8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-
zaluzaninC-3-O-β -D-glucopyranoside(1)、 8α-hy-
droxy-11αH-11 , 13-dihydro-zaluzanin C (2 )和
zaluzanin-C-3-O-β-D-glucopyranoside(3)对照品各
适量 , 加甲醇配制成每毫升含 1、 2、 3分别为
97.5 μg、58.0 μg、54.5 μg的混合溶液作为对照品
溶液 ,备用 。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取杏香兔耳风药材粉末 500 mg,精密加
入25 mL甲醇 ,称重 ,水浴 (90 ℃)加热回流2 h,放
至室温 ,称重补重 ,滤过 ,取续滤液 ,以 0.45 μm微
孔滤膜过滤 ,即得。
2.4　线性关系考察
取 “2.2”项下的对照品溶液 ,分别取 8、10、20、
40、80 μL依次进样 ,按上述色谱条件测定 ,以峰面积
的自然对数为横坐标 ,以进样量 (μg)的自然对数
为纵坐标 ,作标准曲线 ,结果显示 , 3个倍半萜内酯
在各自的质量范围内线性关系良好(见表 1)。
表 1　3个倍半萜内酯的回归方程及线性范围
Table1　Calibrationcurves, testrangesfortheanalytes
化合物 回归方程 相关指数(r)线性范围(μg)
1 Y=1.5754X+5.185 4 0.997 6 0.78 ～ 7.80
2 Y=1.8183X+5.012 2 0.997 1 0.46 ～ 4.64
3 Y=1.7152X+5.128 6 0.999 3 0.44 ～ 4.36
2.5　进样精密度实验
取 “2.2”项下对照品溶液 ,连续进样 6次 ,每
次20 μL,依法测定 ,以峰面积计算 ,化合物 1、2、3
的 RSD分别为 0.84%、0.65%、1.17%。
2.6　稳定性实验
取供试品溶液分别于 0、1、2、4、8 h进样 ,每次
20 μL,依法测定 ,以峰面积计算 ,化合物 1、2、3的
RSD分别为 2.15%、1.89%、1.35%。结果显示 ,供
试品溶液在配制的8 h测定基本稳定 。
2.7　重复性实验
精密称取同一批号杏香兔耳风药材粉末 6份 ,按
“2.3”项下方法操作 ,分别进样20 μL,依法测定 ,化合
物 1、 2 、 3的平均含量分别为 0.074%、 0.039%、
0.250%, RSD分别为0.30%、0.19%、0.10%。
208
第 3期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　曲伟欣等 , HPLC-ELSD法测定杏香兔耳风中三个倍半萜内酯的含量
2.8　回收率试验
采用加样回收法。取已知含量的杏香兔耳风
样品 ,共 6份 ,精密加入一定量的化合物 1、2、3的
对照品溶液 ,按照 “ 2.3”项下方法制成供试品溶
液 ,按照 “2.1”项下色谱条件分别依法测定 ,计算
回收率 。结果见表 2。
表 2　回收率试验结果
Table2　Recoverytest
成分 取样含量(mg)
加入对照
品量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
化合
物 1
185.67 186.03 378.21 103.50
185.07 186.03 377.94 103.70
185.56 186.03 377.73 103.30
185.67 186.03 378.96 103.90
185.37 186.03 378.28 103.70
185.52 186.03 377.32 103.10
103.5 0.28
化合
物 2
97.85 96.92 199.28 104.70
97.54 96.92 199.11 104.80
97.81 96.92 199.09 104.50
97.85 96.92 199.42 104.80
97.70 96.92 199.08 104.60
97.77 96.92 199.05 104.50
104.7 0.13
化合
物 3
627.25 627.34 1 246.87 98.77
625.25 627.34 1 246.94 99.10
627.00 627.34 1 246.81 98.80
627.25 627.34 1 247.06 98.80
626.25 627.34 1 247.19 98.98
626.75 627.34 1 247.63 98.97
98.9 0.13
2.9　样品测定
取不同产地的杏香兔耳风药材粉末各 3份 ,按
“ 2.3”项下操作 , 3个倍半萜内酯的含量测定结果
见表 3。对照品及供试品的 HPLC色谱图见图 2。
图 2　混合对照品溶液(A)和样品溶液(B)的 HPLC色谱图.Fig.2　HPLC-ELSDchromatogramsofthestandardandsample.
1:8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-zaluzaninC-3-O-β-D-glucopyranoside
2:8α-hydroxy-11αH-11, 13-dihydro-zaluzaninC
3:zaluzaninC-3-O-β-D-glucopyranoside
表 3　不同产地样品 3个倍半萜内酯的含量测定结果(n=3)
Table3　Contentsofcompound1, 2 and3 inA.fragrans(n=3)
产地 1含量(%)RSD(%)
2
含量(%)RSD(%)
3
含量(%) RSD(%)
婺源 0.074 1.39 0.039 1.52 0.250 1.81
宜春 0.033 1.65 0.042 1.23 0.214 1.74
邵阳 0.031 1.83 0.056 1.62 0.248 1.40
亳州 1 0.110 1.57 0.068 1.42 0.243 1.65
亳州 2 0.100 1.82 0.065 2.03 0.186 1.96
各个批次含量测定结果的差异 ,可能是由于采
收地和采收时间的不同所导致 。
3　讨　论
3.1　检测器的选择
因杏香兔耳风指标成分倍半萜内酯类成分的
最大紫外吸收波长是末端吸收 ,用梯度洗脱时容易
发生基线漂移的现象 ,对含量测定结果有很大影
响。所以针对蒸发光散射检测器选择了通用型检
测器 ,适合于对紫外吸收较弱或没有紫外吸收的物
质含量测定以及基线平稳的优点。
3.2　气体流速的选择
本实验 考察 了气体 流速 为 3.0 L·min-1 、
2.7 L·min-1、2.5 L·min-1和 2.8 L·min-1 ,结果发现 ,
当气体流速在2.8 L·min-1时 ,响应值最大。
3.3　流动相的选择
先采用乙腈 -水系统 ,由于乙腈 -水系统的蒸发
要求漂移管的温度较高 ,在此温度下化合物 2在漂
移管中易汽化而检测不到信号 ,所以改用汽化温度
比较低的甲醇 -水系统 ,经实验优化得到甲醇 -2 %
醋酸的流动相 ,分离效果最佳 。
参考文献
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[ 3] 　邹盛勤 , 徐光辉 , 林　惠 ,等.高效液相梯度洗脱法测定杏
香兔耳风中绿原酸和芦丁 [ J] .分析试验室 , 2008, 27(5):
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[ 5] 　张　锐 , 张爱华 , 张正行 .高效液相色谱法同时测定杏香兔
耳风中 3种活性成分的含量 [ J] .时珍国医国药 , 2006, 17
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(收稿日期:2009-01-14)
209
药学与临床研究　PharmaceuticalandClinicalResearch　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 17卷