全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2013，28(1)∶073 ～ 076
基金项目:广西壮药质量标准研究项目资助(编号:MZY2010074)
作者简介:苏青(1960—) ，女，副主任技师，主要从事民族药化学成分研究和民族药新药开发工作。Email:nnsq2009@ 163． com
水罗伞药材的鉴别及水黄皮素的含量测定
苏 青1，黄瑞松1，梁子宁2，覃冬杰3，雷沛霖1，陆峥琳1
(1．广西民族医药研究院，广西 南宁 530001;2．广西中医药大学，广西 南宁 530001;3．广西医科大学，广西 南宁 530021)
摘要:目的 研究制订壮药材水罗伞 Fordia cauliflora的质量标准。方法 采用性状、显微、TLC等法鉴别水罗伞药材真伪;采
用 HPLC法测定水罗伞药材中水黄皮素的含量，药材检查等项参照《中国药典》方法测定。结果 广西不同产地 10 批水罗伞药
材均具有相同的性状、显微及 TLC色谱特征，水黄皮素 0． 173% ～ 0． 502%，浸出物 5． 1% ～ 10． 8%，水分 7． 7% ～ 10． 8%，总灰分
5. 2% ～7． 8%，酸不溶性灰分 0． 1% ～0． 5%。结论 建立的壮药材水罗伞质量标准，可有效控制水罗伞药材的质量。
关键词:水罗伞;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法;水黄皮素
中图分类号:R28 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2013)01 － 0073 － 04
Identification of Fordia cauliflora and determination of karanjin
SU Qing1，HUANG Rui － song1，LIANG Zi － ning2，QIN Dong － jie3，LEI Pei － lin1，LU Zheng － lin1
(1． Guangxi Academy of Minority Nationality Medicine and Pharmacology，Nanning，Guangxi，530001 P． R． China;2． Guangxi Univer-
sity of Chinese Medicine，Nanning，Guangxi，530001 P． R． China;3． Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，530021 P． R．
China)
Abstract:OBJECTIVE To research and set quality standard of Fordia cauliflora Hemsl．METHODS Qualitative identification of
Fordia cauliflora Hemsl． was made by the properties，microscope and TLC，and the content of karanjin was determined by HPLC． Other
inspections were determined according to Chinese Pharmacopoeia． RESULTS 10 batches of Fordia cauliflora Hemsl． from different
areas of Guangxi had the same characters，microscopic and TLC features． The content of karanjin was 0． 173% to 0. 502%，ethanol
soluble extraction was 5． 1% to 10． 7%，moisture content was 7． 7% to 10． 8%，ash content was 5． 2% to 7． 8%，and acid insoluble
ash content was 0． 1% to 0． 5% ． CONCLUSION The quality standard established can be effectively used to control the quality of
Fordia cauliflora Hemsl．
Key words:Fordia cauliflora Hemsl．;Quality standard;TLC;HPLC;Karanjin
CLC number:R28 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2013)01 － 0073 － 04
水罗伞(壮语:棵亮忍)是豆科植物干花豆 For-
dia cauliflora Hemsl． 的干燥块根，为壮族民间常用
药，具有活血散淤、消肿止痛、化痰止咳的功效，用于
治疗风湿痹痛、跌打损伤、痈疮肿痛、咳嗽等症［1］。
干花豆主要分布于广西、广东等省区，在广西多分布
于昭平、龙州、田东、田阳、百色、那坡等桂西南地
区［2］。水罗伞含有黄酮、内酯、酚性化合物及多糖
等化学成分，其中水，黄皮素(karanjin)等黄酮类化
合物为其主要成分［3 － 5］。目前，水罗伞的生药学研
究已有报道，但关于其质量标准的研究甚少，为此，
特研究水罗伞的鉴别及水黄皮素的含量测定，为开
发利用该壮药材提供依据［7］。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
LC －20A高效液相色谱仪(日本岛津) ;2401PC
型紫外光谱仪(日本岛津) ;YOKO － ZS 紫外分析摄
影仪(武汉药新技术开发有限公司)。水黄皮素
(karanjin，自制，含量 ＞98%) ;水罗伞对照药材(采自
广西大新县雷平镇后益村，腊叶标本经广西中医药研
究院方鼎、广西食品药品检验所黄燮才鉴定为豆科植
物干花豆 Fordia cauliflora Hemsl．) ;水罗伞药材(共
10个批次，经鉴定为 Fordia cauliflora Hemsl．，来源见
表 1) ;甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
1． 2 水罗伞药材的鉴别
1． 2． 1 性状鉴别 根长条圆柱形，直径 1 ～ 9． 5
cm。表面棕黄色至灰棕色，具横列线状和圆点状皮
孔。质坚韧，不易折断，断面纤维性，切面类白色至
棕黄色，木部具黄白色相间的放射状纹理。气微，味
淡、微辛苦(图 1A)。
1． 2． 2 显微鉴别 根横截面近圆形，木栓层由 7 ～
12 列扁平长方形细胞组成，排列整齐;皮层外侧有
石细胞和纤维，单个散在或数个相聚。皮层较窄，细
胞中充满淀粉粒。维管束放射状断续排列成环，韧
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2013.01.016
皮纤维较多，形成层明显;木质部导管多单个散在或
2 ～ 3 个相聚。木纤维细胞常聚集成带构成断续的
同心环，维管射线明显，宽窄不一;薄壁细胞充满淀
粉粒，有草酸钙方晶散在;木薄壁细胞较多(图 1B)。
粉末黄白色。淀粉粒多见，单粒类圆形或半球形，直
径 5 ～ 26 μm;纤维多见，单个或成束，略弯曲，直径
8 ～ 13 μm，壁厚，胞腔狭小，末端长尖，可见晶鞘纤
维;石细胞多数，单个或成群，淡黄色，呈类圆形、类
长方形或三角形，直径 25 ～ 70 μm，细胞壁厚，孔沟
及层纹明显，木化;草酸钙方晶多见，方形，棱形或多
面形，直径 12 ～ 65 μm;导管为孔纹导管、网纹导管
和螺纹导管，直径 15 ～ 76 μm(图 2)。
表 1 水罗伞药材来源情况
Table 1 Origins of Fordia cauliflora Hemsl．
No． 来源 采集时间
对照药材 广西大新县 1 2011 － 01
1 广西南宁 1 2010 － 11
2 广西田东县 1 2011 － 01
3 广西南宁 2 2010 － 12
4 广西玉林药市 1 2011 － 03
5 广西大新县 2 2011 － 02
6 广西靖西药市 2011 － 06
7 广西田东县 2 2011 － 01
8 广西龙州县 2011 － 03
9 广西玉林药市 2 2011 － 03
10 南宁 3 2011 － 01
30 滋m
木栓层
皮层
石细胞
维管射线
韧皮部
形成层
导管
木纤维
木质部
5
cm
A B
图 1 水罗伞药材图(A)及根横切面详图(B)
Fig 1 Materia medica of(A)and detail drawing of the root of
transverse section(B)Fordia cauliflora Hemsl．
1.淀粉粒
2.草酸钙方晶
3.晶鞘纤维
4.网纹导管
5.螺纹导管
6.孔纹导管
7.薄壁细胞
8.纤维
9.石细胞
8
9
1
4 5
6
27
3
43 滋m
图 2 水罗伞粉末图
Fig 2 Powder of Fordia cauliflora Hemsl．
1． 2． 3 TLC 鉴别及耐用性考察 取水罗伞粉末
1 g，加甲醇 20 mL，超声提取 30 min，滤过，滤液浓缩
至 1 mL，作为供试品溶液。另取水罗伞对照药材 1
g，同法制成对照药材溶液。再取水黄皮素对照品，
加甲醇制成 0． 5 mg·mL －1对照品溶液。按薄层色谱
法(中国药典 2010 年版附录ⅥB)试验，吸取上述供
试品溶液 2 ～ 3 μL、对照药材溶液 2 μL，水黄皮素对
照品溶液 2 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以
正己烷 －丙酮(15∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，
喷以三氯化铝试液，于 105 ℃加热 2 ～ 3 min 后，置
紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对
照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑
点;在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄绿色
荧光斑点(图 3)。分别吸取样品 3、6、8 号供试品溶
液、水罗伞对照药材溶液及水黄皮素对照品溶液各
2 μL，进行耐用性考察。结果这 3 种溶液在两种不
同品牌的预制硅胶 G 板上、温度在 8 ～ 30 ℃、相对
湿度为 50% ～88%的展开环境下，以点状及条状两
种不同的点样方式展开，均获得良好的分离层析
效果。
原点
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 S1 S2
1.南宁 1
2.田东 1
3.南宁 2
4.玉林药市
5.大新县 2
6.靖西药市
7.田东 2
8.龙州县
9.玉林药市
10.南宁 3
S1.对照药材
S2.水黄皮素对照品
图 3 10 批水罗伞药材 TLC色谱图
Fig 3 TLC chromatogram of ten batches of Fordia cauliflora
1． 3 各项检查及浸出物的测定
按《中国药典》2010 年版药材的检查项下，进行
样品水分(第一法)、总灰分、酸不溶灰分测定(表
2)。结果 10 批样品水分含量 ＜ 11． 0%，考虑根块类
药材的含淀粉较高及采收储藏等因素到该药材为南
方所产，而南方气候较为湿润，药材在运输和贮存过
程中发生变化等因素。因此，将样品水分拟订为不
得过 13． 0%。由表 2 可知:10 批不同来源的样品总
灰分测定为 5． 2% ～7． 8%，平均为 6． 6%;酸不溶灰
分测定为 0． 1% ～ 0． 5%，平均为 0. 2%。表明不同
来源的水罗伞药材杂质含量有差异，故制定总灰分
不得过 9． 0%，酸不溶灰分不得过 0． 6%。参照《中
国药典》2010 年版一部浸出物测定法(热浸法) ，以
乙醇为溶剂，测定样品浸出物含量(表 2)。结果 10
批样品浸出物含量在 5. 1% ～ 10． 8%之间，平均值
为 8． 2%，说明不同产地的水罗伞药材内在物质有
一定差异，故制定本品醇溶性浸出物不得低于
47 华 西 药 学 杂 志 第 28 卷
4. 5%。
表 2 水罗伞药材水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物、水黄皮素含量
的测定结果
Table 2 Results of water content，total ash，acid insoluble ash con-
tent，extractum and karanjin assaying of Fordia cauliflora
No． Water /%
Total
ash /%
Acid insoluble
ash /%
Extractum /
%
Karanjin /
%
1 9． 7 5． 8 0． 2 5． 9 0． 173
2 10． 6 7． 0 0． 2 7． 0 0． 206
3 8． 9 7． 2 0． 4 9． 7 0． 277
4 10． 2 6． 3 0． 3 6． 4 0． 175
5 10． 2 5． 2 0． 1 5． 1 0． 188
6 10． 8 7． 5 0． 5 10． 5 0． 426
7 7． 7 7． 8 0． 1 10． 7 0． 502
8 7． 9 6． 1 0． 2 8． 5 0． 350
9 10． 4 5． 6 0． 1 10． 8 0． 190
10 8． 5 7． 1 0． 3 8． 6 0． 300
珔X 9． 5 6． 6 0． 2 8． 2 0． 279
1． 4 含量的测定
1． 4． 1 测定波长的选择 取样品的甲醇提取液
(0． 4 mg·mL －1)及水黄皮素甲醇溶液(10 μg·
mL －1) ，分别在 200 ～ 800 nm扫描。结果，上述溶液
在 260 nm均有最大吸收峰，且光谱图一致，并与文
献报道吻合［3］，故以 260 nm为检测波长。
1． 4． 2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为
Hypersil ODS2 C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相
为甲醇 －水(55∶45) ，流速 1 mL·min －1，检测波长
260 nm，进样量 20 μL，柱温 30 ℃。测定了 10 个批
次的样品溶液。结果各样品色谱图分离效果较好，
水黄皮素峰与相邻峰的分离度均大于 1． 5，符合《中
国药典》技术要求。理论板数按水黄皮素计为
3. 595 × 103 ～ 6. 827 × 103。考虑到不同品牌或规格
色谱柱的差异，理论板数暂定为按水黄皮素峰计应
不低于 3 × 103。
1． 4． 3 溶液的制备 精密称定水黄皮素对照品
14． 9 mg，加甲醇使溶解并定容至 150 mL，制成
99. 33 μg·mL －1对照品溶液。取样品粉末(过 40 目
筛)约 0． 5 g，精密称定，加甲醇 50 mL，索氏回流 1
h，取出，回收溶剂至约 15 mL，放冷，用甲醇分次洗
入 50 mL量瓶至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供
试品溶液。以甲醇溶液作为阴性对照溶液。
1． 4． 4 专属性试验 分别量取“1． 4． 3”项下溶液
各 20 μL进样，按“1． 4． 2”项下色谱条件测定。供
试品溶液色谱图中有与水黄皮素保留时间相同的吸
收峰，阴性对照品溶液无此吸收峰。说明本法测定
水罗伞药材无阴性干扰，专属性强，色谱图见图 4。
1． 4． 5 最低检出限量试验 取水黄皮素对照品甲
醇溶液(0． 0993 μg·mL －1)进行稀释，计算信噪比
3∶1 时注入仪器的量。结果水黄皮素对照品的最
低检出限约为 0． 1 ng。
1． 4． 6 线性关系考察 分别精密量取“1． 4． 3”项
下水黄皮素对照品溶液 0、0． 5、2． 0、4． 0、6． 0、8． 0、
10． 0 mL 置 10 mL 量瓶中，各加甲醇定容。分别取
20 μL进样。以峰面积积分值为纵坐标、水黄皮素进
样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得回归方程为:
Y =5． 463 ×106X －2． 494 ×104(r =0． 9999) ，水黄皮素
0． 0993 ～1． 9876 μg与峰面积呈良好线性关系。
1． 4． 7 精密度与重复性试验 精密量取照
“1. 4. 3”项下制备的样品(6 号)供试品溶液 20 μL，
重复进样 6 次测定。结果供试品溶液水黄皮素峰面
积的 RSD = 0． 33%。取样品粉末 0． 5 g，精密称定，
照“1． 4． 3”项下制备 6 份平行溶液，各进样 20 μL
测定。各次测定水黄皮素的含量 RSD = 0． 26%。
A B C
0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 5 10 15 20 25 30 35 40 0 5 10 15 20 25 30 35 40
t/min
ka
ra
nj
in
ka
ra
nj
in
图 4 水黄皮素对照品(A)、供试品溶液(B)和阴性溶液(C)HPLC色谱图
Fig 4 HPLC chromatogram of reference substance of Karanjin(A)，solution used to examine(B)and megative solution(C)
1． 4． 8 稳定性与加样回收率试验 精密量取照
“1． 4． 3”项下制备的样品供试品溶液 20 μL，分别
于 0、2、4、6、8、24 h时进样测定，结果各次测定水黄
皮素含量的 RSD = 0． 28%。取已测定的本品粉末约
0． 25 g，共 6 份，精密称定，分别精密加入水黄皮素
甲醇溶液(99． 33 μg·mL －1)10 mL，照“1． 4． 3”项下
方法制备供试品溶液，按“1． 4． 2”项下色谱条件进
样 20 μL 测定。结果水黄皮素平均回收率为
57第 1 期 苏 青，等。水罗伞药材的鉴别及水黄皮素的含量测定
99. 48%，RSD = 1． 55%。
1． 4． 9 样品的含量测定及限量的制定 分别取水
黄皮素对照品、10 个不同批次的样品，按“1． 4． 3”项
下方法制备对照品和供试品溶液，照“1． 4． 2”项下
色谱条件进样 20 μL测定。从表 2 可知:10 个不同
批次样品水黄皮素的含量为 0． 17% ～ 0. 50%，平均
为 0． 28%。表明不同产地的水罗伞药材主要化学
成分存在差异。考虑到药材来源的差异，限度暂定
为:按干燥品计算，含水黄皮素(C18H12O4)量不得少
于 0． 15%。
1． 4． 10 HPLC 法耐用性考察 按“1． 4． 2”项下的
色谱条件，取“1． 4． 3”项下制备的样品供试品溶液
及水黄皮素对照品溶液各 20 μL，分别进样，进行耐
用性实验考察。结果采用 Hypersil ODS2 C18色谱柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)时，柱温 25 ～ 30 ℃、流速
0． 8 ～ 1． 2 mL·min －1、流动相(甲醇 －水)组成比例
为53∶47、55∶45、57∶43 时，除流动相比例为 57∶
43 时，测得分离度 ＜ 1． 5 外，其余测得的理论板数、
分离度、拖尾因子等，均符合《中国药典》的要求［8］，
且测定水黄皮素含量的 RSD为 0. 061% ～1． 10%。
2 讨论
豆科植物玉郎伞 Millettia pulchra kurz var．
Laxio (Dunn)Z． Wei的药材性状与水罗伞药材较相
似，均含水黄皮素［9］，仅以性状及 TLC 色谱不易识
别，临床使用常有混淆。经对 10 个不同产地的水罗
伞药材的显微组织观察，发现水罗伞与玉郎伞药材
在显微特征上有差异，如水罗伞粉末显微可见孔纹、
网纹和螺纹三种导管，玉郎伞药材粉末显微可见具
缘纹导管，因此，应注意其显微特征的区别。另外，
在 TLC鉴别项实验中，10 批不同批次的样品除具有
与水罗伞对照药材相对应的两个特征斑点(a、b) ，
还具有与水黄皮素对照品相对应的斑点(a) ，因此，
文中标准的 TLC鉴别项，可增加水黄皮素作为化学
对照品。目前，水黄皮素尚不是法定化学对照品，因
此，加强对水黄皮素化学对照品的进一步研究，将利
于水罗伞药材以及含该类化学成分的中药材质量标
准控制。水黄皮素为水罗伞的主要化学成分，因此
采用 HPLC 测定水黄皮素。在 HPLC 耐用性考察
中，曾进行了同类型、不同厂牌色谱柱的实验。结果
在对照品及供试品溶液中，Hypersil ODS2 C18(250
mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱的测定结果令人满意;
Inertsil ODS － SP C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)及
Gemini C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)色谱柱，对水
黄皮素的分离效果不甚理想。
致谢:承广西中医药大学药学院朱意麟老师及药学院 2008
级曾燕先、韦钰彬同学参与部分实验工作。
参考文献:
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收稿日期:
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2012 － 03 － 18
收 录 证 书
《华西药学杂志》被中国生物医学文献服务系统(SinoMed)中的
《中国生物医学文献数据库》收录。
中国医学科学院医学信息研究所
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