全 文 ：生长调节剂对万寿菊花药培养的影响
李　甫 ,唐道城＊ ,梁顺祥
(青海大学高原花卉研究中心 ,青海 西宁　810016)
摘要:以 B5为基本培养基 ,选用 KT/NAA 、KT/2 ,4-D 、6-BA/NAA 、6-BA/2 ,4-D 4种生长调
节剂组合;每种组合设 20/3 、25/3 、50/3 、80/3 、50 1 、80/1 6种比例 ,研究对万寿菊花药愈伤组织
诱导和器官分化的影响。结果表明 ,KT/NAA=20/3的花药愈伤组织诱导率最高;KT/NAA=
25/3 、KT/NAA=20/3和 6-BA/NAA=25/3最有利器官分化;2 ,4-D与6-BA 、KT组合对器官
分化无作用 。
关键词:万寿菊;花药培养;愈伤组织;器官分化;生长调节剂
中图分类号:Q946.885.1;S682.11　文献标识码:A　文章编号:1006-8996(2007)01-0051-03
Effects of growth regulators on anther culture of marigold
LI Fu , TANG Dao-cheng＊ , LIANG Shun-xiang
(Plateau Flower Research Center of Qinghai University , Xining 810016 ,China)
Abstract:The experiment researched the callus inducement and organ differentiation of marigold anther
in B5 basic medium 4 combinations of KT NAA ,KT 2 ,4-D ,6-BA NAA ,6-BA 2 ,4-D , and 6 ratio
of 20 3 ,25 3 ,50 3 ,80 3 ,50 1 ,80 1.The result showed that ,Kt NAA=20 3 had highest inducement of
callus , 6-BA NAA=25 3 , Kt NAA=25 3 ,Kt NAA=20 3 had highest organ differentiation , 2 ,4-D
connected with 6-BA ,KT had not lead to organogenesis.
Key words:Tagetes erecta L.;anther culture;callus;organogenesis;growth regulator
有关万寿菊育种在国内外的报道很少 ,姚振明[ 1] 、王国云等[ 2] 以雄性不育两用系作母本 ,具有较强
恢复能力的可育系作父本得到万寿菊杂交种 ,并结合当地的自然条件总结出了万寿菊杂交一代制种生
产技术[ 3] 。但利用万寿菊花药培养选育新品种至今未见有报道 。本试验以 B5为基本培养基 ,研究生长
调节剂组合及配比对花药愈伤组织诱导和器官分化的影响 ,为万寿菊的倍性育种奠定基础。
1　材料与方法
1.1　材料及灭菌
由青海大学高原花卉研究中心提供万寿菊F1代(编号A×8-1-3)。于晴天上午 9:00 ～ 10:00取
小孢子大多处于单核期的花蕾 ,自来水下冲洗 20 min后 ,用 70%的酒精处理 30 s , 0.1%升汞处理 90 s ,
0.9%次氯酸钠中处理7 ～ 8 min。
1.2　试验设计
试验设生长调节剂组合和生长调节剂配比 2个因素 ,采用二因素完全随机区组试验设计。生长调
节剂组合设 4个水平:即KT/NAA 、KT/2 ,4-D 、6-BA/NAA 、6-BA/2 ,4-D;生长调节剂配比设 6个水
平:即 20/3 、25/3 、50/3 、80/3 、50/1 、80/1 ,1个空白对照 ,共 25个处理 , 5次重复 ,每瓶接种 25个花药 。以
B5为基本培养基 ,加 3%蔗糖和 0.4%琼脂 ,pH5.8 ～ 6.0 ,20 ～ 25 ℃,弱散光培养。
1.3　统计与分析方法
收稿日期:2006-07-04
作者简介:李　甫(1980—),男 ,河南淮滨人 ,青海大学在读硕士研究生。 ＊通讯作者
第 25卷　第 1期
2007年 2月 　 　　　　　
青 海 大 学 学 报 (自 然 科 学 版)
Journal of Qinghai University(Nature Science)　 　　　　　
Vol.25 No.1
Feb.2007
DOI :10.13901/j.cnki.qhwxxbzk.2007.01.013
　　接种后每周记录愈伤组织数 ,器官分化时间 ,器官分化类型及数目。
愈伤组织诱导率(%)=诱导愈伤组织数/接种花药数×100;器官分化率(%)=分化器官的愈伤组
织数/供试愈伤组织数×100;试验数据采用SAS软件进行统计分析 。
2　结果与分析
2.1　不同处理对万寿菊花药愈伤组织诱导率的影响
　　由表 1可以看出 ,生长调节剂组合与配比对万
寿菊花药的诱导存在显著性差异。组合 NAA +6
-BA和 NAA+KT 诱导率最高 ,达到 27.6%,两种
组合之间没有显著性差异;2 ,4-D+KT则最差 ,诱
导率只有 8.1%;生长调节剂配比为 20/3时 ,愈伤
组织诱导率最高 ,达到 33%;随着比值的增大 ,诱
导率显著降低 。50/3和50/1之间以及 80/3和 80/
1之间没有显著差异 ,但 50/3和 50/1的诱导率显
著高于 80/3和 80/1的诱导率 ,推测与细胞分裂素
的浓度过高有关 。
表 1　生长调节剂组合和配比对
愈伤组织诱导率的差异显著性比较
组　　合 诱导率(%) 配比 诱导率(%)
NAA+6-BA 27.6a 20/ 3 33.0a
NAA+KT 26.9a 25/ 3 22.0b
2 , 4-D+6-BA 10.4b 50/ 3 16.8c
2 , 4-D+KT 8.1c 50/ 1 16.6c
80/ 3 12.2d
80/ 1 9.0d
　　注:SE组合 =1.66 ,SE配比 =2.15;小写字母表示 5%水平上的差
异显著性 ,下同。
　　从表 2可以看出 ,6-BA+NAA 在不同配比之间没有显著性差异 ,诱导率在配比为 25/3时达到最
大 ,为 34.4%;KT+NAA在不同配比之间的互作差异显著 ,在比例为20/3时诱导率最高 ,接近 46%;6-
BA+2 ,4-D和 KT+2 ,4-D在不同配比之间的互作也有显著性差异 ,但总体诱导效果不佳 ,特别在配
比为 80/3 、50/1 、80/1时几乎没有诱导出愈伤组织。说明 NAA和 2 ,4-D作为生长素 ,前者对万寿菊花
药愈伤组织的诱导率高于后者 。
表 2　生长调节剂组合和配比的互作对愈伤组织诱导率的差异显著性比较
　　　　6-BA/NAA　　　　 　　　　KT/NAA　　　　 　　6-BA/ 2 , 4-D　　 　　　　KT/2 , 4-D　　　　
配　比 诱导率(%) 配　比 诱导率(%) 配　比 诱导率(%) 配　比 诱导率(%)
25/ 3 34.4a 20/ 3 45.6a 20/3 27.2a 20/ 3 20.8a
50/ 3 28.0a 25/ 3 32.0ab 25/3 13.6ab 25/ 3 8.0ab
20/ 3 24.0a 50/ 3 27.2b 50/3 7.2b 50/ 3 4.8h
50/ 1 23.7a 80/ 3 25.6b 50/1 0.8c 50/ 1 0.8b
80/ 3 23.2a 50/ 1 24.0b 80/3 0.0c 80/ 3 0.0b
80/ 1 21.8a 80/ 1 11.2c 80/1 0.0c 80/ 1 0.0b
　　注:SE=1.92。
2.2　不同处理对万寿菊器官分化率的影响
从表 3可以看出 ,生长素选用 2 ,4-D时 ,没有
任何类型的器官分化;NAA+KT 、NAA+6-BA两
种组合比较好 ,器官分化率最高可达 40.3%,它们
之间没有显著性差异;生长调节剂配比为 25/3时
器官分化率最高 ,接近 71%;20/3与其他比例均没
有显著差异;比例为 50/1 、80/1 时器官分化率最
低。可见 2 ,4-D对器官的分化效果不如NAA好 ,
且利用细胞分裂素与生长素组合诱导器官分化时 ,
两者比例不宜太高。
表 3　不同生长调节剂组合和配比对
器官分化率的差异显著性比较
组合 器官分化率(%) 配比 器官分化率(%)
NAA+KT 40.3a 25/ 3 70.6a
NAA+6-BA 21.7a 50/ 3 47.9a
2 , 4-D+6-BA 0.0b 20/ 3 32.7ab
2 , 4-D+KT 0.0b 80/ 3 16.4b
50/ 1 12.0b
80/ 1 6.2b
　　注:SE组合=5.16 , SE配比=6.66。
　　从表 4可以看出 ,NAA+6-BA和 NAA+KT 与 6种比例的互作差异显著;6-BA+NAA组合在比例
为25/3和 50/3时器官分化率出现一个高峰 ,比例小于25/3或大于 50/3 ,器官分化率锐减;KT+NAA组
52　　　　　　　　　　　　　　　　　　青海大学学报　　　　　　　　　　　　　　　　第 25卷
合的高峰则出现在 20/3 、25/3 和 50/3 ,大于 50/3
器官分化率开始降低 ,但走势比 6-BA+NAA平
缓。KT+NAA组合在万寿菊愈伤组织的器官分化
方面比6-BA+NAA组合好 。
KT/NAA 、KT/2 ,4-D和6-BA/2 ,4-D 3个组
合在细胞分裂素与生长素的比值比较低(20/3)时
对万寿菊花药培养愈伤组织的诱导是有利的(图
1)。随着比例变大 ,诱导率明显下降;特别是 KT/
2 ,4-D和 6-BA/2 , 4-D 二个组合在比例达到
80/3后基本上没有愈伤组织形成 。万寿菊花药培
表 4　生长调节剂组合和配比的互作
对器官分化率的差异性比较
　　　　NAA+6-BA　　　　 　　　　NAA+KT　　　　
配比 器官分化率(%) 配比 器官分化率(%)
25/ 3 62.3a 25/ 3 76.0a
50/ 3 42.9a 20/ 3 61.0a
80/ 3 5.0b 50/ 3 47.0ab
20/ 3 4.4h 80/ 3 27.7bc
80/ 1 4.4b 50/ 1 22.0bc
50/ 1 2.0b 80/ 1 8.0c
　　注:SE=10.31。
养愈伤组织的诱导率在 6-BA/NAA组合中则是先随着比值的增加而增加 ,在比例为25/3时达到最大 ,
然后随着比例的变大 ,诱导率又开始降低。当比例的范围在 50/3到 80/1时诱导率变化不是很明显 ,趋
于平稳 。另外从图 1还可以看出 NAA对万寿菊花药培养愈伤组织的诱导要比 2 ,4-D有效 ,而 KT 和 6
-BA则没有明显的差别。
图 1　不同生长调节剂配比对花药愈伤组织诱导率的影响
3　讨论与结论
在组织培养中 ,激素或生长调节剂
所产生的影响在培养基的各种成分中
应该是最重要 ,而且植物激素或植物生
长调节剂的组合和用量因植物种类而
定[ 4] 。NAA和 2 ,4-D是组培中常用的
生长素 ,KT 和 6-BA 是常用的细胞分
裂素[ 5] 。本试验通过二因素完全随机区
组试验设计研究了这 4种植物生长调节
剂对万寿菊花药培养的影响。结果显
示NAA与KT 、6-BA组合对万寿菊花药的愈伤组织诱导以及器官分化最好 ,2 ,4-D与KT 、6-BA 组合
则对万寿菊花药的愈伤组织诱导以及器官分化无作用 ,这跟汤青林等[ 6]的研究结果存在一定的差异 ,推
断与物种差异有关 ,生长调节剂配比为 20/3时愈伤组织诱导率最好 ,随着细胞分裂素与生长素的比例
的增加诱导率明显下降。生长调节剂配比为 25/3和 50/3时器官分化率最高 。从总体来看 ,KT/NAA=
20/3这种处理的愈伤组织诱导率最高 ,诱导率可达 45.6%;KT/NAA=25/3 、KT/NAA=20/3和 6-BA/
NAA=25/3对器官分化最有利 ,分化率都在 60%以上。
参考文献:
[ 1] 姚振明.利用核不育两用系配制万寿菊杂交种技术[ J] .中国农学通报 , 1998 ,14(6):90-91.
[ 2] 王国云 ,樊　强 ,李荣富 ,等.万寿菊杂交一代制种生产技术[ J] .内蒙古农业科技 ,2000 ,(增刊):48-50.
[ 3] 张继冲 ,续九如 ,李福荣 ,等.万寿菊的研究进展[ J].西南园艺 , 2005 , 33(5):17-20.
[ 4] 李浚明.植物组织培养教程[M] .北京:北京农业大学出版社 , 1992.34-35.
[ 5] 程广有.名优花卉组织培养技术[M] .北京:科学技术文献出版社 , 2001.25-28.
[ 6] 汤青林 ,宋　明 ,邹　建 ,等.观赏茄花药离体培养研究[ J] .西南农业学报 , 2005, 18(2):175-178.
(责任编辑　杨君丽)
53第 1期　　　　　　　　 李　甫等:生长调节剂对万寿菊花药培养的影响