全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2015，27:1086-1091
文章编号:1001-6880(2015)6-1086-06
收稿日期:2013-09-03 接受日期:2013-12-09
基金项目:江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD);我国水
生、耐盐中药资源的合理利用研究行业专项(201407002)
* 通讯作者 Tel:86-25-85811280;E-mail:chenjw695@ 126． com
艾纳香叶废弃物镇痛、抗炎、止血活性的初步研究
夏 嬿，李 祥，陈建伟*
南京中医药大学药学院，南京 210023
摘 要:研究艾纳香叶提取挥发油后的残留液及叶残渣不同极性部位抗炎、镇痛、止血等药理活性，为其综合利
用提供了依据。抗炎实验采用角叉菜胶致小鼠足肿胀，将其提取挥发油后的残留液及叶残渣不同极性提取物
分成高、中、低剂量组连续给药后，测定足肿胀度、炎症组织蛋白渗出量、PG2E产生量，综合评价抗炎效果;镇痛
实验采用热板实验，观察给药后小鼠痛阈值的变化来评价镇痛效果;止血实验采用观察断尾后人工创面止血时
间的不同，评价止血效果。结果发现艾纳香叶提取挥发油后的废弃物均表现出程度不同的抗炎、镇痛、止血作
用，尤其以水提部位综合效果最为明显，高剂量(92 mg /kg)时，足肿胀抑制率达 64． 03%，显著降低炎症组织中
蛋白质渗出及 PG2E生成，缩短止血时间，并体现出一定的镇痛作用。由此可见艾纳香叶提取挥发油之后的废
弃物均显示不同程度的抗炎、镇痛、止血活性，具有综合利用前景。
关键词:艾纳香叶;废弃物;镇痛;抗炎;止血
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A DOI:10． 16333 / j． 1001-6880． 2015． 06． 027
Anti-inflammatory，Analgesic and Hemostasis Activities of
Different Extracting Fractions of Blumea balsamifera Ｒesidue
XIA Yan，LI Xiang，CHEN Jian-wei*
College of Pharmacy，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing，210023，China
Abstract:The objective of this study was to investigate the analgesic，anti-inflammatory and hemostasis effects of differ-
ent components from Blumea balsamifera (L．)DC． residue． Anti-inflammatory effects were assessed by the weight of
carrageenan-induced hind paw edema after the successive intragastric administration，the protein transudation and PEG2
contents in the tissue were also measured． Analgesic experiments were assessed by hot-plate test． Coagulation time was
tested by the slice method． The results showed that water extract of B． balsamiferashowed the bestacitivity． The high dose
(92 mg /kg)of water extract can lighten swelling degree by 64． 04% and shorten the bleeding time． In total，different
components of B． balsamifera residue hadanalgesic，anti-inflammatory and hemostasis effects．
Key words:Blumea balsamifera (L．)DC．;residues;analgesia;anti-inflammatory;hemostasis
艾纳香是菊科植物艾纳香 Blumea balsamifera
(L．)DC．新鲜或干燥地上部分［1］。全草含挥发油，
主要成分为左旋龙脑［2］，现栽培于贵州、云南、广
西，是苗、壮族的重要药物，具有祛风除湿，温中止
泻，活血解毒、镇痛发汗、祛痰止咳、通经止血等功
效［3，4］。近年来国内外对艾纳香的报道大多围绕艾
纳香的温中止血功效探讨其妇科用药的作用机
制［5-7］，而艾纳香祛风除湿功效对治疗风湿关节炎方
面的影响却鲜有报道。但是民间验方中却屡次出现
艾纳香治疗风湿关节炎的案例，且效果确切。
艾纳香为制取艾片的重要原料，主产区通常采
其鲜叶和嫩枝用传统的土制水蒸汽蒸馏法［8］提取
“艾粉”(为艾纳香制取冰片的粗级产品)，再经提炼
后可制得精制“艾片(天然左旋冰片)”。产地加工
往往将提取“艾粉”后的叶子残渣丢弃，影响了其资
源的有效利用。中医传统用药是采用水煎液，用艾
纳香叶制取挥发油只是利用了其中一小部分有效成
分，大多有效成分仍存在于提取挥发油后残留的废
液和废渣中。本文对艾纳香叶制取挥发油后的废弃
物进行了相关药理活性研究，同时探讨了其不同极
性部位化学成分的镇痛抗炎止血活性差异，为进一
步阐明其治疗风湿关节炎的作用机制及其开发利用
提供了实验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
紫外可见分光光度计，Spectrum752 型;水浴锅，
HH-S型，巩义市英峪予华仪器厂;96 孔板酶标仪，
BIO-ＲAD680，美国 BIO-ＲAD 公司;电子分析天平，
SHIMADZU-AY220。
1． 2 试药
艾纳香干燥的叶，采自贵州罗甸。由南京中医
药大学陈建伟教授鉴定为菊科植物艾纳香 Blumea
balsamifera (L．)DC．叶。将其粉碎，过 40 目筛，收
集经挥发油提取器提取挥发油后的叶残渣，烘干备
用。收集提取挥发油后的废弃液(即艾纳香叶水提
液)，浓缩烘干成干浸膏备用。
芦丁对照品，纯度 99%，购于中国药品生物制
品检定所，批号 0080-9705;角叉菜胶，购自美国 Sig-
ma公司;考马斯亮蓝 G-250，上海博谷生物有限公
司;95%乙醇、50%乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、
甲醇、磷酸、氢氧化钾、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠
以上均为分析纯，广东华光科技股份有限公司。
1． 3 实验动物
清洁级昆明小鼠，雌雄各半，25 ± 1 g，扬州大学
比较医学中心，许可证号:SUXＲ(苏)2012-0004。
2 方法
2． 1 艾纳香叶残渣中总黄酮的含量测定［9］
2． 1． 1 盐酸-镁粉反应
取 1． 2 项下艾纳香叶残渣适量，用 95%乙醇冷
浸 30 min后超声提取 30 min，分取滤液。取滤液 1
mL，加镁粉 0． 04 g后滴加浓盐酸 0． 2 mL，溶液呈红
色，证明其中含有黄酮类化合物。
2． 1． 2 对照品溶液的制备
精密称取 120 ℃ 干燥至恒重的芦丁对照品
15. 17 mg，置 100 mL量瓶中，加 95%乙醇 70 mL，置
水浴上微热使溶解，放冷，加 95%乙醇至刻度，摇
匀，即得对照品溶液(每 1 mL溶液中含芦丁 0． 1517
mg)，备用。
2． 1． 3 供试品溶液的制备
精密称取 1． 2 项下艾纳香叶残渣粉末 2 g，至烧
瓶中，加 95%乙醇 100 mL，冷浸 30 min 后，在水浴
上加热回流 60 min，分取滤液，残渣加 95%乙醇 100
mL，继续水浴加热回流 30 min，过滤，残渣用 30 mL
95%乙醇洗涤，合并滤液，滤液置 250 mL量瓶中，放
冷，加 95%乙醇至刻度，摇匀，作供试品溶液，待用。
2． 1． 4 标准曲线的绘制
精密量取对照品溶液 0． 0、1． 0、2． 0、4． 0、6． 0、
8． 0 mL分别置于 25mL 量瓶中，各加水至 10mL，加
5%亚硝酸钠溶液 1 mL，摇匀，放置 6 min，加 10%硝
酸铝溶液 1 mL，摇匀，放置 6 min，加 4%氢氧化钠溶
液 10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置 15min，以相应
的试剂溶液为空白，在 500 nm 波长处测定吸收值。
以吸收值 A为纵坐标，以对照品浓度 C(mg /mL)为
横坐标，求得回归方程:A = 9． 3033C + 0． 0162(r2 =
0． 9921)，线性范围 0 ～ 0． 048544 mg /mL。
2． 1． 5 样品溶液的测定
取艾纳香叶供试品溶液，精密量取供试品溶液
2 mL，置 25 mL量瓶中，按标准曲线绘制项下操作，
分别加入 5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，4%
氢氧化钠溶液及水，经放置显色后，于 500 nm 波长
处测定吸收值，代入回归方程，以无水芦丁(C27 H30
O16)计算总黄酮的含量。
2． 1． 6 精密度实验
取某一浓度对照品溶液，按标准曲线绘制项下
操作，加入显色剂显色后，测定吸收值，连续 6 次，计
算得 ＲSD值为 0． 21% ，表明仪器精密度较好。
2． 1． 7 稳定性实验
取供试品溶液，按样品溶液测定项下操作，显色
后每隔 5 min测定其吸收度，共计 30 min，其测得值
基本不变，ＲSD值为 2． 30%，结果表明，供试品溶液
在显色后 30 min之内基本稳定。
2． 1． 8 重复性实验
按供试品溶液制备项下方法平行制备供试品溶
液 5 份，依法显色后测定吸收值，含量平均值为
3. 494%，ＲSD 为 1． 96%，表明重现性良好。
2． 1． 9 加样回收实验
精密称取 5 份已知含量艾纳香叶残渣粉末 1 g，
分别加入芦丁对照品，按供试品溶液制备方法制备
供试液，按样品溶液测定方法测定吸收值，测得平均
回收率为 99． 7%，ＲSD为 2． 3%。
2． 2 艾纳香叶残渣镇痛、抗炎、止血药理活性研究
2． 2． 1 供试液的制备
取 1． 2 项下艾纳香叶残渣，以 5 倍量 95%乙醇
浸泡 3 h，回流提取 2 h，重复 2 次，再以 50%乙醇回
流提取提取 1 次;合并提取液滤液，以旋转蒸发仪浓
缩，依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇萃取，浓
缩干燥后分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁
7801Vol. 27 夏 嬿等:艾纳香叶废弃物镇痛、抗炎、止血活性的初步研究
醇部位、甲醇部位，以及 1． 2 项下艾纳香叶干浸膏分
别以 0． 5% CMC-Na稀释成浓度适宜的混悬液备用。
2． 2． 2 小鼠足肿胀炎症模型试验［10］
取正常健康小鼠 128 只，雌雄各半，随机分为叶
残渣石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇部位，分别设高
剂量组、中剂量组、低剂量组以及阳性对照组和空白
对照组，共 16 组，每组 8 只。ig给药，连续 5 d，其中
空白对照组给予生理盐水，阳性对照组给予 10 mg /
kg地塞米松，艾纳香各部位高、中、低组给药剂量分
别为:石油醚部位 64、32、16 mg /kg，乙酸乙酯部位
21． 6、10． 8、5． 4 mg /kg，正丁醇部位 8． 0、4． 0、2． 0
mg /kg，甲醇部位 10． 4、5． 2、2． 6 mg /kg，水提液
184. 8、92． 4、45． 2 mg /kg 折合为生药给药量均为
0. 92、0． 46、0． 23 g /kg。末次给药后 1 h，在每鼠右
侧足趾皮下注射 1%角叉菜胶 0． 05 mL，4 h 后沿踝
关节剪下左右两足，称重，计算肿胀度(左右足重量
差值)和抑制率。
抑制率% =［1 －用药组肿胀度均值 /空白对照
组肿胀度均值］ × 100%
2． 2． 3 炎症组织中 PGE2 含量及蛋白质渗出量测
定［10］
取 2． 2． 2 项下试验小鼠右足，充分剪碎，加入生
理盐水 3 mL浸泡 12 h，倾倒出上清液，3000 转 /min
低速离心 10 min后吸取上清液 0． 1 mL，加 0． 5 mol /
L KOH-甲醇溶液 2 mL，在 50 ℃下异构化 20 min，用
甲醇稀释至 20 mL，采用分光光度法(λ = 278 nm)测
定，以 OD值推算每克炎性组织中 PGE2 含量。
2． 2． 4 小鼠热板镇痛试验［10］
取正常健康雌性小鼠，调节恒温水浴水温(55
± 0． 5)℃，预热 10 min后，将小鼠置热板上至出现
舔后足所需时间为该小鼠痛阈值。选用痛阈值 5 ～
30 s小鼠 128 只进行后续试验，时间过短、过长、不
舔足及跳跃小鼠弃用。给药剂量及组别同 2． 2． 2
项。连续灌胃给药 8 d。于初次给药及末次给药后
1． 5 h 分别测定小鼠痛阈值，与给空白组痛阈值相
比较，观察给药前后痛阈值的变化。
2． 2． 5 小鼠剪尾止血试验［10］
取正常健康小鼠 120 只，雌雄各半。随机分为
艾纳香叶残渣石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇部位
高剂量组、中剂量组、低剂量组和空白对照组，共 15
组，每组 8 只。给药剂量同 2． 2． 2 项。连续给药 5
d。末次给药后 1 h，将小鼠驱入特制的固定器中，然
后剪去鼠尾尖约 3 mm，待血液自行溢出，每隔 30 s
用滤纸轻轻吸去血滴。以人工形成创面到出血停止
所经时间作为止血时间。
2． 3 数据处理
实验数据均以 x ± s 表示，采用 SPSS 11． 0 统计
软件进行方差分析(One-way ANOVA)。
3 实验结果
3． 1 艾纳香叶残渣中总黄酮的含量
5 份艾纳香叶残渣粉末样品，按 2． 1 下的紫外
分光光度法测得其的总黄酮平均含量为 3． 494%，
ＲSD(%)为 1． 96。
3． 2 小鼠足肿胀炎症模型试验
实验结果表明，艾纳香叶水提液液和残渣各极
性部位成分均体现出不同强度的抗炎作用，其中以
甲醇部位作用最为明显，高剂量组效果接近阳性药
水平，低剂量组抑制率也有 43． 26%，且量效关系比
较明确;水提部位效果也很明显，高剂量组抑制率达
到 64． 03%;石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部
位也具有一定的抗炎作用，但抑制率均未超过 50%
(见表 1)。
表 1 艾纳香叶水提部位及残渣不同部位对角叉菜胶致小鼠足肿胀度影响(x ± s，n = 8)
Table 1 The effect of different components fromBlumea balsamifera residues to mice swelling(x ±，n = 8)
组别
Group
剂量
Dose(mg /kg)
足肿胀度
Tumefaction degree(mg)
抑制率
Inhibition ratio(%)
空白 Blank － 102． 1 ± 8． 6 －
阳性 Positive control 10 31． 2 ± 2． 1＊＊ 69． 5
石油醚 Petroleum ether 64 55． 55 ± 9． 2＊＊ 54． 61
32 75． 625 ± 4． 4＊＊ 25． 95
16 97． 75 ± 7． 3 4． 28
乙酸乙酯 Ethyl acetate 21． 6 56． 3 ± 10． 1＊＊ 44． 9
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10． 8 71． 2 ± 9． 7＊＊ 30． 26
5． 4 92． 75 ± 7． 8 9． 18
正丁醇 n-Butanol 8． 0 53． 0 ± 10． 5＊＊ 48． 087
4． 0 61． 9 ± 5． 7＊＊ 39． 43
2． 0 73． 2 ± 10． 7＊＊ 28． 3
甲醇 10． 4 33． 86 ± 4． 7＊＊ 66． 84
5． 2 50． 91 ± 5． 5＊＊ 50． 15
2． 6 58． 0 ± 7． 1＊＊ 43． 26
水 184． 8 36． 7 ± 6． 5＊＊ 64． 027
92． 4 60． 1 ± 8． 6＊＊ 41． 14
45． 2 83． 2 ± 8． 6＊＊ 18． 58
注:与空白组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01(下表皆同)。
Note:* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01vs blank control group(below every tables like this)．
3． 3 炎症组织中中 PGE2 含量及蛋白质渗出量测
定
PGE2 含量测定试验中，叶残渣的甲醇部位和水
提液对于抑制炎症组织中 PGE2 渗出效果均有显著
影响，其高剂量组均接近阳性药水平。乙酸乙酯及
正丁醇部位作用类似，但两者作用均弱于甲醇部位。
石油醚组均差于以上各组。
而蛋白质渗出量测定试验中，药渣的石油醚部
位效果则最好，艾纳香叶水提部位次之，其余各组效
果类似，均对炎症组织中蛋白质的渗出有一定影响，
但都不及阳性药组(见表 2)。
表 2 艾纳香叶水提部位及残渣不同部位对炎症组织中 PGE2 含量及蛋白质渗出量影响(x ± s，n = 8)
Table 2 The effect of different components from Blumea balsamifera residues to the PGE2contents and protein transudation in the in-
flammation tissue (x ± s，n = 8)
组别
Group
剂量
Dose(mg /kg)
PGE2 含量(OD，10-2)
PGE2 content
蛋白质渗出量(OD，10-2)
protein transudation
空白 － 5． 21 ± 0． 38 126． 3 ± 5． 7
阳性 10 1． 71 ± 0． 16＊＊ 65． 5 ± 3． 0＊＊
石油醚 64 3． 50 ± 0． 38＊＊ 85． 1 ± 3． 8＊＊
32 3． 90 ± 0． 22＊＊ 92． 8 ± 5． 9＊＊
16 4． 61 ± 0． 39* 98． 3 ± 5． 3＊＊
乙酸乙酯 21． 6 3． 08 ± 0． 21＊＊ 98． 1 ± 5． 8＊＊
10． 8 3． 65 ± 0． 21＊＊ 97． 3 ± 5． 6＊＊
5． 4 4． 04 ± 0． 23＊＊ 97． 5 ± 8． 9＊＊
正丁醇 8． 0 2． 96 ± 0． 32＊＊ 98． 2 ± 5． 2＊＊
4． 0 3． 19 ± 0． 37＊＊ 98． 7 ± 6． 4＊＊
2． 0 3． 61 ± 0． 24＊＊ 99． 2 ± 5． 7＊＊
甲醇 10． 4 1． 83 ± 0． 36＊＊ 98． 6 ± 8． 0＊＊
5． 2 2． 10 ± 0． 21＊＊ 98． 8 ± 7． 0＊＊
2． 6 2． 45 ± 0． 31＊＊ 99． 6 ± 5． 5＊＊
水 184． 8 1． 84 ± 0． 25＊＊ 90． 7 ± 3． 5＊＊
92． 4 1． 96 ± 0． 40＊＊ 96． 7 ± 1． 7＊＊
45． 2 2． 30 ± 0． 38＊＊ 104． 5 ± 2． 7＊＊
9801Vol. 27 夏 嬿等:艾纳香叶废弃物镇痛、抗炎、止血活性的初步研究
3． 4 小鼠热板镇痛试验
热板试验表明叶水提部位和残渣的乙酸乙酯部
位镇痛作用类似且效果最佳，但其低剂量组几乎没
有效果。甲醇组次之，但由于但剂量设置可能缺乏
合理性，痛阈提高率和剂量没有成一定的线性关系
(见表 3)。
表 3 艾纳香叶水提部位及残渣部位对小鼠痛阈值(热板试验)影响(x ± s，n = 8)
Table 3 The effect of different components from Blumea balsamifera residues to the pain threshold of the mice (x ± s，n = 8)
组别
Group
剂量
Dose(mg /kg)
给药后痛阈值
Pain threshold
after administration(s)
痛阈提高率
Pain threshold increase rate(%)
空白 － 17． 9 ± 2． 6 －
阳性 10 33． 1 ± 8． 4＊＊ 84． 96
石油醚 64 20． 5 ± 6． 2＊＊ 14． 53
32 18． 5 ± 2． 3 3． 35
16 15． 9 ± 12． 8* -11． 31
乙酸乙酯 21． 6 24． 4 ± 10． 2＊＊ 36． 47
10． 8 21． 2 ± 2． 5＊＊ 18． 72
5． 4 17． 6 ± 7． 0 -1． 84
正丁醇 8． 0 20． 8 ± 10． 3＊＊ 15． 92
4． 0 19． 8 ± 4． 3＊＊ 10． 33
2． 0 18． 8 ± 6． 1* 4． 75
甲醇 10． 4 23． 1 ± 4． 0＊＊ 29． 19
5． 2 21． 4 ± 4． 0＊＊ 19． 41
2． 6 22． 0 ± 4． 1＊＊ 22． 91
水 184． 8 24． 1 ± 9． 0＊＊ 34． 78
92． 4 20． 0 ± 3． 3＊＊ 11． 73
45． 2 17． 8 ± 8． 7 -0． 84
3． 5 小鼠剪尾止血试验
小鼠剪尾止血试验表明，艾纳香叶残渣的甲醇
部位止血效果最为明显，石油醚部位次之，其余各部
位止血效果类似(见表 4)。
表 4 艾纳香叶水提部位及残渣不同部位对小鼠止血时间影响(x ± s，n = 8)
Table 4 The effect of different components from Blumea balsamifera residues to the hemostasis time of the mice (x ± s，n = 8)
组别
Group
剂量
Dose(mg /kg)
止血时间
hemostasis time(s)
加快止血率
hemostatic rate(%)
空白 － 305． 4 ± 32． 0 －
石油醚 64 185． 25 ± 17． 4＊＊ 39． 3
32 218． 0 ± 22． 0＊＊ 28． 6
16 249． 0 ± 21． 0＊＊ 18． 5
乙酸乙酯 21． 6 223． 5 ± 6． 7＊＊ 26． 8
10． 8 232． 8 ± 15． 1＊＊ 23． 8
5． 4 284． 8 ± 34． 8 6． 8
正丁醇 8． 0 231． 1 ± 24． 9＊＊ 24． 3
4． 0 239． 8 ± 13． 5＊＊ 21． 5
2． 0 241． 6 ± 10． 2＊＊ 20． 9
甲醇 10． 4 104． 6 ± 15． 8＊＊ 65． 7
0901 天然产物研究与开发 Vol. 27
5． 2 128． 8 ± 7． 6＊＊ 57． 8
2． 6 158． 0 ± 27． 2＊＊ 48． 3
水 184． 8 214． 0 ± 12． 6＊＊ 29． 9
92． 4 256． 5 ± 12． 8＊＊ 16． 0
45． 2 249． 8 ± 19． 0＊＊ 18． 2
4 讨论与小结
由表 1 ～ 表 4 小鼠的足肿胀度、炎症组织中
PGE2 含量及蛋白质渗出量测定、热板镇痛及剪尾止
血试验结果可见，艾纳香叶的废弃物均具有一定的
镇痛、抗炎、止血功效。综合评价看来，艾纳香叶水
提部位在抗炎镇痛方面均体现出良好的效果，只有
在止血方面略逊一些。而残渣甲醇部位在抗炎和止
血功效上表现出较强的活性，而石油醚部位在抑制
炎症组织中蛋白质的渗出作用最强，乙酸乙酯部位
镇痛效果最强。
艾纳香广泛分布于贵州等省区，已有悠久的种
植历史，作为贵州苗药有较长的临床应用历史，主治
感冒、风湿关节炎、产后风痛、痛经;外用治跌打损
伤、疮疖痛肿、湿疹、皮炎。有研究表明，艾纳香中所
含的黄酮类化合物与止血镇痛、保肝抗癌等药理作
用相关［11、12］。本实验通过艾纳香叶废弃物中的总
黄酮含量测定以及镇痛抗炎止血等药理研究，表明
艾纳香叶经水蒸汽蒸馏法提取挥发油和“艾粉”后
的废弃物中非挥发性化学成分具有很高的再研究利
用价值。
综上研究，艾纳香叶提取挥发油之后的废弃物
在镇痛、抗炎、止血方面均具有一定的药理活性，具
有良好的利用价值和综合应用前景。其镇痛、抗炎、
止血机理有待进一步研究。
参考文献
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典)． Shanghai:Science and Technology Press，2005． 804．
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