全 文 ：栏目特约 博士达药业
杏香兔耳风质量标准研究
★　毛晓敏　沈静琳　(江西中医学院 2004级硕士研究生　南昌 330006)
★　陈玲　武丽平　(江西中医药高等专科学校　抚州 344000)
关键词:杏香兔耳风;质量标准;薄层鉴别;高效液相色谱法;绿原酸
中图分类号:R 284.1　　文献标识码:A
　　杏香兔耳风为菊科植物铁灯兔耳风 Ainsliaea
macrolinidioides Hay .或杏香兔耳风 Ainsliaea fra-
grans Champ.的干燥全草。主产婺源 、德兴 、景德
镇 、宜春等地 。为《江西省中药材标准》1996年版收
载 。杏香兔耳风含有皂苷 、生物碱 、酚类 、黄酮类和
香豆素类成分[ 1] 。现代研究表明杏香兔耳风含绿
原酸 、无羁萜酮 、羊齿烯醇 、三十二烷酸 、二十六醇 、β
谷甾醇;还含有黄酮类 、倍半萜内酯 、丁香烯和豆甾
醇等[ 2] 。绿原酸为杏香兔耳风的有效成分之一 ,是
质量控制的重要指标 。具有抑制透明质酸酶 、抗菌
抗病毒 、保肝利胆等多种生物活性 ,原质控标准中仅
有性状及两个理化鉴别 ,无定量指标 。为此 ,我们对
杏香兔耳风的质量标准进行研究 ,增加了该药的薄
层色谱鉴别 ,并采用 HPLC 法对药材中的绿原酸进
行了含量测定 ,经方法学考察 ,本法操作简便 ,专属
性和重现性良好 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　岛津 LC-10ATvp高效液相色谱仪(岛
津公司);N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信
息工程研究所);TY4010 超纯水机(南昌桃源水处
理设备厂);AT330柱温箱(天津奥特赛斯仪器有限
公司);超声波清洗器 SB2200(上海必能信超声有限
公司 , 功率 80 W , 频率 50 KHz);METTLER-
TOLEDD ABS-265-S 型电子天平(瑞士);939薄层
制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂);微量进样器
(上海安亭微量进样器厂);T U-1901型紫外可见分
光光度计(北京普析)。
1.2　样品与试剂　绿原酸对照品(含量测定用 ,
110753-200212),由中国药品生物制品检定所提供;
杏香兔耳风药材由江西京通美联药业有限公司提供
(产地广西);聚酰胺薄膜(薄层层析用)(浙江省台州
市路桥四甲生化塑料厂),硅胶 H(中国青岛海洋化
工集团公司),试剂除 HPLC 用甲醇为色谱纯外 ,其
他均为分析纯 。
2　薄层鉴别试验[ 3]
供试品溶液的制备:取本品粉未 5 g ,加 70%乙
醇 100 mL ,加热回流 1.5小时 ,放冷 ,滤过 ,滤液蒸
至无醇味 ,加水 20 mL ,用稀盐酸调节 pH 值至 2 ,滤
过 ,滤液用乙酸乙酯提取 2次 ,每次 20 mL ,合并提
取液 ,蒸干 ,残渣加甲醇 1 mL 使溶解 ,作为供试品
溶液 。
对照品溶液的制备:取绿原酸对照品加甲醇制
成每 1 mL含 1 mg 的溶液 ,作为对照品溶液。
吸取上述两种溶液各 2 μL ,分别点于同一聚酰
胺薄膜上 ,以异丙醇-甲酸(10:0.5)为展开剂 ,展开 ,
取出 , 晾干 ,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品
色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相同颜色
的荧光斑点(Rf值约为 0.4),本法可用于鉴别杏香
兔耳风药材。
3　绿原酸含量测定
3.1　色谱条件　色谱柱:DiamonsilTM C18 ODS 柱
(5μm ,200 mm×4.6 mm)。流动相:甲醇-水-冰醋
酸-三乙胺(18∶85∶1∶0.3)。检测波长:327 nm 。流
速:1.0 ml/min 。柱温:室温 。理论塔板数按绿原
酸峰计算不得低于 3 000 。
3.2　对照品 、供试品溶液的制备　绿原酸对照品溶
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JIANGXI JOURNAL OF TRADI TIONAL CHINESE MEDICIN E
　
○中药研究○
液的制备:精密称取绿原酸对照品适量 ,置棕色量瓶
中 ,加 50%甲醇制成每 1 mL 含 20 μg 的溶液 ,即
得 。
供试品溶液的制备:取本品粉未适量 ,精密称
定 ,置 100 mL 具塞锥形瓶中 ,精密加入加 50%甲醇
50 mL ,称定重量 ,超声提取 30分钟 ,放冷 ,称定重
量 ,加 50%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,弃去
初滤液 ,取续滤液作为供试品溶液。
制得的绿原酸对照品溶液和供试品溶液均在
10 ℃以下保存 。
3.3　检测波长的确定　取绿原酸对照品溶液 ,以
50%甲醇为空白 ,用 TU-1901 紫外分光光度计于
200 ～ 400 nm 范围内 ,进行光谱扫描 ,由光谱扫描图
可见 ,绿原酸在 327 nm 波长处有吸收峰 ,与参考文
献一致[ 4] 。另取绿原酸对照品溶液 、供试品溶液各
20μL ,进行 HPLC测定 ,结果供试品与对照品保留
时间一致 ,并且供试品中绿原酸与其它组分能良好
分离 ,分离度>1.5 ,故确定检测波长为 327 nm 。
3.4　绿原酸线性关系考察　分别精密量取绿原酸
对照品溶液(50.60 μg/mL)1 mL 、2 mL 、4 mL 、6
mL 、8 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,加 50%甲醇稀释至刻
度 。分别精密吸取 20 μL ,依次进样 ,测定峰面积 ,
以浓度(μg/mL)对峰面积进行线性回归 ,得回归方
程:y =26 539 x -110 27 , r =0.999 6。表明绿原
酸在 5.06 ～ 50.60 μg/mL 范围内有良好的线性关
系 。
3.5　稳定性试验　精密吸取供试品溶液 20μL ,分
别于 0小时 、2 小时 、4小时 、8小时和 24小时进样
测定 ,结果供试品溶液的稳定性良好 ,在 24 小时以
内测定结果稳定 。
3.6　重复性试验　对同一批样品 ,分别取 6份 ,照
上述方法试验 ,测定样品中绿原酸含量 ,结果样品中
绿原酸含量的 RSD为 1.63%,表明本法重现性良
好 。
3.7　回收率试验　采用加样回收法 ,精密称取已知
含量的同一杏香兔耳风粉未 6份(绿原酸含量 0.86
mg/g),分别精密加入绿原酸对照品 50%甲醇溶液
(87.6 μg/mL)适量 ,按上述方法进行测定 ,结果表
明 ,本法回收率良好 ,见表 1。
表 1　回收率试验结果
实验号 样品中绿原酸量(mg) 加入绿原酸量(mg) 测得绿原酸量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 0.528 2 0.350 4 0.867 1 96.71
2 0.543 6 0.350 4 0.886 7 97.90
3 0.537 8 0.438 0 0.970 7 98.84 98.03 1.03
4 0.518 0 0.438 0 0.953 2 99.36
5 0.505 2 0.525 6 1.021 4 98.21
6 0.484 4 0.525 6 0.994 9 97.13
3.8　样品的含量测定　分别精密称取不同批次的
杏香兔耳风药材 ,照上述方法测定 ,杏香兔耳风药材
中绿原酸的含量分别为(%):0.086 、0.022 、0.043 、
0.064 、0.135。
4　讨论
薄层鉴别中 ,供试品溶液制备采用调节 pH 值
至 2 ,过滤 ,滤液再用乙酸乙酯提取的方法 ,可以减
少背景干扰。曾尝试中国药典 2000年版一部金银
花项下绿原酸鉴别的薄层板与展开剂 ,即薄层板为
以 CMC-Na为黏合剂的硅胶 H板 ,展开剂为醋酸丁
酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液 ,但背景干扰
大 ,斑点不明显 。后参考有关文献采用聚酰胺薄膜 ,
展开剂采用异丙醇-甲酸(10∶0.5),结果 Rf值合适 ,
斑点清晰 。
含量测定中 ,曾对样品超声提取时间进行考察 ,
结果表明 ,超声 30分钟即可以提取完全 。曾采用乙
腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)、甲醇-2%冰醋酸(13∶
87)流动相 ,经实验 ,以本文所述流动相分离效果较
好。
本试验对杏香兔耳风进行了薄层色谱鉴别 ,并
采用高效液相色谱法测定药材中绿原酸的含量 ,所
用方法操作简便 ,专属性和重现性良好 ,可用于控制
杏香兔耳风药材的质量 ,并为杏香兔耳风风制剂的
质量控制提供了参考。
参考文献
[ 1] 江西省卫生厅编.江西省中药材标准 1996年版[ S] .江西科学技
术出版社 , 1997.122
[ 2] 宋友昕,吕武清.高效液相色谱法测定杏香兔耳风药材中绿原酸
含量[ J] .江西中医学院学报 , 2005 , 17(2):36
[ 3] 李宗 ,黄振国 ,褚克丹.聚酰胺薄膜分离并测定金银花及其制剂中
绿原酸的含量[ J] .福建中医药 , 1997 , 28(3):16
[ 4] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典 2000 年版一部[ S] .化
学工业出版社 , 2000.177
(收稿日期:2006-04-12)
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　江西中医药 2007 年 7 月第 7 期总 38 卷第 295 期
　
○中药研究○