全 文 ：藤梨根对胃癌细胞抑制作用的实验研究
李 昊 杨慧萍 杨 凡 鲁小青 张 虹 陈百先
(同济大学附属同济医院 上海 200065)
【摘 要】 目的 研究藤梨根对胃癌细胞的抑制作用。方法 采用MMT法观察藤梨根不同浓度和不同
作用时间对胃癌细胞的抑制作用。结果 藤梨根原液药物浓度(5.2 mg ml)经稀释4 倍(1.3 mg ml)后 , 抑瘤率
最强(88.19%), 随着药物浓度的降低 , 抑瘤率随之下降;藤梨根对胃癌细胞作用 24 h 抑制作用最强
(87.61%), 48 h回落 , 72 h再次上升。结论 藤梨根对胃癌细胞有明显杀伤作用。
【关键词】 藤梨根;胃肿瘤;抗肿瘤药 ,植物;药理学
【中图分类号】 R 735.2;R 979.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002-2619(2004)04-314-02
Experimental study of inhibitory effect of Tengligen on gastric cancer cell.LI Hao , YANGHuiping , YANG Fan , et
al.Tong Ji Hospital of Tong J i University , Shanghai 200065
【Abstract】 Objective To explore the inhibitory effect of Tengligen on gastric cancer cell.Methods Concentra-
tion-effect and time-effect of Tengligen were observed using MMT method.Results Tumor-inhibition rate of 1.3mg ml Ten-
gligen was the strongest , attained 88.19%.With concentration of Tengligen decrease , tumor-inhibition rate was lower.In-
hibitory effect of Tengligen was the strongest after 24 hrs(87.61%).Conclusion Tengligen has obviously inhibitory effect
on gastric tumor cell.
【Key word】 Tengligen;Gastric tumor;Cell;Therapy of TCM
＊ 上海市卫生局示范中医科建设项目基金资助(编号:WSJ
0204)
作者简介:李昊(1965-),男 ,副主任医师。主要从事中医药治疗
脾胃病 、白细胞减少症的临床与基础研究。
藤梨根为猕猴桃科猕猴属植物硬毛中华猕猴桃的
根 ,其性味苦 、寒 , 具有清热解毒活血的功效 , 临床上常用
于防治消化道肿瘤 , 有一定的疗效。我们用藤梨根乙酸
乙酯提取物 ,采用 MMT法研究其对人胃低分化腺癌细胞
的抑制作用 ,现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料来源 实验细胞株:人胃低分化腺癌 BGC-823
细胞株引自中国科学研究院上海细胞生物研究所细胞库。
1.2 药物制备 将藤梨根(购自复星药业)500 g 粉碎成
20 目粗粉;加8 倍水煮 2次 , 每次 1 h;过滤浓缩;加入乙酸
乙酯溶媒萃取 3 次(每次 300 ml);回收溶媒 , 得浓缩物加
蒸馏水热溶;过滤;滤液用紫外分光光度计在 A 280 测定
浓度为 5.2 mg ml(原液)。用不含血清的 1640 培养液将
原液分别按 2、4、10、20、50、100、200 、500 倍稀释为另 8 种
浓度:2.6、1.3、0.52 、0.26 、0.104 、0.052 、0.026 、0.0104 mg
ml供实验用。
1.3 主要试剂和仪器 RPMI-1640 培养基(GIBCO 公司
产品);MTT(sigma公司产品);WJ-12C 型 CO2 细胞培养
箱NAPCO MODEL 5410;Multiscan MK-3 酶联免疫检测仪
Thermo Labsystems。
1.4 方法与步骤 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色
法[1 ,2] :在含 10%胎牛血清的 1640 培养液中培养细胞 , 在
细胞达到指数增长期时用于实验。台盼蓝染色 , 细胞活
力>90%, 记数细胞浓度为 1×106 L , 接种于无菌的 96 孔
培养板中。每孔加入肿瘤细胞悬液 100 μl ,再分别加入各
100μl的 9 种不同浓度藤梨根提取液 , 设空白对照孔加
1640培养液 , 实验对照孔加肿瘤细胞 , 每组均为 3 复孔。
混匀后置于 37℃、5%CO2 培养箱中继续培养 24 h。于结
束 4 h 每孔吸去 20 μl上清液 ,然后每孔加入 20 μl浓度为
5 mg ml MTT ,继续培养 4 h ,吸去全部上清液 ,每孔加入二
甲基亚砜 100μl溶解液 ,微型混合器振荡 10～ 15 min ,充分
溶解 ,放入 CO2 培养箱中过夜后 , 用酶联免疫检测仪于
570 nm波长处测定光密度 OD 值 , 按抑制率计算公式计算
藤梨根抑制胃癌细胞的百分率 , 确定最佳药物浓度 , 并用
该浓度药物与细胞作用 , 通过同上的酶联免疫检测法来
观察藤梨根不同时间对胃癌细胞作用和生长情况 , 确定
最佳药物作用时间 , 选取的不同药物作用时间分别为:4、
8、16 、24、32、48 、72 h。
1.5 肿瘤细胞抑瘤率计算公式 抑瘤率=1-(OD实验组 -
OD空白组) (OD实验对照组-OD空白组)×100%
2 结 果
2.1 不同浓度藤梨根抑制细胞作用比较 原液药物浓
度(5.2 mg ml)经稀释4 倍(1.3 mg ml)后 ,平均吸光度值最
低 , 抑瘤率最高(88.19%),之后随着药物浓度的降低 , 抑
瘤率随之下降。结果见表 1。
·314· 河北中医 2004 年 4月第 26 卷第 4期 Hebei J TCM , April 2004 , Vol 26 , No.4
表 1 不同浓度藤梨根对细胞作用 72 h
的平均吸光度值与抑制率
空白 对照 药物浓度(mg ml)
5.2 2.6 1.3 0.52 0.26 0.104 0.052 0.026 0.0104
OD 0.11 1.27 0.28 0.18 0.15 0.16 0.81 0.94 0.99 1.05 1.24
抑制率% 77.95 85.83 88.19 87.4 36.22 25.98 22.05 17.32 2.36
2.2 藤梨根不同作用时间对细胞抑瘤作用比较 藤梨根
对细胞作用 4 h 平均吸光度值最高(0.79),抑瘤作用最低
(30.09%);作用 24 h 平均吸光度值最低(0.17),抑瘤作用
最强(87.61%);48 h回落 , 72 h 再次上升。结果见表 2、图
1 、图 2。
表 2 藤梨根不同时间对细胞作用的平均吸光度值与抑制率
空白 对照 作用时 间(h)
4 8 16 24 32 48 72
OD 0.05 1.13 0.79 0.67 0.17 0.14 0.24 0.31 0.21
抑制率% 30.09 40.71 84.96 87.61 78.76 72.57 81.42
图 1 藤梨根的抑瘤率时间曲线图
图 2 藤梨根作用 72 h 内细胞生长曲线
3 讨 论
中医药防治肿瘤的基本原则是扶正祛邪 , 所采用的
治法不离补益 、清热 、活血 、化痰等 , 而藤梨根具有清热 、
活血 、利水 、消肿作用[ 3] ,切合中医防治肿瘤的原则。临床
上应用发现:其与健脾养阴中药结合 , 对属于癌前病变的
萎缩性胃炎伴肠化生 , 有较好疗效[4] 。我国民间也常用藤
梨根来治疗癌症。藤梨根防治肿瘤作用的现代研究资料
显示:藤梨根提取物蒽醌类化合物对白血病细胞的抑制
率为 54.24%,对结肠低分化癌的抑制率为 60.1%, 有明
显的杀伤作用[ 5] 。也有人认为其机制与抑制肿瘤转移 、促
进淋巴细胞转化 、增强细胞免疫等有一定的作用[6] 。
本研究采用 MMT 法对不同浓度藤梨根作用下细胞
72 h的生长情况进行了观察 ,结果表明藤梨根对细胞生长
的抑制成一定浓度的依赖性:当药物浓度较低时(原液稀
释 20 倍 , 0.26 mg ml), 细胞吸光度值无明显变化。最佳药
物浓度在 1.3 mg ml(原液稀释 4 倍), 对胃低分化腺癌有
明显的杀伤作用 , 其抑瘤率达到 88.19%。本研究还显示
藤梨根对细胞生长的抑制成一定时间的依赖性:藤梨根
对细胞作用 16 ～ 24 h 抑制作用最强 , 其后至 48 h 抑瘤率
下降 , 72 h回升至 81.42%。
藤梨根对胃癌细胞有较强的抑制作用 , 从细胞 72 h
的生长曲线来看 , 16 ～ 24 h 内吸光度值急剧下降 , 说明细
胞大量死亡 ,提示藤梨根对胃癌细胞有直接杀伤作用 , 然
而 24 h 后 , 吸光度值又见上升 ,说明还有部分细胞在分裂
增殖 , 但48 h后 , 吸光度值又见下降 ,细胞出现死亡 , 提示
藤梨根对胃癌细胞的抑制作用 , 除了直接杀伤细胞外 , 还
有可能随时间的延续诱导细胞凋亡。 因此 , 藤梨根对胃
癌细胞的抑制作用 , 可能是直接杀伤和诱导细胞凋亡的
双重作用 , 有待实验进一步证实。
参考文献
1 Mosmann T.Rapid colorimetrc assay for cellular growth and survival:
Application to prolif eration and cytotoxicity assays.J Immunol Meth-
ods , 1983 , 65(1-2):55-63
2 Sargent JM , Taylor CG.Appraisal of the MMT assay as a rapid test of
chemosensitivity in acute myeloid leukaemia.Br J Cancer , 1989 , 60
(12):206-210
3 江苏新医学院编.中药大辞典.第 9版.上海:上海科学技术
出版社 , 1996.2 211
4 李昊.养胃活血饮治疗慢性萎缩性胃炎的临床观察.上海中
医药杂志 , 1999 ,(11):22
5 邹益友 ,谭桂山 , 谢兆霞.猕猴桃根抑制肿瘤细胞的实验研
究.湖南中医药导报 , 1999 , 5(4):37-38
6 阙克清.藤梨根抗肿瘤作用及其对免疫功能的影响.湖南医
学 , 1985 ,(5):21-23 , 46
(收稿日期:2003-10-13)
本刊网址 http: hbzy.chinajournal.net.cn
·315·河北中医 2004年 4 月第 26卷第 4 期 Hebei J TCM , April 2004 , Vol 26 , No.4