全 文 ：　○中药研究○
杏香兔耳风提取物质量标准研究＊
★　杜艳龙＊＊　魏惠珍　饶毅＊＊＊　王跃生　罗晓健　冯育林　(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心
　南昌 330006)
摘要:目的:建立杏香兔耳风提取物的质量控制方法。方法:通过薄层色谱(TLC)法和高效液相色谱(HPLC)法对杏香兔耳风
提取物进行质量控制。结果:杏香兔耳风提取物中 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸线性范围为 0.083 ～ 0.830 μg, r=0.999 9,表明线
性关系良好 , 平均加样回收率为 98.55%, RSD为 0.85%(n=6)。结论:TLC和 HPLC两法合用 ,可定性 、定量控制杏香兔耳风
提取物中 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸的含量 ,准确度高 , 重现性好 ,操作便捷。
关键词:杏香兔耳风提取物;质量标准;3, 5-二咖啡酰基奎宁酸;TLC;HPLC
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A
StudiesonQualityStandardofAinsliaeafragransChamp.extrac
DUYan-long, WEIHui-zhen, RAOYi, WANGYue-sheng, LUOXiao-jian, FENGYu-lin
脉粥样硬化的防治机制可能是多方面的[ 10] 。本研
究结果也发现银杏叶提取物 EGB761可以有效减少
高胆固醇血症引起的动脉粥样硬化斑块 ,与模型组
相比斑块明显减少 ,光镜下泡沫细胞也明显少于模
型组 。说明银杏叶提取物 EGB761可有效改善高胆
固醇血症引起的动脉粥样硬化 ,可见其在防治动脉
粥样硬化方面值得深入研究和推广。
参考文献
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(收稿日期:2009-11-13)
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江西中医学院学报 2 0 0 9年 1 2月第 2 1卷第 6期
JOURNALOFJIANGXIUNIVERSITYOFTCM2009 Vol.21 No.6
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项目基金:“重大新药创制 ”科技重大专项(2009ZX09103 -352);江西省科技支撑计划项目(赣科发计字 [ 2007] 189号);国家 “十一五 ”
科技支撑计划课题(2006BAI06A01-01)
作者简介:杜艳龙 ,助理工程师 ,主要从事中药质量控制研究 , Tel:13576940063, E-mail:dyl0730@hotmail.com
通讯作者:饶毅 , Tel:(0791)7119609, E-mail:raoyi99@ 126.com
　○中药研究○
TheNationalPharmaceuticalEngineeringCenter(NPEC)forSolidPreparationinChineseHerbalMedicine, Nanchang330006
Abstract:Objective:ToestablishthemethodsforthedeterminationofAinsliaeafragransChamp.extrac.Methods:TLCandHPLCwere
usedtocontrolthequalityofAinsliaeafragransChamp.extract.Results:Thecalibrationcurveswerelinearwithintherangeof0.083 ～
0.830 μg(r=0.999 9)for3, 5-dicafeoylquinicacidinAinsliaeafragransChamp.extract.Theaveragerecoveryratewas98.55%, RSD
为 0.85%(n=6).Conclusion:ThemethodsofunitingTLCandHPLCaresimple, accurateandrepeatableforcontrollingthe3, 5-dicaf-
feoylquinicacidcontentinAinsliaeafragransChamp.extractqualitativelyandquantitatively.
Keywords:AinsliaeafragransChamp.extract;Qualitystandard;3, 5-dicafeoylquinicacid;TLC;HPLC
　　中药提取物是一类新兴的天然药物产品 ,被广
泛用于医疗保健。中药提取物的质量规范对中药产
业的发展至关重要 ,但是目前绝大多数的中药提取
物没有国家标准或行业标准 [ 1] 。杏香兔耳风为菊
科 兔 耳 风 属 植 物 杏 香 兔 耳 风 Ainsliaea
fragransChamp.的干燥全草 ,具有清热解毒 、舒筋活
血 、发表祛风等功效 ,主治妇女崩漏 ,痈疽肿毒 ,毒蛇
咬伤 [ 2] 。临床上用于治疗湿热下注之带下病 、慢性
宫颈炎等诸多病症 [ 3] 。杏香兔耳风提取物是通过
一系列分离纯化工艺得到杏香兔耳风有效成分的精
制品 ,富集了大量的酚酸类成分 ,尤其是 3, 5-二咖
啡酰基等二咖啡酰基奎宁酸类化合物含量较高 ,且
具有较强的生物活性 [ 4] 。为全面控制杏香兔耳风
提取物的质量 ,本研究通过 TLC和 HPLC建立了杏
香兔耳风提取物的质量控制方法 ,为杏香兔耳风提
取物的质量评价提供科学依据 ,也为研究杏香兔耳
风药材的鉴别和含量测定方法提供了一定的参考。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Waters2695型高效液相色谱仪 , Waters
2996型二极管阵列检测器 ,中文版 Empower色谱工
作站;AB104-N型电子分析天平(梅特勒-托利多(上
海)有限公司);AUW-220D型电子分析天平(日本
岛津公司);KQ-250DB型超声清洗仪(昆山市超声
仪器有限公司)。
1.2　试药 　杏香兔耳风提取物 (自制 , 批号为
20080908、20081006、20081119)。对照品 3, 5-二咖
啡酰基奎宁酸 (购自中山康之源生物科技有限公
司 ,纯度≥98%)。色谱纯乙腈(山东禹王实业有限
公司化工分公司),其他试剂均为分析纯 ,水为超纯
水。
2　方法与结果
2.1　薄层定性鉴别
取杏香兔耳风提取物 30 mg置于 25 ml量瓶
中 ,加 50%乙醇溶解 ,并稀释至 25 ml,作为供试品
溶液 。另取 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸对照品适量 ,加
50%乙醇溶解配成每毫升含 40 μg3, 5-二咖啡酰基
奎宁酸的溶液 ,作为对照品溶液。照薄层色谱法
(中国药典 2005年版一部附录 Ⅵ B)试验 ,吸取上述
样品溶液 10 μl,对照品溶液 5 μl,分别点于同一块
硅胶 G薄层板上 ,以乙酸丁酯-甲酸 -水(7∶2.5∶2.5)
的上层液为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 5%Fecl3
试液 , 105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中 ,
在与对照品色谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点 。
2.2　含量测定
2.2.1　色谱条件与专属性试验　色谱柱为 Waters
柱 Symmetry· C18(4.6 mm×150mm, 5μm);流动相
为乙腈(A)-0.2%磷酸梯度洗脱(B), (0 min:15∶
85, 10 min:18∶82, 25min:18∶82, 26min:20∶80);流
速为 1 ml/min;检测波长为 328 nm;色谱柱温度为
30℃。
在上述色谱条件下 ,分别精密吸取对照品溶液 、
杏香兔耳风药材供试品溶液 10 μl,注入色谱仪 ,记
录色谱图 。结果见图 1,结果表明 3, 5-二咖啡酰基
奎宁酸谱峰与周围的杂质峰分离良好。
图 1　对照品及样品 HPLC图
A.对照品;B.样品
2.2.2　对照品溶液的制备　精密称取 3 , 5-二咖啡
酰基奎宁酸对照品适量 ,加 50%乙醇制成每 lml含
3, 5-二咖啡酰基奎宁酸 0.042 mg的混合混合对照
品溶液 ,即得。
2.2.3　供试品溶液的制备　称取样品约 30 mg,精
密称定 ,置 25 ml容量瓶中 ,加 50%乙醇加适量 ,超
声 30min溶解后 ,放冷 ,定容 ,摇匀 ,过滤 ,并定容至
刻度 ,用 1 ml的移液管移取 1 ml到 10 ml容量瓶
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　江西中医学院学报　2009年第 21卷第 6期
　○中药研究○
中 ,加 50%乙醇定容至刻度 ,即得。
2.2.4　标准曲线的考察　取 3 , 5-二咖啡酰基奎宁
酸浓度为 0.0416 mg/ml的对照品溶液分别进样 2,
5, 8 , 10, 15 , 20 μl。按上述的色谱条件进行测定 ,以
3, 5-二咖啡酰基奎宁酸进样量(μg)为横坐标 ,峰面
积值为纵坐标 ,求得 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸回归方
程:Y=4×106X-2 307(r=0.999 9)。结果表明:
3, 5-二咖啡酰基奎宁酸进样量分别在 0.083 ～ 0.830
μg范围内与峰面积值呈良好线性关系。
2.2.5　精密度试验　取同一供试品溶液 ,连续进样
6针 ,测得 3 , 5-二咖啡酰基奎宁酸峰面积值的 RSD
为 1.31 %(n=6),实验结果表明 ,仪器的精密度良
好。
2.2.6　重复性试验　取同一批号(20080908)样
品 ,共 6份 ,研细 ,取约 15 mg,精密称定 ,按 “ 2.2.3”
项下方法平行制备供试品溶液 ,进样 ,记录色谱图。
结果测得 , 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸平均含量为 335.
983 mg/g, RSD为 1.71 %(n=6),实验结果表明 ,
该方法重复性良好 。
2.2.7　稳定性试验　取同一批号(20080908)供试
品溶液 ,分别在 0, 2, 4, 6, 8, 12, 18h进样 ,记录色谱
峰 ,测得 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸峰面积值的 RSD分
别为 1.51%,实验结果表明 ,样品溶液稳定性良好 。
2.2.8　加样回收率试验 　取已知含量的样品 15
mg(6份),精密称定 ,按 100%的比例各精密加入对
照品一定量 ,按照 “ 2.2.3”项下方法分别制得供试
品溶夜 ,进样 ,记录色谱图 ,并计算回收率。结果 3,
5-二咖啡酰基奎宁酸平均回收率为 98.55%, RSD为
0.85%(n=6)。结果见表 1 。
表 1　3, 5-二咖啡酰基奎宁酸加样回收试验结果
序号 样品取样量/mg 样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 15.03 5.050 5.040 10.083 99.86
2 15.25 5.124 5.040 10.062 97.98
3 15.33 5.151 5.040 10.079 97.78 98.55 0.85
4 15.04 5.053 5.040 10.054 99.23
5 15.07 5.063 5.040 10.031 98.57
6 15.14 5.087 5.040 10.021 97.9
2.2.9　样品含量测定 　取三批 (20080908、
20081006、20081119)杏香兔耳风提取物 ,每批提取
三份样品 ,按照 “ 2.2.3”项下方法分别制得供试品
溶夜 ,进样 ,记录色谱图 ,测定样品中 3, 5-二咖啡酰
基奎宁酸的含量 ,结果见表 2。
表 2　3批样品含量测定结果
批号 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸 /mg·g-1
20080908 335.983
20081006 329.073
20081119 332.076
3　讨论
在试验过程中 ,本研究曾使用过乙酸丁酯-甲
酸 -水(7∶2.5∶2.5)的上层液 、氯仿-丙酮-甲酸-水(6
∶5∶0.5∶0.5)、乙酸乙酯 -丁酮 -醋酸 -水(10∶1∶1.5∶
0.5的上层液为展开剂 ,结果表明以乙酸丁酯 -甲酸 -
水(7∶2.5∶2.5)的上层液为展开剂 ,一次展开就可
以使 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸斑点分离较好 ,且斑点
显色清晰。
由于 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸分子结构中存在
酚羟基 ,可与 FeCl3溶液发生显色 , 故本研究选择
5%FeCl3试液作为 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸薄层鉴别
的显色剂。
本次试验对 3, 5-二咖啡酰基奎宁酸进行紫外
全波长扫描 ,在 328 nm处有最大吸收 ,样品主峰分
离度较好 ,且阴性样品无干扰 ,故选择 328 nm作为
检测波长。
杏香兔耳风药材目前的标准只有简单的理化鉴
别 ,还未建立薄层鉴别和有效成分的含量测定标准 。
3, 5-二咖啡酰基奎宁酸为杏香兔耳风中主要的药效
成分 ,故本研究所建立的杏香兔耳风提取植物的质
量标准方法可为杏香兔耳风药材质量标准的完善提
供科学依据 。
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(收稿日期:2009-09-09)
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杜艳龙等:杏香兔耳风提取物质量标准研究