全 文 ： ·284· Chin JMAP, 2011 April, Vol.28 No.4 中国现代应用药学 2011 年 4 月第 28 卷第 4 期
重唇石斛、紫皮石斛、铜皮石斛的 DNA 水平差异
进行了比较分析。结果表明“仙斛 1 号”与“天
斛 1 号”等 5 个铁皮石斛品种(系)带型明显差异，
与马鞭石斛、金釵石斛、重唇石斛、紫皮石斛、
铜皮石斛的差异则更大，见图 3。

图 3 药用石斛属植物 ISSR分子标记UBC825的图谱分析
M−DNA 标记；1−铁皮石斛Ⅰ；2−铁皮石斛Ⅱ；3−铁皮石斛Ⅲ；4−铁
皮石斛Ⅳ(“仙斛 1 号”)；5−铁皮石斛Ⅴ(“天斛 1 号”)；6−铁皮石
斛Ⅵ；7−铁皮石斛Ⅶ(硬脚铁皮)；8−马鞭石斛；9−金钗石斛；10−重
唇石斛；11−紫皮石斛(齿瓣石斛)；12−铜皮石斛；13−阴性对照(H2O
代替 DNA 模板)。箭头 1−2 015 bp；箭头 2−1 842 bp；箭头 3−1 377 bp；
箭头 4−708 bp；箭头 5−597 bp
Fig 3 Analysis of ISSR marker UBC825 among medicinal
Dendrobium species
M−DNA marker; 1−Genotype Ⅰ of D. officinale; 2−Genotype Ⅱ of D.
officinale; 3−Genotype Ⅲ of D. officinale; 4−Genotype Ⅳ of D.
officinale (“Xianhu 1”); 5−Genotype Ⅴ of D. officinale (“Tianhu 1”);
6−Genotype Ⅵ of D. officinale; 7−Genotype Ⅶ of D. officinale
(Yingjiao Tiepi); 8−D. fimbriatum; 9−D. nobile; 10−D. hercoglossum;
11−D. devonianum; 12−D. crispulum; 13−negative control. Arrow
1−2 015 bp; arrow 2−1 842 bp; arrow 3−1 377 bp; arrow 4−708 bp; arrow
5−597 bp
3 讨论
显微结构鉴定是生药学鉴定的常用手段，本
研究的显微结构鉴定与文献[3]的描述一致，可以认
为“仙斛 1 号”具有铁皮石斛典型结构特征。
“仙斛 1 号”是继“天斛 1 号”后第 2 个通
过浙江省认定的铁皮石斛新品种，两者均从野生
铁皮石斛资源中驯化而来，但因为两个品种公开
的产量、干品率、干品多糖含量等数据来源于各
自不同的采收时期，因此两者在农艺性状上的差
异有待于进一步比较，分子标记分析表明两者在
DNA 水平上存在明显差异。
铁皮石斛的品质评价还没有一致的标准，其
药效功能成分依然有待于现代科学实验的认证，
目前常用石斛多糖含量作为衡量的主要指标。所
以，在本研究中，笔者只对粗多糖的含量进行测
定。希望随着研究的深入，能够对其功能成分有
更清楚的了解，更科学地评价药材的质量。
综上所述，“仙斛 1 号”是一个来源于野生铁
皮石斛资源、有着优良综合性状的铁皮石斛新品
种，它的选育成功对铁皮石斛资源的保护及相关
制药产业的健康发展有重要的积极意义。
REFERENCES
[1] BAI Y, BAO Y H, JIN J X, et al. Studies on the germplasm of
medicinal Dendrobium genus in China [J]. Chin Tradit Herb
Drugs(中草药), 2006, 37(9): 4-5.
[2] XIE X B, QIU Y Y, QI X J, et al. Analysis of genetic
relationship between male and female plants in Myrica rubra
by RAPD and ISSR [J]. J Fruit Sci(果树学报), 2008, 25(2):
198-202.
[3] CHEN X M, XIAO S Y, GUO S X. Comparison of chemical
compositions between Dendrobium candidum and
Dendrobium nobile [J]. Acta Acad Med Sin (中国医学科学院
学报), 2006, 28(4): 524-529.
收稿日期：2010-04-19



五指毛桃水提液对 60Coγ 射线致小鼠骨髓细胞 DNA 损伤的防护作用

王晓平 1a，段丽菊 2，黄翔 1b，岑业文 1a，李桂芬 1a(1.广西玉林师范学院，a.化学与生物系；b.体育系，广西 玉林 537000；
2.郑州大学公共卫生学院, 郑州 450001)

摘要：目的 探讨五指毛桃水提液对 60Coγ 射线所致的小鼠骨髓细胞 DNA 损伤的防护作用。方法 40 只 SPF 级♂小鼠
随机分为 5组：阴性对照组给予生理盐水，辐射模型组单纯接受照射，3个五指毛桃剂量组分别给予相当于生药 5，10，
20 g·kg−1·d−1五指毛桃水提液，连续灌胃 7 d。除阴性对照组外，所有小鼠接受全身一次性 60Coγ射线照射，照射剂量为 6
Gy。照射 24 h后处死小鼠，取股骨，制作骨髓单细胞悬液，用单细胞凝胶电泳实验检测小鼠骨髓细胞 DNA损伤情况。
结果 辐射模型组小鼠骨髓细胞 DNA的尾部 DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)高于阴性对照组(P<0.01)，五
基金项目：广西教育厅科研项目(200809MS124；200911MS195)
作者简介：王晓平，女，副教授 Tel: (0775)2622315 E-mail: sywxp@163.com
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2011.04.003
中国现代应用药学 2011 年 4 月第 28 卷第 4 期 Chin JMAP, 2011 April, Vol.28 No.4 ·285·
指毛桃各剂量组的 Tail DNA%和 Tail Moment均显著低于辐射模型组(P<0.01)，且随着给药剂量的增加，Tail DNA%和 Tail
Moment降低。结论 五指毛桃水提液对 60Coγ射线损伤小鼠骨髓细胞 DNA具有一定的防护作用。
关键词：五指毛桃；60Coγ射线；骨髓细胞；DNA损伤；单细胞凝胶电泳
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2011)04-0284-04

Protective Role of Aqueous Extract from Fici Hirtae Radix for DNA Damage of Bone Marrow Cells by
60Coγ-Ray in Mice

WANG Xiaoping1a, DUAN Liju2, HUANG Xiang1b, CEN Yewen1a, LI Guifen1a(1.Yulin Normal College,
a.Department of Chemical and Biology; b.Department of Physical Education, Yulin 537000, China; 2.College of Pubilc Heath,
Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To investigate the protective role of aqueous extract from Fici Hirtae Radix for bone marrow cells
DNA of 60Coγ-ray irradiated mice. METHODS Forty SPF male mice were randomized into 5 groups. Negative control group
was given normal saline, irradiated group was radiation model group and 3 Fici Hirtae Radix dose groups were orally given
aqueous extracts from Fici Hirtae Radix of 5, 10, 20 g·kg−1·d−1 for 7 consecutive days. Except the negative control group, all
mice received 6 Gy irradiation of whole body. After 24 h of irradiation, mice were sacrificed on femur. Single cell suspension
was produced. DNA damage was detected using single cell gel electrophoresis experiment. RESULTS The results showed that
Tail DNA% and Tail Moment of radiation model mice were higher than negative control group (P<0.01). Tail DNA% and Tail
Moment of all Fici Hirtae Radix dose groups were significantly lower than radiation model group(P<0.01). As the dose increased,
Tail DNA% and Tail Moment reduced. CONCLUSION Aqueous extracts from Fici Hirtae Radix have good protective effect
on 60Coγ-organization of bone marrow cells DNA damage in mice.
KEY WORDS: Fici Hirtae Radix; 60Coγ-rays; bone marrow cells; DNA damage; single-cell gel electrophoresis

五指毛桃(Fici Hirtae Radix)为桑科植物粗叶
榕 Ficus hirta Vah1.的干燥根，为华南地区广泛运
用的中药材，味辛、甘，性平，有健脾补肺、利
湿舒筋功能[1]。该药又称为南芪、土北芪等，且和
北芪具有相同的补气扶正作用，但不温不燥，药
效温和，是客家人常用的煲汤材料。研究表明北
芪可减轻 60Coγ 射线对骨髓的抑制作用，具有抗 γ
射线辐射作用[2]。60Coγ 射线照射在临床常用作肿
瘤病人辅助治疗的一种手段，但在杀伤肿瘤细胞
的同时可对造血系统产生不良影响，骨髓细胞
DNA 是其攻击的主要对象，因此，寻找对骨髓细
胞 DNA 辐射损伤的防护中草药具有重要意义。本
试验利用单细胞凝胶电泳技术，探讨五指毛桃对
60Coγ 照射后小鼠骨髓细胞 DNA 的防护作用，为五
指毛桃在临床上作为辐射防护剂的应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 五指毛桃水提液的制备
五指毛桃购自玉林市中药材公司，经玉林师
范学院化学与生物系植物学教研室杨存亮副教授
鉴定为桑科植物粗叶榕 Ficus hirta Vahl.的干燥根。
五指毛桃水提液的制备参照周添浓等[3]的方法略
加改进：取五指毛桃干燥药材，用 10 倍体积的蒸
馏水浸泡 1 h，加热煮沸 3 h，滤取药液；残渣再
加 8 倍量体积蒸馏水，煮沸 30 min，合并两次滤
液，浓缩至相当于生药 2 g·mL−1。4 ℃冰箱保存，
用时稀释至所需浓度。
1.2 实验动物
SPF 级昆明种小鼠 40 只，♂，6 周龄，体质
量(20±2) g，购自广西医科大学医学实验动物中
心，动物生产许可证号：SCXK(桂)2009-0002。
1.3 试剂和仪器
正常熔点琼脂糖 (NMA)、低熔点琼脂糖
(LMA)：美国Sigma公司；TritonX-100、十二烷基
肌氨酸钠、溴化乙锭：美国Premega公司；淋巴细
胞分离液(上海试剂二厂)；二甲基亚砜(DMSO)、
乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA)、三羟甲基氨基甲烷
(Tris-base)和氢氧化钠(NaOH)均为国产分析纯。
FYC-50H 60Coγ 治疗机(上海医用核子仪器
厂)；DYY-Ⅲ型电泳槽、DYY-11B 型三恒电泳仪(北
京市六一仪器厂)；BX51·R-32FB3F01 正置荧光相
差生物显微镜(日本 Olympus 公司)；150 万像素 CCD
(日本 Nikon 公司)；L420 台式低速自动平衡离心
机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)。
1.4 动物分组和处理
将小鼠随机分为 5 组，即阴性对照组、辐射
模型组及五指毛桃低中高剂量组，每组 8 只。五
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指毛桃水提液低、中、高剂量组按相当于生药 5，
10，20 g·kg−1 给予灌胃[3]，每天 1 次，连续 7 d，
阴性对照组、辐射模型组给予等量生理盐水。最
后一次给药 1 h 后，除阴性对照组外，对各组小鼠
用 60Coγ 射线一次性全身均匀照射，照射率为
182.28 cGy·min−1，照射野 18 cm×18 cm，照射距
离为 75 cm，照射剂量为 6 Gy。
1.5 单细胞悬液的制备
照射 24 h 后处死小鼠，取股骨，剔尽肌肉，
用生理盐水进行骨髓腔冲洗，收集冲洗下的细胞
悬液，过滤后取滤液离心，将细胞密度调节为
105~106 ·mL−1。
1.6 单细胞凝胶电泳实验
1.6.1 铺胶 在完全磨毛的载玻片(75 mm×25
mm)上铺第1层180 µL质量分数为1%的NMA；待其
固化后铺第2层100 µL质量分数为0.8%的LMA和
细胞悬液的混合液(体积比为5︰3)；待第2层固化
后铺第3层100 µL质量分数为0.5%的LMA。固化条
件均为4 ℃，10 min。
1.6.2 细胞裂解 将玻片置于碱性裂解液(2.5 mol·L−1
NaCl，100 mmol·L−1 Na2EDTA，10 mmol·L−1 Tris-
base，1%十二烷基肌氨酸钠，临用前加终浓度为
1% TritonX-100，10%DMSO的应用液，NaOH调节
pH为10)中，4 ℃下裂解2 h。
1.6.3 细胞DNA解旋和电泳 将玻片置于水平电
泳槽中，加入新配制的电泳缓冲液(1 mmol·L−1
Na2EDTA，300 mmol·L−1 NaOH，pH 13.0)浸泡20
min，以便双链DNA解螺旋。室温下调节缓冲液液
面高低，于22 V，190 mA下电泳20 min。随后将
玻片浸入0.4 mol·L−1 Tris-base缓冲液(pH 7.5)中，
中和30 min。
1.6.4 染色与观察 5 µg·mL−1溴化乙锭染色，双
蒸水漂洗，24 h内在荧光显微镜下观察。
1.6.5 拍照与分析 每只小鼠随机选择50个细胞
进行分析，每组共计数400个。细胞图像由CCD拍
摄，用CASP彗星图像分析软件自动分析。分析指
标为国际公认的尾部DNA百分率(Tail DNA%)和
尾矩(Tail Moment)。其中Tail DNA%为单一的彗尾
强度指标，Tail Moment为复合指标，定义为Tail
DNA%和彗尾长度的乘积。
1.7 统计学分析
采用 Origin 7.0统计分析软件对实验数据进行
分析，各实验组之间的差异性采用 t 检验，结果以
sx ± 表示。
2 结果
2.1 小鼠骨髓细胞拖尾现象比较
经荧光染色后，阴性对照组的骨髓细胞呈现圆
形的荧光团，无拖尾现象，见图 1A；辐射模型组的
骨髓细胞表现为尾长增加，尾部荧光强度增强，细
胞呈彗星样，提示 DNA 链断裂，细胞 DNA 受损严
重，见图 1B；五指毛桃水提液各剂量组骨髓细胞的
尾长和尾部荧光强度与辐射模型组相比均明显减
少，其中高剂量组骨髓细胞拖尾现象不典型，见图
1C~1E，提示各剂量组骨髓细胞 DNA 受损减轻。

图 1 不同处理组骨髓细胞彗星实验图(×200)
A−阴性对照组；B−辐射模型组；C−五指毛桃低剂量组；D−五指毛桃中剂量组；E−五指毛桃高剂量组
Fig 1 Comet assay figures of bone marrow cells of different experimental groups (×200)
A−negative control group；B−radiation model group；C−low Fici Hirtae Radix dose group；D−medium Fici Hirtae Radix dose group；E−high Fici Hirtae
Radix dose group
2.2 五指毛桃对小鼠骨髓细胞 Tail DNA%和 Tail
Moment 的影响
各实验组 Tail DNA%和 Tail Moment 见表 1。
结果显示，小鼠接受 6 Gy 60Coγ 射线照射后，辐
射模型组骨髓细胞的 Tail DNA%和 Tail Moment
与阴性对照组相比均明显升高，差异具有统计学
意义(P<0.01)。五指毛桃各剂量组的 Tail DNA%和
Tail Moment 也高于阴性对照组，差异具有统计学
意义(P<0.01)，但是均低于辐射模型组，差异具有
统计学意义(P<0.01)，且随着给药剂量的增加，Tail
中国现代应用药学 2011 年 4 月第 28 卷第 4 期 Chin JMAP, 2011 April, Vol.28 No.4 ·287·
DNA%和 Tail Moment 逐步降低。
表 1 五指毛桃水提液对小鼠骨髓细胞 Tail DNA%和 Tail
Moment的影响(n=8， sx ± )
Tab 1 Influence of aqueous extract from Ficus Hirta Radix
on Tail DNA% and Tail Moment of mice’s bone marrow
cell(n=8, sx ± )
组别 剂量/
g·kg−1
细胞数 Tail DNA% Tail Moment
阴性对照组 − 400 0.90±0.07 0.03±0.00
辐射模型组 − 400 23.35±1.021) 8.17±0.661)
五指毛桃低剂量组 5 400 5.50±0.341)2) 0.76±0.091)2)
五指毛桃中剂量组 10 400 3.30±0.281)2) 0.33±0.061)2)
五指毛桃高剂量组 20 400 2.48±0.201)2) 0.16±0.021)2)
注：与阴性对照组比较，1)P<0.01；与辐射模型组比较，2)P<0.01
Note: Compared with negative control group, 1)P<0.01; compared with
radiation model group, 2)P<0.01
3 讨论
辐射可导致骨髓造血系统损伤[4]，DNA作为辐
射作用的靶分子，在辐射时极易发生结构的改变，
其中，DNA双链断裂是最常见的损伤形式[5]。因此，
骨髓细胞DNA的损伤和修复情况可以直接反映出
机体的状况。单细胞凝胶电泳是一种在单细胞水
平检测DNA损伤与修复的方法，可对辐射损伤进
行定量测定，且灵敏度高，可检测各种类型的辐
射损伤[6]。本试验应用单细胞凝胶电泳技术，检测
出当小鼠经6 Gy 60Coγ射线照射后，其骨髓细胞的
Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组相比明显
升高，提示60Coγ射线可导致小鼠骨髓细胞DNA链
的断裂。
近年来，国内学者就中医药在预防和治疗辐
射损伤方面进行了研究和探索，发现某些中药具
有良好的抗辐射作用。中医理论认为辐射损伤表
现为热毒炽盛、气血两虚和阴阳失调等症状，所
采用的治法多为清热解毒、活血化瘀和补益气血，
与之相应使用的药物也大致为清热解毒药，活血
化瘀药和补益药[7]。五指毛桃具有清热祛湿，益气
补虚等功效。补骨脂素为五指毛桃的主要活性成
分之一，具有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤、免疫调
节等作用[8]。童曾寿等[9]研究发现补骨脂素对辐射
引起的白细胞降低具有提升作用，可以防止骨髓
细胞DNA的照射损伤，提高小鼠存活率。本试验
也表明，不同剂量的五指毛桃均可对辐射损伤小
鼠骨髓细胞DNA产生防护作用，使骨髓细胞DNA
断片减少，且随着剂量的升高，这种防护作用越
明显。因此，五指毛桃可作为辅助药配合放疗等
抗肿瘤治疗，病人可在放疗前口服五指毛桃水提
液，或者食用五指毛桃保健汤，有利于减轻放疗
的毒副作用。
综上所述，五指毛桃对60Coγ射线辐射损伤具
有一定的防护作用，但其作用机制需进一步深入
研究。
REFERENCES
[1] Nanjing University of Chinese Medicine. Dictionary of
Chinese Herbal Medicine( 中 药 大 辞 典 ) [M]. Shanghai:
Shanghai Science and Technology Publishing House, 2006:
529.
[2] LI Z S, ZHANG D, QIU S C, et al. Research of the function of
Astragalus membranaceus(AM) on the anti-radiation of γ-ray
[J]. Lishizhen Med Mater Med Res(时珍国医国药), 2003,
14(12): 733-734.
[3] ZHOU T N, WANG Y, TANG L H, et al. Comparison study
on anti-stress and immune regulation of Radix Astraga Li and
Radix Fici Hirtae [J]. Tradit Chin Drug Res Clin Pharmacol(中
药新药与临床药理), 2008, 19(1): 15-18.
[4] WANG X H, ZHOU Z Y, LI B Y, et al. Radioprotection of
vitamin D on mice injured by irradiation [J]. J Radiation Res
Radiation Processing(辐射研究与辐射工艺学报), 2008, 26(2):
122-124.
[5] HAN R G, PENG R Y. Research progress on ionizing
radiation damage to bone marrow [J]. Chin J Radiol Med Prot
(中华放射医学与防护杂志), 2005, 25(6): 586-588.
[6] JIANG L, MU W J, LIU G P, et al. Application of single cell
gel electrophoresis in post-evaluation of organism radiation
damage [J]. J Nucl Chem Radiochem(核化学与放射化学),
2009, 31(1): 36-41.
[7] SHI G B, AN H, ZHAO Q C. Research progress on TCM
prevention and treatment of nuclear radiation injury [J]. Chin
Tradit Herb Drugs(中草药), 2008, 39(12): Appendix 1-4.
[8] WEN L, XU G, YANG W H, et al. Research survey of south
China herbal drugs Ficus hirta [J]. Inf Tradit Chin Med (中医
药信息), 2007, 24(1): 18-20.
[9] TONG Z S, HUANG M X, DAI C S. The inquiry of coumarin
radiation protection and its structure-activity relationship [J].
Chin J Med Chem(中国药物化学杂志), 1994, 4(2): 150-151.
收稿日期：2010-07-23