全 文 ：第 30卷第 12期 通 化 师 范 学 院 学 报 Vol.30 № 12
2009年 12月 JOURNALOFTONGHUATEACHERSCOLLEGE Dec.2009
刺五加果醋生产用醋酸菌培养方法探究
刘丽娟 ,朱俊义 ,崔宏伟 ,郑春来
(通化师范学院生物系 ,吉林 通化 134002)
摘 要:为进行刺五加果醋生产 ,采用固体和液体两种培养方法来进行醋酸菌培养方法研究 ,结果表明 ,生长中可用固体培养
方法保藏菌种 ,液体培养方法即刺五加酒进行菌种的扩繁 ,在刺五加酒中醋酸菌的生长情况好于其它培养基.
关键词:刺五加;醋酸菌;培养方法
中图分类号:TS26 文献标志码:A 文章编号:1008-7974(2009)12-0041-02
基金项目:吉林省教育厅科技项目(吉教科合字 2008第 215号);通化师范学院自然科学科研项目(2008044).
收稿日期:2009-03-17
作者简介:刘丽娟(1972-),女,吉林通化人 ,硕士 ,通化师范学院生物系副教授.
刺五加(RadixAcanthopanacisSenticosl)五加
科五加属 ,别名刺拐棒 、刺老鸦子 、老虎镣子.生于低
山 、丘陵落叶阔叶林或针阔混交林的林下或林缘 ,喜
温暖 、湿润气候 ,耐寒 ,地下根茎发达 ,对土壤要求不
严.东北 、陕西 、四川及朝鲜 、苏联运东地区均有分
布 [ 1] .
传统以根和根状茎入药 , 有扶正固本 、养血安
神 、滋补强壮之功能 ,主要药效成分含多种糖甙 、丁
香甙 、香豆精甙 、多糖及果酸 ,是治疗体虚 、咳嗽 、高
血压 、神经衰弱等症的良药.近代医学研究证明刺五
加的作用特点与人参基本相同 ,具有调节机体紊乱 ,
使之趋于正常的功能.有良好的抗疲劳作用 ,较人参
显著 ,并能明显的提高耐缺氧能力.能增强机体非特
异性免疫防卫能力 ,使网状内皮系统吞噬功能显著
增强 ,减低体内外多种致病因子对机体的损害.能促
进抗体的形成 ,对服用抗癌药所致的白细胞减少有
预防作用 ,且能减轻抗癌物的毒性.具有中枢兴奋 ,
抗应激 ,促进肝的再生能力 , 提高蛋白质的生物合
成 ,降低基础代谢 , 促进性腺以及降低血压等作
用 [ 2] .
食醋生产在我国具有悠久的历史 ,其保健作用
早已在实践中得到证实.发展醋饮品是食醋从传统
的调味品走向现代饮料消费品的必然趋势 ,醋饮品
不仅含有人体所需的各种有机酸 ,而且富含氨基酸 ,
它的出现使其保健功能更易为广大消费者所接
受 [ 3] .果醋是集营养 、保健 、食疗等功能为一体的新
型饮品.醋酸菌(Acetobacter.rancen)是能够将酒精
氧化成醋酸的一类微生物[ 4] ,我们以刺五加果发酵
生产刺五加酒 ,再接入醋酸菌生产刺五加果醋.因为
在传统的培养基上醋酸菌生长情况较不理想 ,所以
我们采用不同的培养基配制方法来研究醋酸菌培养
方法 ,以使醋酸菌的数量能满足刺五加果醋生产的
需要.
1 材料与方法
1.1 菌种
生产用醋酸菌 AS1.41,从中国科学院微生物研
究所购买.
1.2 醋酸菌种子的制备 [ 5]
斜面培养基 , 葡萄糖 1%、酵母膏 1%、碳酸钙
2%、无水乙醇 3.5%、2%琼脂 ,培养 48h.
1.3 培养基配方 [ 6]
共采用 8种培养基来研究对醋酸菌的最佳培养
方法 ,培养基配方见表 1.
表 1 培养基配方
处理 培 养基 配 方
1
酵母膏 1g、葡萄糖 10g、碳酸钙 2g、琼脂 1.5g、蒸馏水
100mL、pH 6.8
2 配方同 1,碳酸钙单独灭菌 ,倒平板时再加入
3
酵母膏 1.0g、葡萄糖 1.0g、碳酸钙 1.5g、琼脂 2.5g、乙醇
2.0mL、蒸馏水 100mL、pH5.8
4 配方同 3,用浓盐酸溶解碳酸钙 , pH5.5
5 配方同 3,用浓盐酸溶解碳酸钙 , pH6.8
6 酵母膏 1g、葡萄糖 10g、碳酸钙 2g、蒸馏水 100mL、pH 6.8
7
酵母膏 1.0g、葡萄糖 0.3g、碳酸钙 1.5g、蒸馏水 100mL、乙
醇 6mL、pH自然
8 刺五加酒
1.4 培养基配制
采用固体和液体两种培养方法来培养醋酸菌 ,
处理 1 ～ 5用固体培养方法即试管斜面和平板来培
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DOI :10.13877/j.cnki.cn22-1284.2009.12.005
养 ,处理 6 ～ 8采用液体培养方法即 500mL的三角
瓶 ,每瓶装 200mL液体培养基 ,每个处理设三次重
复 ,除处理 8采用已发酵好的刺五加酒外 ,其余处理
的培养基配好后 , 用高压蒸汽灭菌器 , 121℃, 灭菌
20m,备用.
1.5 培养方法
在上述培养基接入醋酸菌后 ,固体培养基采用
恒温培养箱在 30℃培养 ,定期观察;液体培养基用往
复式摇床 30℃培养 [ 7] .醋酸菌在培养基上生长情况
见表 2.
表 2 醋酸菌生长情况
处理 培养时间
24h 48h 72h 120h
1 - + +++ +++
2 - - - -
3 - + +++ +++
4 - + + +
5 - - - -
6 + + + ++
7 + + ++ +++
8 + + ++ +++
注:“ -”不生长 , “ +”零星生长 , “ ++”连成片或成团 “ +++”
层叠生长
2 结果与分析
从表 2可以看出 ,培养 24h后 ,在固体培养基上
醋酸菌基本上不生长 ,这与大肠杆菌 、枯草杆菌等实
验室常用菌种不同.培养 48h后在处理 2和处理 5
中 ,醋酸菌仍无生长 ,处理 1、3、4中无论是斜面还是
平板均可见醋酸菌菌落在固体培养基表面有零星分
布.培养 72h时 ,处理 4醋酸菌菌落数量没有变化;
处理 1、3醋酸菌菌落连成片形成菌苔 , 培养 120h
时 ,在固体培养基上 ,醋酸菌菌落数量较 72h没有明
显变化.
在处理 2和处理 5这两种配方的固体培养基
上 ,醋酸菌基本不生长 ,说明这两种配方的某些条件
不能满足醋酸菌生长;而处理 4虽然醋酸菌也有生
长 ,但长势较弱 ,此配方的培养基也不适合醋酸菌生
长.处理 2是使碳酸钙位于培养基表层 ,在处理 3和
4中配制培养时 ,采用浓盐酸把碳酸钙溶解 ,因醋酸
菌在生长过程中会产生酸 ,加入碳酸钙目的是中和
产生的酸 ,以延长保藏时间.用酸把碳酸钙给中和
了 ,达不到加入碳酸钙的目的 ,所以醋酸菌先有生
长 ,但长势较弱 ,也就是处理 2、4、5这三种培养基的
配制方法不适用于醋酸菌的培养 ,不宜采用.在处理
1和 3中 ,醋酸菌虽然开始长势慢 ,但是后期菌的生
长量能达到预期要求 ,所以这两种配方可作为培养
和保存醋酸菌的方法采用 ,从培养时间上看 ,培养
72h醋酸菌就可以长满基质 ,不用再延长培养时间 ,
可低温冷藏备用.
处理 6、7、8这三种液体培养基 ,从颜色上难以
辨别醋酸菌长势 ,这是因为处理 6和 7呈现的是酵
母膏的颜色 ,处理 8刺五加果发酵后也呈现酒红色 ,
所以只能采用简单染色法然后用光学显微镜观察醋
酸菌长势.因采用振荡培养 ,所以没有厚的菌醭出
现 ,但在培养后期在三角瓶内壁上仍可清晰地看到
菌膜.培养前 48h醋酸菌数量增加不明显 ,只是在显
微镜视野中零星分布;72h时在处理 7和 8中醋酸菌
已成片可见 ,而处理 6增加不明显;120h时 ,在处理
7和 8中醋酸菌已遍布显微镜视野中 ,而处理 6醋酸
菌数量虽有增加但远不及处理 7和 8.因此 ,用液体
培养基培养醋酸菌可采用处理 7和 8.醋酸菌在处理
7的长势强于处理 6,是因为处理 7的配方中添加了
乙醇 ,乙醇参与了醋酸菌的发酵 ,从而促时了醋酸菌
生长;在这三种液体培养基中 ,处理 8即刺五加酒中
醋酸菌数量增长最明显 ,是最适于醋酸菌培养的 ,原
因可能是刺五加酒中含有某些天然成分 ,对其生长
起了促进作用.
3 小结
在固体培养方法中 ,处理 1和处理 3都适用于
醋酸菌培养 ,接种后培养 72h可保藏备用;液体培养
方法中处理 7和 8适用于醋酸菌培养 ,处理 7可普
遍用于醋酸菌液体培养 ,处理 8是刺五加酒所以仅
适于刺五加果醋的生长.生长中可用固体培养方法
保藏菌种 ,用刺五加酒进行菌种的扩繁.
参考文献:
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(责任编辑:王宏志)
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