全 文 ：第 30卷 ,第 4期 光　谱　实　验　室 Vol . 3 0 , No . 4
2 0 1 3年 7月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory July , 2 0 1 3
RP-HPLC测定黄毛 木中的
紫丁香苷和刺五加苷 E
① 联系人 ,手机: ( 0) 13507058127; E-mail: zsqycxy@ sohu. com
作者简介:周兰姜 ( 1962— ) ,男 ,南昌市人 ,实验师 ,主要从事药学实验研究工作。
收稿日期: 2012-11-21;接受日期: 2012-11-29
周兰姜　邹玉 a　邹盛勤①
(宜春学院化学与生物工程学院　江西省宜春市学府路 576号　 336000)
a (琼州学院生物科学与技术学院　海南省三亚市育才路 1号　 572022)
摘　要　研究 RP-HPLC同时定量分析黄毛 木中紫丁香苷和刺五加苷 E的含量。 采用色谱柱为
NUCLEODUR 100-5 C18 ec柱 ( 4. 6mm× 250mm, 5μm) ,流动相为乙腈∶水 ( 15∶ 85, V /V ) ,流速 0. 8m L·
min- 1 ,检测波长 221nm,柱温 30℃。紫丁香苷进样量在 0. 01364— 0. 15004μg范围内 ,与峰面积呈良好的线
性 关系 ( r= 0. 9999) ,平均回收率为 96. 8% , RSD为 2. 5% (n = 6) ;刺五加苷 E进样量在 0. 02940—
0. 32340μg范围内 ,与峰面积呈良好的线性关系 ( r= 0. 9999) ,平均回收率为 97. 9% , RSD为 1. 9% (n= 6)。
本方法操作简便 ,测定结果准确可靠 ,可同时测量黄毛 木中紫丁香苷和刺五加苷 E的含量。
关键词　黄毛 木 ;光电二极管阵列检测器 ;反相高效液相色谱法 ;紫丁香苷 ;刺五加苷 E
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2013) 04-1576-04
1　引言
黄毛 木 ( Aralia decaisneana Hance)系五加科 木属植物 ,广泛分布于江西、广东、湖南、云南、
贵州和广西等地 ,其根、茎及皮供药用 ,主治风湿腰痛、肝炎、肾炎、肝硬化和糖尿病等 [1 ] ,具有散瘀
消肿、抗菌止痛的功效 [2 ]。黄毛 木主要含以齐墩果酸为主的三萜皂苷 ,此外还含黄酮类等成分。姚
向超等 [3 ]采用薄层扫描法测定黄毛 木中齐墩果酸的含量 ,并证实黄毛 木根中齐墩果酸主要以皂
苷的形式存在 ,林耕等 [4 ]从黄毛 木中分离出了齐墩果酸型皂苷主要为 木皂苷Ⅱ、Ⅲ 、Ⅳ、≫ 以及
黄毛 木皂苷 D。黄毛 木的化学成分研究主要集中于皂苷类成分 [5 ] ,但其紫丁香苷和刺五加苷 E
的含量测定未见文献报道。本实验拟采用超声辅助提取 ,建立反相高效液相色谱法同时测定黄毛
木不同部位中紫丁香苷和刺五加苷 E的含量 ,为黄毛 木中紫丁香苷和刺五加苷 E的测定及其开
发利用提供科学依据。
2　实验部分
2. 1　仪器与试剂
Waters系列高效液相色谱仪 ,包括双 515泵 ,光电二极管阵列检测器 ( 2996型 ) , 77251进样
阀 , Empower中文色谱数据工作站 (美国 Waters公司 ) ; RO-MB-10D型高纯水机 (杭州永洁达膜分
离设备厂 ) ; CP225D型电子分析天平 (德国 Sartourius公司 ) ; SK2510HP超声波清洗器 (上海科导
超声仪器有限公司 ,功率: 250W ,频率: 59kHz)。
乙腈为色谱纯 (天津市元立化工有限公司 ) ,乙醇为分析纯 (江西洪都生物化学有限公司 ) ,紫丁
香苷对照品 (上海阿拉丁试剂有限公司 ,批号: 35890) ,刺五加苷 E(北京恒元启天化工技术研究院 ,
批号: M US T-11082410)、黄毛 木原料药 2012年 3月采自江西省奉新县 ,经鉴定为五加科 木属
植物黄毛 木的茎及根。实验用水为超纯水。
2. 2　溶液配制
对照品溶液: 准确称定紫丁香苷、刺五加苷 E对照品 3. 41mg、 7. 35mg,分别加流动相溶解并稀
释至 50m L容量瓶中 ,摇匀 ,备用。 准确吸取上述溶液各 1mL置于 10mL容量瓶中 ,用流动相稀释
至刻度 ,制成含紫丁香苷 0. 00682mg· mL- 1和刺五加苷 E 0. 0147mg· mL- 1的对照品混合溶液。
样品溶液: 黄毛 木清洗干净后 ,按直径大小进行分类 (部分根、茎将表皮剥离 ) ,得到不同样
品。将样品置恒温烘箱中于 80℃下干燥 12h,高速粉碎机粉碎 ,过 20目筛。准确称取黄毛 木各样
品粉末约 3g ,分别置于 50 mL具塞锥形瓶中 ,加入 95%乙醇 50mL,称重。超声提取 45min,冷却后
用乙醇补足损失重量 ,摇匀 ,用 0. 45μm滤膜过滤 ,取续滤液作为样品溶液。
2. 3　色谱条件
色谱柱为 NU CLEODUR 100-5 C18 ec柱 ( 4. 6mm× 250mm , 5μm);流动相为乙腈∶水 ( 15∶ 85,
V /V ) ,流速 0. 8mL· min- 1 ,检测波长 221nm,柱温 30℃。以紫丁香苷和刺五加苷 E计 ,理论塔板数
均大于 8500,样品中紫丁香苷和刺五加苷 E的分离度均大于 1. 9,对称因子分别为 1. 12、 1. 10,外
标法定量分析。对照品和样品色谱见图 1。
图 1　紫丁香苷和刺五加苷 E对照品 (a)和黄毛 木样品 (b ) HPLC谱
3　结果与讨论
3. 1　检测波长的选择
通过光电二极管阵列检测器在 190— 400nm波长范围内进行紫外扫描 ,对照品及样品溶液中
紫丁香苷及刺五加苷 E紫外光谱一致 ,且紫丁香苷最大吸收波长为 221. 0nm和 265. 8nm ,刺五加
苷 E最大吸收波长为 206. 9nm和 269. 3nm。选择 221. 0nm作为检测波长 ,紫丁香苷和刺五加苷 E
均有较强的紫外吸收 ,信噪比高 ,基线平稳 ,最终选择两组分的检测波长为 221. 0nm。
3. 2　精密度实验
分别准确吸取紫丁香苷和刺五加苷 E对照品混合溶液 10μL,平行进样 5次 ,以峰面积计算色
谱系统精密度 ,紫丁香苷和刺五加苷 E峰面积的 RSD分别为 1. 1% (n= 5)和 1. 3% (n= 5)。说明进
样方法和仪器精密度良好。
1577第 4期 周兰姜等: RP-HPLC测定黄毛 木中的紫丁香苷和刺五加苷 E
3. 3　重现性实验
取黄毛 木叶样品 5份 ,每份各约 3g ,按“ 2. 2项”下样品溶液制备方法制备样品溶液。 准确吸
取各样品溶液 10μL,进样 ,测定其峰面积积分值 ,外标法计算含量。紫丁香苷和刺五加苷 E含量的
RSD分别为 1. 7% (n= 5)和 2. 3% (n= 5)。结果表明 ,样品制备方法重现性良好。
3. 4　线性关系实验
用微量注射器准确吸取紫丁香苷和刺五加苷 E对照品混合溶液 2、 8、 12、 16、 22μL进样分析 ,
按色谱条件测定峰面积 ,以对照品的进样量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制校准曲线 ,得紫丁香苷
回归方程为: y= 4. 84× 106x+ 7. 46× 103 (r= 0. 9999) ,刺五加苷 E回归方程为: y= 1. 73× 106x -
2. 75× 103 (r= 0. 9999)。表明紫丁香苷进样量在 0. 01364— 0. 15004μg,刺五加苷 E进样量在
0. 02940— 0. 32340μg时 ,线性关系良好。
3. 5　加标回收率实验
准确称取已知紫丁香苷和刺五加苷 E含量的黄毛 木叶样品 6份 ,按高、中、低三种浓度分别
加入对照品适量 ,制备样品溶液 ,进样测定紫丁香苷和刺五加苷 E的含量 ,计算得紫丁香苷平均回
收率为 96. 8% , RSD为 2. 5% (n= 6) ,刺五加苷 E平均回收率为 97. 9% , RSD为 1. 9% (n= 6)。
3. 6　样品含量测定
准确吸取制备的样品溶液各 10μL进样 ,平行 3次 ,测定紫丁香苷和刺五加苷 E峰面积积分
值 ,外标法计算紫丁香苷和刺五加苷 E的平均含量。测定结果见表 1。
表 1　黄毛 木样品不同部位中紫丁香苷和刺五加苷 E的含量测定结果 (mg /g,n= 3)
编号 部位 紫丁香苷 刺五加苷 E
1 粗根 (> 2cm) 0. 55053 0. 33405
2 粗根 (去皮 ) 0. 14790 0. 26260
3 粗根皮 1. 06195 0. 31178
4 细根 (≤ 2cm) 0. 75043 0. 21758
5 细根 (去皮 ) 0. 38744 0. 25855
6 细根皮 1. 73513 0. 42175
7 茎 0. 27874 0. 44013
8 茎 (去皮 ) 0. 43034 0. 39116
9 茎皮 1. 32867 0. 29002
　　测定结果表明 ,在黄毛 木样品不同部位中 ,紫丁香苷含量最高为 1. 73513mg /g,最低为
0. 14790mg /g;刺五加苷 E含量最高为 0. 44013mg /g ,最低为 0. 21758mg /g。在黄毛 木样品中 ,茎
或根皮中的紫丁香苷含量远高于去皮茎或根 ,可以证实紫丁香苷主要存在于茎或根的皮中 ;刺五加
苷 E含量在黄毛 木不同部位中差异相对较小 ,总体而言刺五加苷 E在粗根中的含量高于细根。
4　结论
高效液相色谱测定紫丁香苷和刺五加苷 E的含量多采用梯度洗脱法 [ 6, 7] ,设备要求较高 ,操作
复杂 ,本实验以乙腈 -水为流动相 ,采用等度洗脱法 ,同时测定了黄毛 木不同部位中紫丁香苷和刺
五加苷 E的含量 ,分离度达到定量分析的要求 ,样品分析在 25min内完成。采用二极管阵列检测器
对对照品及样品中紫丁香苷和刺五加苷 E进行紫外光谱扫描 ,归一化后组分紫外光谱一致 ;通过
Empower色谱工作站系统适应性软件分析了紫丁香苷和刺五加苷 E色谱峰纯度 ,证实两组分色谱
峰均为单一成分色谱峰 ,在定量的同时增强了方法的定性能力。
1578 光谱实验室 第 30卷
参考文献
[1 ]江苏新医学院 .中药大辞典 (下册 ) [M ].上海:上海科学技术出版社 , 1986. 2440.
[2 ]朱兆仪 ,崔立英 ,胡碧煌等 .黄毛 木皂甙 A的分离和结构测定 [ J ].药学学报 , 1994, 29( 11): 840— 842.
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[4 ]林耕 ,杨峻山 .黄毛 木的化学成分研究Ⅱ [ J] .中国药学杂志 , 2004, 39( 8): 577— 578.
[5 ]郑玲玲 ,裴凌鹏 . 木属植物研究进展 [ J] .中国民族医药杂志 , 2010, ( 6): 57— 59.
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Determination of Syringin and El eutheroside E in Aralia decaisneana
Hance by RP-HPLC
ZHOU Lan-Jiang　 ZOU Yu-Jinga　 ZOU Sheng-Qin
( School o f Chemistr y and Bioengineering of Yichun University, 576,X uef uload , Yichun 336000, P. R. China )
a( School of Biological Science and Technolog y of Qiongzhou University, 1 Yucaiload , San ya 572022, P. R .China)
Abstract　 A RP-HPLC method for quanti tativ e determination of sy ringin and eleutheroside E in
Aralia decaisneana Hance was developed. The separation of sy ringin and eleutheroside E w as
perfo rmed on a N UCLEODUR 100-5 C18 ec column( 4. 6mm× 250mm, 5μm) w ith acetoni trile-w ater
( 15∶ 85, V /V ) as the mobile phase. The flow ra te w as 0. 8mL· min- 1 at 30℃ , and the detection
w aveleng th w as set at 221nm. The linear ranges of syringin were relationship at the 0. 01364—
0. 15004μg (r= 0. 9999) . The recovery w as 96. 8% and RSD was 2. 5% (n= 6) . The linea r ranges of
eleutheroside E were relationship at the range of 0. 02940— 0. 32340μg ( r= 0. 9999) . The recovery
w as 97. 9% and RSD was 1. 9% (n= 6) . The proposed method is simple time-saving and accurate. It
can be used fo r the determination of sy ringin and eleutheroside E in Aral ia decaisneana Hance.
Key words　 Aralia decaisneana Hance; Photodiode Array Detecto r; RP-HPLC; Syringin;
Eleutheroside E
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