全 文 ：第 卷第 期 年 月 北京中医药大学学报
中药化学
无梗五加中 个有机酸的含量测定及其与
细柱五加 、 剌五加的比较
宋洋 冯 雪松
中 国 医科大学药 学院 药物分析教研室 辽 宁
摘要 ： 目 的 建立高效液 相色谱法 （ 同 时 测定无梗五加 中 个有 机酸 （ 绿 原酸 ， 新绿 原 酸 ， 咖
啡酸 ， ， 二 咖 啡 酰 奎 宁 酸 ， 异 绿 原 酸 ， 异绿 原 酸 ， 异 绿 原 酸 含 量 的 方 法 。 方法 采 用
， 色 谱柱 ， 柱温 室 温 ， 以 甲 酸 乙 腈 甲 酸水溶
液进行梯度 洗脱 ， 流 速 ， 检 测 波 长 。 结果 个 有 机 酸 的 线 性 范 围 分 别 为
、 、 平均
加 样 回 收率 均在 范 围 内 。 结论 该方 法 快速 简便 、 精密 度好 、 灵 敏度高 ， 为控 制
无梗五加药材质 量及与 五加属 的 其他 药 材进行对 比 研究提供 了 方 法 。
关键词 ： 无 梗五加 ； 细柱五加 ； 刺 五加 ； 有机酸 含量测 定 ； 高效液相 色谱法
中图分类号
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宋洋 ，女 ，博士 讲师
通信作者 ： 冯雪松 ， 男 ， 副教授 ， 硕士生导师 ， 主要研究方向 ： 中 药药效物质基础及质量控制 ，
国家 自然科学基金青年科学基金资助项 目 （ 丨
2 6 0 北京 中医药大学学报 第 卷
无梗五加 器中备用 。 乙腈为色谱纯 其余试剂均为分析纯 ， 水
又名短梗五加 ， 为五加科五加属植 为重蒸馏水 。
物 ，分布于东北 、华北 、陕西等地 ，在山地 、溪流两岸 、 方法与结果
丘陵坡地 、林缘等地均有生长 。 《 中华本草 》 记载无 色谱条件
梗五加的根皮为五加皮的来源之一 具有祛风湿 、 补 ， ； 流
肝肾 、 强筋骨 、 活血脉等功效 。 五加科五加属植 动相 甲 酸乙腈 甲 酸水溶液 （ ，
物大都具有药用价值 ，如滋补 、抗风湿 、抗应激 、抗疲 梯度 洗脱 （ 流 速
劳 、 抗肿瘤等作用 ， 临床用于风湿痹痛 、腰膝软弱等 检测波长 柱温 。
病症 。 近年来研究利用较多的有刺五加 、 细柱五加 对照品溶液的制备
及无梗五加 。 在前期提取分离工作中 和 取绿原酸 、新绿原酸 、 咖啡酸 、 ， 二咖啡酰奎
成分研究工作 中发现 无梗五加根中 的 主要成 宁酸 、异绿原酸 、 异绿原酸 和异绿原酸 的 对
分为木脂素类和有机酸类成分 。 而有机酸 中又多为 照品适量 ， 精密称定 ， 加 甲 醇溶解 ， 并配制成浓度为
咖啡酰奎宁酸类成分 ，广泛分布于无梗五加 、 细柱五 、 、 、 、 、 、 的各对照
加和刺五加 的不同部位 中 。 咖啡酰奎宁酸类化合物 品储备液 。 精密吸取各对照品储备液适量 ， 配制成
是一类由 奎宁酸和不同数 目 的咖啡酸通过醋化反应 浓度为 、 、 、 、 、 、
缩合而成的 天然酚酸类化合物 ， 具有抗氧 化 、抗 的混合对照品储备液 。
炎 、抗微生物 、 酶抑制 、 肝细 胞保护 、 抑 供试品溶液的 制备
制血小板凝集 、抗纤维化等药理活性 。 本文建 取无梗五加根粉末 精密称定 ， 置具塞锥
立了高效液相色谱法 （ 方法 同时测定 种有 形瓶 中 ， 加 人 乙 醇水溶液 ， 超声提取
机酸类成分 即绿原酸 、新绿原酸 、 咖啡酸 、 二咖 ， 抽滤 。 滤液置 量瓶中 ， 用 乙腈水
啡酰奎宁酸 、 异绿原酸 、异绿原酸 和异绿原酸 溶液定容至刻度 ， 摇匀 。 滤膜滤过 ， 即得 。
， 并应用该方法对无梗五加 、 细柱五加和剌五加根 系 统适用 性试验
中的有机酸类成分的含量进行了 比较研究 。 分别精密 吸取 “ ” 混合对 照 品储备液 和
仪器与试药 “ ”项下供试品溶液各 斗 ， 注人高效液相色谱
高效液相色谱仪 日 本分光 仪 ， 记录色谱图 ， 典型 色谱图见 图 。 个有机酸类
公司 ） 紫外 可见光检测器 日 本 成分的 色谱峰与相 邻 色谱 峰的分离 度均 不 小 于
分光公 司 ） ， 色谱工作 站 （ 赛智科技有 限公 理论塔板数以咖啡酸计算不小于 ， 拖尾因
司 ） ， 型数控超声波清洗器 （ 昆山 市超声 子均在 之间 。
仪器有限公司 ） ， 重蒸水仪 （ 上海亚荣生化仪 线性 关 系 考察
器厂 ） ， 旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂 ） ， 精密量取“ ” 项 下混合对照 品储备液 、
电子 天平 （ 梅特勒 托利 多仪 、 、 、 ， 分别置 量瓶中 加甲 醇
器有限公司 ） 。 稀释至刻度 摇匀 ， 即得系 列混合对照品溶液 。 进样
对照品绿原酸 ， 新绿原酸 咖啡 酸 二咖啡 记录色谱图 。 以相应的峰面积 对浓度
酰奎宁酸 ， 异绿原酸 异绿原酸 ， 异绿原酸 均 进行线性回 归分析 ， 结果见表 ， 各
为本实验室 自 制 ， 经 方法鉴定结构 ， 组分在其相应的浓度范围 内线性关系 良好 。
测定纯度均大于 峰面积归一化法 ） 。 精密度试验
无梗五加 、 细柱五加和刺五加药材均 由 辽宁省 取无梗五加根供试品溶液 份 ， 进样 ， 重
丹东五加高新农业科技开发公司提供 ， 经沈 阳药科 复进样 次 记录峰面积 。 计算绿原酸 ， 新绿原酸 ，
大学 中药学院路金才教授鉴定分别为五加科五加属 咖啡酸 ， 二咖啡酰奎 宁酸 异绿原酸 ， 异绿原
植物无梗五加 ： 耶 的干燥根 、 细 酸 异绿原酸 峰面积的相对标准偏差 （ 分
柱五加 的干燥根和刺五加 别为 、 、 、 、 、 、
干燥根 。 全部样品经 自 然干 表明系统精密度 良好 。
燥后 ， 置烘箱 过夜 ，粉碎 ，过 目 筛 置于干燥
第 期 宋洋等 无梗五加中 个有机酸 的含 量测 定及其与细柱五加 、 刺五加的 比较
表 个有机酸的标准 曲线 及线性范 围
化合物 线性方程 回 归系数 线性范 围
￡
，
重 复性试验
取同一批无梗五加根样品 约 共 份 ， 精
！ 密称定 ， 按照 “ ” 项下方法 ， 制 备供试 品 溶液 进
样 记录峰面 积 计算含量 及其 。 绿原
° °
； 酸 ， 新绿原酸 ， 咖啡酸 二咖 啡酰奎宁 酸 ， 异绿原
。 。。 。 。。
° °
酸 异绿原酸 ， 异绿原酸 分别为 、 、
、 、 、 、
， 分别为
。
、 、 、 、 、 、 表
￡
養
明本法重复性 良好 。
■ 稳定性试验
— 取同一供试品溶液 ， 分别 于 、 、 、 、 卜 进样
‘ °° ° °° 进行 分析 ， 所测定 的 个有机 酸峰 面积 的
在 内 均小于 表 明 供试品 溶液 在绿原酸 新绿原酸 咖啡酸 二咖啡酰奎宁酸 ；
异绿原酸 异绿原酸 异绿原酸 。
； ； ； ￡
加
； ； ；
取 已 知含量的无梗五加根粉末约 ， 共
份 精密称定 分别精密加入 定量的对照品溶液 ，
图 无梗五 加样品 及对照 品 典型 色谱 图 按 “ ” 项下制 备供试品 溶液 进样 ， 记录峰
面积 计算平均回收率及其 ， 个有机酸 的平均
回 收率均在 范围 内 ， 均不大
于 表 明方法准确度 良好 。 结果见表 。
表 个有机酸 的平均回 收率
化合物 理论值 实测值 回收率 相对标准偏差
±
±
±
±
±
±
±
样 品测 定 面积 按回归方程计算绿原酸 新绿原酸 ， 咖啡酸 ， ，
取生长年份分别 为 年 的 批无梗五加 根 二咖啡 酰奎 宁 酸 ， 异绿原酸 ， 异绿原 酸 ， 异绿
药材各 份 以及细柱五加根 、刺五加根药材各 份 ， 原酸 的平均含量 结果见图 、 图 。
按 “ ” 项下制备供试品溶液 ， 进样 记录峰
2 6 2 北京中 医药大学学报 第 卷
— 加 细柱五加 。 无 梗五加 、 细柱五 加和刺 五加均为
；
五加科五加属 植物 。 《 中华本草 》 中 记载 ， 无梗五加
‘ ： ：
一
：：：：口 和细 柱五加 的 根皮 为五 力 皮 的 来源 《 中 国药典 》
； ：二 版 部 规定五 加皮的 来源仅为细柱五加 的
： ；
：
；
根皮 。 刺五加 亦被 《 中 国 药典 》 （ 版一部 ） 收
—一 — 载 ， 药用部位为根茎 。 本实验从有机酸成分的角 度 ，
研究无梗五加 、 细柱五加和刺五加 种 五加属植物
的差别 ， 可以 到三者根部 个有机酸 成分的含量生长年份 （ 年 ）
差异不大 。 某种程度上印证了 同属植物相同 的部位图 不 同 生长 年份无梗五加根 中 个有机酸 的含 量
仏 常含有相 同或相似的活性成分的说法 。
参考文献 ：
国家 中 医药管理局 《 中 华本草 》 编 委会 中 华 本 草 ： 第
卷 上海 上海科学技术 出 版社 ，
二 ，
□
摩 卜義广 领 ，
，
不 闻药材
图 年生无梗五 加 、 细柱五加和刺五 加根中
个有机酸的含量 ， ， ⑶ ：
，
、
：论
，本文测定了 个生长年份 、 、 、 、 年生 ） 的
无梗五加根 中 个有机酸成分的 白 量 。 这 生长
年份 的无梗五加根药材均采集 自 丹东凤城同一块地 （
以确保其生长条件一致 。 对样品 的测定结果表明 ，
个有机酸成分的含量总和随无梗五加生长年份的增
加而增加 ， 即 在第 年时最大。 结果表 明 ， 年生无 。 ， ，
梗五加根中仅能测 到绿原酸和新绿原酸 种成分 ， ， ， °
并且含量总和仅为 年生植物有 机酸含 量总和 的
。 综上 当有机酸类为主要的药效物质时 ， 采 — °
， ，收年份不宜小于 年 。丁
还测定 了丹东凤城 年生 的无梗五加 、 细柱五
加 、刺五加根 中 有机酸成分的含量 。 对样 的
测定结果表 明 种五加属植物根中 的有机 酸成分
含量差异不大 ， 其 中含量最局 的成分为绿原 ， 其含 ， ：
量均分别 占到 了三者全部有机酸总量的 以上 ， ，
含量次大的有机酸成分为异绿原酸 。 三者绿原酸
含量按大小排序 ： 无梗五加 细柱五加 刺五加 。 ：
三者异绿原酸 含量按大小排序 刺五加 无梗五 （ 收稿 日 期