全 文 ：第３５卷第４期
２０１６年８月
中 国 海 洋 药 物
ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＡＲＩＮＥ　ＤＲＵＧＳ
Ｖｏｌ．３５　Ｎｏ．４
Ａｕｇｕｓｔ，２０１６
西河柳种质遗传多样性的ＩＳＳＲ分析△
＊
孙稚颖，周凤琴＊
（山东中医药大学 药学院，山东 济南２５０３５５）
摘　要：目的 应用ＩＳＳＲ－ＰＣＲ标记技术研究中药材西河柳基原植物柽柳及其近缘种的亲缘关系和遗传多样
性，为西河柳药材鉴定和育种提供参考。方法 对柽柳７个居群以及甘蒙柽柳、多枝柽柳及购自药材市场西河
柳共１１个样本进行ＩＳＳＲ－ＰＣＲ分析，采用ＮＴＳＹＳ－ｐｃ软件计算柽柳各居群及近缘种间的Ｊａｃｃａｒｄ遗传相似系
数，按非加权配对算术平均法（ＵＰＧＭＡ）建立所研究类群的系统聚类图。结果１４条引物扩增出１０６个条
带，其中多态带为８３条，占总扩增条带数的７８．３％。从聚类分析图可以看出，柽柳不同居群样本首先聚在一
起，表明是一自然物种；甘蒙柽柳与柽柳具有较近的亲缘关系。研究还表明目前商品市场西河柳药材来源较
混乱。结论ＩＳＳＲ标记可以为西河柳原植物及其近缘种的种质资源鉴定、遗传关系分析及栽培育种提供分子
生物学依据。
关键词：西河柳；柽柳；ＩＳＳＲ；种质资源；遗传多样性
中图分类号：Ｒ９３１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００２－３４６１（２０１６）０４－０６０－０５
ＩＳＳＲ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ
ＳＵＮ　Ｚｈｉ－ｙｉｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｆｅｎｇ－ｑｉｎ＊
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｎａｎ　２５０３５５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｏｔａｎｉｃａｌ　ｏｒｉｇｉｎ　ｏｆ
Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂｙ　ＩＳＳＲ－ＰＣＲ　ｍａｒｋｅｒ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｆｏｒ
ｔｈｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｅｖｅｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｘ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
Ｌｏｕｒ．ａｎｄ　ｆｏｕｒ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｘｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　Ｔ．ａｕｓｔｒｏｍｏｎｇｏｌｉｃａ　Ｎａｋａｉ，Ｔ．ｒａｍｏｓｉｓｓｍａ　Ｌｅｄｅｂ　ａｎｄ
Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ　ｂｏｕｇｈｔ　ｆｒｏｍ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｍａｒｋｅｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ＩＳＳＲ－ＰＣＲ　ｍａｒｋｅｒｓ．Ｔｈｅ　Ｊａｃｃａｒｄ　ｃｏ－
ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ｗａｓ　ｗｏｒｋｅｄ　ｏｕｔ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＮＴＳＹＳ－ｐｃ　ｓｏｆｔｗａｒｅ，ａｎｄ　ａ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓａｍｐｌｅｓ
ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｕｎｗｅｉｇｈｅｄ　ｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｉｔｈ　ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ　ｍｅａｎ（ＵＰＧＭＡ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ　１４
ＩＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　１０６ｌｏｃｉ　ｏｆ　ｗｈｉｃｈ　８３ｌｏｃｉ　ｗｅｒｅ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙ－
ｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄｓ（ＰＰＢ）ｗａｓ　７８．３ ％．Ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ，ｔｈｅ　ｓｅｖｅｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｘ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ｔｏｇｅｔｈｅｒ　ｗｈｉｃｈ　ｓｈｏｗｅｄ　Ｔａｍａｒｉｘ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｗａｓ　ａ　ｎａｔｕｒａｌ　ｓｐｅｃｉｅｓ；Ｔ．ａｕｓ－
ｔｒｏｍｏｎｇｏｌｉｃａ　ｗａｓ　ｃｌｏｓｅｒ　ｔｏ　Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ａｌｓｏ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｏｔａｎｉｃａｌ　ｏｒｉｇｉｎ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｃｉｓ
Ｃａｃｕｍｅｎ　ｗａｓ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｉｎ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｍａｒｋｅｔ　ａｔ　ｐｒｅｓｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ＩＳＳＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｇｅｒｍ－
ｐｌａｓｍ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｏｔａｎｉｃａｌ　ｏｒｉｇｉｎ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅ－
ｌａｔｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ，ｔｈｕｓ　ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ　ａ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕ－
ｍｅｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ；Ｔａｍａｒｉｘ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ＩＳＳＲ；ｇｅｒｍｐｌａｓｍ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
＊ △基金项目：国家高技术研究发展计划项目（２０１３ＡＡ０９３００１）；山东省高等学校科技计划项目（Ｊ１２ＬＭ０５）资助
　作者简介：孙稚颖（１９７１－），女，博士，副教授，从事药用植物资源与鉴定工作。
＊通讯作者：周凤琴，女，教授。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｆｑ＿ｓｄｚｙ＠１６３．ｃｏｍ
　　收稿日期：２０１５－１２－２６
DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2016.04.011
４期 孙稚颖，等：西河柳种质遗传多样性的ＩＳＳＲ分析 ６１　
　　中药材西河柳具有发表透疹，祛风除湿的功
效，现代药理研究表明还具有抑菌、止咳、解热镇
痛、抗氧化、保肝、抗肿瘤等作用［１］。据中国药典
（２０１５年版）［２］，其来源为柽柳科植物柽柳（Ｔａｍａ－
ｒｉｘ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌｏｕｒ．）的干燥细嫩枝叶。除药用外，
柽柳因其具有抗盐、抗旱、耐水湿的生物学特
性［３］，是极有推广价值的盐碱地、沿海滩涂沙荒地
造林绿化的树种之一［４］，因而具有显著的生态学
作用。柽柳分布很广，但保存较好、较大的群体并
不多见，目前在黄河三角洲地区发现了成片的、人
为破坏较少的大面积天然群体。同时，同属的多
枝柽柳在该区也有大量分布。国内外对柽柳属植
物的生物学特征及种群生态的研究较多，内容涉
及资源分布、森林培育、种群生态、生理和生物学
等各个方面［５－９］。但关于柽柳或其同属植物的遗
传多样性研究仅有零星报道［１０－１１］。
简单重复序列间扩增（ＩＳＳＲ）是Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ
等［１２］在１９９４年提出的１种ＤＮＡ分子标记，该标
记具有较长的引物序列，退火温度高，表现出较好
的稳定性，且结合位点丰富，可以检测到基因组中
多个位点的差异，能够揭示出比限制性片段长度
多态 性 （ＲＦＬＰ）、随 机 引 物 扩 增 多 态 ＤＮＡ
（ＲＡＰＤ）、ＳＳＲ 更多的多态性信息［１３］。该标记已
经应用于莪术、栝楼、石斛、丹参［１４－１６］等多种药用
植物遗传多样性与亲缘关系的研究，并取得了较
好的成效。本文选用ＩＳＳＲ 标记技术研究了柽柳
群体及其相关物种在ＤＮＡ水平上的差异，分析了
其种质资源遗传多样性，旨为西河柳药材种质资
源鉴定、亲缘关系分析、育种及资源合理开发利用
提供参考。
１　材料和方法
１．１　材料
野外采集实验样品新鲜嫩枝叶（除２份西河
柳药材购自药材市场），硅胶干燥保存备用。供试
样品来源见表１，全部由山东中医药大学周凤琴教
授鉴定。
表１　实验材料及来源
Ｔａｂｌｅ　１　Ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ
编号 代码 类群 拉丁名 采集地
１ ＣＬ１ 柽柳１　 Ｔａｍａｒｉｘ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 山东省东营市河口区
２ ＣＬ２ 柽柳２　 Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 山东省东营市河口区
３ ＭＣ１ 密柽１　 Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 山东省东营市
４ ＭＣ２ 密柽２　 Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 山东省东营市
５ ＭＣ４ 密柽４　 Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 山东省东营市
６ ＧＭ 甘蒙柽柳 Ｔ．ａｕｓｔｒｏｍｏｎｇｏｌｉｃａ 山东东营盐生植物种质园
７ ＤＺ 多枝柽柳 Ｔ．ｒａｍｏｓｉｓｓｍａ 山东省东营市河口区
８ ＭＣ５ 密柽５　 Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 山东省东营市
９ ＸＨ 西河柳１　 Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ 河北安国药材市场（产于河北）
１０ ＭＣ３ 密柽３　 Ｔ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 山东省东营市
１１ ＸＣＬ 西河柳２　 Ｔａｍａｒｉｃｉｓ　Ｃａｃｕｍｅｎ 安徽亳州药材市场（产于新疆）
１．２　仪器和试剂
混合型震荡碾磨仪（Ｒｅｔｓｃｈ　ＭＭ４００）、小型台
式离心机（Ｓｉｇｍａ－１－１４型，Ｇｅｒｍａｎｙ）、数显恒温水
浴锅（ＨＨ－２型，国华电器有限公司）、ＰＣＲ 仪
（ＢＩＯＲＡＤ　ＰＴＣ　０２００，Ｍｅｘｉｃｏ）、电泳仪（ＤＹＹⅢ型
电泳仪，北京六一仪器厂）、凝胶紫外成像系统
（ＢＩＯＲＡＤ）、ＳＡＮＹＯ制冰机（ＩＣＥ　ＭＡＫＥＲ　ＳＩＭ－
Ｆ１４０型）。
ｄＮＴＰ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶（北京赛百盛）、引物
（参照加拿大哥伦比亚大学 ＵＢＣ公司２００６年公
布的ＩＳＳＲ 引物序列，由上海 Ｓａｎｇｏｎ合成）、
ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ（大连赛恩斯公司）、琼脂糖、ＥＢ
（上海Ｓａｎｇｏｎ公司），其余试剂均为分析纯。
１．３　ＤＮＡ的提取
取样约２０ｍｇ，液氮研磨后，利用植物 ＤＮＡ
提取试剂盒（天根生物技术公司）提取总ＤＮＡ。
１．４　ＰＣＲ扩增及产物检测
反应体系包括模板ＤＮＡ　１．０μＬ（约３０ｎｇ），
１．０μＬ　ｐｒｉｍｅｒ（１０μｍｏｌ／Ｌ），２．５μＬ　ＰＣＲ　Ｂｕｆｆｅｒ
（１０×）（Ｍｇ２＋ｆｒｅｅ），Ｍｇ２＋ ２μＬ（２５ｍｍｏｌ／Ｌ），
ｄＮＴＰｓ混合物２μＬ（２．５ｍｍｏｌ／Ｌ），Ｔａｑ　ＤＮＡ聚
合酶１．０Ｕ，最后加灭菌双蒸水至２５μＬ体积。反
应程序：９４℃５ｍｉｎ；９４℃０．５ｍｉｎ，５５℃１ｍｉｎ，
７２℃１．５ｍｉｎ，３５个循环后于７２℃延伸１０ｍｉｎ，
６２　 中　国　海　洋　药　物 ３５卷
扩增完成后置于１０℃保存。扩增产物于１．５％琼
脂糖（内含１μｇ／ｍＬ　ＥＢ）凝胶电泳检测（５Ｖ／ｃｍ　１
～２ｈ），用ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ作分子量标记，观察记
录结果，分析扩增谱带。
１．５　数据分析及品种的鉴定
每一条引物均重复扩增、电泳３次，选取稳定
清晰的条带进行统计分析。根据条带的迁移率及
其有无统计所有的二元数据，“有”赋值为１（包括
强带和重复性好的弱带），“无”赋值为０，从而得到
原始数据矩阵，计算多态性条带比率，用 ＮＴＳＹＳ－
ｐｃ软件（Ｖｅｒｓｉｏｎ　２．００）计算各品种间的Ｊａｃｃａｒｄ
遗传相似系数，按非加权配对算术平均法（ＵＰＧ－
ＭＡ）建立各品种间的聚类图。
２　结果
２．１　ＩＳＳＲ扩增产物的多态性
从５０个加拿大哥伦比亚大学（ＵＢＳ）设计的
引物９＃系列筛选出１４个能扩增出清晰且具多态
性条带的引物，用以对１１份样品材料进行扩增，
结果扩增出１０６个条带，其中多态带为８３条，占
总扩增条带数的７８．３％，表明所研究样本间具有
较丰富的遗传多态性，见表２。扩增条带长度范围
多集中在２５０～１　０００ｂｐ。由于ＩＳＳＲ揭示的是基
因组ＤＮＡ在酶切位点和其后的选择性碱基的变
异，所以不同引物的ＩＳＳＲ产物图谱不同；而同一
引物，不同供试材料间扩增带也不相同，从而直观
表现出供试样品之间在ＤＮＡ水平上存在的差异
（见图１）。
图１　引物ＵＢＣ８１１（左）、ＵＢＣ８３６（右）扩增的ＩＳＳＲ带谱
Ｆｉｇ．１　ＩＳＳＲ　ｂａｎｄｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｐｒｉｍｅｒ　ＵＢＣ８１１（Ｌｅｆｔ）ａｎｄ　ＵＢＣ８３６（Ｒｉｇｈｔ）
１、ＣＬ１；２、ＣＬ２；３、ＭＣ１；４、ＭＣ２；５、ＭＣ４；６、ＧＭ；７、ＤＺ；８、ＭＣ５；９、ＸＨ；１０、ＭＣ３；１１、ＸＣＬ
表２　ＩＳＳＲ分析所用引物及其扩增结果
Ｔａｂｌｅ　２　Ｐｒｉｍｅｒｓ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ＩＳＳＲ　ａｎｄ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ
序号 引物 序列（５＇→３＇） 位点数目 多态位点 多态性％
１ ＵＢＣ８０８ （ＡＧ）８Ｃ　 ５　 ４　 ８０　
２ ＵＢＣ８０９ （ＡＧ）８Ｇ　 ５　 ２　 ４０　
３ ＵＢＣ８１１ （ＧＡ）８Ｃ　 １１　 １０　 ９０．９
４ ＵＢＣ８１２ （ＧＡ）８Ａ　 ７　 ６　 ８５．７
５ ＵＢＣ８２７ （ＡＣ）８Ｇ　 ３　 ３　 １００　
６ ＵＢＣ８３４ （ＡＧ）８ＹＴ　 １０　 ８　 ８０　
７ ＵＢＣ８３６ （ＡＧ）８ＹＡ　 ４　 ２　 ５０　
８ ＵＢＣ８４２ （ＧＡ）８ＹＧ　 １２　 １０　 ８３．３
９ ＵＢＣ８５５ （ＡＣ）８ＹＴ　 ６　 ５　 ８３．３
１０ ＵＢＣ８５６ （ＡＣ）８ＹＡ　 ８　 ４　 ５０　
１１ ＵＢＣ８５７ （ＡＣ）８ＹＧ　 ８　 ７　 ８７．５
１２ ＵＢＣ８６８ （ＧＧＡ）６ ４　 １　 ２５　
１３ ＵＢＣ８７３ （ＧＡＣＡ）４ １４　 １１　 ７８．６
１４ ＵＢＣ８８０ （ＧＧＡＧＡ）３ ８　 ８　 １００
４期 孙稚颖，等：西河柳种质遗传多样性的ＩＳＳＲ分析 ６３　
２．２　柽柳与近缘种不同类群的聚类分析
由聚类图（见图２）看出，多枝柽柳、从河北安
国市场所购西河柳药材与柽柳、密柽、甘蒙柽柳以
及新疆产柽柳相差很远，在遗传相似系数为０．５５
处即分开。来自山东东营不同居群的柽柳与密柽
首先聚在一起，表明亲缘关系较近。在遗传相似
系数为０．７６处，各样本被分为４组，第一组包括柽
柳与密柽不同居群样本；第二组为甘蒙柽柳；第三
组为购自安徽亳州药材市场的西河柳药材，产自
新疆；第四组包括多枝柽柳与购自河北安国药材
市场的药材西河柳样本。
图２　柽柳及其近缘种基于ＩＳＳＲ分析数据的聚类图
Ｆｉｇ．２　Ｃｌｕｓｔｅｒ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　Ｔａｍａｒｉｘ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ＩＳＳＲ　ｄａｔａ
３　讨论
从本研究聚类图中可以明显看出，柽柳是１
个非常自然的物种，来自不同居群，形态上花枝有
疏密之分的样本，彼此都聚在了一起。甘蒙柽柳
曾经被认为是中国柽柳的异名［１７］或独立的种［１８］，
基于分支分类结果并结合分子证据，张道远也认
为甘蒙柽柳是独立于中国柽柳的种［１９］。从以上分
析可以看出，甘蒙柽柳与柽柳具有较近的亲缘关
系。本研究结果支持这一观点，两者是近缘种。
据中国药典记载，西河柳原植物为柽柳，但本
研究发现目前药材市场中西河柳药材来源较混
乱，在聚类图中，购自河北安国市场的西河柳药材
最先与多枝柽柳聚在一起，这表明，其来源很可能
就是多枝柽柳，而不是柽柳；购自安徽亳州药材市
场的西河柳药材，独立成一支，从本研究判断，其
原植物既不是柽柳，也不是多枝柽柳，因其产自新
疆，而新疆柽柳属植物种类丰富，所以其原植物尚
需进一步研究确定。柽柳属植物外形特征相似，
均为小型鳞片叶，加之花器官很小，极易天然杂
交，因而天然杂交种较多，变异多样，给分类造成
极大困难，所以在西河柳采收时，极易将同属其他
近缘物种采收混用，借助分子手段进行分析鉴定，
可以确保药材来源的真实可靠。另外，由于该属
植物混用做西河柳的现象比较常见，因而有必要
对柽柳与其同属多种植物的化学成分及药理药效
方面的差异进行深入研究分析。
遗传多样性是生物所携带遗传信息的总和，
是居群生存、发展和进化的基础［２０］。黄河三角洲
滨海湿地是环渤海地区盐渍化面积最大、生态最
脆弱的地区，也是我国三大盐渍化地区之一，具有
含盐高、面积大、增长快的特点［２１］。东营市河口区
是黄河三角洲的前沿城市，拥有柽柳林场面积６．４
万ｈｍ２，柽柳的分布对于该地区的生态环境具有
非常重要的生态学意义，但同时品种的选育改良
也是亟需的。从所研究的柽柳不同居群的７份样
本可以看出，不同样本间遗传相似系数不同，遗传
距离最近的为密柽１和密柽５，遗传相似系数为
０．９６３　９，而遗传距离最远的为密柽２与密柽４，遗
传相似度为０．８１０　８。ＩＳＳＲ作为一种分子标记，
能较好的反映物种之间的亲缘关系和柽柳不同居
群间的遗传多样性，因而既可以用于西河柳药材
真伪鉴定，也可以更好的指导柽柳种质资源的品
种选育与优质品种资源在地区间的推广种植。
６４　 中　国　海　洋　药　物 ３５卷
参考文献
［１］　张媛，屠鹏飞．柽柳属药用植物研究进展［Ｊ］．中草药，２００８，
３９（６）：９４７－９５１．
［２］　国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｓ］．北京：化
学工业出版社，２０１５：１３０．
［３］　郑万钧．中国树木志［Ｍ］．２卷，北京：中国林业出版社，
１９８５．
［４］　王景志，盖文杰，刘岩山，等．柽柳的绿化价值与栽培［Ｊ］．林
业实用技术，２００２，８：１１－１２．
［５］　李鹏．山东省柽柳资源现状与开发利用探讨［Ｊ］．山东林业科
技，２００３，４：５１－５２．
［６］　曾凡江，张希明，李小明．柽柳的水分生理特性研究进展［Ｊ］．
应用生态学报，２００２，１３（５）：６１１－６１４．
［７］　张思树，戚德仁，赵延茂，等．滨海盐碱地柽柳栽植及柽柳绿
篱养成技术研究［Ｊ］．山东林业科技，１９９７，１１０（增刊）：３５－
３８．
［８］　王仲礼，刘林德，方炎明．黄河三角洲柽柳的开花特性及传粉
生态学研究［Ｊ］．热带亚热带植物学报，２００５，１３（４）：３５３－
３５７．
［９］　王斌，李国强，管华诗．柽柳挥发油成分及无机元素的 ＧＣ／
ＭＳ和ＩＣＰ－ＭＳ分析［Ｊ］．质谱学报，２００７，２８（３）：１６１－１６４．
［１０］　张娟，尹林克，张道远．刚毛柽柳天然居群遗传多样性初探
［Ｊ］．云南植物研究，２００３，２５（５）：５５７－５６２．
［１１］　赵景奎，徐立安，解荷峰，等．黄河三角洲柽柳群体遗传多样
性ＲＡＰＤ分析［Ｊ］．南京林业大学学报（自然科学版），２００８，
３２（５）：５６－６０．
［１２］　Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ　Ｅ，Ｒａｆａｌｓｋｉ　Ａ，Ｌａｂｕｄａ　Ｄ．Ｇｅｎｏｍｅ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｉｎｇ
ｂｙ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔｓ （ＳＳＲ）ａｎｃｈｏｒｅｄ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，１９９４，２０（２）：
１７６．
［１３］　王明明，宋振巧，王建华．ＩＳＳＲ标记技术及其在药用植物遗
传育种中的应用［Ｊ］．中草药，２００７，３８（１）：１３４－１３７．
［１４］　王晓慧，汤晓闯，杨恩秀，等．莪术不同种和居群的ＩＳＳＲ－
ＰＣＲ分析［Ｊ］．中国中药杂志，２００８，３３（１８）：２０３７－２０４０．
［１５］　高燕会，李慧慧，朱玉球，等．基于ＩＳＳＲ的栝楼遗传多样性
分析［Ｊ］．中草药，２０１１，４２（２）：３６３－３６６．
［１６］　袁佐清，张建勇，刘涛．石斛属植物遗传多样性的简单重复
间系列分析［Ｊ］．时珍国医国药，２００９，２０（１０）：４３５－４３６．
［１７］　Ｂａｕｍ　Ｂ　Ｒ．Ｔｈｅ　ｇｎｅｕｓ　Ｔａｍａｒｉｘ［Ｍ］．Ｉｓｒａｅｌ：Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ　Ａｃ－
ａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，１９７８：１２－１７．
［１８］　张鹏云，张耀甲．柽柳科．中国植物志第５０卷２分册［Ｍ］．
北京：科学出版社，１９９０：１４２－１７７．
［１９］　张道远．中国柽柳属植物的分支分类研究［Ｊ］．云南植物研
究，２００４，２６（３）：２７５－２８２．
［２０］　陈灵芝．中国的生物多样性现状及其保护对策［Ｍ］．北京：
科学出版社，１９９３：９３－１１３．
［２１］　邵秋玲，谢小丁，李法曾．黄河三角洲国家级自然保护区植
物区系研究［Ｊ］．西北植物学报，２００２，２２（４）：９４７－９５１．