全 文 ：第 27卷第 6期
2008年 6月 　　　　　　　　　
分析测试学报
FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis)　　　　　　　　　
Vol.27No.6
623～ 626
收稿日期: 2007-09-03;修回日期:2007-09-18
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30772643)
第一作者:陈建新(1967-), 男 , 湖南祁东人 , 副研究员 , 博士研究生 , Tel:020-88257119, E-mail:jxchen@scau.edu.cn
绵马贯众抗禽流感病毒活性部位的
高效液相色谱 -质谱法分析
陈建新1, 3 , 曾振灵 1 , 方炳虎 1 , 杨运云 2 , 牟德海 2 , 叶文才 3
(1.华南农业大学　兽医学院　广东省兽药研制与安全评价重点实验室 , 广东　广州 　510642;
2.中国广州分析测试中心 , 广东　广州　510070;3.暨南大学　药学院 , 广东　广州　510632)
摘　要:分别在 ESI(+)、 ESI(-)和 APCI(+)3种电离检测模式下对绵马贯众抗禽流感病毒活性部位进行
了液相色谱分离及离子阱质谱检测 , 共有 21种组分能在 2种或 3种检测模式下被同时检测到。比较分析 3种
检测模式下得到的总离子流色谱图及各色谱峰的多级质谱图 , 并参考相关文献 , 推测活性部位中含有 15种
间苯三酚衍生物 , 是绵马贯众抗 AIV活性部位的主要成分。
关键词:绵马贯众;抗禽流感病毒;高效液相色谱 -质谱;间苯三酚衍生物
中图分类号:O657.63;R978.7　　文献标识码:A　　文章编号:1004-4957(2008)06-0623-04
AnalysisofChemicalConstituentsoftheAnti-avianInfluenzaVirus
SiteofDryopterisCrassirhizomabyHPLC-ESI/APCI-MSn
CHENJian-xin1, 3 , ZENGZhen-ling1 , FANGBing-hu1 ,
YANGYun-yun2 , MUDe-hai2 , YEWen-cai3
(1.GuangdongProvincialKeyLaboratoryofVeterinaryPharmaceuticsDevelopmentandSafetyEvaluation,
CollegeofVeterinaryMedicine, SouthChinaAgriculturalUniversity, Guangzhou　510642, China;
2.ChinaNationalAnalyticalCenter(Guangzhou), Guangzhou　510070, China;3.Collegeof
Pharmacy, JinanUniversity, Guangzhou　510632, China)
Abstract:Theanti-AIVsiteofDryopterisCrassirhizoma(DC)wasanalyzedbyHPLC-IT-MSunder
threediferentionizationmodes, viz.ESI(+), ESI(-)andAPCI(+), respectively.Twenty-
oneconstituentshadbeendetectedsimultaneouslyundertwoorthreeionizationmodes.Bycomparing
thetotalionchromatogramsandthechromatographicpeaksofmultistagemassspectraobtainedunder
threediferentdetectionmodes, togetherwiththerelatedreferences, itwasfoundthattherewere15
phlorophenonederivativesintheactivesiteofDCandwereconfirmedtobethemainconstituentsof
theanti-avianinfluenzavirussiteofDC.
Keywords:DryopterisCrassirhizoma;anti-avianinfluenzavirus(AIV);liquidchromatography-
tandemmasspectrometry(HPLC-MSn);phlorophenonederivatives
绵马贯众系鳞毛蕨科植物 DryopteriscrassirhizomaNakai的根茎 , 是中药贯众的主流品种 , 具有清热
解毒 、 驱虫 、止血等功效 , 现代研究表明 , 绵马贯众具有抗肿瘤 、 抗疟 、 抗病毒等活性[ 1] 。本课题组
利用鸡胚试验发现绵马贯众醇提物的正丁醇萃取物对禽流感 H9N2亚型病毒具有显著抑制作用 [ 2] 。为
探明绵马贯众抗禽流感病毒(avianinfluenzavirus, AIV)活性部位的化学成分 , 本文采用高效液相色谱 -
离子阱质谱 , 对其活性部位 ———正丁醇萃取物进行了初步分析 , 获得了该活性部位主要组分的相对分
子质量信息 , 并根据色谱组分的多级质谱推测间苯三酚类衍生物是其活性部位的主要成分 , 为绵马贯
众抗流感病毒药效成分的深入研究及绵马贯众药材的 “色谱 -质谱” 指纹图谱的构建提供依据 。
1　实验部分
1.1　试剂与样品
乙腈为色谱纯 , 水为 MiliQ超纯水 , 甲酸 、 石油醚(60 ～ 90 ℃沸程)、乙酸乙酯 、 正丁醇及体积分
1
分析测试学报 第 27卷
数为 95%的乙醇均为分析纯。绵马贯众药材由北京中医药大学中药学院高增平副研究员鉴定 。
1.2　样品处理
将 50g绵马贯众粉碎成粗粉 , 用 500mL体积分数为 50%的乙醇水溶液分 3次加热回流提取 , 合
并提取液 , 减压旋蒸至膏状后用 100mL水溶解 , 依次用石油醚 、 乙酸乙酯 、正丁醇各萃取 3次 , 取对
禽流感病毒有显著抑制活性的正丁醇萃取部位进行液相色谱 -质谱分析。
1.3　仪器及实验条件
美国 Agilent公司 1100型液相色谱 -离子阱质谱联用仪。色谱柱:XDB-C18柱(150 mm×2.1 mm
i.d., 3.5 μm);二元梯度洗脱 , A相为乙腈 , B相为水 , 均含 1%(体积分数)甲酸;梯度程序:20%
A保持 2min, 逐渐增加 A比例 , 至 50 min时 A为 100%, 保持 10 min;流速:0.5 mL/min;进样量
20 μL。
质谱条件:ESI离子源 , 正 、负离子模式检测;APCI离子源 , 正离子模式检测;雾化气 N2 , 压力
276kPa;干燥气 N2 , 流速 9L/min;质量扫描范围 100 ～ 1 000u;自动三级质谱(自动选择最强离子进
行源内诱导裂解)。
图 1　绵马贯众正丁醇萃取物在不同电离和
检测模式下的总离子流色谱图
Fig.1　TICofn-butanolextractofDryopteris
Crassirhizoma(DC)underdiferent
ionizationanddetectionmodes
A.APCI-MS(+);B.ESI-MS(+);C.ESI-MS(-)
2　结果与讨论
2.1　不同电离方式得到的总离子流色谱及组
分质谱比较
尽管色谱分离条件完全一致 , 但不同电离模式
得到的总离子流色谱(见图 1)及各色谱组分的质谱
有显著差异 。 3种电离检测模式得到的色谱峰数分别
为:ESI(+)共 52个 、 ESI(-)共 38个 、 APCI(+)
共 20个 。ESI(-)检测到的大部分组分在色谱图的
后半段 , 而 ESI(+)检测到的组分在色谱图上的分
布较均匀 , 表明贯众活性部位组分较易在 ESI电离
源中捕获 H+及 Na+, 但极性较大组分在 ESI电离源
中不易失去质子;APCI(+)检测到的组分较少 , 表
明大部分组分在 APCI电离源中不能电离;APCI
(-)检测到的组分更少 。大部分组分不能在 3种电
离模式下同时被检出 , 表 1比较了 3种检测模式在
同一保留时间检测到的一级质谱离子 , 共有 8个色
谱组分能在 APCI(+)、 ESI(+)和 ESI(-)3种电离
模式下同时被检出 , APCI(+)和 ESI(+)检测到的
离子质量相同 , 且与 ESI(-)检测到的离子质量相
差 2;共有 7个组分能在 APCI(+)和 ESI(+)2种电
离模式下同时检测到相同质量的离子 , 共有 3个组
分能在 APCI(+)和 ESI(-)两种电离模式下同时检
测到质量数相差 2的离子。此外 , ESI(+)检测模式
得到的色谱图中共有 7个组分的一级质谱包含质量
数相差 22的离子对 , 很可能是组分分子电离同时生
成了 H+和 Na+的加合离子 。比较 3种电离模式得到
的色谱图及其质谱图 , 推测绵马贯众活性部位至少
含 21种成分 , 其相对分子质量见表 1。在 APCI(+)检测模式下 , 保留时间 37.5、 39.6和 41.9 min的
色谱组分均检测到 m/z405离子 , 在 ESI(-)检测模式下 , 对应保留时间的色谱组分均检测到 m/z403
离子 , 而且它们具有相同的二级质谱图 , 表明它们是同分异构体 , 相对分子质量均为 404u。此外 , 相
对分子质量为 418、 612 u的组分也存在同分异构体 。
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第 6期 陈建新等:绵马贯众抗禽流感病毒活性部位的高效液相色谱 -质谱法分析
表 1　2种或 3种电离模式能同时检测出的贯众提取物组分
Table1　ResultsofHPLC-MSanalysisinESI/APCIionizationmodesforDCextract
No RetentiontimetR/min MS
1 majorionm/z
APCI(+) ESI(+) ESI(-) Mr　
1 0.8(APCI), 1.0(ESI+) 266＊ , 248 381, 266＊ , 365 265
2 11.1(APCI), 10.8(ESI+) 355＊ 355＊ , 377, 311 354
3 12.8(APCI), 12.6(ESI+) 453＊ , 333, 373 453＊ , 362, 340 452
4 15.2(APCI), 14.9(ESI+), 14.8(ESI-) 349＊ , 331 349＊ , 371, 387 695, 347＊ 348
5 17.3(APCI), 17.3(ESI+) 453＊ , 317, 306 475, 453＊ 453
6 18.8(APCI), 18.6(ESI+) 289＊ , 435, 451 457, 597, 289＊ 288
7 29.6(APCI), 29.5(ESI+) 295＊ 353, 295＊ , 277 294
8 31.3(APCI), 31.2(ESI-) 353, 311, 557＊ 555＊ 556
9 35.2(APCI), 34.9(ESI+), 34.9(ESI-) 391＊ , 451 355, 391＊ 389＊ , 581 390
10 37.5(APCI), 37.1(ESI-) 405＊ 403＊ , 375 404
11 38.8(APCI), 38.5(ESI+), 38.5(ESI-) 419＊ 419＊ 417＊ 418
12 39.6(APCI), 39.4(ESI+), 39.3(ESI-) 405＊ , 295, 209 405＊ , 295 403＊ 404
13 41.9(APCI), 41.5(ESI+), 41.5(ESI-) 405＊ 405＊ , 427, 419 403＊ 404
14 42.9(APCI), 42.7(ESI+) 413＊ 413＊ , 453 412
15 44.7(APCI), 44.3(ESI+), 44.3(ESI-) 419＊ 419＊ , 377, 355 417＊ 418
16 47.3(APCI), 47.0, 47.3(ESI+), 46.6, 46.9(ESI-) 463＊ , 405, 613＊ 613＊ , 585＊ , 463＊ , 485 583＊ , 611＊ , 585 462, 612, 584
17 47.9(APCI), 47.5(ESI-) 627＊ , 419 625＊ 626
18 49.0(APCI), 48.5(ESI-) 599＊ 597＊ , 611 598
19 50.0(APCI), 49.5(ESI+), 49.0, 49.5(ESI-) 613＊ , 405, 417 613＊ 639, 611＊ 612
　　＊basedionsfordeterminingrelativemolecularmassofconstituents(推测组分相对分子质量依据的离子)
2.2　多聚间苯三酚类衍生物的结构推测
已有的研究表明 [ 3-4] , 多聚间苯三酚类衍生物在绵马属植物中分布广泛 , 是绵马属植物的标志成
分 。本实验利用 HPLC-ESI/APCI-MS联用分析贯众活性部位 , 得到了活性部位的总离子流色谱图及
各色谱组分的多级质谱图 。在 ESI(+)和 APCI(+)的检测模式下 , 多个色谱组分的质谱包含 m/z191、
193、 197、 209、 211、 223、 391、 403、 417、 431等间苯三酚衍生物的特征离子;在 ESI(-)的检测模
式下 , 多个色谱组分的质谱包含 m/z195、 207、 209、 211、 389、 401、 403、 417、 429等间苯三酚衍生
物的特征离子。在前人对绵马属植物中间苯三酚类衍生物化学结构的研究基础上 [ 5-6] , 本文根据贯众
活性部位色谱组分的质谱图对含有以上特征离子的组分进行结构推导 , 推测绵马贯众活性部位含有 15
种多聚间苯三酚类衍生物 , 其名称(相对分子质量)初步鉴定为:根皮吡喃酮 PB(348)(phloropyrone
PB)、黄绵马酸 AA(390)(flavaspidicacidAA)、白绵马素 AA(404)(albaspidinAA)、 绵马素 AA(404)
(aspidinAA)、绵马素 AP(418)(aspidinAP)、 黄绵马酸 AB(418)(flavaspidicacidAB)、 绵马酸 ABA
(598)(flicicacidABA)、绵马根酸 ABA(612)(filixicacidABA)、 三环黄绵马酸 APB(612)(trisflavas-
pidicacidAPB)、绵马酸 ABB(626)(flicicacidABB)、 绵马酸 PBP(640)(flicicacidBPB)、 东北贯众素
ABAA(792)(dryocrassinABAA)、 东北贯众素 ABPP(820)(dryocrassinABPP)、 东北贯众素 ABBP
(834)(dryocrassinABBP)、 东北贯众素 PBBP(848)(dryocrassinPBBP)等 。图 2A是 ESI(-)检测模式
下保留时间 46.9min色谱组分的一级质谱 , B和 C分别是其二级和三级质谱;图 3A是 APCI(+)检测
模式下对应保留时间(47.3 min)色谱组分的一级质谱 , B和 C分别是其二级和三级质谱 。根据质谱推
测该组分为三环黄绵马酸 APB(Mr=612), 图 4表示其在 APCI(+)检测模式下可能的质谱裂解途径 。
3种质谱检测模式均检测到贯众药效部位含有多种多聚间苯三酚衍生物。 APCI(+)和 ESI(-)2种
检测模式得到的总离子流色谱中 , 含有多聚间苯三酚衍生物的组分峰面积分别占全部组分色谱峰面积
的 61.6%和 77.8%, 表明多聚间苯三酚类衍生物是绵马贯众抗流感病毒活性部位的主要成分 。
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分析测试学报 第 27卷
图 4　三环黄绵马酸 APB在 APCI(+)模式下可能
的电离裂解途径
Fig.4　FragmentationschemeofAPBinAPCIpositivemode
3　结　论
在相同的色谱分离条件下 , 同时运用多种
质谱电离模式(ESI/APCI(±))对绵马贯众抗病
毒活性部位进行分析 , 利用不同检测模式下得
到的 [ M +H] +、 [ M +Na] +及 [ M -H] -相
互印证 , 可以较准确地推测出活性部位各组分
的相对分子质量 。
一般而言 , 仅凭质谱很难确定物质的结
构 。但由于天然产物常含有骨架结构相同的同
系物 , 它们具有相同的质谱裂解规律 , 基于未
知组分与已知组分质谱的异同 , 往往可以对未
知组分的结构进行初步鉴定。本文利用 HPLC
-MSn初步检测到绵马贯众抗病毒活性部位含
有 15种多聚间苯三酚类衍生物 , 其中根皮吡喃
酮等 5种在绵马属其它植物中含有 , 但在绵马
贯众中未见报道 。
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