全 文 ：201 0年
第4 2卷 第 7 期
实 用 中 医 内 科 杂 志
O JU R L A NO F PR AC TIC L A TR AI D T !O L A NC I H N ES EI N T ER NL A M EDIC I NE
绵马贯众等五味中药抗甲型流感病毒 F MI 株的实验研究
杨关林 , 张 杨 , 南春红 ,孙科峰 , 徐艳玲 , 赵克明
(辽宁中医药大学附属医院 ,辽宁沈阳 n o 32)
摘 要 : 【目的〕优选出安全性高、 抗病毒疗效好的中药 。 【方法 〕采用鸡胚体外杭病毒实验方法对绵马贯众 、黄答 、
金银花 、 苦参、 连翘五味药进行 了实验研究 。 【结果〕绵马贯众时 FM I 病毒的预防及治疗作用均优于其他四味中药 。
关 键 词 :绵马贯众 ; FM I 病毒
中图分类号 : R 一 33 文献标识码 : ^ d o i : 10 . 396 9 j/ . i s s n . 167 1 一 7 5 13 . 20 10 . 07 . 0 1
S t u d y O n In h ib it o yr E f e e t o f F iv e Kin d s of T rad it io n a l C h in e s e l M e d ie in e
In e lu d i n g D yr o Pt e r js C ar s s irh iz o m a O n In f lu e n z a A V i r u s F M I S t r a in
Y A N G G u a n 一 l i n , Z H A N G Y a n g , N A N C h u n 一 h o n g , S U N K e 一 fe n g , X U Y a n 一 l in g , Z H A O K e 一 m i n g
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A b s t r a e t : [ O b’e e r沁 ]W a s t o s e l e e t a k i n d o f tar d i it o n a l e h i n e s e m e d i e i n e t h a t w a s s a fe w e l l a n d e fe e t i v e .
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K e y W o dr
s : d砂o P t e ir s e r a s s i ht i z o m a : FM I s tar i n
本实验采用鸡胚体外抗病毒实验方法评价绵马 参 、 连翘制备成 1酬 m L 溶液 。 以上各药材提取物经
贯众 、黄芬 、金银花 、苦参 、连翘五味 中药抗鼠肺病毒 高速离心机 40 0 r/ im n 离心 so m in , 取上清液 , 高温
F M I 株的疗效及安全性 , 旨在优选 出安全性高 、 抗病 高压灭菌后 4℃冷藏备用 。
毒疗效好的 中药 。 2 . 2 流感病毒增毒及其在 鸡胚 上半数感 染量 的 测
1 实验材料 定 将病毒原液接种于局部消毒后的 9 日龄 S P F 鸡
1
.
1 药物及主要试剂 绵马贯众 、黄荃 、 金银花 、 苦 胚尿囊腔每胚接种 0 . l m L , 石蜡封 口 , 3 ℃ 一 35 ℃ 温
参 、 连翘饮片均购于沈阳众意愿大药房 。 阳性对照药 箱孵育 48 h , 4℃ 过夜 。 收取尿囊液 , 红细胞凝集试验
利巴韦林注射液 、 双黄连 口服液 。 测血凝滴度 。 将 流感病毒系 列对数稀释 ( 10 一 ’ -
1
.
2 病 毒 甲型流感病毒鼠肺适应株 夕 FM I 4/ 7 10 一 12 ) ,分别接种在事先标记好的鸡胚尿囊腔 内 , 每
( H I NI )
, 中国预防医学科学院病毒研究所提供 , 冻 个浓度接种 4 只鸡胚 , 0 . Z m口只 , 并做生理盐水对
存于辽宁中医药大学病毒室 , 经鼠肺 、鸡胚传代后为 照 。 将注射 了流感病毒的鸡胚放人 3 ℃ 一 35 ℃ 温
FM I M g E Z M I E 3 M Z4E M I E 7
。 箱内 , 4 8 h 后取 出 , 放人 4 ℃ 冰箱 内过夜 : 收取尿囊
1
.
3 鸡 胚 9 日龄尼克白种鸡胚 , SP F 级 , 购于辽 液 , 每胚 0 . l m L 依次加人作好标记的血凝板上 , 再
宁省益康生物制品厂 。 加人预先配制好的 1% 鸡血球 0 . l m L , 轻摇后 4 o m in
1
.
4 1% 鸡红细胞悬 液 采集健康公鸡血 , 阿氏液 观察结果 ,用 k ar b er 公式计算 。 测得 EI D S。为 1 0 一 5 ,
抗凝 ,生理盐水 15 0 r/ im n 离心洗涤 3 次 ,弃上清 , 以 实验用 lo o EI D S。 。
无菌生理盐水配制成 1% 悬液 , 4 ℃冷藏备用 。 2 . 3 药材提取物及 阳 性对照 药对鸡胚最大 无毒浓
1
.
5 仪 器 n 级生物安全柜 (美 国 B ak er 公司 , 度的测 定 用含 P (S 青霉素 G 和链霉素混合试剂 )
型号 : S以03 T X C E ) ;低温高速离心机 (德国 H er ae us , 1O % 的生理盐水将药物原液作连续 2 倍系列稀释至
型号 : iB o fu ge 28 R S ) ; 台式压力蒸汽灭菌器 (沈 阳盛 1 , 5 12 浓度 , 每次抽取 0 . Zm L 分别接种在预先作好
达生物电子设备有限公司 ) ; 电热恒温培养箱 (上海 标记的鸡胚上 ,每个浓度接种 8 个鸡胚 , 并设生理盐
跃进医疗器械厂 ) : A S 31 20 电子超声仪 。 水对照 。 将接种好的鸡胚放人 34 ℃ 温箱内孵育 72 h ,
2 实验方法川及结果 每 12 h 观察记录鸡胚存活情况 , 2h4 内死亡的鸡胚不
2
、
1 药物 的制 备 将绵马贯众 、 黄荃 、 金银花 、 苦 记人药物毒性作用致死数 。 结果见表 1 。
实 用 中 医 内 科 芍冬 志
J OU RNA L O F P RA C T I CA L T RA DI T ! O NA L CH! NE S E I N TE RNA L M E DIC INE
Jul
.
2 0 1 0
V lo
.
2 4 N o
.
7
组别
表 1 最大无毒剂 t 结果
最大无毒剂量稀释倍数 最大无毒剂量 (m扩mL )
绵马贯众组 1 : 8 1 52
金银花组 1: 64 巧 . 6
黄 芬 组 1 : 1 2 8 7 . 8
苦 参 组 1 : 64 巧 . 6
连 翘 组 1 : 64 巧 . 6
双黄连口服液组 1 : 64 23 . 4
利巴韦林组 1 : 1 1 0
2
.
4 药材提取物及 阳 性对 照 药对 甲型流感病 毒感
染鸡胚预 防作用 药物原液稀释至最大无毒剂量 , 每
胚 0 . l m L 分别接种鸡胚 ,每组 8 个鸡胚 , 37 ℃孵育
Z h
, 并设 生理 盐水 和 病 毒 对 照 : 然 后 分别 接 种
0
.
l m L l o EI D
, 的病毒悬液 ,盐水对照组注射 0 . 9%
的生理盐水 0 . l m L , 放人 37 ℃温箱 内 48 h , 再于 一
2o ℃冰箱内冷冻 l h , 抽取鸡胚尿囊液 , 测定血凝滴
度 。 结果见表 2 。
表 2 各组在最大无毒剂 l 对甲型流感病毒
感染鸡胚的预防作用
组别 n 血凝效价因子
绵马贯众组 5 1 . 0 1 34 士 0 . 7 11 04 * 份
金银花组 8 1 . 7 1 09 土 0 . 3 5 7 5 4 .
黄 荃 组 8 l . 9() 3 l 士 0 . 3 5 9 8 0 申
苦 参 组 8 2 . 0 1 60 士 0 . 15 5 8 0 ,
连 翘 组 8 1 . 9 4 0 7 士 0 . 25 12 2 .
双黄连口服液组 8 l . 9() 3 l 士 0 . 2 27 5 6 *
利巴韦林组 8 0
生理盐水组 8 0
病毒对照组 8 2 . 35 46 士 0 . 1 60 1
注 :与病毒对照组比较 , * p < 。 . 05 ;绵马贯众组与其他各中药组
及双黄连 口服液组比较 , # 尸 < 。 . 05 。
2
.
5 药材提取物及 阳性对照 药对 甲型流感 病毒感
染鸡胚治疗作用 药物原液稀释至最大无毒剂量 ,每
胚接种 0 . l m L l o EI D ,。的病毒悬液 ,每组 8 个鸡胚 ,
并设生理盐水和病毒对照 , 37 ℃孵育 Z h , 然后分别注
射各药物 0 . l m L , 对照 组注射 0 . 9% 的 生理盐水
0
.
1 m L
,放人 37 ℃ 温箱 内 48 h , 再于 一 2O ℃冰箱内冷
冻 l h , 抽取鸡胚尿囊液 ,测定血凝滴度 。 结果见表 3 。
表 3 各组在最大无毒剂 t 对甲型流感病毒
感染鸡胚的治疗作用
组别 n 血凝效价因子
绵马贯众组 8 1 . 7 902 士 0 . 15 5 80 * 毋
金银花组 8 2 . 12 89 土 0 . 1 39 35 . 口
黄 琴 组 5 1 . 97 83 士 0 . 2 6 6 8 3 * ·
苦 参 组 8 2 . 1 6 65 士 0 . 1仅抖 3 , .
连 翘 组 8 2 . 2以 1 士 0 . 0侧Xx 〕* .
双黄连口服液组 8 2 . 09 12 士 0 . 2 2 3 9 7 , .
利巴韦林组 8 0
生理盐水组 8 0
病毒对照组 8 2 . 35 46 * 0 . 16 09 1
注 :与病毒对照组比较 , * 尸 < 0 . 05 ;绵马贯众组与金银花组 、苦
参组 、 连翘组及双黄连 口服液组比较 , # p < 0 . 05 。
2
.
6 各药组在最大无毒剂量直接抑制 甲型流感病
毒的作用 用 P H 为 7 . 4 的 H an k 。 工作液将各组药
稀释至最大无毒剂量 ,每个浓度 4 支试管 , 分别加人
等量 l o IE D 50 的流感病毒 , 置 3 ℃ 一 35 ℃ 温箱中于
1
,
4
,
8
,
14
,
16
,
24 h 测各组药物不同时间点血凝滴度 ,
同时设病毒对照和 Han k g 液对照 。 结果见表 4 。
表 4 各组在最大无毒剂 t 对甲型流感病毒
的直接抑制作用
平均血凝滴度组别—-一 ’ lh 4h s h 14h 16h 料 h绵马贯众组 1 : 57 . 5 1 : 灯 . 5 1 : 13 . 75 1: 14 . 375 1 : 23 . 125 1: 印金银花组 l : 75 1 : 1的 l : 45 1: 4 . 37 5 1: 95 1: 85黄琴组 l : 80 1 : 83 . 75 1: 即 l : 6 . 75 ] : 肠 . 25 ] : 95苦参组 l : l如 l : 7 5 1 : 77 . 5 1 : 75 1: 68 . 7 5 1 : 95连翘组 :1 1印 1 : 83 . 75 1 , 65 1: 6 . 乃 1: 印 1: 95双黄连口服液组 1: 170 1: 110 1 : 92 . 5 1: 35 .必 l : 81 . 2 5 1 : 95利巴韦林组生理盐水组病毒对照组 l : 320 1 : 320 1 : 320 1 : 32D I : 3加 1: 3加3 讨 论在抗生素得到广泛应用 的今天 ,病毒性疾病对人类健康的危害上升 ,为所有感染性疾病中最重要的一
类 。 病毒感染性疾病是 目前世界上发病率最高的疾
病 ,急性上呼吸道感染中 9O % ~ 95 % 是由病毒而引
起的 ,常见的呼吸道病毒有流感病毒 、 副流感病毒 、 呼
吸道合胞病毒等 。 由于流感病毒 、冠状病毒等呼吸道
病毒基因易发生变异 , 出现新的变异病毒而引起全球
爆发性大范围流行 ,严重危害人类的健康和生命 。 目
前在世界上许多国家和地区发生 的禽流感就是由 A
型流感病毒感染引发的从呼吸道感染到呼吸衰竭 的
急性呼吸道感染病症 。 因此 ,努力发掘和研究中医药
学优势 ,研发出治疗急性上呼吸道感染的 、 具有抗病
毒作用的 、安全有效的 、 低毒副作用 的中药新药具有
十分重要的理论 、经济和社会意义 。
本实验对绵马贯众等五味中药进行 了鸡胚法抗
甲型流感病毒 FM I 株的实验研究 , 分别进行了最大
无毒剂量的测定 、预防作用研究 、 治疗作用研究及直
接对病毒的抑制作用研究 。 结果表明 :本实验所选的
五味中药均有抗甲型流感病毒 FM I 株的作用 , 与病
毒对照组有显著性差异 ;绵马贯众的最大无毒剂量最
大 ,安全性最好 ; 绵马贯众对甲型流感病毒 FM I 株的
预防及治疗作用均优于其它四味中药 。
通过以上鸡胚法抗病毒实验研究 ,绵马贯众的安
全性较高 ,对甲型流感病毒 F M I 株的预防和治疗作
用均较好 , 有望开发成低毒高效的抗病毒新药 。
参考文献
【l] 潘墨墨 , 王雪峰 . 金银花提取物体外抗甲型流感病毒 FMI 株的研
究 〔J] · 中国中医药信息杂志 , 20 07 , 14 ( 6) : 37 一 39
(收稿 日期 : 2 0 10 一 0 6 一 0 8 )