全 文 ：Hainan Med J, Jul. 2016, Vol. 27, No. 13 海南医学2016年7月第27卷第13期
海南三叉苦抗炎作用及机制研究
林紫微，赵智萍，林志军，王海龙，任守忠，李佩佩
（海南医学院药学院，海南 海口 571199）
【摘要】 目的 研究海南三叉苦水提物的抗炎作用并探索其作用机制。方法 通过二甲苯致小鼠耳肿胀、角
叉菜胶致大鼠足肿胀来观察三叉苦的抗炎作用。采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定肿瘤坏死因子α (TNF-α)和
白细胞介素1β (IL-1β)的含量。结果 与模型组(0)相比，三叉苦水提物中、高剂量(19.11%，22.94%)能抑制二甲苯
所致小鼠耳肿胀(P<0.05)，中剂量对角叉菜胶致大鼠足肿胀有明显的抑制作用，在致炎 4 h [(0.53±0.17) cm]效果
最明显(P<0.01)。水提物中、高剂量对大鼠血清中 TNF-α [(169.61±73.80) ng/L和(124.34±85.65) ng/L]和 IL-1β
[(521.01±206.89) ng/L和(393.99±197.61) ng/L]有不同程度的降低作用，TNF-α较模型组[(283.98±68.68) ng/L]降低
显著(P<0.05)。结论 海南三叉苦水提物具有抗炎作用，其抗炎作用可能与抑制TNF-α和 IL-1β的生成有关。
【关键词】 三叉苦；抗炎；作用机制；肿瘤坏死因子α；白细胞介素1β
【中图分类号】 R285.1 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—6350（2016）13—2079—03
Anti-inflammatory effect and mechanism of Evodia lepta in Hainan. LIN Zi-wei, ZHAO Zhi-ping, LIN Zhi-jun, WANG
Hai-long, REN Shou-zhong, LI Pei-pei. School of Pharmacy, Hainan Medical University, Haikou 571199, Hainan, CHINA
【Abstract】 Objective To study the anti-inflammatory effect and mechanism of Evodia lepta in Hainan.
Methods The anti-inflammatory effect of Evodia lepta was observed by acute inflammation model of the mouse ear
swelling and rat foot swelling. The contents of tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and interleukin 1 beta (IL-1β)
were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with the model group, the
middle and high dose water extracts (19.11%, 22.94%, respectively) of Evodia lepta could inhibit the ear swelling in-
duced by xylene (P<0.05); The water extracts at middle doses could remarkably restrained paw edema induced by car-
rageen, with the best anti-inflammatory effect at 4 h [(0.53±0.17) cm, P<0.01]; The water extracts at middle and high
dose could reduce the content of TNF-α [(169.61±73.80) ng/L vs (124.34±85.65) ng/L] and IL-1β [(521.01±206.89)
ng/L vs (393.99±197.61) ng/L] in rat serum; Compared with the model group [(283.98±68.68) ng/L], the TNF-α was
decreased significantly (P<0.05). Conclusion The water extract of Evodia lepta has anti-inflammatory effect, and its
anti-inflammatory effect may be related to inhibiting the formation of TNF-α and IL-1β.
【Key words】 Evodia lepta (Spreng.) Merr.; Anti-inflammatory; Mechanism; Tumor necrosis factor alpha
(TNF-α); Interleukin 1 beta (IL-1β)
·论 著·doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2016.13.005
基金项目: 2014年省级大学生创新创业训练计划项目（编号：20140112）
通讯作者：任守忠。E-mail：540877323@qq.com
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(收稿日期：2015-12-23)
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三叉苦为芸香科吴茱萸属植物三叉苦 [Evodia
lepta (Spreng.) Merr]的干燥全株，又名三桠苦、小黄
散、鸡骨树、三丫苦、三枝枪、三叉虎等，味苦，性寒，具
有清热解毒、祛风除湿、消肿止痛等功效；主治咽喉肿
痛、疟疾、黄疸型肝炎、风湿骨痛、湿疹皮炎、感冒发
热、扁桃体炎、咽喉炎、跌打肿痛、风湿痹痛等[1-3]。由
三叉苦等组成的贯黄感冒冲剂等复方具有清热解
毒、祛风止咳作用，用于感冒、发热、咳嗽等风热型感
冒，在市场上具有较好的声誉。本实验通过研究海
南三叉苦对两种急性炎症模型的保护作用，比较海
南三叉苦水提物对正常和炎症模型大鼠血清中的
TNF-α和 IL-1β含量的影响，进一步探讨其抗炎作用
机制，以便为开发海南三叉苦的临床应用提供实验
依据。
1 材料与方法
1.1 动物 50只健康昆明种小鼠和48只健康昆
明种大鼠，购于长沙市天勤生物科技有限公司。
1.2 仪器 TP-1200C公斤电子天平(湘仪天平
仪器设备有限公司)；SENCO R系列 旋转蒸发器(上
海申生科技有限公司)；SENCO W201恒温水浴锅(上
海申生科技有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵
(巩义市予华仪器有限责任公司)；HH-6数显恒温水
浴锅 (常州澳华仪器有限公司)；MK3酶标仪 (美国
Thermo)。
1.3 药材与试剂 三叉苦采于海南省琼海市长
坡镇，经海南医学院曾念开老师鉴定为芸香科吴茱萸
属植物三叉苦的干燥茎叶；阿司匹林肠溶片(批号：
150116222，辰欣药业股份有限公司)；布洛芬缓释胶囊
(批号：20150505，长春海外制药集团有限公司)；二甲
苯(批号：20140919，广州光华科技股份有限公司)。
1.4 方法
1.4.1 海南三叉苦水提物样品制备 水煎煮法
制备，称取三叉苦干燥茎叶共2 000 g，浸泡过夜，煎煮
3次。第一次10倍量水煎煮2 h，第二次9倍量水煎煮
1.5 h，第三次 8倍量水煎煮 1 h，过滤，合并滤液，减压
浓缩至稠膏，50℃下真空干燥，计算提取率。实验时
用蒸馏水溶解至所需浓度。
1.4.2 海南三叉苦水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀
的影响[4] 取小鼠50只，称重，标号，按体重随机分为5
组，即模型组、阿司匹林组、三叉苦水提物低、中、高剂量
组，每组10只。灌胃给药，连续给药5 d，1次/d，灌胃体
积为 0.1 mL/10 g体重，模型组给予等体积的蒸馏水。
末次给药后1 h，在每只小鼠右耳前后两面涂二甲苯各
20 µL，左耳不涂作为对照，45 min后脱颈处死，剪下完
整左右耳，用 6 mm直径打孔器在距耳缘 1 cm处打下
圆耳片，称重。左右耳的重量之差作为肿胀度并计算
肿胀抑制率，计算公式为：肿胀度=右耳重量-左耳重
量，肿胀抑制率=(模型组肿胀度－药物组肿胀度)/模
型组肿胀度×100%。
1.4.3 海南三叉苦水提物对角叉菜胶致大鼠足
肿胀的影响[5] 取大鼠42只，按1.4.1方法分为6组，即
空白组、模型组、布洛芬组、三叉苦水提物低、中、高剂
量组，每组8只。灌胃给药，连续5 d，1次/d，灌胃体积
为 1 mL/100 g体重，空白组和模型组给予等体积蒸馏
水。末次给药后，测量每只大鼠右后足踝关节周长
(cm)，1 h后，除空白组以外，每组大鼠均在右后足足趾
中部皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL/只致炎。分别在致
炎后1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h测定大鼠右后足踝关节周
长，计算足趾肿胀度，即足趾肿胀度=致炎后踝关节周
长-致炎前踝关节周长。致炎后6 h，乙醚麻醉，断头取
血，备用。
1.4.4 大鼠血清中 TNF-α和 IL-1β的含量 取
1.4.3法中大鼠断头所得全血，于3 600 r/min下离心，吸
取上清液即得到血清。用酶联免疫吸除法(ELISA)，严
格按照试剂盒说明书操作，测定大鼠血清中TNF-α和
IL-1β的含量。
1.5 统计学方法 采用 SPSS16.0 软件进行分
析，计量数据用均数±标准差(x-±s)表示，两组间比较采
用 t检验，显著性水平α界定值设定为0.05。以P<0.05
为差异具有统计学的意义。
2 结 果
2.1 海南三叉苦水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀
的影响 与模型组比较，三叉苦水提物中、高剂量组
对二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制较明显，差异具有统计
学意义(P<0.05)，而三叉苦水提物低剂量组差异无统
计学意义。三叉苦不同剂量组之间有一定的量效关
系，高、中剂量组与低剂量组之间有明显的量效关系，
而中、高剂量组之间的量效关系不明显，见表1。
2.2 海南三叉苦水提物对角叉菜胶致大鼠足肿
胀的影响 由表 2可知，与模型组比较，致炎后 1 h、
2 h、4 h、5 h、6 h，三叉苦中剂量组的大鼠足肿胀度显
著降低，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；致炎后
4 h、5 h，高剂量组足肿胀度显著降低，与模型组比较
差异有统计学意义(P<0.05)；致炎后 4 h，低剂量组足
肿胀度降低显著，与模型组比较差异有统计学意义
(P<0.05)。
表1 海南三叉苦水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x-±s)
组别
模型组
阿司匹林组
三叉苦
剂量(g/kg)
-
0.5
18
6
2
耳肿胀度(mg)
4.97±0.59
3.03±1.39b
3.83±1.39a
4.02±0.94a
4.38±0.59
肿胀抑制率(%)
0
39.64
22.94
19.11
11.87
注：与模型组比较，aP<0.05，bP<0.01。
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Hainan Med J, Jul. 2016, Vol. 27, No. 13 海南医学2016年7月第27卷第13期
表2 海南三叉苦水提物对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响(x-±s)
组别
模型组
布洛芬组
三叉苦
剂量（g/kg）
-
0.09
13.5
4.5
1.5
足肿胀度(cm)
1 h
0.50±0.34
0.23±0.14
0.40±0.35
0.16±0.16a
0.39±0.26
2 h
0.86±0.55
0.33±0.14a
0.71±0.39
0.44±0.25a
0.90±0.33
3 h
0.99±0.35
0.46±0.22b
0.63±0.45
0.67±0.21
0.75±0.19
4 h
1.10±0.27
0.37±0.23b
0.59±0.37a
0.53±0.17b
0.78±0.19a
5 h
0.93±0.17
0.34±0.22b
0.51±0.34a
0.46±0.34b
0.69±0.15
6 h
0.89±0.38
0.33±0.15b
0.63±0.21
0.39±0.27a
0.59±0.24
注：与模型组比较，aP<0.05，bP<0.01。
2.3 大鼠血清中TNF-α和 IL-1β的含量 三叉苦
水提物中、高剂量组均能降低TNF-α的含量，且与模
型组比较，差异有统计学意义(P<0.05或 P<0.01)；三叉
苦水提物各剂量组能不同程度地降低 IL-1β的含量，
但差异无统计学意义，见表3。
3 讨 论
本实验通过复制二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶
致大鼠足肿胀两种急性炎症模型，观察三叉苦水提物
抗炎效果。结果表明，三叉苦水提物对角叉菜胶致大
鼠足肿胀有抑制作用，且三叉苦水提物中剂量组对足
肿胀的抑制效果明显。可见海南三叉苦水提物有明
显的抗炎作用。
炎症过程中释放的炎性介质是造成机体损害的
重要原因，TNF-α是炎性细胞因子，参与全身炎症反
应，是一种内源性致热源，能够引起发烧，诱导细胞凋
亡，TNF-α与内皮细胞结合可增加过氧化物阴离子产
生，刺激细胞脱颗粒和髓过氧化物酶，从而使内皮细
胞分泌 IL-8、IL-1和GM-CSF等炎性因子增加，并促
进中性粒细胞在内皮细胞上黏附，进而刺激机体局部
发生炎症反应，是一个重要的炎症介质[6]。IL-1β是由
活化的单核巨噬细胞产生的炎性因子，能调节炎症反
应中纤维蛋白的沉积和溶解，促进成纤维细胞胶原酶
的产生，刺激成纤维细胞增殖，促进胶原沉积，参与
机体的炎症反应过程 [7]。三叉苦水提物给药组大鼠
血清中 TNF-α和 IL-1β的含量与模型组比较有不同
程度的降低，其中TNF-α下降明显，差异有统计学意
义，IL-1β虽有一定程度降低，但差异无统计学意义，
提示抑制TNF-α和 IL-1β的生成可能是三叉苦抗炎的
作用机制。且其抑制作用具有明显的量效关系，在一定
的范围内，TNF-α和 IL-1β的含量随着给药剂量的增加
而显著降低。
从小鼠耳肿胀实验结果来看，海南三叉苦水提物的
抗炎效果次于阿司匹林；从大鼠足肿胀以及血清中
TNF-α、IL-1β的测定实验结果来看，海南三叉苦水提物
的抗炎效果优于布洛芬。由此可见，海南三叉苦具有良
好的抗炎作用。据调查，一些海南人民会用三叉苦叶子
泡茶，有药食同源之功。因此，海南三叉苦具有很高的
药用商品化价值，可以被进一步的开发利用。
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(收稿日期：2016-02-25)
表3 海南三叉苦水提物对角叉菜胶所致足肿胀大鼠血清中TNF-α和
IL-1β含量的影响(x-±s)
组别
空白组
模型组
布洛芬组
三叉苦
剂量(g/kg)
-
-
0.09
13.5
4.5
1.5
TNF-α (ng/L)
133.97±51.64b
283.98±68.68
198.26±66.51a
124.34±85.65b
169.61±73.80a
211.78±43.33
IL-1β (ng/L)
383.39±232.27a
565.88±202.14
562.84±214.19
393.99±197.61
521.01±206.89
571.97±223.47
注：与模型组比较，aP<0.05，bP<0.01。
·· 2081