全 文 ：2410-2411．
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千金子霜质量标准研究
李英霞1， 侯立静2， 高 华1， 刘桂霞2， 苏丽君1， 慈倩倩3
( 1． 青岛大学药学院，山东 青岛 266021; 2． 山东省中医药研究院，山东 济南 250014; 3． 山东省医学科
学院研究生教育中心，山东 章丘 250202)
收稿日期: 2014-09-09
基金项目: 国家“十一五”科技支撑计划项目 ( 2006BAI09B06-05)
作者简介: 李英霞 ( 1964—) ，女，硕士，教授，从事中药品质评价与质量控制研究。Tel: ( 0532 ) 82991202，E-mail: li_ yx1964@
163． com
摘要: 目的 对千金子霜进行质量标准研究。方法 以泻下成分千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯为对照品，
建立薄层色谱 ( TLC) 法，并对 10 批不同产地的千金子霜进行鉴别。高效液相色谱 ( HPLC) 法对千金子霜中这两种
泻下成分、水分、灰分及脂肪油的含有量进行测定。结果 10 批千金子霜在与千金子甾醇及千金二萜醇二乙酸苯甲
酸酯对应的 TLC位置上，均显示出相同颜色的斑点，水分含有量为 5. 55% ～ 7. 22%，总灰分、酸不溶性灰分含有量
分别为 5. 95% ～ 6. 82%和 0. 12% ～ 0. 45%，含油量为 18. 04% ～ 20. 00%，千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯
含有量分别为 0. 134% ～0. 182%和 0. 212% ～0. 248%。结论 该方法可用于千金子霜的定性鉴别及定量分析，为其质
量标准的进一步完善提供了实验基础。
关键词: 千金子霜; 质量标准; 千金子甾醇; 千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯; TLC; HPLC
中图分类号: R284. 1 文献标志码: B 文章编号: 1001-1528( 2015) 12-2769-04
doi: 10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 12. 045
千金子又名续随子，是我国传统中药材之一，来源于
大戟科植物续随子 Euphorbia lathyris L． 的干燥成熟种子，
其性温，味辛，有小毒，泻下作用强烈，属峻下逐水药，
具有逐水消肿，破血散结之功效，用于水肿痰饮、积滞胀
满、二便不通、血瘀经闭等症，外治顽癣、疣赘［1］，而且
在抗肿瘤、抗白血病等方面具有较大的开发潜力［2-9］。千金
子中含有大量脂肪油，包括二萜酯类、游离二萜醇及多种
脂肪酸，另外还含有香豆素、甾醇类等成分［10］，近年来又
发现了两种新骨架化合物［11-12］。一般认为，脂肪油为千金
子导泻的有效部位，也是毒性部位，其中的二萜酯类成分
6，20-环氧千金二萜醇苯乙酸酯 ( 俗称千金子甾醇) 和千
金二萜醇二乙酸苯甲酸酯为千金子的主要泻下成分之
一［13-14］，故为了缓和其峻烈之性，降低其毒性，一般要求
去油制霜炮制后使用。《中国药典》2010 年版将千金子甾
醇确定为千金子药材中的“含量测定”指标，并规定了其
含有量限度标准不得少于 0. 35%。另外，将炮制品千金子
霜单列，规定了其“制法”、 “性状”、秦皮乙素的“TLC
鉴别”、脂肪油的“含量测定”及“限度标准”( 18. 0% ～
20. 0% ) ，但仍缺乏对毒性成分的质控方法及限度标准，难
以保证临床使用的安全性和有效性。因此，本课题组前期
采用新研制的制霜设备，对千金子制霜新工艺进行了考
察［15］，比较了制霜前后脂肪油及主要泻下成分的含有
量［16］，发现制霜后其含有量均明显下降。本实验将 10 批
不同产地的千金子霜继续进行研究，旨为其质量标准的进
一步完善提供实验基础。
1 仪器、试剂与试药
Waters 2695HPLC 色谱仪 ( 美国 Waters 公司 ) ; 2996
二级管阵列检测器、R-201 旋转蒸发仪 ( 上海申胜生物技
术有限公司) 。
千金子霜为河南南阳、河南社旗、广西、新疆、云南
5 个产地的千金子药材经制霜新工艺所得到的样品，共 10
批，批号为 20090622-1 ～ 20090622-10。
秦皮乙素对照品购自中国食品药品检定研究院，批号
为 110741-200506，供含有量测定用; 千金子甾醇和千金二
萜醇二乙酸苯甲酸酯对照品均购自北京显通时代医药科技
发展有限公司，批号分别为 20081106 和 200812228，经
HPLC面积归一化法测定，纯度分别达 98. 00%和 99. 67%，
与文献 ［17-18］报道基本一致。硅胶 G ( 青岛海洋化工有
限公司) 。甲醇为色谱纯; 其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
9672
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
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2. 1 外观性状 5 个产地的 10 批千金子霜均为均匀、疏
松的淡黄色粉末 ( 河南社旗和新疆产样品的颜色比其他产
地略深) ，微显油性，味辛辣。
2. 2 薄层色谱鉴别
2. 2. 1 秦皮乙素的鉴别 千金子制霜炮制后其脂肪油含有
量明显下降，而香豆素类成分 ( 如秦皮乙素等) 提高。因
此，按照《中国药典》2010 年版 ( 一部) 千金子霜“鉴
别 ( 2) ”项下方法，对不同产地的 10 批千金子霜样品进
行了薄层色谱 ( TLC) 鉴别。结果显示，在与秦皮乙素对
照品相应的 TLC位置上，它们均显示出相同的亮蓝色荧光
斑点，见图 1。
1． 秦皮乙素对照品 2 ～ 10． 千金子霜 ( 2 ～ 6． 河南南阳 7． 广西
8． 云南 9． 新疆 10． 河南社旗)
图 1 千金子霜中秦皮乙素的 TLC图
2. 2. 2 两种泻下成分的鉴别 《中国药典》2010 年版
( 一部) 千金子和其炮制品千金子霜的“鉴别”项下只有
香豆素类成分秦皮乙素的 TLC 鉴别方法，而其作为峻下逐
水药，却没有主要泻下成分的定性鉴别方法。因此，本实
验建立了以泻下成分千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯
甲酸酯为对照品的千金子霜的 TLC鉴别方法，并应用于 10
批样品。
2. 2. 2. 1 供试品溶液的制备 取千金子霜样品 10 批，每
批 2 g，加甲醇 15 mL，超声 ( 300 W、45 kHz) 5 min，滤
过，滤液蒸干，加甲醇溶解，转移至 2 mL量瓶中，甲醇稀
释至刻度，即得。
2. 2. 2. 2 对照品溶液的制备 取千金子甾醇和千金子二萜
醇二乙酸苯甲酸酯对照品适量，加甲醇分别制成每 1 mL含
2 mg上述成分的对照品溶液。
2. 2. 2. 3 TLC鉴别 按照《中国药典》2010 年版 ( 一部)
附录Ⅵ B方法进行试验，分别吸取上述对照品和供试品溶
液 5 μL，点于同一硅胶薄层 G板 ( 以羧甲基纤维素钠为黏
合剂) 上，以石油醚 ( 60 ～ 90 ℃ ) -乙酸乙酯-环己烷-丙酮
( 18 ∶ 6 ∶ 12 ∶ 1 ) 为展开剂展开，取出，晾干，喷 5%硫酸
乙醇溶液，挥干后于 105 ℃下烘烤 5 min。结果，在与对照
品相应的 TLC位置上，千金子甾醇显淡黄色斑点，而千金
子二萜醇二乙酸苯甲酸酯先显褐色，后渐变为灰蓝色，斑
点比较清晰，见图 2。
2. 3 含水量、总灰分及酸不溶性灰分含量测定 《中国药
1 ～ 7． 千金子霜 ( 1 ～ 5． 河南南阳 6、7． 云南) 8． 千金子二萜
醇二乙酸苯甲酸酯对照品 9 ～ 11． 千金子霜 ( 9． 广西 10． 新疆
11． 河南社旗) 12． 千金子甾醇对照品
注: 温度 26 ℃，湿度 60%
图 2 千金子甾醇和千金子二萜醇二乙酸苯甲酸酯的
TLC图
典》2010 年版 ( 一部) 千金子霜的质量标准缺少“检查”
项，本实验按照《中国药典》2010 年版 ( 一部) 附录 IX
H水分测定法 ( 烘干法) 及附录 IX K 项下方法，分别对
10 批千金子霜的含水量、总灰分及酸不溶性灰分含有量进
行了测定，结果见表 1、表 2。
表 1 10 批千金子中试霜平均含水量和含油量测定结果
( n =3)
序号 样品名称 产地
平均含水
量 /%
RSD /
%
平均含油
量 /%
RSD /
%
1 千金子霜-1 河南南阳 6. 44 1. 80 20. 00 0. 27
2 千金子霜-2 河南南阳 5. 55 1. 10 19. 92 1. 26
3 千金子霜-3 河南南阳 6. 36 0. 98 19. 72 1. 44
4 千金子霜-4 河南南阳 6. 60 1. 90 19. 79 1. 47
5 千金子霜-5 河南南阳 5. 95 1. 66 18. 82 1. 15
6 千金子霜-6 广西 7. 22 1. 50 19. 40 1. 05
7 千金子霜-7 云南 5. 66 0. 98 18. 04 0. 93
8 千金子霜-8 云南 5. 87 0. 90 20. 00 0. 65
9 千金子霜-9 新疆 6. 01 0. 50 19. 06 0. 43
10 千金子霜-10 河南社旗 6. 76 1. 31 18. 89 1. 20
表 2 10 批千金子中试霜总灰分和酸不溶性灰分含有量测
定结果 ( n =3)
序号 样品名称 产地
总灰分 /
%
RSD /
%
酸不溶性
灰分 /%
RSD /
%
1 千金子霜-1 河南南阳 6. 25 0. 98 0. 18 1. 55
2 千金子霜-2 河南南阳 6. 22 0. 59 0. 19 1. 33
3 千金子霜-3 河南南阳 6. 20 0. 57 0. 19 1. 25
4 千金子霜-4 河南南阳 6. 22 0. 69 0. 18 1. 45
5 千金子霜-5 河南南阳 6. 25 0. 80 0. 19 1. 85
6 千金子霜-6 广西 5. 95 1. 32 0. 26 0. 47
7 千金子霜-7 云南 6. 26 0. 76 0. 26 0. 84
8 千金子霜-8 云南 6. 19 0. 69 0. 26 0. 48
9 千金子霜-9 新疆 6. 15 0. 58 0. 12 1. 46
10 千金子霜-10 河南社旗 6. 82 1. 18 0. 45 0. 49
2. 4 含油量测定 《中国药典》2010 年版 ( 一部) 千金
子霜“含量测定”项下规定，含油量限度范围在 18. 0% ～
0772
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
December 2015
Vol． 37 No． 12
20. 0%之间，本实验按照药典方法，对 10 批千金子霜的含
油量进行了测定，结果见表 1。
2. 5 泻下成分千金子甾醇 ( Ⅰ) 和千金二萜醇二乙酸苯
甲酸酯 ( Ⅱ) 的测定 《中国药典》2010 年版 ( 一部)
千金子霜“含量测定”项下仅有含油量测定方法与标准。
作为毒性中药，须采用更准确、快速的方法测定其毒性成
分含有量，规定其含有量限度标准才能保证用药的安全性、
有效性及质量稳定性。因此，本实验建立了 HPLC 法测定
千金子霜中主要泻下成分千金子甾醇 ( Ⅰ) 和千金二萜醇
二乙酸苯甲酸酯 ( Ⅱ) 的含有量，色谱条件、对照品和供
试品溶液的制备方法及方法学考察参考文献 ［16］，结果
见表 3。
表 3 10 批千金子中试霜中Ⅰ和Ⅱ平均质量分数测定结果
( n =3)
序号 样品名称 产地
Ⅰ /
%
RSD /
%
Ⅱ /
%
RSD /
%
1 千金子霜-1 河南南阳 0. 164 0. 02 0. 224 0. 18
2 千金子霜-2 河南南阳 0. 152 1. 33 0. 239 0. 66
3 千金子霜-3 河南南阳 0. 154 0. 92 0. 247 0. 29
4 千金子霜-4 河南南阳 0. 166 2. 93 0. 246 0. 78
5 千金子霜-5 河南南阳 0. 134 0. 10 0. 212 0. 16
6 千金子霜-6 广西 0. 161 0. 14 0. 227 0. 44
7 千金子霜-7 云南 0. 149 0. 86 0. 203 0. 63
8 千金子霜-8 云南 0. 161 0. 22 0. 229 1. 64
9 千金子霜-9 新疆 0. 153 2. 00 0. 218 0. 39
10 千金子霜-10 河南社旗 0. 182 1. 04 0. 248 0. 43
3 讨论与小结
3. 1 千金子作为峻下逐水药，毒性较大，其泻下成分既是
该药材的毒性物质，也是有效物质，不能完全去除。在临
床应用或作为制剂原料使用时，大多采用毒性较低的炮制
品千金子霜，故对其泻下成分进行有效控制是很有必要的。
目前，《中国药典》2010 年版收载的千金子霜质量标准并
不完善，没有“检查”项和主要泻下成分“TLC 鉴别”及
“含量测定”项。目前，迄今尚未见对不同产地千金子霜
样品进行系统质量研究的文献报道。
3. 2 本实验对泻下成分千金子甾醇和千金二萜醇二乙酸苯
甲酸酯 TLC 鉴别中样品的提取方法、点样量、展开剂种
类、溶剂比例等进行了筛选，最终确定了鉴别方法。由图
2 可知，10 批千金子霜的 TLC 在与对照品相应的位置上，
均出现相同颜色的斑点，除广西千金子霜斑点颜色略淡外，
其它产地样品无明显差异。
3. 3 由表 1 和表 2 可知，5 个产地 10 批千金子霜的含水量
均较低，在 5. 55% ～ 7. 22%之间，总灰分含有量在 5. 95%
～6. 82%之间，酸不溶性灰分含有量在 0. 12% ～ 0. 45%之
间，略有差别。另外，含油量在 18. 04% ～ 20. 00%之间，
符合药典规定标准。
3. 4 10 批千金子霜中两种泻下成分的含有量分别在
0. 134% ～0. 182%和 0. 212% ～ 0. 248%之间，表明不同产
地、批次之间两者含有量差异不大。
3. 5 本课题组前期报道了 HPLC测定两种泻下成分的方法
以及比较制霜前后两者含有量的变化，用于探讨千金子制
霜的目的及原理［16］。本实验主要从完善千金子霜的质量标
准角度出发，以新制霜设备生产的 10 批千金子霜为研究对
象，首次建立了两种泻下成分的 TLC 鉴别方法，并采用已
建立的 HPLC法测定其含有量，同时对水分、总灰分和酸
不溶性灰分进行了考察，这为今后进一步完善千金子霜的
质量标准提供了科学依据。
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2015 年 12 月
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
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Vol． 37 No． 12
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微孔板和分光光度计法检测 7 种食用菌的抗氧化活性
李根林， 李 竹， 吴宿慧* ， 李寒冰， 张颜语， 吕 宁， 韩素月， 王晨琳， 杨 阳
(河南中医学院药学院，河南 郑州 450008)
收稿日期: 2014-12-25
基金项目: 国家自然科学基金面上项目 ( 81473435) ; 河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目 ( 2013GGJS-092 ) ; 河南省教育厅科
学技术重点资助项目 ( 14A310023) ; 河南中医学院研究生创新基金项目 ( 2014YCX009 ) ; 河南中医学院药学院大学生创新学习项目 ( YX-
CX ［2014］ 22)
作者简介: 李根林 ( 1963—) ，男，教授，硕士生导师，从事中药生物活性评价研究。Tel: 13703920231，E-mail: lhb9988@ 163． com
* 通信作者: 吴宿慧 ( 1980—) ，女，讲师，从事中药药理学研究。Tel: ( 0371) 65962746，E-mail: iwusuhui@ 163． com
摘要: 目的 建立微量检测食用菌体外清除二苯代苦味酰基自由基 ( DPPH·) 活性的方法，并比较常见食用菌的抗氧
化活性，为寻找天然抗氧化剂提供初步的筛选方法和技术资料。方法 超声提取得到香菇等 7 种食用菌和火麻仁的提
取物后，采用微孔板与分光光度计法测定其 DPPH·清除率，然后对这两种方法的测定结果进行曲线拟合，并对实验
耗时、试剂用量和方法重复性方面进行对比，进而比较其 DPPH·清除活性。结果 两种方法所得的 DPPH·清除率无
统计学差异，但在实验耗时、试剂用量等方面，微孔板法有明显优势。另外，食用菌水提物的抗氧化活性均明显高于
醇提物，其中香菇水提物的活性最高。结论 微孔板法测定食用菌 DPPH·的清除活性时具有准确、快捷、重复性好等
特点，而且食用菇水溶性成分的抗氧化活性大于醇溶性成分，可为后续产品的开发提供技术资料。
关键词: 食用菌; 抗氧化活性; 微孔板; 分光光度计; DPPH·
中图分类号: R284. 1 文献标志码: B 文章编号: 1001-1528( 2015) 12-2772-04
doi: 10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 12. 046
自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强
氧化性，当体内代谢产物的自由基过多或清除能力下降时，
会导致生物细胞氧化性损伤，引发心血管疾病、癌症等各
种病变［1］，因此清除体内外过量自由基有着重要意义，而
多种食用菌具有确切的体外抗氧化活性［2］。目前，分光光
度计法［3］作为一种经典的抗氧化实验方法，广泛应用于药
品和食品的检测，其简便易行［4-7］，但测试大规模样品时存
在耗时长、有机溶剂消耗大等缺陷，因此建立一种快速、
精确、低成本的抗氧化活性测定方法具有广阔的应用前景。
本实验对分光光度计法进行改良，并以阳性对照品维生素
E ( VE) 、具有 DPPH·清除作用的火麻仁及香菇为研究对
象，建立微孔板法对香菇等 7 种食用菌进行体外抗氧化活性
测定，期冀为其活性初筛和相关机能食品开发提供参考。
1 材料与方法
1. 1 实验材料与试剂 样品购自河南省郑州市农贸市场，
经河南中医学院陈随清教授鉴定，分别为真菌类担子菌纲
伞菌目伞菌科香蕈 Lentinus edodes ( Berk． ) Sing 的子实体
香菇、担子刚伞菌目侧耳科真菌糙皮侧耳 Pleurotus ostreatus
( Jacq． ex Fr． ) Quel 的子实体平菇、层菌纲伞菌目侧耳科
真菌刺芹侧耳 Pleurotus eryngii 的子实体杏鲍菇、伞菌目白
蘑科真菌冬菇 Flammulina velutiper ( Fr． ) Sing的子实体金针
菇、层菌纲伞菌目白蘑科真菌真姬菇 Hypsizygus marmoreus
( Peck) H． E． Bigelow不同品种的子实体白玉菇、蟹味菇、
海鲜菇。
火麻仁购自郑州本草国药馆，经河南中医学院陈随清教
授鉴定，为桑科植物大麻 Cannabis sativa L的干燥成熟果实。
二苯代苦味酰基自由基 ( DPPH·，批号 STBC5116V，
美国 Sigma公司) ; 天然型维生素 E 胶丸 ( 批号 20131008，
青岛双鲸药业有限公司 ) 。无水乙醇为分析纯 ( 批号
20130630，天津市凯通化学试剂有限公司) 。
1. 2 主要仪器设备 96 孔细胞培养板 ( 美国 Corning 公
司) ; 分析天平 ( 德国赛多利斯公司) ; 100 ～ 200 目药材粉
碎机 ( 北京中仪泓瑞科技发展有限公司) ; Dragon 移液器
( 北京智杰方远科技有限公司) ; VIS-7220N 可见分光光度
计 ( 北京瑞丽分析仪器有限公司) ; Multiskan GO全波长酶
标仪 ( 美国 Thermo Fisher Scientific公司) ; KQ-250DE 数控
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2015 年 12 月
第 37 卷 第 12 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
December 2015
Vol． 37 No． 12