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不同肥料种类对南板蓝根产量及靛玉红含量的影响



全 文 :中药新药与临床药理 2010年 9月第 21卷第 5期
收稿日期:2010-01-01
作者简介:张丹雁(1964-),女,教授,硕士,从事《中药鉴定学》教学和中药 GAP等研究工作。Email: danyan64@21cn.com。
基金项目:广东省科技计划项目“南板蓝根等五种中药材野生转家栽规范化种植研究”(2004B36001017)。
南板蓝根(Radix et Rhizoma Baphicacanthi)来源
于爵床科植物马蓝(Baphicanthu cusia Bremek)的根茎
和根,具有清热解毒,凉血功效,已收载入 2005年
版《中国药典》[1],常用于防治流感、流行性腮腺炎、
流行性乙型脑炎等疾患 [2]。靛玉红为暗红色针状结
晶,化学名称是 2,2 -联亚吲哚-3,3 -二酮,分子
式为 C15H10N2O2,式量为 262.26。靛玉红呈弱碱性,
不溶于水,难溶于冷乙醇,但溶于醋酸乙酯等[3],是
南板蓝根茎、叶中主要药用成分,是目前评定南板蓝
根质量的指标性成分之一,对慢性粒细胞白血病具有
明显抑制作用,且具临床疗效可靠、毒副作用小、对
骨髓无明显抑制作用等特点[4,5]。
随着市场对南板蓝需求的扩大及其深加工的进一
步发展,南板蓝身价陡增,栽培面积亦不断扩大,对
南板蓝的研究也逐渐得到重视 [6]。本文针对不同肥
料种类对南板蓝根产量及靛玉红含量的影响进行研
不同肥料种类对南板蓝根产量及靛玉红含量的影响
张丹雁,陈晓庆,杜沛欣,林秀旎(广州中医药大学中药学院,广州 510006)
摘要:目的 探求各种肥料与南板蓝根产量及靛玉红含量之间的量化关系,最终筛选出种植南板蓝的最佳肥
料。方法 通过田间种植,取施用了不同肥料种类的南板蓝根的干燥地下根部药材,称其干物质重,粉碎,提
取,用HPLC法测定其靛玉红含量,从而针对不同肥料种类对南板蓝根靛玉红含量的影响进行比较研究,应用
Microsoft Excel统计进行方差分析比较。结果 各肥料组与对照组的产量及靛玉红含量有显著性差异;从产量
及靛玉红含量看,其含量大小顺序均为农家肥 > 化肥 > 生物肥 > 空白对照。肥料种类以南板蓝根靛玉红含量
最高者为准,同时综合考虑其产量,故南板蓝根规范化种植中,肥料应首选农家肥。结论 不同肥料种类对南
板蓝产量及靛玉红含量影响差异较大,在南板蓝根种植中应注意科学合理地选择适宜肥料。
关键词:肥料种类;南板蓝根;靛玉红;高效液相色谱
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1003-9783(2010)05-0531-03
Effect of Different Fertilizers on Yield of Radix et Rhizoma Baphicacanthi and Its Indirubin Content
ZHANG Danyan,CHEN Xiaoqing,DU Peixin,LIN Xiuni (School of Chinese Herbal Medicine,Guangzhou Uni-
versity of Chinese Medicne,Guangzhou 510006,China)
Abstract:Objective To seek the quantitative relationship of different fertilizers with yield of Radix et Rhizoma
Baphicacanthi and its indirubin content, and to screen out the optimal fertilizer for planting Baphicacanthus cusia
Bremek. Methods We adopted field plantation, and applied different fertilizers for the plants of Radix et Rhizoma
Baphicacanthi. After harvesting Radix et Rhizoma Baphicacanthi, we weighed the dry weight. After grinding and ex-
tracting Radix et Rhizoma Baphicacanthi, the content of indirubin was determined by HPLC. According to the effect of
different fertilizers on indirubin content, we made the comparative study, and performed variance analysis and multiple
comparison with the application of Microsoft Excel. Results The yield of Radix et Rhizoma Baphicacanthi and in-
dirubin content were in a decreasing sequence in the following groups: farmyard manure group >chemical fertilizer
group>biological fertilizer group>blank control group. In consideration with the highest indirubin content and the yield
of Radix et Rhizoma Baphicacanthi, farmyard manure can be the optimal one. Conclusion There is great difference
among yield of Radix et Rhizoma Baphicacanthi and its indirubin content after applying different fertilizers, and farm-
yard manure is the first choice in the GAP of Baphicacanthus cusia Bremek.
Keywords:Fertilizers;Radix et Rhizoma Baphicacanthi;Indirubin;HPLC
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Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology,2010 September,Vol.21 No.5
究,为其生产过程的合理选择肥料种类提供科学实
验数据,从而为顺利开展南板蓝规范化种植(GAP)打
下基础。
1 材料与方法
1.1 材料 南板蓝根药材来自于广东省南台药业有限
公司位于梅州市平远县石正镇的南板蓝根规范化种植
基地。该种植基地地理坐标北纬 24°30′,东经 115°
49′,属亚热带季风气候区,土壤为酸性山地红壤,
砂砾含量中等,排水良好,肥力中等。马蓝试验基地
在一向阳山坡上开辟的梯田上,海拔约 400 m,坡度
约 30°,日平均光照时间约 5 h。
采集农家肥、生物肥、化肥等不同肥料种类及不
施用肥料种植的南板蓝根药材,经张丹雁教授鉴定,
确认为爵床科植物马蓝的根茎和根 Radix et Rhizoma
Baphicacanthi。按照施用肥料种类的不同,将其分为
农家肥组、生物肥组、化肥组以及空白对照组,具体
见表 1。
表1 施肥方案设计
1.2 样品的采集 将南板蓝于 2005 年 8 月底定植,
分别于 2006年 9月、2007年 2月、2007年 9月进行
采样,并分别在各施肥组别中随机挖取 10株,取其
地下根及根茎部分,测量其平均干物质量,通过高效
液相色谱法测量 2006年 9月及 2007年 9月两组样品
的靛玉红含量。
1.3 南板蓝根中靛玉红含量测定方法
试剂:无水乙醇,AR级(天津大茂);甲醇,AR
级(天津大茂);色谱级甲醇(德国 Merck公司)。
仪器:Dionex P -680 单泵高效液相色谱仪、
Dionex UVD170紫外检测器、Cromasil C18色谱柱。
色谱条件:流动相:甲醇-0.1 %乙酸(80 ∶ 20);
流速:1.0 mL/min;检测波长:290 nm;进样量 10
μL。理论板数按靛玉红色谱峰计算不低于 2200,靛
玉红色谱峰与相邻峰之间的分离度均大于 1.5。
方法:取南板蓝根粉末约 5 g,精密称定,加入
50 mL无水乙醇,水浴回流提取 60 min,稍静止并小
心倾出上清液,残渣继续加入 30 mL无水乙醇继续
回流提取 40 min,合并两次提取液并抽滤,所得滤
液水浴蒸干,残渣用甲醇定容至 25 mL,并以 0.45
μm微孔滤头过滤得到供试液,并以上述色谱条件进
行高效液相法测定其靛玉红含量。2006 年 9 月及
2007年 9月采样的各对照肥料组分别测量 5次,计
算得其平均值。
1.4 系统适应性考察
1.4.1标准曲线的绘制 精密称取靛玉红对照品 4.30
mg,以甲醇溶解,并定容至 100 mL,制成 43.0 μg/
mL 的标准溶液,分别用移液管吸取上述溶液 2.5
mL、5.0 mL、至 50 mL 容量瓶,添加甲醇至刻度,
制成含靛玉红 2.15 μg/mL、4.30 μg/mL 的对照品溶
液。分别精密吸取 2.15 μg/mL溶液各 2.5 μL、5 μL、
10 μL,4.30 μg/mL溶液各 10 μL、15 μL、20 μL进
样,测得其峰面积,以进样量为横坐标,峰面积为纵
坐标,建立回归方程,其方程为 Y=0.075 3X-0.009 4,
r=0.999 4。
1.4.2 精密度试验 取靛玉红标准液,按 1.3的色谱
条件测定,连续进样 5次,每次 10 μL,测得其峰面
积的 RSD值为 1.28 %。
1.4.3 稳定性试验 精密称取南板蓝根粉末约 5 g,
按“1.3”方法制得供试液,在 0,1,2,4,6,12,
24 h分别进样 10 μL,测得其峰面积的 RSD 值为
1.73 %,证明靛玉红在 24 h内稳定。
1.4.4 重现性试验 精密称取南板蓝根粉末 5份,每
份约 5 g,按“1.3”方法制得供试液并测量其含量,
5次测得的靛玉红含量平均值为 6.43 ppm,RSD值为
2.34 %。
1.4.5 回收率试验 精密称取已知含量的南板蓝根粉
末约 2.5g,用移液管移取并加入 7.0 mL 4.30 μg/mL
的靛玉红标准液(相当于含有靛玉红 30.1 μg),按 1.3
方法制得供试液并测量其靛玉红含量,重复 5次,得
到平均回收率为 96.22 %,RSD为 1.65 %。
2 结果
不同肥料种类南板蓝根产量及靛玉红含量的影响
分别见表 2、表 3、表 4。表 2、表 3结果表明,从 3
组不同生长年限的南板蓝根亩产量变化来看,农家肥
组产量最高,化肥组次之,生物肥组再次,对照组最
低,各对照组经 P值分析,即认为各肥料组与对照
组的干物质重有显著性差异,故从产量看,不同肥料
肥料名称
农家肥
化肥
生物有机肥
空白对照
肥料种类
含鸡粪、牛粪、猪粪、稻草
含 NPK无机总养分,其中
N ∶ P ∶ K=18 ∶ 7 ∶ 10,购于
广东福利龙复合肥有限公司
以发酵鸡粪以载体,有机质含量
85%以上,含 NPK无机总养分为
10%,及部分微生物菌剂,购于
广东福利龙复合肥有限公司
除种植前施入鸡粪作为基肥外不另施肥
667m2施肥量/kg
1 000
25
70
0
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中药新药与临床药理 2010年 9月第 21卷第 5期
种类对南板蓝根产量影响较大,在各类肥料施肥总量
相当的情况下,呈现出农家肥>化肥>生物肥>空白对
照;由表 4看,即从靛玉红含量看,不同肥料种类对
南板蓝根靛玉红含量影响亦较大,呈现出农家肥 >
化肥 > 生物肥 > 空白对照的排列顺序。
表2 不同肥料种类对南板蓝根地下部分干物质重的影响(n=10)
表3 不同肥料种类对南板蓝根产量的影响(n=10)
注:与空白对照组比较, *P < 0.05; **P < 0.01。
表4 不同肥料种类对南板蓝根靛玉红含量影响(n=5)
注:与空白对照组比较, *P < 0.01。
3 讨论
由于农家肥具有纯天然、安全长效、无污染、成
本低等特点,能促进植物良好、持久的生长而有利于
提高南板蓝根的产量和靛玉红的形成和累积,使产量
和质量得以提高,故建议种植南板蓝根首选农家肥;
化肥的作用迅速,对靛玉红含量的形成与累积有较好
促进作用,但其成本较高,且易受雨水冲刷流失,肥
效欠缺持久性,可配合农家肥限量使用;而过磷酸钙
(磷粉)和氯化钾等化肥易造成重金属沉积而导致药材
重金属超标,应严禁使用含有此类成分的化肥;生物
肥肥效虽差于农家肥和化肥,但生物肥具有安全、无
污染等特点,同时能改善土壤微生物结构而对植物抗
病有一定促进作用,在经济条件允许的情况下,可配
合其它肥料混合使用。为了配合南板蓝根规范化种植
研究,在南板蓝根种植中应注意科学合理地选择适宜
肥料。
参考文献:
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:化学工业
出版社,2005:198.
[2] 肖元,钟鸣. 南板蓝根的化学成分药理作用研究进展[J]. 河南中
医,2006(8):78-79.
[3] 王景文,袁血海. 青黛中提取靛玉红等有效成分最佳工艺的研究
[J]. 中成药,1999,21(11):557.
[4] 陈锫,陆哲维,关德棋,等. 南板蓝根的化学成分研究[J]. 中草
药,1987,18(11):8-9.
[5] 曾庆田,杜德极,杨士兰,等 . 靛玉红的药理研究[J]. 中草药通
讯,1979,14(11):35.
[6] 侯惠婵,梁少珍. HPLC法测定马蓝根、茎 、叶中靛玉红、靛蓝
的含量[J]. 2006,(7):681-682.
(编辑:修春)
农家肥
化肥
生物肥
空白对照
2006年 9月(1年生)
55.2±20.2
45.7±14.9
37.6±11.8
22.7±8.5
2007年 2月(1.5年生)
52.9±18.6
43.4±14.2
35.9±13.3
21.7±9.2
2007年 9月(2年生)
68.8±27.2
63.4±26.8
52.3±23.2
32.0±16.9
平均每株根重/g
农家肥
化肥
生物肥
空白对照
2006年9月(1年生)
220.8±80.8**
182.8±59.6*
150.4±47.2*
90.8±34.0
2007年 2月(1.5年生)
211.6±74.4**
173.6±56.8*
143.6±53.2*
86.8±36.8
2007年 9月(2年生)
275.2±108.8**
253.6±107.2*
209.2±92.8*
128.0±67.6
平均亩产量/kg
农家肥
化肥
生物肥
空白对照
2006年9月(1年生)
9.61±0.11*
8.66±0.09*
6.71±0.07*
4.80±0.06
2007年9月(2年生)
6.43±0.07*
5.06±0.06*
4.36±0.05*
3.35±0.04
靛玉红含量/ppm
收稿日期:2010-04-13
作者简介:冯小权(1986-),女,硕士研究生,研究方向:中药新药研究与指纹图谱分析。通讯作者:黄可儿,研究员,博士生导师,主要从事
中西医结合临床及药理研究。Email:hke8989@163.com。
基金项目:教育部科学技术研究重点项目(208104);广东省科技计划项目(2007B031404011)。
黄芪总皂苷与黄芪甲苷在酸碱中的含量变化分析
冯小权1,黄可儿2,魏 刚1,黄月纯2(1.广州中医药大学,广州 510405;2.广州中医药大学第一附属医院,广
州 510405)
摘要:目的 探讨黄芪总皂苷(AST)与黄芪甲苷(AST-Ⅳ)在人工胃液(0.1 mol·L-1HCL溶液)及氨试液中的含量
变化情况。方法 采用紫外分光光度比色法测定黄芪总皂苷含量,检测波长:531 nm;采用HPLC-ELSD法测
定黄芪甲苷含量,以Eclipse XDB(150 mm×4.6 mm,5 μm)ODS色谱柱,流动相为乙腈 ∶ 水(梯度洗脱),洗脱梯
度为0-17 min,乙腈26 %→55 %,流速为1.0 mL·min-1,检测器为ELSD-Alltech3300,漂移管温度为40 ℃,氮
气流速为1.5 L·min-1。结果 单纯的黄芪甲苷在0.1 mol·L-1HCL溶液中降解14 %左右,再经4 mL 8 %氨试液处
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