全 文 ：作者简介:李钦 ,男 ,博士研究生 ,副教授　　Tel:(0378)5956970　　E-mail:liqin@henu.edu.cn
复方南板蓝根冲剂质量标准研究
李钦1 ,2 ,程铁峰1 ,许启太1 ,贾天柱2(1.河南大学药学院 ,河南开封 475001;2.辽宁中医学院 ,辽宁 沈阳 110032)
摘要:目的　研究复方南板蓝根冲剂的质量标准。方法　用 TLC 对处方中的咖啡酸 、紫花地丁进行定性鉴别;用 HPLC 测定蒲
公英中咖啡酸的含量 。结果　TLC 色谱能检出咖啡酸 、紫花地丁;咖啡酸的含量在 0.142 ～ 0.710μg 内 , 进样量与峰面积积分
值呈良好的线性关系 , r=0.999 7 , 平均回收率 97.4%, RSD=1.27%。结论　建立的方法能准确 、快速地进行定性 、定量检测 ,
可用于复方南板蓝根冲剂的质量控制。
关键词:复方南板蓝根冲剂;薄层鉴别;高效液相色谱法;咖啡酸
中图分类号:R927.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2004)12-0938-03
Study on the quality control for Fufang Nanbanlangen Chongji
LI Qin1 ,2 ,CHENG Tie-feng1 ,XUQi-tai1 , JIA Tian-zhu2(1.Pharmacy College , Henan University , Kaifeng 475001 , China;2.Liaoning
College of Traditional Chinese Medicine , Shenyang 110032 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To develop the quality control for Fufang Nanbanlangen Chongji.METHODS　Herba Violae and caffeic acid
were identified by TLC.The concentration of caffeic acid in Herba Taraxaci was determined by HPLC.RESULTS　Herba Viola and caffeic
acid were identified by TLC;A good linearity was obtained over the range of 0.142～ 0.710μg with the correlation coefficient 0.999 7 caffeic
acid in the HPLC assay.The recovery was 97.4 % and RSD was 1.27%.CONCLUSION　The methods are accurate and quick to operate ,
and can be used for the quality control of Fufang Nanbanlangen Chongji.
KEY WORDS:Fufang Nanbanlangen Chongji;TLC;HPLC;caffeic acid
表 4　样品测定结果.n=9
Tab 4　Contents of total scopoletin in the samples.n=9
编号 含量/mg·g-1 编号 含量/mg·g-1
1 1.931 11 0.695
2 1.748 12 0.611
3 1.037 13 2.111
4 0.262 14 2.203
5 0.411 15 2.132
6 0.413 16 1.727
7 2.254 17 2.757
8 1.868 18 1.389
9 1.033 19 1.557
10 1.742 20 1.459
3　讨　论
3.1　东莨菪内酯在紫外 310 和 345 nm 处均有最大吸收。 文
献报道[ 2 ～ 3] , 均以 310 nm作为其含量测定的检测波长。笔者
经比较发现 ,东莨菪内酯在 345 nm 处的吸收值较 310 nm 处
大 ,而且样品中在 310 nm 处有吸收的其他杂质在 345 nm 处
吸收值很小 ,基本上消除了它们的干扰 , 所以本实验选择以
345 nm 作为检测波长。
3.2　含量测定结果表明 , 10 个正品丁公藤药材样品的总东
莨菪内酯平均含量为 1.270 mg·g-1 , 其中丁公藤样品平均含
量 1.840 mg·g-1 , 光叶丁公藤样品平均含量 1.128 mg·g-1;但
光叶丁公藤商品药材中总东莨菪内酯的平均含量(0.531 mg·
g-1)明显低于自采的光叶丁公藤药材的平均含量(1.724 mg·
g-1),这可能与商品药材的贮存方法 、贮存年限以及药材的
原产地等因素有关。
3.3　丁公藤和光叶丁公藤分布区域狭窄 , 全国仅分布于广
东 、广西 、云南 、海南四省 , 且多生长于深山密林 , 采收困难 ,
因此药材丁公藤的药源十分紧张。大果飞蛾藤则分布较广 ,
华南 、西南至华中西部均有分布 , 且与丁公藤 、光叶丁公藤不
易区别 ,已在市场上作为丁公藤商品药材的主要来源广泛使
用。本实验采用HPLC对丁公藤 、光叶丁公藤中总东莨菪内
酯的含量进行测定的同时 ,也测定了其混用品大果飞蛾藤中
总东莨菪内酯的含量。结果表明 ,大果飞蛾藤中不仅含有东
莨菪内酯 ,且 10 个样品总东莨菪内酯的平均含量为 1.664 mg
·g-1 ,略高于正品丁公藤药材。但大果飞蛾藤能否作为丁公
藤和光叶丁公藤的代用品 , 还有待于药理 、药效学和化学指
纹图谱等方面的实验来论证。
参考文献
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(收稿日期:2003-12-20)
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　　复方南板蓝根冲剂由南板蓝根 、蒲公英和紫花地丁组成
的冲剂 , 具有消炎解毒的功效 , 临床上主治腮腺炎 、咽炎 、乳
腺炎 , 疮疖肿痛等[ 1] 。原质量标准只有性状 , 南板蓝根的
TLC 鉴别和试管反应 , 不能很好地控制产品质量 。为加强质
量控制 ,对制剂中的紫花地丁和蒲公英中的咖啡酸 TLC 鉴别
方法进行了研究 ,并对方中蒲公英中所含有效成分咖啡酸进
行了含量测定。据文献报道 ,咖啡酸的含量测定方法主要有
薄层扫描法[ 2] 和高效液相色谱法[ 3 ～ 5] 。本实验采用高效液
相色谱法对咖啡酸含量进行了测定 , 所建方法简便 、准确 , 重
现性好 ,可作为复方南板蓝根冲剂的质量标准 。
1　仪器 、试药与样品
1.1　仪器
大连依利特液相色谱仪 , EChrom98工作站 , UV200Ⅱ紫外
可见波长检测器 , P200Ⅱ变压恒流泵 , 手动进样器。
1.2　试药
咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号:885-
200001 , 供含量测定用 , 经 HPLC 归一化法测定纯度为
98.9%);南板蓝根对照药材(中国药品生物制品鉴定所 , 批
号:971-200002);紫花地丁对照药材[ 市售 , 经河南大学生药
学教研室许文渊教授鉴定为堇菜科植物紫花地丁(Viola ye-
doensis Makino)的干燥全草] 。薄层色谱硅胶 G(青岛海洋化
工集团公司)。甲醇为色谱纯 , 水为高纯水;其余所用试剂均
为分析纯。
1.3　样品
复方南板蓝根冲剂(批号:20020318 , 20020323 , 20020408 ,
广州奇星药药业股份有限公司)。
2　定性鉴别
2.1　咖啡酸 TLC 鉴别
取本品8 g , 加甲醇20 mL ,加热回流 30 min ,滤过 , 滤液蒸
干 ,残渣加水 10 mL使溶解 , 滤过 , 滤液用醋酸乙酯振摇提取
2 次 ,每次 10 mL, 合并醋酸乙酯液 , 蒸干 , 残渣加甲醇 10 mL
使溶解 ,作为供试品溶液。另取咖啡酸对照品 , 加甲醇制成
每1 mL含 0.5μg 的溶液 , 作为对照品溶液。 按原处方组成
比例 ,除去蒲公英 , 并按供试品溶液的制备方法 , 制成阴性对
照溶液。照薄层色谱法[ 6] , 吸取上述 3 种溶液各 6 μL , 分别
点于同一硅胶G 薄层板上 ,以醋酸乙酯-甲酸-水(7∶2∶2)的上
层溶液为展开剂 , 展开 , 取出 , 晾干 , 置紫外光灯(365 nm)下
检视。供试品色谱中 , 在与对照品色谱相应的位置上 , 显相
同颜色的荧光斑点 ,缺蒲公英的阴性对试验无干扰。结果见
图 1。
2.2　紫花地丁 TLC 鉴别
取本品8 g , 加甲醇20 mL ,超声处理 20 min ,滤过 , 滤液蒸
干 ,残渣加热水 10 mL , 搅拌 ,使溶解 , 滤过 ,滤液蒸干 , 残渣加
甲醇 1 mL使溶解 , 作为供试品溶液。另取紫花地丁药材粉
末2 g同法制成对照药材溶液。按原处方组成比例 , 除去紫
花地丁 , 并按供试品溶液的制备方法 , 制成阴性对照溶液。
吸取上述 3 种溶液各 5μL, 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 ,
以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶3∶1)的上层溶液为展开剂 , 展开 ,
　　
图 1　咖啡酸 TLC 图谱
a-供试品液;b-咖啡酸对照品;c-阴性对照液
Fig 1　TLC of caffeic acid
a-sample;b-caffeic acid;c-negative sample
取出 ,晾干 ,置紫外灯(365 nm)下检视 , 供试品色谱中 , 在与
紫花地丁对照药材色谱相应的位置上(Rf=0.84),有一显相
同颜色的荧光斑点 ,而缺紫花地丁的阴性对照溶液在相应的
位置无干扰。结果见图 2。
图 2　紫花地丁 TLC 图谱
a-供试品液;b-紫花地丁对照药材;c-阴性对照液
Fig 2　TLC of Herba Viola
a-sample;b-Herba Viola;c-negative sample
3　含量测定
3.1　色谱条件
色谱柱:依利特 Hyper ODS C18(4.6 mm×250 mm),柱温:
40℃。流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠 1.56 g ,
加水使溶解成 1 000 mL ,再加 1%磷酸溶液调节 pH 值至 3.8
～ 4.0 , 即得)(13∶87)。流量:1.0 mL·min-1 , 检测波长:323
nm ,测定时间:50 min。纸速:0.264 cm·min-1。
3.2　对照品溶液的制备
精密称取在 110℃干燥至恒重的咖啡酸对照品 7.1 mg ,
置 50 mL量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 精密量取 2 mL , 置 10
mL量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 即得(每 1 mL 中含咖啡酸
28.4μg)。
3.3　供试品溶液的制备
取本品内容物约 7.5 g , 精密称定 ,置 50 mL 具塞锥形瓶
中 ,精密加 5%甲酸的甲醇溶液 10 mL ,密塞 , 摇匀 ,称定重量 ,
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超声处理(功率 250 W , 频率 40 kHz)30 min , 取出 , 放冷 , 再称
定重量 ,用 5%甲酸的甲醇溶液补足减失的重量 ,摇匀 , 离心 ,
取上清液 , 用微孔滤膜(0.45 μm)滤过 , 滤液置棕色瓶中 , 即
得。同法制得阴性对照溶液。
3.4　对照品 、供试品 、阴性样品的 HPLC 图谱
按上述色谱条件 , 精密吸取供试品溶液 、阴性液 、对照品
溶液各 10 μL , 注入液相色谱仪中 , 绘制液相色谱图 , 由色谱
图提示 , 在对照品色谱相应的位置上 , 供试品溶液具有相同
保留时间的色谱峰 , 阴性液在此峰位无吸收 , 对本品中咖啡
酸含量测定无干扰 ,方法专属性强。
3.5　标准曲线的制备
精密吸取对照品溶液 5 , 10 , 15 , 20 , 25 μL 注入液相色谱
仪中 ,测定色谱峰面积 , 以咖啡酸的含量(X)为横坐标 , 其峰
面积吸收度积分值(Y)为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,计算得回归
方程为:Y=25 600.92X -51.04 , r=0.999 7。 由测定结果提
示 ,咖啡酸对照品进样量在 0.142 ～ 0.710 μg 内线性关系良
好。
3.6　进样重复性试验
取同一供试品溶液(批号 020318)10 μL ,重复进样 5 次 ,
测定峰面积积分值为9 496.06 , 9 782.90 , 9 989.98 , 9 945.20 ,
9 782.14 , 平均值为 9 799.26 , RSD为 1.98%。
3.7　供试品稳定性实验
取同一供试品溶液(批号 020318), 分别于 0 , 2 , 4 , 6 , 8 h
各 进样10μL , 测定咖啡酸峰面积积分值为8 9 84.1 8 ,
9 331.64 , 8 945.50 , 9 198.02 , 8 992.67 , 平均值为9 090.42 , RSD
为 1.844%。结果表明:样品在 8 h 内性质稳定。
3.8　超声提取时间的考察
取同一批号样品(批号 020318), 精密称定 , 分别超声处
理20 , 30 , 40 min ,测定 , 计算 , 咖啡酸的含量分别为 0.023 8 ,
0.025 3 , 0.025 2 mg·g-1 。结果表明:超声提取 30 min 与 40
min ,咖啡酸的含量相近 , 为节省时间 , 以超声提取 30 min 为
宜。
3.9　重复性试验
取同一批号样品(批号 20020318)5 份各 7.5 g , 精密称
定 ,分别按“3”项下有关方法操作 ,分别进样 10 μL , 测定咖啡
酸含量 ,结果平均含量 0.025 1 mg·g-1 , RSD为 1.71%。
3.10　回收率试验
取本品(批号 20020318 ,含量 0.025 1 mg·g-1)研细 , 6份 ,
每份取 3.75 g ,精密称定 , 按“3.3” 项下分别加入不同量对照
品标准液 ,及 5%甲酸甲醇溶液定容至 10 mL 量瓶中 , 按“3”
项下有关方法操作 ,测定 , 计算。本方法回收率在 96.5 %～
101.4 %之间 , RSD为 1.92%。结果见表 1。
3.11　样品测定
分别取批号 20020318 , 20020323 , 20020408 的3 批样品 , 按
供试品制备方法制备供试液 ,依法测定 , 色谱图见图 3。结果
3 批样品咖啡酸含量(mg·g-1)分别为:0.025 1 , 0.024 8 ,
0.025 9 mg·g-1。
4　讨　论
表 1　咖啡酸回收率试验
Tab 1　Recovery of caffeic acid
取样量
/g
样品含量
/mg
加入量
/mg
实测量
/mg
回收率
/ %
平均回收率
/ %
RSD
/ %
3.745 0.094 0.075 0.167 97.3
4.183 0.105 0.075 0.179 98.7
3.825 0.096 0.094 0.186 95.7 97.4 1.27
4.064 0.102 0.094 0.195 98.9
4.104 0.103 0.113 0.213 97.3
3.903 0.098 0.113 0.207 96.5
图 3　复方南板蓝根冲剂的 HPLC 图
A-样品液;B-阴性溶液;C-咖啡酸对照品;1-咖啡酸
Fig 3　HPLC chromatogram of Fufang Nanbanlangen Chongji
A-sample;B-negative sample;C-caffeic acid;1-caffeic acid
4.1　南板蓝根为方中主药 , 因复方南板蓝根冲剂采用水煎
煮提取工艺 ,无合适的活性成分作为含量测定指标。咖啡酸
为蒲公英的活性成分之一 ,咖啡酸具有抗菌抗病毒性[ 7] 。所
以 ,选择咖啡酸为复方南板蓝根冲剂的含量测定指标。
4.2　在紫花地丁的 TLC 研究中 , 因没有紫花地丁的法定对
照药材 , 故从药店购买的 5 批紫花地丁药材 , 经河南大学生
药学教研室许文渊教授鉴定 , 均为堇菜科植物紫花地丁(Vi-
ola yedoensis Makino)的干燥全草 , 5 批紫花地丁的 TLC 相同。
所以以市售紫花地丁作对照。
4.3　因生物体内咖啡酸往往以游离和盐的形式存在 , 所以
用 5%甲酸的甲醇溶液作为溶剂超声提取更完全。流动相的
选择 , 经过反复摸索 , 选择酸性流动相 , 因咖啡酸为有机酸 ,
酸性可抑制其电离 ,使峰形稳定 , 分离度较好。
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(收稿日期:2004-02-27)
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